茶氨酰氨基酸苄酯修饰的姜黄素，其合成，活性和应用的制作方法

本发明涉及1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮,涉及它们的制备方法,涉及它们的抗肿瘤生长活性,涉及它们的抗炎活性，因而本发明涉及它们在制备抗肿瘤药物和抗炎药物中的应用。本发明属于生物医药领域。

背景技术：

恶性肿瘤是严重危害人类健康的全球性问题。肿瘤患者发现病患时大多已是临床中晚期，治疗方法以放化疗为主，化疗是恶性肿瘤处于中晚期时的主要治疗手段。然而，炎症会进一步恶化肿瘤患者的预后。由于现有抗肿瘤药物没有抗炎作用，所以肿瘤化疗的临床疗效不理想。发明具有抗炎活性的抗肿瘤药物是临床的迫切需求。此前，发明人曾公开1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰氨基酸苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的活性。后来发明人又公开抗黏附肽修饰的姜黄素在1μmol/kg剂量下可抑制s180小鼠肿瘤生长和抑制icr小鼠的炎症。可是最低有效剂量为1μmol/kg。为了降低最低有效剂量，发明人对姜黄素的酚羟基展开了各种修饰。经过3年探索，发现用茶氨酰-aa-obzl(aa选自l-ala残基、l-glu残基、gly残基、l-ile残基、l-met残基和l-thr残基)修饰的姜黄素不仅可使抗肿瘤生长的最低有效剂量降至0.1μmol/kg，而且抗炎的最低有效剂量低至0.1μmol/kg。抗肿瘤生长的有效剂量降低10倍表明，这种结构修饰有突出的技术效果。根据这些发现，发明人提出了本发明。

技术实现要素：

本发明的第一个内容是提供下式的1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(式中aa选自l-ala残基、l-glu残基、gly残基、l-ile残基、l-met残基和l-thr残基)

本发明的第二个内容是提供1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(式中aa选自l-ala残基、l-glu残基、gly残基、l-ile残基、l-met残基和l-thr残基)的合成方法，该方法包括：

(1)制备6-(4-羟基-3-甲氧苯基)-5,6-己烯-2,4-二酮(1)；

(2)制备2-(4-甲酰基-2-甲氧基苯氧基)-乙酸苄酯(2)；

(3)以步骤(1)和步骤(2)的产物为反应原料制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(3)；

(4)将1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮皂化，得到1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰乙酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(4)；

(5)化合物4和l-茶氨酸苄酯偶联得到1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(5)；

(6)将化合物5皂化得到1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)；

(7)化合物6和l-氨基酸苄酯偶联得到权利要求1的1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7)；

(8)化合物7皂化得到1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(aa选自l-ala残基、l-glu残基、l-gly残基、l-ile残基、l-met残基和l-thr残基)。

本发明的第三个内容是评价1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮对s180小鼠肿瘤生长的抑制应用。

本发明的第四个内容是评价1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮对icr小鼠炎症的抑制作用。

附图说明

图11-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮的合成路线.7a中aa为l-ala残基；7b中aa为l-glu残基；7c中aa为l-gly残基；7d中aa为l-ile残基；7e中aa为l-met残基；7f中aa为l-thr残基；i)三氧化二硼(b2o3),乙酰丙酮,硼酸三正丁酯,正丁胺,氯化氢水溶液(1m)；ii)碳酸钾,溴乙酸苄酯；iii)三氧化二硼(b2o3),硼酸三正丁酯,正丁胺,10％乙酸水溶液；iv)氢氧化钠水溶液(2m),丙酮；v)二环己基碳二亚胺(dcc),1-羟基苯并三唑(hobt),n-甲基吗啉(nmm),四氢呋喃(thf)。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1制备6-(4-羟基-3-甲氧苯基)-5,6-己烯-2,4-二酮(1)

