本发明属化学合成领域，涉及具有高抗癌活性海洋天然产物海兔毒素dolastatin10的制备方法。
背景技术
据报道，目前，化学药物治疗是癌症治疗中最重要的手段之一，但由于癌细胞和健康细胞之间仅存在微小的差异，这使得在化学药物治疗中出现“杀敌一千，自损八百”的严重副作用。因此，开发新型高效、低毒的抗肿瘤药物的研究是当今生命科学中富有挑战性且意义重大的研究领域。
现有技术公开了抗体药物偶联物(antibodydrugconjugate,adc)是一种靶向治疗的药物，由抗体、偶联键和细胞毒性药物组成，它是将细胞毒素的高效性和抗体的靶向性完美地结合在一起的抗肿瘤新药，符合高效、低毒的理念，其中细胞毒素的高效性至关重要。研究显示，大多数来自海洋的天然产物及其类似物大多具有理想的抗肿瘤活性，是adc“弹头”的最佳来源之一，然而，并非具有抗肿瘤活性的天然产物即可用作adc弹头药物，adc弹头药物必须满足活性高、稳定性强和作用机制明确等要求，因此，开展满足adc“弹头”要求的天然产物的合成具有重要意义。
海洋天然产物海兔毒素dolastatin10是1987年美国pettit小组从西印度洋软体动物海兔中分离得到的高抗癌活性肽，其ic50＝0.5nmol/l，约为长春碱的40倍，作用机制明确，它通过与β微管蛋白的氨基酸残基结合，使α和β二聚体的发生形变，从而抑制微管的聚合，进而诱导多种癌细胞凋亡，是目前用于临床的为数不多的药物“弹头”分子之一。海兔毒素dolastatin10在临床研究中主要用于肺癌、卵巢癌、黑色素瘤和前列腺癌等实体瘤的治疗。虽然海兔毒素dolastatin10在ⅱ期临床试验中对肿瘤的疗效并不明显，但其诸多衍生物在临床试验的疗效上，无论单独用药还是与单抗偶联用药，均表现出显著的治疗效果，具有良好的应用前景。由于其显著的活性，在过去的30年中，对于海兔毒素dolastatin10的研究从未停止，然而却由于海兔毒素dolastatin10分子中手性片段的合成难度大等原因，目前对于海兔毒素dolastatin10中dill和dap三手性片段的合成研究仅有少量文献报道，并且在这些报道的合成路线中，由于路线可操作性、立体化学的控制、合成成本等因素，可用于发展为大量制备工艺的路线不多，严重阻碍了海兔毒素dolastatin10类结构的研究，因此，建立一种高效低成本的海兔毒素dolastatin10合成技术路线具有重要意义。
基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供新的制备海兔毒素dolastatin10的方法。
技术实现要素：
本发明的目的旨在克服现有技术的缺陷，提供新的一种制备高抗癌活性肽海兔毒素dolastatin10的方法。
本发明提供了一种简便工艺技术路线，所述制备方法的技术路线高效、低成本、可放大制备海兔毒素dolastatin10。
本发明的制备高抗癌活性肽海兔毒素dolastatin10的方法，通过如下技术路线，在下文的陈述实施例中，中间体通式是根据结构式中的编号，用阿拉伯数字表示，
所述的化合物海兔毒素dolastatin10的合成包括从中间体2-1转化，其合成方法包括步骤：
步骤1：化合物2、(s)-叔丁基亚磺酰胺和吡啶对甲基苯磺酸盐(ppts)在一种无机盐的二氯甲烷中反应24-72小时，经过滤、浓缩及纯化得化合物3；所说的无机盐是指无水硫酸镁、无水硫酸铜、无水硫酸钠，特别是无水硫酸铜；
步骤2：在2-溴噻唑的甲苯溶液中加入一种碱，反应0.5-2小时后，加入化合物3，继续反应3-12小时，经萃取、浓缩及纯化得化合物4；所说的碱是指正丁基锂、氢化钠、六甲基二硅基胺基锂、六甲基二硅基胺基钠、六甲基二硅基胺基钾、叔丁醇钾，特别是正丁基锂；
步骤3：化合物5、化合物6、叔丁醇和新制备的二碘化钐溶液在无水四氢呋喃中反应3-12小时，经萃取、浓缩及纯化得化合物7；
步骤4：化合物7与硅醚化试剂在一种碱的干燥二氯甲烷中反应1-18小时，经萃取、浓缩及纯化得化合物8；所说的硅醚化试剂是指叔丁基二甲基氯硅烷(tbscl)、叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯(tbsotf)，特别是叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯(tbsotf)；所说的碱是指三乙胺、咪唑、2,6-二甲基吡啶，特别是2,6-二甲基吡啶；
