本发明涉及一种生姜提取物的提取方法，特别涉及一种从生姜中提取分离6-姜酚的方法。
背景技术：
生姜中存在一系列姜酚的同系物，由于结构类似，性质相近，很难用常规方法纯化成单体成分，在低压柱层析柱上分离出的成分，经薄层色谱鉴别为单一斑点，实际上为一族化合物，经高效液相色谱进一步分离得到5个化合物，其中一个主要成分为6-姜酚。6-姜酚中含有8-羟基酮结构，理化性质不稳定，容易受到外界条件的干扰而失去活性。目前，6-姜酚的提取方法多采用化学萃取剂萃取的方法，得到的一般是不纯的粗体，也有采用高效液相色谱等方法提取纯度高，但是6-姜酚化学性能不稳定，提取过程中损耗较大。专利200410074545.3公开了一种从生姜中提取分离6-姜酚的方法。该方法通过制备姜油树脂，硅胶色谱柱分离，制备粗姜酚，液相色谱分离，去除溶剂等步骤制备6-姜酚，该方法制备的6-姜酚得率低，产品不容易长期保存。专利200610161540.3公开了一种分离纯化6-姜酚的方法，该方法从姜的超临界流体萃取物中分离纯化6-姜酚，包括硅胶柱色谱分离，hplc纯化，重结晶的步骤，其优点是制备方法简单，缺点是得率和纯度不高，产品不容易长期保存。专利201210553119.2公开了一种从生姜中提取纯化6-姜酚的方法，包括以下步骤：(1)姜酚的提取浓缩：切片生姜置于小型多功能提取浓缩罐，用质量浓度为80-95％的乙醇按1∶6-15的料液质量体积比在60-80℃下加热回流提取，提取的时间为每次2-3小时，每批生姜提取2-4次，每次提取的提取液流入所述小型多功能提取浓缩罐中，经统一浓缩得到生姜提取物；(2)姜酚萃取：将所述生姜提取物置于玻璃反应釜中，用乙酸乙酯进行萃取，萃取次数2-4次，合并得到萃取液；该萃取液经旋转蒸发仪减压回收得到姜酚粗提物；所述生姜提取物与所述乙酸乙酯的体积比为1∶2-4；(3)硅胶柱层析：将所述姜酚粗提物溶于乙酸乙酯，然后加入所述姜酚粗提物重量2-4倍的硅胶拌样，溶剂乙酸乙酯挥干后，干法上硅胶柱；用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂等度洗脱，薄层层析tcl检测，收集含有6-姜酚的洗脱液部分，用旋转蒸发仪减压回收所述洗脱液得到6-姜酚粗品；将所述6-姜酚粗品再次上硅胶柱，按照上述方法经洗脱、检测、收集、回收溶剂，得到较纯6-姜酚；(4)制备hplc纯化：将所述步骤(3)所得的较纯6-姜酚用甲醇-水混合溶剂溶解，以制备hplc纯化，以甲醇-水混合溶剂作为流动相等度洗脱，收集最大色谱峰，置旋转蒸发仪上蒸干至恒重，即得到高纯度的6-姜酚。该方法得到的6-姜酚纯度很低，只适合于食品和化妆品领域的应用。
技术实现要素：
本发明是为了克服上述现有技术中缺陷，提出一种从生姜中提取分离6-姜酚的方法。
一种从生姜中提取分离6-姜酚的方法，按照如下步骤进行：
(1)将生姜切成碎块，加1-5倍重量的溶剂，于水浴回流2-4小时，倾出溶剂，再加1-3倍重量的溶剂提取1-5次，合并溶剂提取液，减压回收溶剂，得到深棕色油状提取物；
(2)采用200-300目层析硅胶干法装柱，将上步提取的油状提取物加溶剂溶解，与硅胶拌均，挥发去溶剂，装于柱上端，再加硅胶于其上，用石油醚-醋酸乙酯洗脱，洗脱液以薄层色谱鉴别，用6-姜酚标准品对照，将相同部位合并，减压浓缩回收醋酸乙酯，得淡黄色油状提取物；
(3)将上步制备的淡黄色油状提取物溶解于甲醇中，用制备型高效液相色谱仪分离纯化6-姜酚；
(4)将制备型高效液相色谱仪纯化的6-姜酚油状物加正已烷回流10-30分钟，将溶液转移至锥形瓶中，密闭，放置于15-25℃水箱中过夜，即可析出絮状结晶，挥去溶剂后，获得结晶产品。
所述用制备型高效液相色谱仪分离纯化6-姜酚的条件：
色谱柱：制备型十八烷基键合硅胶柱；
流动相：80％甲醇水溶液；
70％甲醇水溶液；
流速：1.2-2.2ml/min；
检测：280nm紫外检测，灵敏度0.5或示差析光检测；
纸速：20cm/min。
所述石油醚的沸点为60-90℃。
所述石油醚-醋酸乙酯中石油醚与醋酸乙酯的体积比为6∶4。
所述溶剂为醋酸乙酯，丁酸乙酯，乙醇或甲苯。
6-姜酚产品冻存液，由如下重量份数的组分组成：维生素c20-30份，乙醇300-500份，水莎草提取物1-2份。
所述水莎草提取物的提取方法为：将新鲜水莎草茎秆在液氮中冻存，取出研磨为粉末，加3-8倍重量的70％乙醇水溶液溶解，回流提取3次，合并滤液，蒸干制成。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：采用本发明的方法制备的6-姜酚产率高，制备的6-姜酚生物活性高，纯度高，可直接用于药品的制备，冻存液可长期保存6-姜酚，生物活性不降低。
附图说明
图1是本发明6-姜酚分离提取的工艺图。
具体实施方式
下面结合附图，对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
实施例1
一种从生姜中提取分离6-姜酚的方法，按照如下步骤进行：
(1)溶剂提取
生姜(zingeberofficinlerosc，产地山东莱芜，秋季采集)300克，切成碎块，加2倍量醋酸乙酯，于水浴回流3小时，倾出醋酸乙酯，再加2倍量的醋酸乙酯提取3次，合并醋酸乙酯提取液，减压回收醋酸乙酯，得到深棕色油状提取物2克。
(2)低压硅胶柱层析分离姜酚粗品
采用200-300目层析硅胶干法装柱，将上步提取的粗提物加5ml醋酸乙酯溶解，与4g硅胶拌均，挥发去醋酸乙酯，装于柱上端，再加3g纯硅胶于其上，用石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(6∶4)洗脱，洗脱液以薄层色谱鉴别，用6-姜酚标准品对照，将相同部位合并，减压浓缩回收醋酸乙酯，得淡黄色油状物(约400毫克)，为姜酚粗品。
(3)高效液相色谱纯化
将上步制备的姜酚粗品溶解于4毫升甲醇中，用制备型高效液相色谱仪分离纯化姜酚。
色谱条件：
色谱柱：制备型十八烷基键合硅胶柱；
流动相：80％甲醇水溶液；
70％甲醇水溶液；
流速：1.2-2.2ml/min；
检测：紫外检测(280nm)灵敏度0.5或示差析光检测；
纸速：20cm/min；
采用6-姜酚为标准品标定目标化合物的保留时间，将上步制备的姜酚粗品0.4克溶于4毫克甲醇中，每次进样15μl，按峰收集样品，合并后回收溶剂，得到淡黄色油状物0.2克，此样品中含有杂质，需要改变流动相进一步纯化。
将上步的0.2克样品溶于2毫升甲醇中，改用70％甲醇水溶液为流动相，流速1.8ml/min，其它条件不变，再进行hplc分离，按峰收集样品，得到6-姜酚0.12克(淡黄色油状物)。
(4)重结晶
将hplc纯化的6-姜酚油状物加80毫升正已烷回流20分钟，将溶液转移至100毫升锥形瓶中，密闭，放置于20℃水箱中过夜，即可析出絮状结晶，挥去溶剂后，此结晶在室温下(19℃)不融化。
