一种治疗哮喘的药物组合物的制作方法

本发明涉及医药领域，具体的说，本发明涉及一种治疗哮喘的药物组合物以及化合物在制备治疗哮喘的药物中的用途。

背景技术：

哮喘是一种气道慢性炎症性疾病，先天性免疫和获得性免疫系统中的许多细胞，连同上皮细胞引起支气管高反应性，黏液产生过剩，气道炎症细胞浸润、气道重塑和气道狭窄。治疗哮喘的传统方法为使用糖皮质激素和支气管扩张药，然而患者的复发情况依然没有得到理想的控制，因此迫切需要开发有效的治疗药物。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种治疗哮喘的药物组合物。

为了实现本发明的目的，本发明提供一种治疗哮喘的药物组合物，该药物组合物以具有下式创新结构的化合物作为活性成分：

优选地，r1表示氢、卤素、羟基、硝基、氰基、c1-6烷氧羰基、氨基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷酰基、苯基、烷氧基、任选被一-、二-或三-卤素取代的c1-6烷基或任选被一-、二-或三-卤素取代的c1-6烷氧基。

优选地，r2表示氢、卤素、羟基、硝基、氰基、氨基、羧基、四唑基、c1-6烷氧基、c1-6烷氧羰基、c1-6烷酰基、c1-6烷酰基氨基、任选被一-、二-或三-卤素或羟基取代的c1-6烷基。

更优选地，r1、r2同时代表甲氧基。

更优选地，所述药物组合物还可以包含一种或多种药用辅料、稀释剂或者载体。

本发明还提供化合物在制备治疗哮喘的药物中的用途，所述化合物的结构式为：

优选地，r1表示氢、卤素、羟基、硝基、氰基、c1-6烷氧羰基、氨基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷酰基、苯基、烷氧基、任选被一-、二-或三-卤素取代的c1-6烷基或任选被一-、二-或三-卤素取代的c1-6烷氧基。

优选地，r2表示氢、卤素、羟基、硝基、氰基、氨基、羧基、四唑基、c1-6烷氧基、c1-6烷氧羰基、c1-6烷酰基、c1-6烷酰基氨基、任选被一-、二-或三-卤素或羟基取代的c1-6烷基。

更优选地，r1、r2同时代表甲氧基。

本发明药物在减轻哮喘患者气道炎症反应、抑制哮喘、改善肺功能方面有较好的效果，有望研制成为临床应用的治疗哮喘的药物。

附图说明

图1是4组小鼠肺组织病理特征(×200)。

图2是4组小鼠肺组织中il-5和il-13基因的表达。

图3是4组小鼠肺组织中pten和sirt1的表达。

a.正常对照组；b.模型对照组；c.本发明药物组；d.地塞米松组。

具体实施方式

通过实施例建立哮喘模型来具体说明本发明药物的作用效果。

实验例1本发明药物的表征

¹hnmr(cdcl3)δ:7.24(1h,d),6.89(1h,d),4.44(1h,d),4.40(1h,d),4.36(1h,d),3.89(3h,s),3.87(1h,d),3.31(3h,s),1.98(1h,m),1.74(1h,m),1.10(1h,m),1.04(1h,m)。

实验例2本发明药物治疗哮喘的效果

分组及模型建立

所有小鼠按照随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、本发明药物组和地塞米松组，每组10只。除正常组外其余组在第1和14天腹腔注射致敏液0.2ml致敏，在第14、25、26、27天给予戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，给予激发液0.05ml滴鼻激发。在第28～41天模型对照组给予0.9％氯化钠溶液0.5ml灌胃，本发明药物组给予实施例1药物10mg/kg灌胃，地塞米松组腹腔注射地塞米松0.5ml(1mg/kg)。正常对照组在致敏、激发、灌胃干预阶段均以0.9％氯化钠溶液代替。所有小鼠均于第42天给药24h后摘眼球取血处死，留取右肺组织，固定于4％甲醛溶液中。

苏木精-伊红(he)染色：取小鼠肺组织，石蜡包埋、切片后行he染色。常规脱蜡，苏木精染核，盐酸乙醇分化，伊红染细胞质，脱水，中性树胶封片。

pas染色(过碘酸-希夫染色)：取各组小鼠肺组织，常规石蜡切片，脱蜡。进行pas特殊染色。

酶联免疫吸附试验(elisa)检测血清ige(免疫球蛋白)：离心收集各组小鼠血清，根据elisa试剂盒说明书检测血清中含量。

westernblot检测小鼠肺组织pten、sirt1蛋白表达

取等量蛋白质样本进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后将蛋白质转移至聚偏氟乙烯膜上，tbst+5％bsa封闭液封闭2h。将膜分别与pten和sirt1一抗4℃孵育过夜，然后tbst洗涤3次，每次10min，之后加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔igg二抗，室温孵育2h。用tbst洗膜3次，每次10min，最后加入ecl发光液显色。

实时定量聚合酶链反应(qpcr)检测各组小鼠肺组织中基因表达变化

rna的提取采用qiagen公司的rneasypluskit试剂，按说明书操作方法进行。cdna合成采用invitrogen公司superscriptⅲ第一链合成试剂盒，按说明书操作方法进行。荧光定量pcr反应试剂采用roche公司pcrmastermix，反应条件为：94℃10min，94℃30s，60℃1min，共40个循环，abistepone全自动荧光定量pcr仪(美国abi公司)，以gapdh基因作为内参。

统计学方法采用spss16.0版统计学软件。符合正态分布的计量资料以均数±标准差表示，组间均数比较采用两独立样本t检验。以p<0.05为差异有统计学意义。

肺组织病理特征

正常对照组小鼠肺组织小支气管无炎症细胞浸润、气道无明显黏液分泌；模型对照组小鼠肺组织呈明显炎症细胞浸润、气道黏液分泌显著增加；本发明药物组小鼠肺组织炎症细胞浸润较模型组明显缓解，气道黏液分泌显著降低。见图1。

4组小鼠血清ige(免疫球蛋白e)含量

正常对照组、模型对照组、本发明药物组和地塞米松组小鼠血清ige含量分别为(0.22±0.02)，(6.79±2.56)，(3.10±1.43)，(2.32±1.18)pg/ml。与正常对照组比较，模型对照组小鼠血清ige含量显著增加(t＝3.331,p<0.01)，而在给予本发明药物干预后小鼠血清的ige含量显著降低(t＝2.806，p<0.05)。

qpcr检测本发明药物对哮喘小鼠il-5和il-13的调节作用

前人研究表明，白细胞介素il-5和il-13与哮喘发病密切相关。4组小鼠肺组织中il-5和il-13的基因表达变化见图2，结果显示本发明药物降低了il-5和il-13的表达水平(t＝2.569，2.788，p<0.05)。

westernblot检测小鼠肺组织中pten和sirtl表达的变化

pten基因在哮喘炎症机制中发挥着重要作用，sirtl作为一种去乙酰化酶可以降低pten的乙酰化水平，因此可以通过体内pten和sirtl的表达判断哮喘炎症水平。

图3中：模型对照组小鼠的肺组织pten和sirt1的表达量显著低于正常对照组(t＝-2.491，p<0.05；t＝-3.454，p<0.01)，本发明药物组小鼠肺组织pten和sirtl的表达量显著高于模型对照组(t＝-2.301，-2.586，p<0.05)。