步骤5：化合物8在二氯二氰基苯醌(ddq)或氢气/钯碳/氢氧化钯的二氯甲烷/水溶液或甲醇、乙醇溶液中反应0.5-8小时，经萃取或过滤、浓缩得粗品，然后在一种碱的条件下加入甲基磺酰氯(mscl)，反应15到60分钟，经萃取、浓缩及纯化得化合物9；所说的碱是指二乙胺、三乙胺、叔丁醇钾或氢氧化钠，特别是三乙胺和叔丁醇钾；
步骤6：化合物9在氟化物的四氢呋喃中反应3-12小时，经萃取、浓缩得粗品，然后将其与六甲基磷酰三胺(hmpa)溶于干燥四氢呋喃中，降至-78摄氏度，滴入一种碱，搅拌0.5小时后滴入甲基化试剂，升至-15摄氏度继续反应15到60分钟，经萃取、浓缩及纯化得化合物10；所说的氟化物是指四丁基氟化铵(tbaf)、氢氟酸(hf)，特别是四丁基氟化铵(tbaf)；所说的碱是指六甲基二硅基胺基锂、六甲基二硅基胺基钠、六甲基二硅基胺基钾、叔丁醇钾、丁基锂、氢化钠、二异丙基氨基锂、二异丙基氨基钠，特别是六甲基二硅基胺基锂；所说的甲基化试剂是指碘甲烷、三氟甲磺酸甲基酯(meotf)，特别是三氟甲磺酸甲基酯(meotf)；
步骤7：化合物10在一种酸的二氯甲烷中反应1-3小时浓缩得到粗品胺，将粗品溶于二氯甲烷，加入二碳酸二叔丁酯(boc2o)、4-二甲氨基吡啶(dmap)和三乙胺反应12-48小时，经浓缩及纯化得化合物11；所说的酸是指盐酸、三氟乙酸，特别是三氟乙酸；
步骤8：化合物11在一种醇中，钯碳/氢气条件下反应3-10小时，经过滤、浓缩得化合物12；所说的醇是指甲醇、乙醇，特别是甲醇；
步骤9：化合物12与一种氧化剂在二氯甲烷中反应0.5-10小时后，经萃取、浓缩得粗品，不经纯化直接溶于叔丁醇/2-甲基-2-丁烯(1:1)的溶液中，加入亚氯酸钠和磷酸二氢钠的水溶液，反应8-12小时，经萃取、浓缩及纯化得化合物13；所说的氧化剂是指pcc、dmp、dmso/(cocl)2，特别是dmp、dmso/(cocl)2；
步骤10：化合物4在一种酸的二氯甲烷或甲醇中反应1-3小时浓缩得到粗品胺。化合物13和粗品胺在缩合剂和碱的二氯甲烷中反应6-24小时，经萃取、浓缩及纯化得化合物14；所说的酸是指盐酸、三氟乙酸、草酰氯；所说的缩合剂是指dcc、dic、edci、hatu、hbtu、hobt、hctu、hapyu、hbpyu、tbtu、tstu、tntu、bop、pybop、pyaop、dpp-cl、decp、dppa、mpta、bop-cl，特别是指hatu。hatu，化学名称为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯，是一种医药中间体，作为一种多肽缩合试剂，通常应用在羧基与氨基合成肽键的反应之中；所说的碱是指三乙胺、二乙胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶(dmap)、吗啉、n-甲基吗啉、n，n-二异丙基乙胺(dipea)，特别是指dipea；
步骤11：化合物15在第一种碱和碘甲烷的干燥四氢呋喃中反应20-36小时，经萃取、浓缩得粗品。将粗品溶于二甲基亚砜中，加入第二种碱和苄溴反应8-24小时，经萃取、浓缩及纯化得化合物16；所说的第一种碱是指氢化钠、六甲基二硅基胺基锂、六甲基二硅基胺基钠、六甲基二硅基胺基钾、叔丁醇钾、丁基锂，特别是指氢化钠；所说的第二种碱是指氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾，特别是碳酸钾；
步骤12：化合物16在一种酸的二氯甲烷中反应1-3小时浓缩得到粗品胺。n-叔丁氧基羰基-l-缬氨酸和粗品胺在缩合剂和碱的二氯甲烷中反应6-24小时，经萃取、浓缩及纯化得化合物17；所说的酸是指盐酸、三氟乙酸；所说的缩合剂是指dcc、dic、edci、hatu、hbtu、hobt、hctu、hapyu、hbpyu、tbtu、tstu、tntu、bop、pybop、pyaop、dpp-cl、decp、dppa、mpta、bop-cl，特别是指hatu。hatu，化学名称为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯，是一种医药中间体，作为一种多肽缩合试剂，通常应用在羧基与氨基合成肽键的反应之中；所说的碱是指三乙胺、二乙胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶(dmap)、吗啉、n-甲基吗啉、n，n-二异丙基乙胺(dipea)，特别是指dipea；
