本发明涉及橡胶籽油技术领域，具体涉及一种碱溶酸沉法制备橡胶籽蛋白的方法。
背景技术：
橡胶籽(rubberseed)，大戟科乔木巴西三叶橡胶蒴果的卵圆形种子，呈卵圆形，褐色并带有银灰色斑纹，由种壳和种仁组成，种仁在种壳内部，外表包有柔软的薄膜层，是一种热带木本植物油料。橡胶籽去壳榨油后的部分为橡胶籽粕，橡胶籽粕中约含有60%的碳水化合物，25%的粗蛋白，28%的氨基酸。橡胶籽蛋白是全价蛋白质，含有18种氨基酸，其中8中必需氨基酸齐全，精氨酸、谷氨酸和天冬门氨酸的含量高，橡胶籽蛋白大多数是疏水性氨基酸和酸性氨基酸，具有很高的食用价值和保健功能。因此，有必要研究一种制备橡胶籽蛋白的方法。
技术实现要素：
针对上述技术中存在的不足之处，本发明提供了一种工艺安全、制备便捷、橡胶籽蛋白提取率高的碱溶酸沉法制备橡胶籽蛋白的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种碱溶酸沉法制备橡胶籽蛋白的方法，包括如下步骤：步骤一、橡胶籽粉原料的制备；步骤二、一次碱溶：将橡胶籽粉原料和水按一定比例混匀制得一次浆液，调节一次浆液ph并对其进行超声波处理，得到一次碱溶液，将一次碱溶液离心分离，得到一次碱溶沉淀和一次橡胶籽蛋白溶液；步骤三、二次碱溶：将一次碱溶沉淀和水按一定比例混匀制得二次浆液，调节二次浆液ph并对其进行超声波处理，得到二次碱溶液，将二次碱溶液离心分离，得到二次碱溶沉淀和二次橡胶籽蛋白溶液；步骤四、三次碱溶：将二次碱溶沉淀和水按一定比例混匀制得三次浆液，调节三次浆液ph并对其进行超声波处理，得到三次碱溶液，将三次碱溶液离心分离，得到三次橡胶籽蛋白溶液；步骤五、酸沉：将一次橡胶籽蛋白溶液、二次橡胶籽蛋白溶液和三次橡胶籽蛋白溶液混匀，调节其ph并进行酸沉处理，经离心分离得到橡胶籽蛋白粉；步骤六、纯化：将橡胶籽蛋白粉和水按一定比例混匀制得橡胶籽蛋白浆液，调节橡胶籽蛋白浆液ph并加入复合酶进行超声辅助酶解，待酶解后，将酶解液进行灭酶处理，经离心分离得到蛋白沉淀，水洗蛋白沉淀ph至中性，即得到纯化橡胶籽蛋白粉；步骤七、冷冻干燥：将纯化橡胶籽蛋白粉进行冷冻干燥处理，即得橡胶籽蛋白。
优选的，所述步骤一中橡胶籽粉的制备过程为：将橡胶籽去壳后采用六号溶剂浸泡，脱溶后得到脱脂的橡胶籽粕，其残油量为0.8～1.2%，并将脱脂的橡胶籽粕粉碎过筛得到颗粒大小为80～100目筛的橡胶籽粉原料。
优选的，所述步骤二中一次碱溶的过程如下：将橡胶籽粉原料和水按料液比1g:20～25ml混匀制得一次浆液，向一次浆液中加入氢氧化钠溶液，将一次浆液ph调至10～11，并对其进行超声波处理，超声功率为20～40khz，超声时间为80～100分钟，超声温度为54～56℃，得到一次碱溶液，将一次碱溶液离心分离，得到一次碱溶沉淀和一次橡胶籽蛋白溶液。
优选的，所述步骤三中二次碱溶的过程如下：将一次碱溶沉淀和水按料液比1g:15～20ml混匀制得二次浆液，向二次浆液中加入氢氧化钠溶液，将二次浆液ph调至11～12，并对其进行超声波处理，超声功率为20～40khz，超声时间为60～80分钟，超声温度为48～52℃，得到二次碱溶液，将二次碱溶液离心分离，得到二次碱溶沉淀和二次橡胶籽蛋白溶液。