将45.0ml(437.7mmol)乙酰丙酮，21.0g(301.6mmol)氧化硼和150.0ml无水乙酸乙酯于60℃回流1h。然后，往里加22.5g(148.0mmol)香草醛和41ml(293.0mmol)硼酸三丁酯。反应混合物70℃搅拌30min。于30min内继续往里加15ml(205.1mmol)正丁胺与135ml乙酸乙酯中的溶液。混合物于100℃搅拌3h后冷却至室温，并往里滴加150ml盐酸(1m)。混合物于50℃搅拌30min,静置，充分分层，水层用乙酸乙酯萃取3次。合并的乙酸乙酯层用饱和nacl溶液洗至中性，无水硫酸钠干燥,过滤，滤液减压浓缩至干，残留物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)得到10.05g(29％)目标化合物，为黄色固体。esi-ms(m/e)：235[m+h]⁺；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝15.74(s,1h),9.64(s,1h),7.50(d,j＝15.9hz,1h),7.30(s,1h),7.12(d,j＝8.1hz,1h),6.82(d,j＝8.1hz,1h),6.64(d,j＝15.9hz,1h),5.84(s,1h),5.14(s,2h),3.83(s,3h),2.12(s,3h)。

实施例2制备3-甲氧基-4-(氧基-2-乙酰苄酯基)苯甲醛(2)

将10g(65.8mmol)香草醛溶于100ml无水四氢呋喃。向该溶液分批加入10.9g(79.0mmol)碳酸钾并搅拌3h。然后向溶液中滴加9.3ml溴乙酸苄酯，室温搅拌48h，tlc监(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)显示反应结束。反应混合物过滤，滤液减压浓缩，残余物用100ml乙醚磨洗静置12h后倒掉乙醚，10ml乙醚磨洗3次，去乙醚，得到15.4g(78％)标题化合物，为无色固体。esi-ms(m/e)：301[m+h]⁺；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.86(s,1h),7.50(dd,j1＝8.4hz,j2＝1.8hz,1h),7.44(d,j＝1.8hz,1h),7.39(s,5h),7.11(d,j＝8.4hz,1h),5.21(s,2h),5.03(s,2h),3.84(s,3h)。

实施例3制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(3)

将5.55g(23.7mmol)6-(4-羟基-3-甲氧苯基)-5,6-己烯-2,4-二酮(1),0.83g(11.9mmol)氧化硼和100ml乙酸乙酯的悬浮液于70℃回流1h。之后，减压浓缩。残留物用100ml无水dmf溶解。往得到的溶液中加10.67g(35.6mmol)3-甲氧基-4-(氧基-2-乙酰苄酯基)苯甲醛(2)和11.15ml(41.0mmol)硼酸三丁酯。得到的溶液于80℃搅拌30min。之后，往里分4次滴加0.98ml(6.4mmol)正丁胺，用时1h，得到的溶液于80℃继续搅拌3h。之后，往里加200ml预热至60℃的10％乙酸水溶液。得到的溶液于80℃继续搅拌1h。反应混合物冷却至室温，过滤，滤饼用柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得到6.63g(53％)标题化合物，为黄色固体。esi-ms(m/e)：517[m+h]⁺；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.69(s,1h),8.51(d,j＝7.5hz,1h),7.80(t,j＝5.7hz,1h),7.59(d,j＝3.0hz,1h),7.54(d,j＝3.0hz,1h),7.37(m,7h),7.16(m,1h),6.89(m,4h),6.09(s,1h),5.14(s,2h),4.62(s,2h),4.37(m,1h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.04(qd,j1＝7.2hz,j2＝5.7hz,2h),2.15(m,2h),2.05(m,1h),1.90(m,1h),0.98(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例4制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(4)

将5g(9.7mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(3)用丙酮溶解。室温下往里加naoh水溶液(2m)，调节反应液ph为13并搅拌6h。tlc(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)显示反应完成。反应混合物用饱和khso4水溶液将ph调到7，减压浓缩，残余物用饱和khso4水溶液调ph到2。之后，用乙酸乙酯萃取3次。合并乙酸乙酯层，用饱和nacl溶液洗至中性，用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残留物用无水乙醚磨洗，得到2.64g(64％)标题化合物，为红色固体。esi-ms(m/e)：425[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.55(s,1h),7.57(m,2h),7.37(m,2h),7.20(m,2h),6.79(m,4h),6.06(s,1h),4.74(s,2h),3.85(s,6h)。