化合物17在甲醇或乙醇中，钯碳/氢气条件下反应3-10小时，经过滤、浓缩得粗品酸。粗品酸和五氟苯酚、n,n'-羰基二咪唑、氯甲酸乙酯或氯甲酸甲酯在四氢呋喃中反应3-6小时，备用。-78摄氏度下在乙酸苄酯的四氢呋喃中滴入六甲基二硅基胺基锂、六甲基二硅基胺基钠、六甲基二硅基胺基钾、叔丁醇钾、丁基锂、氢化钠、二异丙基氨基锂或二异丙基氨基钠，搅拌反应0.5小时后，滴入制备好的备用溶液，继续搅拌反应3小时，经萃取、浓缩及纯化得化合物18；
步骤13：化合物17在甲醇或乙醇中，钯碳/氢气条件下反应3-10小时，经过滤、浓缩得粗品酸。粗品酸和一种活化酸试剂在四氢呋喃中反应3-6小时，备用。-78摄氏度下在乙酸苄酯的四氢呋喃中滴入一种碱，搅拌反应0.5小时后，滴入制备好的备用溶液，继续搅拌反应3小时，经萃取、浓缩及纯化得化合物18；所说的活化酸试剂是指五氟苯酚、n,n'-羰基二咪唑、氯甲酸乙酯、氯甲酸甲酯，特别是五氟苯酚和n,n'-羰基二咪唑；所说的碱是指六甲基二硅基胺基锂、六甲基二硅基胺基钠、六甲基二硅基胺基钾、叔丁醇钾、丁基锂、氢化钠、二异丙基氨基锂或二异丙基氨基钠，特别是二异丙基氨基锂；
步骤14：化合物18在还原剂的醇溶液中反应1-6小时，经萃取、浓缩及纯化得化合物19；所说的还原剂是指硼氢化钠、硼氢化锂、硼氢化钾、三乙基硼氢化钠、三乙基硼氢化锂，特别是硼氢化钾；所说的醇是指甲醇、乙醇；
步骤15：化合物19与六甲基磷酰三胺(hmpa)溶于干燥四氢呋喃中，-78摄氏度下滴入一种碱，搅拌0.5小时后滴入甲基化试剂，-15-0摄氏度继续反应15到60分钟，经萃取、浓缩及纯化得化合物20；所说的碱是指六甲基二硅基胺基锂、六甲基二硅基胺基钠、六甲基二硅基胺基钾、叔丁醇钾、丁基锂、氢化钠、二异丙基氨基锂、二异丙基氨基钠，特别是六甲基二硅基胺基锂；所说的甲基化试剂是指碘甲烷、三氟甲磺酸甲基酯(meotf)，特别是三氟甲磺酸甲基酯(meotf)；
步骤16：化合物20在一种酸的二氯甲烷中反应1-3小时浓缩得到粗品胺。n-叔丁氧基羰基-l-缬氨酸和粗品胺在缩合剂和碱的二氯甲烷中反应6-24小时，经萃取、浓缩及纯化得化合物21；所说的酸是指盐酸、三氟乙酸；所说的缩合剂是指dcc、dic、edci、hatu、hbtu、hobt、hctu、hapyu、hbpyu、tbtu、tstu、tntu、bop、pybop、pyaop、dpp-cl、decp、dppa、mpta、bop-cl，特别是指hatu。hatu，化学名称为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯，是一种医药中间体，作为一种多肽缩合试剂，通常应用在羧基与氨基合成肽键的反应之中；所说的碱是指三乙胺、二乙胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶(dmap)、吗啉、n-甲基吗啉、n，n-二异丙基乙胺(dipea)，特别是指dipea；
步骤17：化合物21在一种酸的二氯甲烷中反应1-3小时浓缩得到粗品胺。将粗品胺溶于乙腈中，加入40％的甲醛溶液和一种还原剂，反应12-24小时，经萃取、浓缩及纯化得化合物22；所说的酸是指盐酸、三氟乙酸；所说的还原剂是指氰基硼氰化钠、氰基硼氰化钾、硼氢化钠、硼氢化钾、三乙基硼氢化钠、硼烷，特别是氰基硼氰化钠和氰基硼氰化钾；
步骤18：化合物14在一种酸的二氯甲烷中反应1-3小时浓缩得到粗品胺。化合物22在甲醇或乙醇中，钯碳/氢气条件下反应2-6小时，经过滤、浓缩得粗品酸。粗品胺和粗品酸在缩合剂和碱的二氯甲烷中反应6-24小时，经萃取、浓缩及纯化得化合物1；所说的酸是指盐酸、三氟乙酸；所说的缩合剂是指dcc、dic、edci、hatu、hbtu、hctu、hapyu、hbpyu、tbtu、tstu、tntu、bop、pybop、pyaop、dpp-cl、decp、dppa、mpta、bop-cl，特别是指hatu和hobt。hatu，化学名称为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯，是一种医药中间体，作为一种多肽缩合试剂，通常应用在羧基与氨基合成肽键的反应之中；edci，化学名称为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，通用的羰基活化试剂，用于在酰胺与仲胺键合的过程中；所说的碱是指三乙胺、二乙胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶(dmap)、吗啉、n-甲基吗啉、n，n-二异丙基乙胺(dipea)，特别是指dipea和n-甲基吗啉。