优选的，所述步骤四中三次碱溶的过程如下：将二次碱溶沉淀和水按料液比1g:10～15ml混匀制得三次浆液，向三次浆液中加入氢氧化钠溶液，将二次浆液ph调至12～13，并对其进行超声波处理，超声功率为20～40khz，超声时间为40～60分钟，超声温度为44～46℃，得到三次碱溶液，将三次碱溶液离心分离，得到三次橡胶籽蛋白溶液。
优选的，所述步骤五中酸沉的过程如下：将一次橡胶籽蛋白溶液、二次橡胶籽蛋白溶液和三次橡胶籽蛋白溶液混匀，加入盐酸或柠檬酸调节ph至4.5进行酸沉处理，酸沉温度为40～50℃，待出现絮状物后经离心分离得到橡胶籽蛋白粉。
优选的，所述步骤六中纯化的过程如下：将橡胶籽蛋白粉和水按料液比1g:8～10ml混匀制得橡胶籽蛋白浆液，调节橡胶籽蛋白浆液ph至4～5，并加入复合酶进行超声辅助酶解，超声功率为20～40khz，超声时间为60～80min，超声温度为40～50℃，待酶解后，将酶解液加热至85～95℃灭酶处理10～15分钟，经离心分离得到蛋白沉淀，采用35～45℃的蒸馏水水洗蛋白沉淀ph至7，得到纯化橡胶籽蛋白粉。
优选的，所述复合酶采用纤维素酶+淀粉酶+糖化酶+果胶甲酯水解酶，所述纤维素酶：淀粉酶：糖化酶：果胶甲酯水解酶的用量为1：3～6：4～8：2～4，且复合酶的加酶量为橡胶籽蛋白浆液用量的1.5～2.5ug/g。
优选的，所述纤维素酶：淀粉酶：糖化酶：果胶甲酯水解酶的用量为1：4.5：6：3，且复合酶的加酶量为橡胶籽蛋白浆液用量的2ug/g。
本发明与现有技术相比，其有益效果是：本发明提供的碱溶酸沉法制备橡胶籽蛋白的方法，通过依次调节一次碱溶、二次碱溶、三次碱溶方法中的ph值，可充分溶解橡胶籽粉原料中的蛋白成分，从而有效提高橡胶籽蛋白的提取率；通过在纯化时采用一定比例的纤维素酶+淀粉酶+糖化酶+果胶甲酯水解酶组成的复合酶进行酶解，可有效去除一些糖类等假蛋白，以增加橡胶籽蛋白的纯度；通过在灭酶处理后采用35～45℃的蒸馏水水洗蛋白沉淀ph至7，可减少对橡胶籽蛋白的损伤及再溶解；该碱溶酸沉法制备橡胶籽蛋白的方法，工艺安全、制备便捷、橡胶籽蛋白提取率可达75.0%以上、提取的橡胶籽蛋白纯度高达90.0%以上。
附图说明
图1是本发明所述碱溶酸沉法制备橡胶籽蛋白的方法流程图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
如图1所示，本发明提供了一种碱溶酸沉法制备橡胶籽蛋白的方法，包括如下步骤：
步骤一、橡胶籽粉原料的制备：将橡胶籽去壳后采用六号溶剂浸泡，脱溶后得到脱脂的橡胶籽粕，其残油量为0.8～1.2%，并将脱脂的橡胶籽粕粉碎过筛得到颗粒大小为80～100目筛的橡胶籽粉原料；
步骤二、将橡胶籽粉原料和水按料液比1g:20～25ml混匀制得一次浆液，向一次浆液中加入氢氧化钠溶液，将一次浆液ph调至10～11，并对其进行超声波处理，超声功率为20～40khz，超声时间为80～100分钟，超声温度为54～56℃，得到一次碱溶液，将一次碱溶液离心分离，得到一次碱溶沉淀和一次橡胶籽蛋白溶液；
