一种比色和荧光双响应型TNP检测探针及其制备方法与流程

本发明属于化学传感技术领域，具体涉及一种比色和荧光双响应型tnp检测探针，本发明还涉及一种比色和荧光双响应型tnp检测探针的制备方法。

背景技术：

2,4,6-三硝基苯酚(tnp)又称苦味酸(picricacid,pa)，是一种比2,4,6-三硝基甲苯(tnt)具有更强爆炸力的黄色炸药，最初用于填装炮弹而被人们熟知。2,4,6-三硝基苯酚经震动、碰撞等易发生剧烈分解而引起爆炸，被用于制造电雷管、烟花等。此外，2,4,6-三硝基苯酚还广泛用于染料、医药、皮革等行业中。然而，tnp的大量使用对人类健康及公共安全造成极大的危害。长期大量接触tnp会引起头晕、头痛、诱发皮炎及导致肝、肾损害。

目前已经报道的tnp的检测方法多为仪器检测方法：如电化学法、拉曼光谱法、质谱法等。该类方法仍需解决现场检测不便及选择性低等问题。因此，一种简便、高效、专一的有机小分子类tnp检测探针更符合实时、高效、高选择性的检测需求。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种比色和荧光双响应型tnp检测探针，解决了现有技术tnp检测技术存在的空白，提供一种具有选择性好、灵敏度高、响应速度快等特点的有机小分子类tnp比色/荧光探针。

本发明所采用的第一技术方案是，一种比色和荧光双响应型tnp检测探针，具有以下结构式：

本发明所采用的第二技术方案是，一种比色和荧光双响应型tnp检测探针的制备方法，具体按照以下步骤实施：

步骤1、将罗丹明b与乙二胺反应制备得到罗丹明b乙二胺中间体；

步骤2、将所述步骤1得到的罗丹明b乙二胺中间体与1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐于干燥的有机溶剂中、加热条件下发生反应，合成对称的探针分子；

步骤3、将步骤2得到的反应液经过滤得到粗产物，粗产物采用有机溶剂重结晶得到淡红色探针分子。

步骤2中罗丹明b乙二胺中间体与1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐的摩尔比为2.0:0.9～1.2。

步骤2中罗丹明b乙二胺中间体与1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐发生反应时的反应温度为10～100℃。

步骤2中的有机溶剂为乙腈、四氢呋喃、氯仿、n,n-二甲基甲酰胺或n-甲基吡咯烷酮中的一种。

步骤3中重结晶采用的有机溶剂为乙腈或乙醇。

本发明的有益效果是，一种比色和荧光双响应型tnp检测探针，填补了该类型tnp检测方法的空白，可根据探针溶液颜色的变化，可视化鉴别tnp；使用荧光光谱仪及紫外可见光谱仪可定量地测定tnp浓度，解决了现有tnp检测技术中存在的特异性识别能力低、检测操作复杂、检测灵敏度低等技术缺陷。

附图说明

图1是探针分子以氘代dmso为溶剂所做核磁共振氢谱；

图2是探针分子以氘代dmso和氘代水混合溶剂所做核磁共振氢谱；

图3是20μm/l探针甲醇溶液对不同浓度tnp(0-190μm)的荧光测试响应曲线图；

图4是20μm/l探针甲醇溶液对不同浓度tnp(0-190μm)的荧光测试响应拟合曲线图；

图5是20μm/l探针甲醇溶液对不同浓度tnp(0-190μm)的紫外-可见吸收响应曲线图；

图6是20μm/l探针甲醇溶液对不同浓度tnp(0-190μm)的紫外-可见吸收响应拟合曲线；

图7是20μm/l探针甲醇溶液对同等浓度(100μm)不同结构类似物的荧光测试响应图；

图8是探针甲醇溶液对tnp荧光检测响应时间测试图；

图9是探针甲醇溶液对tnp紫外-可见吸收检测响应时间测试图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。

本发明一种比色和荧光双响应型tnp检测探针，具有以下结构式：

一种比色和荧光双响应型tnp检测探针的制备方法，具体按照以下步骤实施：

步骤1、将罗丹明b与乙二胺反应制备得到罗丹明b乙二胺中间体；

步骤2、将所述步骤1得到的罗丹明b乙二胺中间体与1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐于干燥的有机溶剂中、加热条件下发生反应，合成对称的探针分子；

步骤2中罗丹明b乙二胺中间体与1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐的摩尔比为2.0:0.9～1.2；

步骤2中罗丹明b乙二胺中间体与1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐发生反应时的反应温度为10～100℃；