本发明的制备海兔毒素dolastatin10的方法，其技术路线操作简单，路线简洁，收率较高，所用的试剂均为常用试剂，而且，适合大规模制备，在实验室中可以方便实现1-10克级的制备。
具体实施方式
实施例1
合成化合物3：将化合物2(5.00g,41.61mmol)溶于150ml二氯甲烷中，依次加入(s)-叔丁基亚磺酰胺(5.55g,45.77mmol)，无水硫酸铜(13.28g,83.22mmol)和吡啶对甲苯磺酸盐(1.05g,4.16mmol)，室温搅拌36小时后过滤浓缩，并经硅胶柱纯化得到浅黄色液体3(7.43g，80％)；
合成化合物4：将2-溴噻唑(2.42ml,26.87mmol)溶于90ml甲苯中，降至-78摄氏度，缓慢加入正丁基锂的己烷溶液(1.6minhexane,22.39mmol)，搅拌30分钟后，将化合物3溶于10ml甲苯中缓慢加入，并于-78摄氏度反应三小时，经饱和氯化铵溶液淬灭后，乙酸乙酯萃取，干燥，浓缩，硅胶柱纯化得到无色液体4(3.66g，53％)，1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.76(d,j＝3.2hz,1h),7.28-7.19(m,5h),7.13-7.10(m,2h),4.96(dd,j＝14.4,7.2hz,1h),4.26(d,j＝7.2hz,1h),3.30-3.27(m,2h),1.12(s,9h)ppm.
合成化合物7：将化合物5(2.50g,14.00mmol)、化合物6(4.36g,14.00mmol)、叔丁醇(5.36ml,56.00mmol)溶于280ml四氢呋喃中，冷却至-78摄氏度，加入新制备的二碘化钐溶液(280ml，0.2minthf)，搅拌5小时后加入五水合硫代硫酸钠溶液淬灭后，用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色油状液体7(3.6g，78％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.38-7.28(m,5h),7.27-7.22(m,2h),6.89-6.84(m,2h),4.52-4.48(m,2h),4.44-4.40(m,2h),3.84-3.80(m,0.5h),3.80-3.78(m,3h),3.66-3.62(m,0.5h),3.55-3.53(m,1h),3.53-3.47(m,3h),3.45-3.41(m,1h),3.33-3.26(m,1h),2.07-1.99(m,1h),1.97-1.74(m,3h),1.74-1.63(m,2h),1.20-1.17(m,9h),1.04-0.98(m,1.5h),0.93-0.89(m,1.5h)ppm.
合成化合物8：将化合物7(10.00g,20.34mmol)溶于80ml二氯甲烷中，降至0摄氏度，依次加入2,6-二甲基吡啶(11.84ml,101.70mmol)，叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸甲酯(11.68ml,50.85mmol)，搅拌4小时后加入饱和氯化铵溶液淬灭，用二氯甲烷萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体8(10.85g,88％)。1hnmr(cdcl3,400mhz,mixtureofrotamers):δ7.35-7.24(m,7h),6.89-6.84(m,2h),4.46-4.41(m,4h),4.26-4.22(m,0.5h),4.16-4.11(m,0.5h),3.79(s,3h),3.71-3.60(m,2h),3.49-3.43(m,2h),3.24-3.18(m,2h),3.35-3.22(m,1h),1.90-1.82(m,2h),1.65-1.55(m,2h),1.13-1.09(m,9h),0.95-1.90(m,3h),0.88(s,6h),0.11(s,3h),0.08(s,0.5h),0.03(s,0.5h)ppm.