实施例5制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(5)

冰浴下将2g(4.7mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(4),1.69g(5.6mmol)盐酸茶氨酸苄酯和0.761g(5.64mmol)n-羟基苯并三唑(hobt)用50ml无水四氢呋喃溶解。向溶液中滴入由1.16g(5.63mmol)二环己基羰二亚胺(dcc)和10ml无水四氢呋喃的溶液。反应液用n-甲基吗啉调ph到8，室温搅拌12h。tlc(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)显示反应完成。反应液减压浓缩至干，残余物用150ml乙酸乙酯溶解。过滤、滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3次，饱和硫酸氢钾水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3次，饱和碳酸氢钠水溶液洗3次及饱和氯化钠水溶液洗3次。合并的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残留物用柱层析(二氯甲烷/甲醇＝80/1)纯化，得到2.24g(71％)标题化合物，为黄色固体。esi-ms(m/e)：673[m+h]⁺；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.69(s,1h),8.51(d,j＝7.5hz,1h),7.80(t,j＝5.7hz,1h),7.59(d,j＝3.0hz,1h),7.54(d,j＝3.0hz,1h),7.37(m,7h),7.16(m,1h),6.89(m,4h),6.09(s,1h),5.14(s,2h),4.62(s,2h),4.37(m,1h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.04(qd,j1＝7.2hz,j2＝5.7hz,2h),2.15(m,2h),2.05(m,1h),1.90(m,1h),0.98(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例6制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)

将2.24g(3.3mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(5)用丙酮溶解，室温下向溶液中滴加naoh水溶液(2m)至反应液ph为13，搅拌6h，tlc(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)显示反应完成。用饱和khso4水溶液将反应液ph调到7，减压浓缩，残余物用饱和khso4水溶液调ph到2。之后，用乙酸乙酯萃取3次，合并的乙酸乙酯层用饱和nacl水溶液洗至中性，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到1.07g(55％)标题化合物，为红色糖浆。esi-ms(m/e)：581[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.42(s,1h),8.1(m,1h),7.77(m,1h),7.57(m,1h),7.37(m,1h),7.24(m,2h),7.10(m,2h),6.96(d,j＝5.1hz,1h),6.79(m,3h),6.06(s,1h),4.57(s,2h),4.20(m,1h),3.82(s,6h),3.01(m,2h),2.09(m,3h),1.77(m,1h),0.95(t,j＝4.5hz,3h)。

实施例7制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-asp(obzl)-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7a)

冰浴下将2.83g(6.32mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6),1.63g(7.58mmol)hcl·ala-obzl和1.02g(7.58mmol)n-羟基苯并三唑(hobt)用20ml无水四氢呋喃溶解。之后，往里滴加1.56g(7.58mmol)二环己基羰二亚胺(dcc)和5ml无水四氢呋喃的溶液。反应液用n-甲基吗啉(nmm)调ph为8，室温搅拌12h，tlc(二氯甲烷/甲醇＝50/1)显示反应结束。反应液减压浓缩至干，残余物用150ml二氯甲烷溶解，抽滤、滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3次，饱和硫酸氢钾水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3次，饱和碳酸氢钠水溶液洗3次及饱和氯化钠水溶液洗3次。合并的二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干。残留物用柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝50/1)，得到1.64g(35％)标题化合物，为黄色固体。mp152-153℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：744[m+h]⁺；ir(cm^-1):3284,3068,2973,2931,2851,1736,1641,1626,1584,1540,1508,1449,1374,1337,1267,1211,1135,1030,964,696；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.70(s,1h),8.59(d,j＝6.9hz,1h),8.1(d,j＝7.8hz,1h),7.77(t,j＝6.0hz,1h),7.57(d,j＝15.6hz,2h),7.37(m,7h),7.24(d,j＝8.1hz,1h),7.17(d,j＝8.1hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.89(m,3h),6.10(s,1h),5.13(s,2h),4.61(s,2h),4.37(m,2h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.04(qd,j1＝7.2hz,j2＝6.0hz,2h),2.09(m,2h),1.95(m,1h),1.77(m,1h),1.31(d,j＝7.2hz,3h),0.99(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例8制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-glu-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7b)