步骤2中干燥的有机溶剂为乙腈、四氢呋喃、氯仿、n,n-二甲基甲酰胺或n-甲基吡咯烷酮中的一种。

步骤3、将步骤2得到的反应液经过滤得到粗产物，粗产物采用有机溶剂重结晶得到淡红色探针分子；

步骤3中重结晶采用的有机溶剂为乙腈或乙醇。

一种比色和荧光双响应型tnp检测探针的制备方法如下：

式1为罗丹明b乙二胺中间体，式2为1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐，式3为比色和荧光双响应型tnp检测探针。

本发明一种比色和荧光双响应型tnp检测探针的检测原理如下：

本发明利用探针分子与tnp分子特异性的络合作用反应，打开探针分子中罗丹明b结构单元中的螺环，而导致探针分子共轭体系发生变化，使其在紫外和荧光光谱上产生显著地变化，且该变化可通过肉眼辨别(探针溶液由无色变为红色)。

本发明所述探针的使用方法并无特殊限制。通常可以在室温下将探针分子溶解在乙醇或甲醇溶液中进行测试。为研究该探针分子对tnp分子的特异性识别作用，以甲醇或乙醇为溶剂配制浓度为20μm/l的探针溶液；分别配制10mm的对硝基苯酚、间硝基苯胺、2,4,6-三硝基苯酚(tnp)、对硝基苯肼、2,4-二硝基苯肼、苯肼、对硝基苯甲酸、5-氨基间苯二甲酸、3,3-二氨基联苯胺、联苯胺、对苯二胺的甲醇或乙醇溶液。

该探针对于不同浓度的tnp产生响应，呈现良好的线性关系。在tnp浓度为25-80μm及80-170μm范围内可采用荧光检测方法对tnp进行定量检测，tnp最低检测浓度为1.69nm/ml(激发波长为500nm)；在tnp浓度为15-80μm及80-170μm范围内，可采用紫外可见吸收检测方法对tnp进行定量检测，tnp最低检测浓度为1.17nm/ml。

该探针对于同等浓度(100μm)的不同tnp结构类似物均无明显响应，且对tnp响应迅速。

图1为以dmso-d6为溶剂对探针分子所做的核磁共振氢谱表征，从该图可以看出该探针为对称分子，化学位移δ＝12.17为羧基氢核磁共振信号、δ＝7.77为酰胺氢核磁共振信号，其它位置的氢均可归属。结合质谱数据可确证该分子结构；

图2为以dmso-d6和d2o为溶剂，对探针分子所做的核磁共振氢谱表征，化学位移δ＝12.17的羧基氢核磁共振信号、δ＝7.77的酰胺氢核磁共振信号(结合图1)消失，结合质谱数据可进一步确证该分子结构；

图3中横坐标为波长、纵坐标为探针溶液加入tnp溶液后(ph约为7.0)的相对荧光强度；

图4中横坐标为浓度、纵坐标为探针溶液加入tnp溶液后(ph约为7.0)的相对荧光强度；

图5中横坐标为波长、纵坐标为探针溶液加入tnp溶液后(ph约为7.0)的相对紫外吸收强度；

图6中横坐标为浓度、纵坐标为探针溶液加入tnp溶液后(ph约为7.0)的相对紫外吸收强度；

图7中横坐标为不同结构类似物、纵坐标为探针溶液加入同等浓度不同结构类似物后(ph约为7.0)的相对荧光强度。

实施例1

将罗丹明b与乙二胺反应制备得到罗丹明b乙二胺中间体，称取罗丹明b乙二胺中间体(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐(式2，196mg，1.0mmol)及干燥的乙腈(10ml)于双颈反应瓶中，油浴加热下50℃反应24小时。tlc监测反应，反应完毕后，冷却、抽滤，滤饼用少量乙腈和水的混合溶剂洗涤两到三次。滤液旋蒸除去溶剂，固体用乙醇重结晶得到淡红色探针分子固体，共计1.01g，收率87％。

产物的结构表征数据如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

实施例2：

将罗丹明b与乙二胺反应制备得到罗丹明b乙二胺中间体，称取罗丹明b乙二胺中间体(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐(式2，196mg，1.0mmol)及干燥的四氢呋喃(10ml)于双颈反应瓶中，油浴加热下50℃反应24小时。tlc监测反应，反应完毕后，冷却、抽滤，滤饼用少量四氢呋喃和水的混合溶剂洗涤两到三次。滤液旋蒸除去溶剂，固体用乙腈重结晶得到淡红色探针分子固体，共计0.97g，收率83％。