合成化合物9：将化合物8(1.00g,1.65mmol)溶于10ml二氯甲烷和1ml水中，降至0摄氏度，分三批加入二氯二氰基苯醌(749mg,3.30mmol)，搅拌30分钟后加入饱和硫代硫酸钠溶液淬灭，用二氯甲烷萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体(545mg,68％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.37-7.25(m,5h),4.52-4.43(m,2h),4.09(d,j＝7.2hz,1h),3.70-3.58(m,4h),3.34-3.26(m,1h),3.23(dd,j＝9.2,4.8hz,1h),2.21-2.14(m,1h),1.98-1.72(m,2h),1.70-1.54(m,2h),1.16(s,9h),0.98-0.95(m,3h),0.88(s,9h),0.09(s,3h),0.04(s,3h)ppm.将上述无色液体(500mg,1.03mmol)溶于10ml二氯甲烷中，依次加入三乙胺(1.14ml,8.23mmol)和甲磺酰氯(0.24ml,3.09mmol)，搅拌10分钟后加入饱和氯化铵淬灭，用二氯甲烷萃取，干燥，过滤，浓缩后溶于10ml四氢呋喃中，加入叔丁醇钾(231mg,2.06mmol)，搅拌15分钟后加入饱和氯化铵淬灭，用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体9(351mg,73％)。1hnmr(cdcl3,400mhz,mixtureofrotamers):δ7.37-7.24(m,5h),4.53-4.43(m,2h),3.95-3.92(m,0.76h),3.82-3.79(m,0.25h),3.76-3.71(m,1h),3.68-3.61(m,1h),3.50-3.42(m,1h),3.37-3.31(m,0.76h),3.25-3.20(m,0.25h),2.72-2.63(m,1h),2.12-1.96(m,1.78h),1.90-1.80(m,1.25h),1.76-1.66(m,2h),1.21(s,2.25h),1.17(s,6.75h),0.95-0.91(m,3h),0.90-0.87(m,9h),0.11-0.01(m,6h)ppm.
合成化合物10：将化合物9(4.60g,9.84mmol)溶于40ml四氢呋喃中，降至0摄氏度，加入四丁基氟化铵(19.68ml,19.68mmol)，搅拌4小时后加入饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到白色固体(2.12g,61％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.38-7.26(m,5h),4.57-4.50(m,2h),3.82-3.73(m,2h),3.63-3.59(m,1h),3.58-3.53(m,2h),2.99-2.95(m,1h),2.78-2.70(m,1h),1.94-1.88(m,1h),1.86-1.77(m,3h),1.74-1.64(m,1h),1.22(s,9h),0.98-0.94(m,3h),1.21(s,2h),1.17(s,7h),0.95-0.91(m,3h),0.90-0.87(m,9h),0.11-0.01(m,6h)ppm.将上述白色固体(2.00g,5.66mmol)溶于40ml四氢呋喃中，加入六甲基磷酰三胺(1.49ml,8.50mmol)，降至-78摄氏度，加入六甲基二硅基胺基锂(8.50ml,8.50mmol)，于-78摄氏度搅拌30分钟后，于冰盐浴下加入三氟甲磺酸甲酯(1.28ml,11.32mmol)，搅拌15分钟后，加入饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体10(1.98g,95％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.39-7.23(m,5h),4.55-4.47(m,2h),3.84-3.76(m,1h),3.74-3.67(m,1h),3.51-3.45(m,1.5h),3.43-3.41(m,3h),3.36-3.28(m,1.5h),2.78-2.71(m,1h),1.93-1.82(m,3h),1.81-1.67(m,2h),1.22(s,9h),1.01-0.93(m,3h)ppm.
合成化合物11：将化合物10(1.90g,5.17mmol)溶于20ml甲醇中，降至0摄氏度，加入盐酸/二氧六环(2.00ml)，搅拌30分钟后减压浓缩得粗品胺。将上述粗品胺溶于20ml二氯甲烷中，依次加入三乙胺(4.30ml,31.02mmol)及二碳酸二叔丁酯(1.35g,6.20mmol)，搅拌12小时后，加入饱和氯化铵溶液淬灭，用二氯甲烷萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体11(1.48g,79％)。1hnmr(cdcl3,400mhz,mixtureofrotamers):δ7.38-7.24(m,5h),4.55-4.46(m,2h),4.02-3.84(m,1h),3.70-3.65(m,0.33h),3.58-3.46(m,2h),3.42-3.36(m,0.68h),3.35(s,3h),3.31-3.22(m,1h),1.99-1.89(m,2h),1.86-1.65(m,3h),1.49-1.46(m,9h),1.04-0.99(m,3h)ppm.
合成化合物12：将化合物11(1.40g,3.85mmol)及10％钯碳(1.40g)溶于100ml甲醇中，在氢气作用下反应5小时后，经硅胶漏斗过滤、浓缩并经硅胶柱纯化得到无色液体化合物12(758mg,72％)。1hnmr(cdcl3,400mhz,mixtureofrotamers):δ4.01-3.82(m,1h),3.81-3.75(m,0.5h),3.69-3.62(m,1h),3.61-3.51(m,2.5h),3.48-3.41(m,3.5h),3.32-3.24(m,1h),3.18-3.03(m,0.5h),2.06-1.99(m,1h),1.99-1.92(m,1h),1.89-1.66(m,3h),1.50-1.45(m,9h),1.06-0.86(m,3h)ppm.