采用实施例7的方法,从2.5g(5.87mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)和3.59g(8.80mmol)hcl·glu(obzl)-obzl得到880mg(17％)标题化合物，为黄色固体。mp140-142℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e):892[m+h]⁺；ir(cm^-1):3284,3066,2937,1731,1665,1639,1585,1543,1508,1449,1422,1390,1336,1265,1215,1162,1135,1032,964,845,799,754,741,696；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.69(s,1h),8.56(d,j＝8.1hz,1h),8.12(d,j＝8.1hz,1h),7.76(t,j＝5.7hz,1h),7.57(m,2h),7.36(m,12h),7.20(dd,j1＝8.4hz,j2＝1.8hz,1h),6.98(d,j＝8.4hz,1h),6.85(m,3h),6.11(s,1h),5.13(s,2h),5.08(s,2h),4.61(s,2h),4.40(m,2h),3.87(s,3h),3.85(s,3h),3.06(qd,j1＝7.2hz,j2＝5.7hz,2h),2.45(m,2h),2.09(m,2h),1.94(m,1h),1.80(m,1h),1.01(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例9制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-gly-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7c)

采用实例7的方法，从0.17g(0.29mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)和0.12g(0.60mmol)hcl·gly-obzl得到65mg(31％)标题化合物，为黄色固体。mp208-209℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：730[m+h]⁺；ir(cm^-1):3438,3287,3088,2934,1657,1639,1585,1550,1508,1455,1423,1382,1262,1214,1175,1134,1060,1032,962,753,697；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.69(s,1h),8.55(t,j＝3.6hz,1h),8.14(d,j＝4.8hz,1h),7.76(t,j＝3.3hz,1h),7.55(d,j＝9.3hz,2h),7.35(m,7h),7.20(d,j＝5.10hz,1h),7.13(d,j＝5.1hz,1h),6.94(d,j＝4.8hz,1h),6.79(m,3h),6.06(s,1h),5.11(s,2h),4.59(s,2h),4.35(m,1h),3.90(dd,j1＝7.2hz,j2＝5.7hz,2h),3.84(s,3h),3.82(s,3h),3.01(qd,j1＝6.9hz,j2＝3.3hz,2h),2.07(t,j＝4.8hz,2h),1.91(m,1h),1.75(m,1h),0.94(t,j＝6.9hz,3h)。

实施例10制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-ile-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7d)

采用实例7的方法，从3.52g(6.05mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)和1.87g(7.26mmol)hcl·ile-obzl得到1.32g(27.8％)标题化合物，为黄色固体。mp160-161℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：786[m+h]⁺；ir(cm^-1):3267,3076,2963,2932,2874,1732,1670,1646,1633,1586,1550,1508,1448,1422,1380,1340,1271,1256,1220,1195,1163,1133,1031,964,799,696；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.70(s,1h),8.39(d,j＝7.8hz,1h),8.08(d,j＝8.1hz,1h),7.79(t,j＝5.4hz,1h),7.58(d,j＝18.3hz,2h),7.37(m,7h),7.23(d,j＝8.4hz,1h),7.17(d,j＝8.1hz,1h),6.96(d,j＝8.4hz,1h),6.82(m,3h),6.10(s,1h),5.13(m,2h),4.61(s,2h),4.47(m,1h),4.27(m,1h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.05(qd,j1＝7.2hz,j2＝5.4hz,2h),2.09(m,2h),1.79(m,3h),1.32(m,1h),1.18(m,1h),0.99(t,j＝7.2hz,3h),0.78(m,6h)。

实施例11制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-met-obzl-3-甲氧基苯基)-1.6-庚二烯-3,5-二酮(7e)