采用本实施例的方法得率为75％，6-姜酚纯度为99.6％。
为确证其化学结构，对该化合物进行了fab-ms，ei-ms，1hnmr，13cnmr，ir和uv分析，证明该化合物为6-姜酚。以前文献报导的6-姜酚可能由于当时的分离技术所限，含有少量同系物杂质，因而熔点下降，在5℃以上为油状物。
6-姜酚，白色结晶(正已烷)，mp.28-30℃，元素分析：c69.19％(理论值：69.29％)，h9.05％(理论值：8.9％)。fab-ms谱证明该化合物的分子量为294.3，分子式为c17h26o4
结构解析：从fab-ms和ei-msm/z(％)显示分子离子峰为294，符合6-姜酚的分子式c17h26o4。ir(kbr)cm-1：3443.5(bs)、2929.5、2858.5、1704.3、1603.9、1515.8、1462.5、1370.5、1271.0、1240、1208.1、1152.3、1123.9、1034.3、924.0、853.2、814.8、727.2，提示分子中存在羟基、次甲基、甲基、酮基、苯环、甲氧基等；1hnmr中δ：6.82、6.68、6.65为苯环上1’、5’、6’位的三个h，4.02碳链上5位羟基碳的h，3.87为苯环上3’位上甲氧基的三个h，2.83为碳链上2位碳的二个h，2.73为碳链上1位碳的二个h，2.49(2h)，1.47(2h)，1.28(6h)为碳链上6、7、8位碳的h，0.88为碳链上10位碳的三个h；13cnmr(400mhz，cdcl3)δ：211.5为3位碳；120.7、114.4、146.4、144.0、132.6、111.0苯环的六个碳；55.9为甲氧基上碳；14.0为10位上的甲基碳；22.6、25.1、29.3、31.7、67.7、49.3、45.4、36.4为碳链1至9位的碳。从hmbc(600mhz，cdcl3)显示，季碳δc132.6(c-1’)与δh2.73(2h，dd，h-1)、δh2.83(2h，dd，h-2)、δh6.68(1h，d，h-2’)、δh6.82(1h，d，h-5’)有相关关系；季碳δc144.0(c-4’)与δh6.68(1h，d，h-2’)、δh6.82(1h，d，h-5’)、δh6.65(1h，dd，h-6’)有相关关系；季碳δc146.4(c-3’)与δh6.68(1h，d，h-2’)、δh6.82(1h，d，h-5’)、δh3.87(3h，dd，h-11)有相关关系，证明甲氧基是连在3’位置的碳上，羟基连在4’位置的碳上。
hmbc相关谱如下所示：
从hmbc相关谱中可以看出，c1`(132.6)、c2`(111.0)、c6`(120.7)与c1-h、c2`-h相关，c1`-h、c2`-h都与羰基碳(211.5)，c2`(45.4)与c4`-h(2.57，2.49)、c4`(49.3)与c2`-h(2.79)都有相关，羰基碳(211.5)与c4`-h(2.57，2.49)、和c5`-h(4.02))都有相关，c4`(49.3)与c5`-h(4.02)c6`-h(1.47)都有相关，c5`(67.7)与c4`-h(2.57，2.49)和c6`-h(1.47)都有相关，从而说明1-6位碳的连接顺序，说明醇羟基连于5位碳上。
通过以上ir、ei-ms、1hnmr、13cnmr和hmbc谱的分析，确定了苯环、碳链和碳链上羰基和羟基以及苯环上甲氧基、酚羟基的位置，从而证明我们得到的化合物为6-姜酚。其结构如下所示：