合成化合物13：将上述无色液体(600mg,2.19mmol)溶于10ml二氯甲烷中，降至0摄氏度，加入dmp(1.12g,2.63mmol)反应30分钟后，加入饱和硫代硫酸钠溶液和饱和碳酸氢钠溶液淬灭，用二氯甲烷萃取，干燥，过滤，浓缩后溶于5ml叔丁醇和5ml2，3-二甲基-2-丁烯中，依次加入磷酸二氢钠(1.64g,10.5mmol)和亚氯酸钠(945mg，10.5mmol)的水溶液，室温反应8小时后，经乙酸乙酯萃取，干燥，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体13(472mg,75％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ4.01-3.85(m,1h),3.83-3.77(m,1h),3.69-3.62(m,1h),3.62-3.46(m,1h),3.45(s,3h),3.28-3.20(m,1h),2.58-2.48(m,1h),2.01-1.84(m,3h),1.80-1.70(m,1h),1.50-1.45(m,9h),1.30-1.26(m,3h)ppm.
合成化合物14：将化合物4(484mg,1.57mmol)溶于6ml甲醇中，加入盐酸/二氧六环(500μl)，搅拌30分钟后，减压浓缩得粗品胺。将上述粗品胺溶于6ml二氯甲烷中，依次加入hatu(581mg,1.88mmol)，二异丙基乙胺(1.64ml,9.42mmol)及化合物13(450mg,1.57mmol)，搅拌18小时后，加入饱和氯化铵溶液淬灭，用二氯甲烷萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体14(595mg,80％)。1hnmr(cdcl3,400mhz,mixtureofrotamers):δ7.76-7.73(m,1h),7.28-7.26(m,1h),7.24-7.10(m,5.5h),6.50-6.46(m,0.5h),5.66-5.55(m,1h),3.94-3.85(m,0.5h),3.77(brs,0.5h),3.73-3.70(m,0.5h),3.57-3.47(m,1h),3.42-3.39(m,0.5h),3.37-3.35(m,3h),3.30-3.11(m,2.5h),2.45-2.35(m,0.5h),2.31-2.25(m,0.5h),2.17-2.08(m,0.5h),1.84-1.76(m,1h),1.76-1.64(m,2h),1.62-1.55(m,1h),1.50-1.46(m,9h),1.18-1.12(m,3h)ppm.
合成化合物16：将化合物15(10.00g,43.24mmol)溶于170ml四氢呋喃中，分三批加入氢化钠(8.65g,60％,216.20mmol)，搅拌30分钟后，加入碘甲烷(18.84ml,302.68mmol)，搅拌48小时后加入饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，浓缩后溶于50ml二甲亚砜中，依次加入碳酸钾(11.95g,86.48mmol)，溴化苄(4.11ml,47.56mmol)，搅拌18小时后，加入饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体16(7.98g,55％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.40-7.27(m,5h),5.19-5.10(m,2h),4.60(d,j＝10.8hz,0.5h),4.29(d,j＝10.8hz,0.5h),2.84-2.76(m,3h),2.07-1.91(m,1h),1.46-1.41(m,9h),1.14-1.03(m,1h),0.92-0.86(m,6h)ppm.
合成化合物17：将化合物16(7.80g,23.25mmol)溶于90ml二氯甲烷中，加入三氟乙酸(10ml)，搅拌2小时后，减压浓缩后溶于90ml二氯甲烷中，依次加入hatu(9.72g,25.58mmol)，二异丙基乙胺(24.30ml,139.50mmol)及n-boc-l-缬氨酸(5.56g,25.58mmol)，搅拌18小时后，加入饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体17(8.29g,82％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.37-7.28(m,5h),5.23-5.19(m,1h),5.18-5.13(m,1h),5.10-5.07(m,1h),5.07-5.04(m,1h),4.35(dd,j＝9.6,7.2hz,1h),2.98(s,3h),2.05-1.97(m,1h),1.88-1.80(m,1h),1.42(s,9h),1.38-1.30(m,1h),1.06-0.98(m,1h),0.97-0.94(m,3h),0.88-0.81(m,9h)ppm.
合成化合物18：将化合物17(16.00g,36.82mmol)及10％钯碳(1.6g)溶于1000ml甲醇中，在氢气作用下搅拌5小时后，过滤、浓缩后溶于140ml四氢呋喃中，加入五氟苯酚(6.78g,36.82mmol)，室温搅拌2小时后备用；将乙酸苄酯(16.9ml,117.82mmol)溶于140ml四氢呋喃中，降至-78摄氏度，缓慢加入二异丙基胺基锂(55ml,110.46mmol)，搅拌30分钟后，加入上述制备好的活化酯，-78摄氏度搅拌3小时后加入饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体18(10.53g,60％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.38-7.32(m,5h),5.25-5.10(m,3h),5.06-4.85(m,1h),4.39(dd,j＝9.6,6.8hz,1h),3.49(dd,j＝26.4,16.4hz,1h),3.10(s,0.35h),2.89(s,2.76h),2.09-1.99(m,1h),1.97-1.89(m,1h),1.42(s,9h),1.32-1.26(m,1h),1.01-0.94(m,1h),0.93-0.89(m,6h),0.88-0.79(m,6h)ppm.