步骤三、将一次碱溶沉淀和水按料液比1g:15～20ml混匀制得二次浆液，向二次浆液中加入氢氧化钠溶液，将二次浆液ph调至11～12，并对其进行超声波处理，超声功率为20～40khz，超声时间为60～80分钟，超声温度为48～52℃，得到二次碱溶液，将二次碱溶液离心分离，得到二次碱溶沉淀和二次橡胶籽蛋白溶液；
步骤四、将二次碱溶沉淀和水按料液比1g:10～15ml混匀制得三次浆液，向三次浆液中加入氢氧化钠溶液，将二次浆液ph调至12～13，并对其进行超声波处理，超声功率为20～40khz，超声时间为40～60分钟，超声温度为44～46℃，得到三次碱溶液，将三次碱溶液离心分离，得到三次橡胶籽蛋白溶液；
步骤五、将一次橡胶籽蛋白溶液、二次橡胶籽蛋白溶液和三次橡胶籽蛋白溶液混匀，加入盐酸或柠檬酸调节ph至4.5进行酸沉处理，酸沉温度为40～50℃，待出现絮状物后经离心分离得到橡胶籽蛋白粉；
步骤六、将橡胶籽蛋白粉和水按料液比1g:8～10ml混匀制得橡胶籽蛋白浆液，调节橡胶籽蛋白浆液ph至4～5，并加入复合酶进行超声辅助酶解，所述复合酶采用纤维素酶+淀粉酶+糖化酶+果胶甲酯水解酶，所述纤维素酶：淀粉酶：糖化酶：果胶甲酯水解酶的用量为1：3～6：4～8：2～4，且复合酶的加酶量为橡胶籽蛋白浆液用量的1.5～2.5ug/g，超声功率为20～40khz，超声时间为60～80min，超声温度为40～50℃，待酶解后，将酶解液加热至85～95℃灭酶处理10～15分钟，经离心分离得到蛋白沉淀，采用35～45℃的蒸馏水水洗蛋白沉淀ph至7，得到纯化橡胶籽蛋白粉；优选的，所述纤维素酶：淀粉酶：糖化酶：果胶甲酯水解酶的用量为1：4.5：6：3，且复合酶的加酶量为橡胶籽蛋白浆液用量的2ug/g；
步骤七、将纯化橡胶籽蛋白粉进行冷冻干燥处理，即得橡胶籽蛋白。
实施例1
将橡胶籽粉原料和水按料液比1g:20ml混匀制得一次浆液，将一次浆液ph调至10，并对其进行超声波处理，得到一次碱溶液，将一次碱溶液离心分离，得到一次碱溶沉淀和一次橡胶籽蛋白溶液；将一次碱溶沉淀和水按料液比1g:15ml混匀制得二次浆液，将二次浆液ph调至11，并对其进行超声波处理，得到二次碱溶液，将二次碱溶液离心分离，得到二次碱溶沉淀和二次橡胶籽蛋白溶液；将二次碱溶沉淀和水按料液比1g:10ml混匀制得三次浆液，将二次浆液ph调至12，并对其进行超声波处理，得到三次碱溶液，将三次碱溶液离心分离，得到三次橡胶籽蛋白溶液；将一次橡胶籽蛋白溶液、二次橡胶籽蛋白溶液和三次橡胶籽蛋白溶液混匀，调节ph至4.5进行酸沉处理，酸沉温度为40℃，待出现絮状物后经离心分离得到橡胶籽蛋白粉；将橡胶籽蛋白粉和水按料液比1g:8ml混匀制得橡胶籽蛋白浆液，调节橡胶籽蛋白浆液ph至4，并加入复合酶进行超声辅助酶解，所述复合酶采用纤维素酶+淀粉酶+糖化酶+果胶甲酯水解酶，所述纤维素酶：淀粉酶：糖化酶：果胶甲酯水解酶的用量为1：3：4：2，且复合酶的加酶量为橡胶籽蛋白浆液用量的1.5ug/g，待酶解后，将酶解液加热至85℃灭酶处理10分钟，经离心分离得到蛋白沉淀，采用35℃的蒸馏水水洗蛋白沉淀ph至7，得到纯化橡胶籽蛋白粉；将纯化橡胶籽蛋白粉进行冷冻干燥处理，即得橡胶籽蛋白，其中，橡胶籽蛋白提取率为75.2%，纯度为93.6%。