13cnmr，1hnmrdataof6-gingerol(400mhz，cdcl3)
其熔点为28～30℃，经高压液相色谱归一化法分析，其在一年内没有变化。因此可作为对照品应用。
实施例2
一种从生姜中提取分离6-姜酚的方法，按照如下步骤进行：
(1)溶剂提取
生姜(zingeberofficinlerosc，产地山东莱芜，秋季采集)300克，切成碎块，加2倍量丁酸乙酯，于水浴回流3小时，倾出丁酸乙酯，再加2倍量的丁酸乙酯提取3次，合并丁酸乙酯提取液，减压回收丁酸乙酯，得到深棕色油状提取物2克。
(2)低压硅胶柱层析分离姜酚粗品
采用200-300目层析硅胶干法装柱，将上步提取的粗提物加5ml醋酸乙酯溶解，与4g硅胶拌均，挥发去醋酸乙酯，装于柱上端，再加3g纯硅胶于其上，用石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(6∶4)洗脱，洗脱液以薄层色谱鉴别，用6-姜酚标准品对照，将相同部位合并，减压浓缩回收醋酸乙酯，得淡黄色油状物(约400毫克)，为姜酚粗品。
(3)高效液相色谱纯化
将上步制备的姜酚粗品溶解于4毫升甲醇中，用制备型高效液相色谱仪分离纯化姜酚。
色谱条件：
色谱柱：制备型十八烷基键合硅胶柱；
流动相：80％甲醇水溶液；
70％甲醇水溶液；
流速：1.2-2.2ml/min；
检测：紫外检测(280nm)灵敏度0.5或示差析光检测；
纸速：20cm/min；
采用6-姜酚为标准品标定目标化合物的保留时间，将上步制备的姜酚粗品0.4克溶于4毫克甲醇中，每次进样15μl，按峰收集样品，合并后回收溶剂，得到淡黄色油状物0.2克，此样品中含有杂质，需要改变流动相进一步纯化。
将上步的0.2克样品溶于2毫升甲醇中，改用70％甲醇水溶液为流动相，流速1.8ml/min，其它条件不变，再进行hplc分离，按峰收集样品，得到6-姜酚0.12克(淡黄色油状物)。
(4)重结晶
将hplc纯化的6-姜酚油状物加80毫升正已烷回流20分钟，将溶液转移至100毫升锥形瓶中，密闭，放置于20℃水箱中过夜，即可析出絮状结晶，挥去溶剂后，此结晶在室温下(19℃)不融化。
采用本实施例的方法得率为73％，6-姜酚纯度为99.5％。
实施例3
6-姜酚产品冻存液，由如下重量份数的组分组成：维生素c25份，乙醇400份，水莎草提取物2份。
所述水莎草提取物的提取方法为：将新鲜水莎草茎秆在液氮中冻存，取出研磨为粉末，加3-8倍重量的70％乙醇水溶液溶解，回流提取3次，合并滤液，蒸干制成。
将实施例1制备的6-姜酚产品与冻存液按照1∶10的比例混合，储存于-4℃冰箱中，1年内生物活性不降低。
实施例4
6-姜酚产品冻存液，由如下重量份数的组分组成：维生素c25份，乙醇400份，喜盐草提取物2份。
所述喜盐草提取物的提取方法为：将新鲜喜盐草茎秆在液氮中冻存，取出研磨为粉末，加3-8倍重量的70％乙醇水溶液溶解，回流提取3次，合并滤液，蒸干制成。
将实施例1制备的6-姜酚产品与冻存液按照1∶10的比例混合，储存于-4℃冰箱中，1年内生物活性不降低。
实施例5
6-姜酚产品冻存液，由如下重量份数的组分组成：维生素c25份，乙醇400份。
将实施例1制备的6-姜酚产品与冻存液按照1∶10的比例混合，储存于-4℃冰箱中，半年内生物活性降低50％。
以上公开的仅为本发明的具体实施例，但是，本发明并非局限于此，任何本领域的技术人员能思之的变化都应落入本发明的保护范围。