合成化合物19：将化合物18(6.50g,13.64mmol)溶于55ml甲醇中，降至-78摄氏度，分三批加入硼氢化钾(2.58g,47.74mmol)，于-78摄氏度搅拌十分钟后，于冰盐浴条件下继续搅拌35分钟后，加入冰醋酸调解ph在9-10之间，减压浓缩后用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体19(5.09g,78％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.39-7.26(m,5h),5.19-5.05(m,3h),4.46-4.31(m,1h),4.29-4.20(m,0.5h),3.19-3.05(m,3h),2.55-2.27(m,2h),2.14-2.03(m,0.5h),2.02-1.87(m,1h),1.43-1.34(m,9h),1.03-0.95(m,6h),0.94-0.87(m,4h),0.87-0.76(m,3h)ppm.
合成化合物20：将化合物19(1.00g,2.09mmol)溶于8ml四氢呋喃中，加入六甲基磷酰三胺(4.02ml,2.30mmol)，降至-78摄氏度，加入六甲基二硅基胺基锂(2.09ml,2.09mmol)，于-78摄氏度搅拌30分钟后，于冰盐浴下加入三氟甲磺酸甲酯(473μl,4.18mmol)，搅拌15分钟后，加入饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体20(857mg,60％)。1hnmr(cdcl3,400mhz,mixtureofrotamers):δ7.37-7.31(m,5h),5.18-5.14(m,1.36h),5.11-5.05(m,1.67h),4.45-4.40(m,1h),4.39-4.32(m,1h),4.13-4.07(m,1h),3.29-3.27(m,3h),3.07-3.04(m,3h),2.51-2.44(m,1h),2.41-2.34(m,1h),2.04-1.88(m,2.67h),1.66-1.60(m,0.35h),1.42-1.36(m,9h),1.30-1.25(m,1h),0.99-0.97(m,3h),0.96-0.93(m,3h),0.92-0.89(m,3h),0.83-0.75(m,3h)ppm.
合成化合物21：将化合物20(1.50g,3.04mmol)溶于12ml二氯甲烷中，降至0摄氏度，加入三氟乙酸(1ml)，搅拌2小时后，减压浓缩得粗品胺。将上述粗品胺溶于12ml二氯甲烷中，依次加入hatu(1.12g,3.65mmol)，二异丙基乙胺(3.18ml,18.24mmol)及n-boc-l-缬氨酸(793mg,3.65mmol)，搅拌18小时后，加入饱和氯化铵溶液淬灭，用二氯甲烷萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体21(1.53g,85％)。1hnmr(cdcl3,400mhz,mixtureofrotamers):δ7.36-7.32(m,5h),6.54-6.36(m,1h),5.19-5.15(m,0.5h),5.09-5.04(m,2.5h),4.83-4.78(m,1h),4.38-4.32(m,1h),4.11-4.06(m,1h),3.94-3.78(m,1h),3.29-3.26(m,3h),3.05-3.02(m,3h),2.52-2.39(m,1h),2.37-2.24(m,1h),2.06-1.98(m,2h),1.97-1.88(m,1.5h),1.66-1.59(m,0.5h),1.43-1.41(m,9h),1.24-1.11(m,1h),0.98-0.95(m,3h),0.95-0.92(m,3h),0.89-0.86(m,6h),0.81-0.79(m,3h),0.78-0.75(m,3h)ppm.
合成化合物22：将化合物21(1.40g,2.37mmol)溶于9ml二氯甲烷中，降至0摄氏度，加入三氟乙酸(1ml)，搅拌2小时后，减压浓缩得粗品胺。将上述粗品胺溶于9ml乙腈中，依次加入40％甲醛溶液(4ml,18.96mmol)，氰基硼氰化钠(447mg,7.11mmol)，搅拌18小时后，加入饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体22(1.01g,82％)。1hnmr(cdcl3,400mhz,mixtureofrotamers):δ7.41-7.29(m,5h),6.92-6.74(m,1h),5.20-5.16(m,0.5h),5.10-5.07(m,1.5h),4.89-4.83(m,1h),4.40-4.34(m,1h),4.12-4.09(m,1h),3.30-3.23(m,3h),3.10-3.06(m,3h),2.53-2.39(m,2h),2.38-2.30(m,1h),2.25(s,3h),2,19(s,3h),2.10-1.91(m,3.5h),1.68-1.59(m,0.5h),1.30-1.18(m,1h),1.03-1.00(m,3h),0.99-0.96(m,4.5h),0.95-0.91(m,6h),0.88-0.86(m,1.5h),0.80-0.75(m,3h)ppm.