采用实施例7的方法，从2.5g(5.87mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)和3.7g(8.80mmol)hcl·met-obzl得到830mg(18％)标题化合物，为黄色固体。mp169-170℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：804[m+h]⁺；ir(cm^-1):3287,3069,2929,1739,1644,1629,1584,1508,1447,1425,1378,1250,1212,1164,1134,1055,1031,963,816,696；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.68(s,1h),8.54(d,j＝7.2hz,1h),8.10(d,j＝5.2hz,1h),7.76(t,j＝6.0hz,1h),7.57(m,2h),7.36(m,7h),7.23(d,j＝7.2hz,1h),7.16(d,j＝7.8hz,1h),6.96(d,j＝7.8hz,1h),6.81(m,3h),6.09(s,1h),5.14(s,2h),4.60(s,2h),4.40(m,2h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.40(m,2h),3.05(qd,j1＝7.2hz,j2＝6.0hz,2h),2.09(m,2h),1.93(m,6h),1.77(m,1h),0.99(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例12制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-thr-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7f)

采用实施例7的方法，从3.31g(5.69mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)和1.68g(6.83mmol)hcl·thr-obzl得到0.95g(22％)标题化合物，为黄色固体。mp224-225℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：774[m+h]⁺；ir(cm^-1):3404,3289,3079,2936,1748,1658,1630,1585,1537,1512,1453,1441,1423,1375,1339,1276,1259,1165,1138,1125,1090,1034,987,962,694；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.69(s,1h),8.29(d,j＝8.4hz,1h),8.10(d,j＝8.1hz,1h),7.77(t,j＝5.1hz,1h),7.57(d,j＝15.6hz,2h),7.37(m,7h),7.23(d,j＝8.4hz,1h),7.17(d,j＝8.1hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.89(m,3h),6.09(s,1h),5.13(s,2h),5.08(d,j＝5.1hz,1h),4.61(m,3h),4.37(dd,j1＝8.4hz,j2＝3.0hz,1h),4.20(m,1h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.05(qd,j1＝6.9hz,j2＝5.1hz,2h),2.09(m,2h),1.95(m,1h),1.77(m,1h),1.06(d,j＝6.0hz,3h),0.97(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例13制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-ala-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(8a)

将500mg(0.67mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-asp(obzl)-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7a)用丙酮溶解，室温下往里滴加naoh水溶液(2m)至反应液ph为13并搅拌6h，tlc(二氯甲烷/甲醇＝50/1)显示反应完成。用饱和khso4水溶液将反应液ph调为7，减压浓缩，残余物用饱和khso4水溶液调ph为2，用乙酸乙酯萃取3次，合并的乙酸乙酯层用饱和nacl溶液洗至中性，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用无水乙醚磨洗，残留物用c18柱层析纯化得到290mg(66％)标题化合物，为黄色固体。mp175-177℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：742[m-h]^-；ir(cm^-1):3285,2935,1626,1508,1450,1252,1134,1030,964,843,810,713,666；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝12.60(s,1h),9.70(s,1h),8.40(d,j＝6.3hz,1h),8.07(d,j＝6.9hz,1h),7.77(t,j＝6.0hz,1h),7.60(m,2h),7.37(m,2h),7.24(d,j＝7.5hz,1h),7.17(d,j＝7.2hz,1h),6.98(d,j＝8.4hz,1h),6.89(m,3h),6.10(s,1h),4.61(s,2h),4.40(m,1h),4.21(m,1h),3.88(s,3h),3.85(s,3h),3.04(qd,j1＝6.3hz,j2＝6.0hz,2h),2.10(m,2h),1.93(m,1h),1.76(m,1h),1.28(d,j＝6.3hz,3h),0.99(t,j＝6.3hz,3h)。

实施例14制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-glu-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(8b)

采用实施例13的方法，从500mg(0.56mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-glu-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7b)得到230mg(51％)标题化合物，为黄色固体。mp139-140℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：710[m-h]^-；ir(cm^-1):3293,2935,1723,1624,1426,1257,1029,963,844,810,666；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝12.45(s,2h),9.69(s,1h),8.36(d,j＝7.5hz,1h),8.08(d,j＝8.1hz,1h),7.76(t,j＝6.0hz,1h),7.57(m,2h),7.37(m,2h),7.24(d,j＝8.1hz,1h),7.17(d,j＝8.1hz,1h),6.97(d,j＝8.1hz,1h),6.82(m,3h),6.10(s,1h),4.61(s,2h),4.39(m,1h),4.22(m,1h),3.87(s,3h),3.85(s,3h),3.04(qd,j1＝6.9hz,j2＝6.0hz,2h),2.29(t,j＝6.9hz,2h),2.10(m,2h),1.98(m,2h),1.77(m,2h),0.99(t,j＝6.9hz,3h)。