产物的结构表征数据如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

实施例3：

将罗丹明b与乙二胺反应制备得到罗丹明b乙二胺中间体，称取罗丹明b乙二胺中间体(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐(式2，196mg，1.0mmol)及干燥的n-甲基吡咯烷酮(8ml)于双颈反应瓶中，油浴加热下100℃反应10小时。tlc监测反应，反应完毕后，冷却、向反应液中加入约50ml饱和食盐水，有大量固体析出。抽滤、干燥、固体用乙腈重结晶，得到淡红色探针分子固体，共计0.99g，收率85％。产物的结构表征数据如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

实施例4：

将罗丹明b与乙二胺反应制备得到罗丹明b乙二胺中间体，称取罗丹明b乙二胺中间体(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐(式2，196mg，1.0mmol)及干燥的乙腈(10ml)于双颈反应瓶中，于10℃反应30小时。tlc监测反应，反应完毕后，冷却、抽滤，滤饼用少量乙腈和水的混合溶剂洗涤两到三次。滤液旋蒸除去溶剂，固体用乙醇重结晶得到淡红色探针分子固体，共计0.87g，收率75％。

产物的结构表征数据如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

实施例5：

将罗丹明b与乙二胺反应制备得到罗丹明b乙二胺中间体，称取罗丹明b乙二胺中间体(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐(式2，176mg，0.9mmol)及干燥的乙腈(10ml)于双颈反应瓶中，于50℃反应24小时。tlc监测反应，反应完毕后，冷却、抽滤，滤饼用少量乙腈和水的混合溶剂洗涤两到三次。滤液旋蒸除去溶剂，固体用乙腈重结晶得到淡红色探针分子固体，共计0.84g，收率72％。

产物的结构表征数据如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

实施例6：

将罗丹明b与乙二胺反应制备得到罗丹明b乙二胺中间体，称取罗丹明b乙二胺中间体(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐(式2，235mg，1.2mmol)及干燥的乙腈(10ml)于双颈反应瓶中，于50℃反应24小时。tlc监测反应，反应完毕后，冷却、抽滤，滤饼用少量乙腈和水的混合溶剂洗涤两到三次。滤液旋蒸除去溶剂，固体用乙醇重结晶得到淡红色探针分子固体，共计1.01g，收率87％。

产物的结构表征数据如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

实施例7

将罗丹明b与乙二胺反应制备得到罗丹明b乙二胺中间体，称取罗丹明b乙二胺中间体(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐(式2，196mg，1.0mmol)及干燥的氯仿(10ml)于双颈反应瓶中，油浴加热下50℃反应24小时。tlc监测反应，反应完毕后，冷却、抽滤，滤饼用少量乙腈和水的混合溶剂洗涤两到三次。滤液旋蒸除去溶剂，固体用乙醇重结晶得到淡红色探针分子固体，共计0.93g，收率80％。

产物的结构表征数据如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

实施例8：

将罗丹明b与乙二胺反应制备得到罗丹明b乙二胺中间体，称取罗丹明b乙二胺中间体(式1，968mg，2.0mmol)，1,2,3,4-环丁烷四甲酸二酐(式2，196mg，1.0mmol)及干燥的n,n-二甲基甲酰胺(8ml)于双颈反应瓶中，油浴加热下100℃反应10小时。tlc监测反应，反应完毕后，冷却、向反应液中加入约50ml饱和食盐水，有大量固体析出。抽滤、干燥、固体用乙腈重结晶，得到淡红色探针分子固体，共计1.00g，收率86％。产物的结构表征数据如下：¹hnmr(500mhz,dmso-d6)(t＝298k)δ:ppm12.17(s,2h,cooh),7.77(s,2h,-conhr),7.77(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.33(m,18h),2.50-3.20(m,10h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；¹hnmr(500mhz,dmso-d6+d2o)(t＝298k)δ:ppm7.76(d,j＝5.95hz,2h),7.46(s,4h),6.90(d,j＝5.95hz,2h),6.30(m,12h),3.27(m,18h),3.16(d,j＝7.80hz,2h),2.96(m,4h),2.71(t,j＝8.70hz,4h),1.03(t,j＝5.95hz,24h)；ms(esi)calcd.forc68h78n8o10[m+2h]²⁺:m/z＝583.3,found:583.3。

实施例9：

本实施例为实施例1～8制得的探针分子，对不同浓度tnp的荧光响应。

采用甲醇配制浓度为20μm的探针分子溶液，再分向探针溶液中加入tnp，使得tnp浓度分别为0μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm、45μm、50μm、60μm、70μm、80μm、90μm、100μm、110μm、120μm、130μm、140μm、150μm、160μm、170μm、180μm、190μm并且探针溶液体积变化可以忽略。以波长为500nm的激发光，测定加入tnp前后探针溶液的荧光光谱变化，结果如图3所示。