合成化合物1；将化合物22(608mg,1.17mmol)及10％钯碳(600mg)溶于50ml甲醇中，在氢气作用下搅拌2小时后，过滤、浓缩得粗品酸。将化合物14(500mg,1.06mmol)溶于4ml二氯甲烷中，降至0摄氏度，加入三氟乙酸(1ml)，搅拌2小时后，减压浓缩得粗品胺。将上述粗品胺溶于4ml二氯甲烷中，依次加入hatu(392mg,1.27mmol)，二异丙基乙胺(1.11ml,6.36mmol)及上述粗品酸，搅拌18小时后，加入饱和氯化铵溶液淬灭，用二氯甲烷萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体1(500mg,60％)。1hnmr(cdcl3,400mhz,mixtureofrotamers):δ7.74(dd,j＝4.8,2.0hz,1h),7.49(d,j＝5.2hz,0.5h),7.31(d,j＝5.2hz,0.5h),7.28-7.18(m,6h),6.99-6.91(m,1h),5.62-5.55(m,1h),4.92(dd,j＝6.0,4.0hz,0.5h),4.85(dd,j＝6.0,3.2hz,0.5h),4.39-4.27(m,2h),4.15-4.05(m,1h),3.89(dd,j＝4.8,1.6hz,0.5h),3.79(dd,j＝4.8,2.0hz,0.5h),3.47-3.39(m,1.5h),3.39(s,1.5h),3.38-3.36(m,0.5h),3.35(s,1.5h),3.34-3.31(m,1h),3.31(s,1.5h),3.31-3.29(m,0.5h),3.29(s,1.5h),3.28-3.26(m,0.5h),3.13-3.11(m,2.5h),2.49-2.46(m,0.5h),2.46-2.40(m,2h),2.35-2.30(m,1h),2.29(s,3h),2.26(s,3h),2.14-2.00(m,4h),1.98-1.94(m,1h),1.92-1.83(m,1h),1.82-1.75(m,1h),1.74-1.62(m,2h),1.26-1.18(m,1h),1.16-1.11(m,3h),1.10-1.04(m,3h),1.04-1.00(m,6h),0.96-0.92(m,6h),0.81-0.75(m,3h)ppm.。
实施例2
合成化合物18:将化合物17(8.00g,18.41mmol)及10％钯碳(800mg)溶于500ml甲醇中，在氢气作用下搅拌5小时后，过滤、浓缩后溶于70ml四氢呋喃中，加入氯甲酸乙酯(2.00g,18.41mmol)，室温搅拌2小时后备用；将乙酸苄酯(8.43ml,58.91mmol)溶于70ml四氢呋喃中，降至-78摄氏度，缓慢加入二异丙基胺基锂(27.62ml,55.23mmol)，搅拌30分钟后，加入上述制备好的活化酯，-78摄氏度搅拌3小时后加入饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体18(1.76g,20％)。
实施例3
合成化合物18:将化合物17(8.00g,18.41mmol)及10％钯碳(800mg)溶于500ml甲醇中，在氢气作用下搅拌5小时后，过滤、浓缩后溶于70ml四氢呋喃中，加入n,n'-羰基二咪唑(2.99g,18.41mmol)，室温搅拌2小时后备用；将乙酸苄酯(8.43ml,58.91mmol)溶于70ml四氢呋喃中，降至-78摄氏度，缓慢加入二异丙基胺基锂(27.62ml,55.23mmol)，搅拌30分钟后，加入上述制备好的活化酯，-78摄氏度搅拌3小时后加入饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体18(7.02g,80％)。
实施例4
合成化合物1:将化合物22(608mg,1.17mmol)及10％钯碳(600mg)溶于50ml甲醇中，在氢气作用下搅拌2小时后，过滤、浓缩得粗品酸。将化合物14(500mg,1.06mmol)溶于4ml二氯甲烷中，降至0摄氏度，加入三氟乙酸(1ml)，搅拌2小时后，减压浓缩得粗品胺。将上述粗品胺溶于4ml二氯甲烷中，依次加入edci(224mg,1.17mmol)，hobt(172mg,1.27mmol)，n-甲基吗啡啉(0.7ml,6.36mmol)及上述粗品酸，搅拌18小时后，加入饱和氯化铵溶液淬灭，用二氯甲烷萃取，干燥，过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化得到无色液体1(533mg,64％)。
结合上述实施例对本发明做了进一步的叙述，但本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，可以在不脱离本发明宗旨的前提下做出各种变化。