实施例15制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-gly-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二(8c)

采用实施例13的方法，从500mg(0.69mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-gly-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7c)得到335mg(77％)标题化合物，为黄色固体。mp151-153℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：638[m-h]^-；ir(cm^-1):3290,2934,1625,1584,1508,1423,1252,1134,1030,964,845,810,666；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.70(s,1h),8.33(t,j＝5.4hz,1h),8.10(d,j＝8.1hz,1h),7.77(t,j＝6.0hz,1h),7.57(m,2h),7.36(m,2h),7.33(s,1h),7.24(d,j＝8.1hz,1h),7.16(d,j＝7.8hz,1h),6.99(d,j＝8.4hz,1h),6.83(m,3h),6.10(s,1h),4.61(s,2h),4.38(m,1h),3.88(s,3h),3.85(s,3h),3.76(t,j＝5.4hz,1h),3.04(qd,j1＝6.9hz,j2＝6.0hz,2h),2.10(m,2h),1.94(m,1h),1.78(m,1h),0.98(t,j＝6.9hz,3h)。

实施例16制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-ile-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(8d)

采用实施例13的方法，从500mg(0.64mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-ile-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7d)得到352mg(80％)标题化合物，为黄色固体。mp147-149℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：694[m-h]^-；ir(cm^-1):3281,2966,1733,1644,1585,1543,1508,1424,1253,1136,1030,963,844,802,706,604；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝12.66(s,1h),9.68(s,1h),8.18(d,j＝8.1hz,1h),8.06(d,j＝7.8hz,1h),7.78(t,j＝5.4hz,1h),7.56(m,2h),7.37(d,j＝18.3hz,2h),7.24(d,j＝7.8hz,1h),7.17(d,j＝8.1hz,1h),6.98(d,j＝8.1hz,1h),6.88(m,3h),6.10(s,1h),4.61(s,2h),4.47(m,1h),4.19(m,1h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.05(dq,j1＝6.9hz,j2＝5.4hz,2h),2.11(m,2h),1.92(m,1h),1.78(m,2h),1.40(m,1h),1.21(m,1h),0.99(t,j＝6.9hz,3h),0.87(m,6h)。

实施例17制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-met-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(8e)

采用实施例13的方法，从500mg(0.62mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-met-obzl-3-甲氧基苯基)-1.6-庚二烯-3,5-二酮(7e)得到223mg(50％)标题化合物，为黄色固体。mp162-163℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：712[m-h]^-；ir(cm^-1):3291,3081,2970,2935,1652,1626,1586,1544,1510,1428,1375,1338,1258,1136,1031,963,810；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝12.73(s,1h),9.69(s,1h),8.36(d,j＝7.8hz,1h),8.09(d,j＝7.8hz,1h),7.77(t,j＝5.4hz,1h),7.57(m,2h),7.37(m,2h),7.23(d,j＝8.4hz,1h),7.16(d,j＝8.1hz,1h),6.96(d,j＝8.4hz,1h),6.81(m,3h),6.10(s,1h),4.61(s,2h),4.37(m,2h),3.88(s,3h),3.85(s,3h),3.04(qd,j1＝6.9hz,j2＝5.4hz,2h),2.00(m,9h),0.96(t,j＝6.9hz,3h)。

实施例18制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-thr-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(8f)