实施例2
将橡胶籽粉原料和水按料液比1g:25ml混匀制得一次浆液，将一次浆液ph调至11，并对其进行超声波处理，得到一次碱溶液，将一次碱溶液离心分离，得到一次碱溶沉淀和一次橡胶籽蛋白溶液；将一次碱溶沉淀和水按料液比1g:20ml混匀制得二次浆液，将二次浆液ph调至12，并对其进行超声波处理，得到二次碱溶液，将二次碱溶液离心分离，得到二次碱溶沉淀和二次橡胶籽蛋白溶液；将二次碱溶沉淀和水按料液比1g:15ml混匀制得三次浆液，将二次浆液ph调至13，并对其进行超声波处理，得到三次碱溶液，将三次碱溶液离心分离，得到三次橡胶籽蛋白溶液；将一次橡胶籽蛋白溶液、二次橡胶籽蛋白溶液和三次橡胶籽蛋白溶液混匀，调节ph至4.5进行酸沉处理，酸沉温度为50℃，待出现絮状物后经离心分离得到橡胶籽蛋白粉；将橡胶籽蛋白粉和水按料液比1g:10ml混匀制得橡胶籽蛋白浆液，调节橡胶籽蛋白浆液ph至5，并加入复合酶进行超声辅助酶解，所述复合酶采用纤维素酶+淀粉酶+糖化酶+果胶甲酯水解酶，所述纤维素酶：淀粉酶：糖化酶：果胶甲酯水解酶的用量为1：6：8：4，且复合酶的加酶量为橡胶籽蛋白浆液用量的2.5ug/g，待酶解后，将酶解液加热至95℃灭酶处理15分钟，经离心分离得到蛋白沉淀，采用45℃的蒸馏水水洗蛋白沉淀ph至7，得到纯化橡胶籽蛋白粉；将纯化橡胶籽蛋白粉进行冷冻干燥处理，即得橡胶籽蛋白，其中，橡胶籽蛋白提取率为76.8%，纯度为92.1%。
实施例3
将橡胶籽粉原料和水按料液比1g:22.5ml混匀制得一次浆液，将一次浆液ph调至10.5，并对其进行超声波处理，得到一次碱溶液，将一次碱溶液离心分离，得到一次碱溶沉淀和一次橡胶籽蛋白溶液；将一次碱溶沉淀和水按料液比1g:17.5ml混匀制得二次浆液，将二次浆液ph调至11.5，并对其进行超声波处理，得到二次碱溶液，将二次碱溶液离心分离，得到二次碱溶沉淀和二次橡胶籽蛋白溶液；将二次碱溶沉淀和水按料液比1g:12.5ml混匀制得三次浆液，将二次浆液ph调至12.5，并对其进行超声波处理，得到三次碱溶液，将三次碱溶液离心分离，得到三次橡胶籽蛋白溶液；将一次橡胶籽蛋白溶液、二次橡胶籽蛋白溶液和三次橡胶籽蛋白溶液混匀，调节ph至4.5进行酸沉处理，酸沉温度为45℃，待出现絮状物后经离心分离得到橡胶籽蛋白粉；将橡胶籽蛋白粉和水按料液比1g:9ml混匀制得橡胶籽蛋白浆液，调节橡胶籽蛋白浆液ph至4.5，并加入复合酶进行超声辅助酶解，所述复合酶采用纤维素酶+淀粉酶+糖化酶+果胶甲酯水解酶，所述纤维素酶：淀粉酶：糖化酶：果胶甲酯水解酶的用量为1：4.5：6：3，且复合酶的加酶量为橡胶籽蛋白浆液用量的2ug/g，待酶解后，将酶解液加热至90℃灭酶处理12.5分钟，经离心分离得到蛋白沉淀，采用40℃的蒸馏水水洗蛋白沉淀ph至7，得到纯化橡胶籽蛋白粉；将纯化橡胶籽蛋白粉进行冷冻干燥处理，即得橡胶籽蛋白，其中，橡胶籽蛋白提取率为77.2%，纯度为94.5%。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。