图3是20μm/l探针溶液对不同浓度tnp(0-190μm)的响应，横坐标为波长、纵坐标为探针溶液加入tnp溶液后(ph约为7.0)的相对荧光强度，从图中可以看出，随着tnp浓度的增加，该探针分子在580nm左右的荧光强度逐渐增强，tnp浓度为170μm时接近饱和。以不同浓度tnp对应的相对荧光强度作图，如图4所示。根据拟合曲线可知，tnp浓度在25-80μm及80-170μm范围内时与荧光强度成线性关系，r²＝0.9860，检出限为1.69nm/ml。本实施例所得实验结果显示，该探针分子可以用于定量检测tnp，且有较高的灵敏度。

实施例10

本实施例为实施例1～8制得的探针分子，对不同浓度tnp的紫外可见吸收响应。

配制20μm的探针分子的甲醇溶液，再分向探针溶液中加入tnp，使得tnp浓度分别为0μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm、45μm、50μm、60μm、70μm、80μm、90μm、100μm、110μm、120μm、130μm、140μm、150μm、160μm、170μm、180μm、190μm，并且探针溶液体积变化可以忽略。测定加入tnp前后探针溶液的紫外可见吸收光谱变化，结果如图5所示。

图5是20μm/l探针溶液对不同浓度tnp(0-190μm)的吸收响应，横坐标为波长、纵坐标为探针溶液加入tnp溶液后(ph约为7.0)的相对紫外吸收强度，从图中可以看出，随着tnp浓度的增加，该探针分子在554nm处的吸收逐渐增强，tnp浓度为170μm时接近饱和。以不同浓度tnp对应的相对吸收强度作图得到图6，根据拟合曲线可知，tnp浓度在15-80μm及80-170μm范围内时与紫外吸收强度成线性关系，r²＝0.9949，检出限为1.17nm/ml。本实施例所得实验结果显示，该探针分子可以采用紫外可见吸收光谱法定量检测tnp，且有较高的灵敏度。

实施例11

本实施例为实施例1～8制得的探针分子，对相同浓度的tnp结构类似物的荧光响应测试。

配制浓度为20μm的探针分子甲醇溶液，再分向探针溶液中加入对硝基苯酚、间硝基苯胺、2,4,6-三硝基苯酚(tnp)、对硝基苯肼、2,4-二硝基苯肼、苯肼、对硝基苯甲酸、5-氨基间苯二甲酸、3,3-二氨基联苯胺、联苯胺、对苯二胺，使得每种被测试物浓度均为100μm并且保持探针溶液体积变化可忽略。测定探针溶液加入不同结构类似物后的相对荧光强度，结果如图7所示。从图7中可以看出，仅有加入tnp的探针溶液，荧光显著增强。其它结构类似物与探针分子均无明显作用。本实施例所得实验结果显示，该探针分子可以特异性地识别并检测出tnp。

实施例12

本实施例为实施例1～8制得的探针分子，对tnp荧光测试响应时间。

配制浓度为20μm的探针分子甲醇溶液。室温下，向探针溶液中加入100μmtnp进行荧光测试，分别记录加入tnp后每隔5分钟的荧光强度，结果如图8所示，横坐标为加入tnp的时间，纵坐标为相对荧光强度。从图8可以看出：加入tnp后，1分钟内已经开始响应，到35分钟已经接近完全响应。本实施例所得实验结果表明，该探针分子可以快速地与tnp发生作用，给出荧光信号。

实施例13

本实施例为实施例1～8制得的探针分子，对tnp检测紫外吸收响应时间。

配制浓度为20μm的探针分子甲醇溶液。室温下，向探针溶液中加入100μmtnp进行荧光测试，分别记录加入tnp后每隔5分钟的紫外吸收强度，结果如图9所示，横坐标为加入tnp的时间，纵坐标为相对紫外吸收强度。从图9可以看出：加入tnp后，1分钟内已经开始响应，到35分钟已经接近完全响应。探针溶液颜色由无色透明逐渐变为红色，可进行可视化检测

本发明的优点是，一种比色和荧光双响应型tnp检测探针，填补了该类型tnp检测方法的空白，可根据探针溶液颜色的变化，可视化鉴别tnp；使用荧光光谱仪及紫外可见光谱仪可定量地测定tnp浓度，解决了现有tnp检测技术中存在的特异性识别能力低、检测操作复杂、检测灵敏度低等技术缺陷。