采用实施例13的方法，从500mg(0.65mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-thr-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7f)得到286mg(65％)标题化合物，为黄色固体。mp169-170℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：682[m-h]^-；ir(cm^-1):3293,2935,1721,1625,1507,1423,1260,1131,1030,962,844,809,667；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝16.30(s,1h),12.60(s,1h),9.69(s,1h),8.10(d,j＝7.8hz,1h),8.04(d,j＝8.4hz,1h),7.77(t,j＝6.3hz,1h),7.57(m,2h),7.36(d,j＝17.1hz,2h),7.24(d,j＝8.4hz,1h),7.17(d,j＝7.8hz,1h),6.97(d,j＝8.1hz,1h),6.89(m,3h),6.10(s,1h),4.61(s,2h),4.53(m,1h),4.21(m,2h),3.88(s,3h),3.85(s,3h),3.05(qd,j1＝7.2hz,j2＝6.3hz,2h),2.10(m,2h),1.93(m,1h),1.76(m,1h),1.04(d,j＝6.3hz,3h),0.99(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例19测定化合物8a-f的抗肿瘤生长活性

测定前将阿霉素,化合物6和化合物8a-f用生理盐水溶解,用于s180小鼠给药。在无菌环境中取接种于雄性icr小鼠10天生长旺盛的s180腹水瘤液，用生理盐水稀释成(1:2)的液体充分混合，将肿瘤细胞悬液用新鲜配制的0.2％台盼蓝染色，混匀后按白细胞计数方法计数，染蓝色者为死细胞，不染色者为活细胞。按细胞浓度＝4大方格内活细胞数/4×10⁴×稀释倍数＝细胞数/ml计算细胞密度，按细胞存活率＝活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100％计算细胞存活率。将存活率大于90％的瘤液用匀浆法制成密度为2.0×10⁷个/ml的细胞悬液。该细胞悬液接种于小鼠右腋皮下(0.2ml/只)，制造s180荷瘤小鼠。接种24h后s180荷瘤小鼠每日腹腔注射阿霉素的生理盐水溶液(剂量为2μmol/kg/天g)或腹腔注射化合物6的生理盐水溶液(剂量为1μmol/kg/天)或腹腔注射化合物8a-f的生理盐水溶液(剂量为0.1μmol/kg/天)，每组10只。每天给药一次，连续给药12天。最后一次给药的次日乙醚麻醉脱颈椎处死，然后用镊子固定小鼠右腋肿瘤生长部位，剪开皮肤钝性剥离肿瘤并称重。用瘤重(均值±sdg)表示疗效，数据用t检验和方差分析。结果见表1。在0.1μmol/kg剂量下化合物8a-f不仅有效地抑制肿瘤生长，而且活性与剂量比它们大10倍的化合物6没有显著性差异。这些数据表明，本发明有显著的技术效果。

表1化合物8a-f对s180小鼠肿瘤生长的影响

a)与生理盐水比p<0.01,与化合物6比p>0.05；n＝10.

实施例20测定化合物8a-f的抗炎活性

因为二甲苯引起的小鼠耳肿胀被公认为急性炎症模型，所以本发明在二甲苯引起的小鼠耳肿胀模型上测定化合物8a-f的治疗作用。因为阿司匹林是治疗急性炎症的阳性药，所以本发明选择阿司匹林为阳性对照药。icr雄性小鼠(体重22±3g)在22℃环境静息2天,自由饮水和进食。之后，随机分为生理盐水组(剂量为0.2ml/只)，阿司匹林组(剂量为1.11mmol/kg)，化合物6组(剂量为1μmol/kg)及化合物8a-f组(剂量为0.1μmol/kg)，每组10只小鼠。测定时小鼠按所在组或腹腔注射生理盐水，或腹腔注射阿司匹林，或腹腔注射化合物6，或腹腔注射化合物8a-f。给药30min后,往小鼠的左耳廓均匀涂抹30μl二甲苯,2h后小鼠接受乙醚麻醉，断颈处死,剪下左右两耳,用7mm的打孔器在两耳的相同位置取圆形耳片,称重,求出两耳肿胀差值作为肿胀度。即肿胀度＝左耳圆片重量–右耳圆片重量。数据见表2。在0.1μmol/kg剂量下化合物8a-f不仅有效地抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀，而且活性与剂量比它们大10倍的化合物6没有显著性差异。这些数据表明，本发明有显著的技术效果。

表2化合物8a-f对二甲苯引起的小鼠耳肿胀的影响

a)与生理盐水比p<0.01,与化合物6比p>0.05；n＝10。