本发明涉及一类化合物及其应用，具体是n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺及其在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂的应用。
背景技术：
tala等[euromedchem,2014,76:155-169]以bo-1055为先导化合物，利用生物电子等排原理设计合成化合物a，测试了其对人前列腺癌（pc3），人肺癌（h460和h1299）和人结肠癌（hct-116，h3347，dld-1和ht-29）细胞系抗肿瘤活性；其抗肿瘤活性优于阳性对照物顺铂。
misra等[jmedchem,2004,47(7):1719-1728.]以cdk2为靶标，从1-溴-3,3-二甲基-2-丁酮出发，通过叠氮反应经加氢还原，引入氨基，再经酰化反应、环合反应和亲核反应得到5-(((5-(叔丁基)恶唑-2-基)甲基)硫基)噻唑-2-胺；最后与羧酸衍生物发生酰胺化反应得到化合物b，并测试了无细胞酶活性和a2780人卵巢癌细胞体外抗肿瘤活性，在无细胞酶测定中，化合物b显示cdk2/cyce的ic50为48nm；且分别比cdk1/cycb和cdk4/cycd高10倍和20倍的选择性；抗增殖活性在a2780细胞细胞毒性测定，化合物b显示ic50为95nm。化合物b已作为抗肿瘤剂被选择进入ⅰ期人临床试验。
biswal等[wo2014145642a2,2014-9-18]合成了一系列以转录因子nrf2为靶点的小分子抗肿瘤化合物，体外抗肿瘤活性测试结果显示：化合物c对非小细胞肺癌细胞a549和人肺腺癌细胞h1437的抑制活性：5μm＜ic50＜25μm。
技术实现要素：
本发明解决的技术问题是提供一类n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺及其制备方法与用途。
为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：
本发明技术方案的第一方面是提供了一类如结构式ⅰ所示的n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺及其在药学上可接受的盐：
i
式中r选自：氢、c1~c2烷基、c3~c4直链烷基；x1~x3选自：氢、氟、氯、溴或碘；n选自：1、2、3、4或5。
进一步的，优选的化合物选自：n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺和n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯-5-氟苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺。
本发明技术方案的第二方面是提供了n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：
i
式中r选自：氢、c1~c2烷基、c3~c4直链烷基；x1~x3选自：氢、氟、氯、溴或碘；n选自：1、2、3、4或5。
本发明技术方案的第三方面是提供含有第一方面所述化合物及其药学上可接受的盐的药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的本发明的n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺及其药学上可接受的盐，以及任选的含有药用载体。其中所述的药用载体指药学领域常用的药用载体；该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物及其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂组合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物及其药学上可接受的盐在其药物组合物中的含量通常为0.1%~95%重量百分比。
本发明化合物及其药学上可接受的盐或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂（包括真溶液和胶体溶液）、乳剂（包括o/w型、w/o型和复乳）、混悬剂、注射剂（包括水针剂、粉针剂和输液）、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂（包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片）、胶囊剂（包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊）、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气（粉）雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
本发明化合物及其药学上可接受的盐可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
为了将本发明化合物及其药学上可接受的盐制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物及其药学上可接受的盐与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物及其药学上可接受的盐先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物及其药学上可接受的盐片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物及其药学上可接受的盐的胶囊剂。
为将本发明化合物及其药学上可接受的盐制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、ph调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；ph调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明技术方案的第四方面是提供含有第一方面所述化合物及其药学上可接受的盐以及第三方面所述药物组合物在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂方面的应用。
有益技术效果：本发明的n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂方面的应用。
具体实施方式
以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。
实施例1
n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺的制备
1mmoln-[4-（1,2,4-三唑-1-基）-5-(2,4-二氯苯基)噻唑-2-基]-2-氯乙酰胺、2mmol哌啶、10mlthf和1.20mmoltea，常温反应24h；脱溶，用乙酸乙酯和饱和食盐水洗，反萃有机层，合并有机层，无水硫酸钠干燥，脱溶，乙醇重结晶得0.24g白色固体n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺，收率53.3%，熔点201~203℃；1hnmr(400mhz，cdcl3)δ：1.26(s，2h，ch2)，1.59~1.71(m，4h，ch2×2)，2.57(s，4h，ch2nch2)，3.25(s，2h，coch2)，7.34-7.36(m，2h，c6h35,6-h)，7.47(s，1h，c6h33-h)，7.94(s，1h，c2n3h23-h)，8.03(s，1h，c2n3h25-h)。
实施例2
n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯-5-氟苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺的制备
1mmoln-[4-（1,2,4-三唑-1-基）-5-(2,4-二氯-5-氟苯基)噻唑-2-基]-2-氯乙酰胺、2mmol哌啶、10mlthf和1.20mmoltea，常温反应24h。脱溶，用乙酸乙酯和饱和食盐水洗，反萃有机层，合并有机层，无水硫酸钠干燥，脱溶，乙醇重结晶得0.23g白色固体n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯-5-氟苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺，收率50.1%，熔点210~212℃；1hnmr(400mhz，cdcl3)δ：1.49(s，2h，ch2)，1.58~1.76(m，4h，ch2×2)，2.57(s，4h，ch2nch2)，3.25(s，2h，coch2)，7.29(d，j=8.8hz，1h，c6h23-h)，7.50(d，j=6.6hz，1h，c6h26-h)，8.00(s，1h，c2n3h23-h)，8.04(s，1h，c2n3h23-h)。
实施例3
n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺的抗流感病毒神经氨酸酶活性的测定
1.实验原理
化合物munana是神经氨酸酶的特异性底物，在神经氨酸酶作用下产生的代谢产物在360nm照射激发下，可产生450nm荧光，荧光强度的变化可以灵敏地反映神经氨酸酶活性。酶均来自a/pr/8/34（h1n1）病毒毒株。
2.实验方法
在酶反应体系中，一定浓度样品与流感病毒神经氨酸酶na悬浮于反应缓冲液中（ph6.5），加入荧光底物munana启动反应体系，37˚c孵育40分钟后，加反应终止液终止反应。在激发波长360nm和发射波长为450nm的参数条件下，测定荧光强度值。根据荧光强度的减少量可以计算化合物对na活性的抑制率。
3.检测样品：实施例化合物
4．活性结果
在反应系统中检测浓度40.0μg/ml时，n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺和n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯-5-氟苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺对神经氨酸酶的抑制率分别为34%和31%。
n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺具有良好的抗流感病毒神经氨酸酶活性，可用于制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂。