C-18位氟代的Laragzole类似物、其制备方法和制备抗肿瘤剂的用途与流程

本发明属制药领域，涉及一种新的海洋天然产物环酯肽(即海洋天然产物largazole)的氟代类似物、其制备方法及含有该化合物的药物或其组合物作为抗肿瘤治疗剂的用途。

背景技术：

据资料显示，癌症已成为继心脑血管疾病之后的又一危害人类身体健康的重大疾病，从20世纪70年代以来，我国癌症发病及死亡人数一直曾上升趋势，预计到2020年肿瘤年发病人数更将高达300万人次，而年死亡人数也会达到250万人次，在我国城镇居民中癌症已占死因首位，因此，研究与发现低毒高效的肿瘤治疗药物，具有重要的临床及商业价值。

目前国际上已开发的抗肿瘤药物众多，临床常用的抗肿瘤有80多种。随着人们对肿瘤研究的不断深入，使人们认识到传统的具有细胞毒性的化疗药物，在杀伤肿瘤细胞的同时随着人们对肿瘤研究的不断深入，使人们认识到传统的具有细胞毒性的化疗药物，在杀伤肿瘤细胞的同时，也会对人体某些正常的组织、器官和细胞如骨髓、消化道、肝、肾等带来更大的伤害，这些都极大的制约了这些传统化疗药物的临床应用。目前新型抗肿瘤药物的开发正在从传统细胞毒药物转向针对癌症细胞内异常的信号系统靶点的特异性抗肿瘤药物，即分子靶向治疗药。随着对肿瘤信号网络的不断认识，已开发出一些的分子靶向药物，并进入了临床应用，取得了显著成绩。其中，组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase，hdacs)对肿瘤细胞生长调控具有重要作用的一种蛋白。组蛋白乙酰化转移酶(histoneacetylases，hats)和组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylases,hdacs)负责调控核心组蛋白乙酰化和去乙酰化的动态平衡，从而保证人体细胞的正常功能，不致发生癌变。但是，研究证实，在大多肿瘤细胞内hdacs都呈现过度表达，而导致组蛋白呈现低乙酰化状态，组蛋白乙酰化状态的失衡与肿瘤的发生和发展有这密切关系，并且发现hdacs抑制剂主要通过阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制血管新生、诱导自我吞噬、发挥协同作用等作用机制，可以达到治疗癌症的目的。

到目前为止己经发现的hdacs抑制剂按结构主要有以下几种类型:1.短链脂肪酸类，包括丁酸、苯丁酸和异戊酸及其盐类；2.羟肟酸类，包括trichostatina(tsa)和伏利诺他(saha)及其衍生物cbha和mm232等；3.不含环氧酮基的环四肽类结构，包括fr90i228,apicidin和包含环氧酮基的环四肽类结构，包括trapoxinb等；4.酰胺类，包括ms-275,ci-994和cso55等(如下式所示)。

研究发现在哺乳动物细胞中hdacs共有18个hdac的亚型，根据与酵母菌hdac序列的同源性，分为一下4大类：第i类hdac家族包括hdac1、hdac2、hdac3和hdac8，与酵母菌rpd3蛋白相似；第ii类hdac家族包括hdac4、hdac5、hdac6、hdac7、hdac9和hdac10，与酵母菌hda1蛋白相似；第iii类hdac家族与酵母菌的转录抑制因子sir2序列相近；第iv类只有hdac11一种。其中i、ii和iv类的hdac家族为zn2+依赖型靶标，而iii类hdac为保守的尼克酰胺腺嘌呤双核苷酸(nad+)依赖型靶标。

实践显示，目前的hdacs抑制剂大多对于hdacs亚型的选择性欠佳，已暴露出较多的潜在不良反应，如伏利诺他(saha)对hdac1～hdac9显示的活性基本相当，导致如红细胞减少、血小板减少及心电图异常等，这都极大的制约了它们的临床疗效。而随着对hdac与肿瘤发生、发展研究的不断深入探讨，特别是对hdacs各个亚型结构和功能的不断被揭示，单个亚型或者是属于同一类的多个亚型选择性组蛋白去乙酰化酶抑制剂在发挥疗效和减少副作用上更具优势。

目前已在临床应用的hdacs抑制剂药物主要有：伏利诺他(vorinostat,saha)，它对hdac1、hdac2、hdac3、hdac4、hdac6、hdac7、hdac9和hdac10都有较高的抑制活性，该化合物于2006年被美国fda批准用于治疗皮肤t淋巴细胞瘤，而同类羟肟酸类hdacs抑制剂belinostat也于2014年被美国fda批准临床应用；罗米地辛(romidepsin,fk-228)归属于第i型的选择性hdac抑制剂，对hdaci型具有较好的选择性抑制作用，它对于hdac2和hdac1的抑制活性要比对hdac4和hdac6抑制活性的要强，其结构中的二硫键在体内被还原成巯基后发挥于金属离子的结合作用，于2010年被美国fda批准用于临床治疗的cttl患者；西达苯胺，为酰胺类hdacs抑制剂于2015年1月在中国批准上市，用于治疗外周t细胞淋巴瘤(ptcl)。

海洋天然产物largazole是由佛罗里达州立大学的天然物质研究院hendrinkluesch等人从海洋蓝藻symplocaspp.中首次分离得到的一个具有十六元环肽内酯结构天然产物，并证实它是一种强效的组蛋白去乙酰化酶抑制剂，尤其是对i型的组蛋白去乙酰化酶具有极好的选择性抑制作用，能够有效地抑制肿瘤细胞的增殖，临床前的研究表明合适剂量的largazole能够选择性地杀死肿瘤细胞而对正常细胞不产生影响(j.am.chem.soc.2008,130,13506)。它与具有16元大环结构的罗米地辛(romidepsin,fk-228)相似，水解它的硫酯侧链能够产生一个与fk228在体内发挥药物活性结构相似的活化硫醇结构，该活化硫醇可以协调到催化zn2+的组蛋白去乙酰化酶中(org.lett.2010,12,1368)。

largazole因其独特的结构、良好的药理活性以及特异的靶向性，其一经发现报道，就掀起了对其进行的结构修饰的热潮，到目前为止已有大量关于其合成改造和代谢活性的相关报道(nat.prod.rep.2012,29,449)，同时，largazole游离硫醇与hdac8复合物的x-衍射晶体结构也公开报道(j.am.chem.soc.2011,133,12474)。但关于largazole氟代类似物的研究并不深入，大量的新药开发研究发现，在活性分子中引入f元素往往可以增加其活性及体内代谢稳定性，其原因在于：1.氟原子和氢原子的大小很接近，引入后分子大小和形状几乎没有发生变化；2.氟原子的引入使非极性的碳碳双键(c＝c)产生了极性；3.强负电性的f原子可以参与形成氢键；4.氟原子的引入可以产生强亲脂性作用，尤其利于透过细胞膜；5.在双键上引入一个f原子会比普通的c＝c双键更稳定，对酶的耐受性更强。因而在活性分子开发中，尤其是在烯烃双键上引入氟原子，往往产生意想不到的效果。

尽管largazole因已被证实是一个抗肿瘤治疗剂，但进一步的结构修饰以改善其抑制hdacs效果、降低其毒性和理化性质仍是必要的。基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供一种具有抗肿瘤作用的largazole氟代类似物、其制备方法和含有该化合物的药物或其组合物作为抗肿瘤治疗剂的用途。

技术实现要素：

本发明的目的是基于现有技术的现状，拟提供一种具有抗肿瘤作用的largazole氟代类似物，具体涉及一种新的海洋天然产物环酯肽(即海洋天然产物largazole)的氟代类似物、其制备方法及含有该化合物的药物或其组合物作为抗肿瘤治疗剂的用途。

本发明提供了一种通式(i)所示的化合物或其盐：

其中：

r¹选自h，r³，r³s，r³co，r³nhco；

r²选自h，me，et，r³s，r³ss，sh，ch2sr³，ch2ssr³，ch2sh，r³o，bn，或取代的bn；

r³选自氢，c1-c10的烷基，芳香基，其中c1-c10的烷基链上可以嵌入一个或多个氧或氮原子；或者c1-c10烷基链上可以嵌入一个芳香基；或者r³也可选自c1-c10的烷基和芳基成环的组合；

r¹与r²还可以形成一个环；

另外，本发明提供了通式(i)所述化合物的制备方法，按如下合成路线进行：

其中，

第六步：s-构型的醇6经缩合反应制备相应的含噻唑类杂环的氟代烯烃酯7，所述的缩合反应是指s-构型的醇6，在合适溶剂和反应温度条件下，在碱和酸活化剂作用下，与带有氨基保护基的氨基酸反应，制备相应构型的含噻唑类杂环的氟代烯烃酯7，其中所述的碱可以是二异丙基乙胺(dipea)、4-二甲甲氨基哌啶(dmap)；所述的活化剂是酰氯、hobt、hoat、edci或dcc；其中所述的溶剂为四氢呋喃、乙醚、二氯甲烷、dmf等非质子性有机溶剂，所述的反应温度为-10-100℃；

第七步：酯7经水解反应、脱保护基反应、分子内缩合关环反应制备相应构型的大环化合物8；所述的水解反应是指：在碱性条件下，在极性溶剂中，酯7发生选择性的甲酯水解，经中和获得相应中间体酸；所述的碱性条件是指用碱如koh、naoh、lioh、ba(oh)2或bu3snoh等；所述的极性溶剂是指1,2-二氯乙烷、thf、1,4-二氧六环、dmf、dmso、甲醇、乙醇、异丙醇、水等溶剂中或上述溶剂组合的混合溶剂；所述的反应条件包括反应温度，优选的是反应温度为-10-100℃；

所述的脱保护基反应是指：酯7经水解反应获得的相应中间体酸，再经脱保护基反应制备相应的含羧基的有机胺化合物；所述的脱保护基反应是指相应中间体酸用二级胺类化合物作有机碱如：二乙基胺、吗啉、哌啶等，在有机溶剂如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、thf、1,4-二氧六环、dmf、dmso、甲醇、乙醇或异丙醇等溶剂中，控制反应温度如-10-100℃，可以将中间体中氨基保护基选择性地脱除，制备相应含羧基的胺类化合物；

所述的分子内缩合关环反应是指：酯7经水解反应、脱保护基反应制备的相应含羧基的有机胺化合物，再经分子内缩合关环反应制备相应构型的氟代烯烃取代的大环化合物8，所述的分子内缩合关环反应是指：经水解反应、脱保护基反应制得的含羧基的有机胺化合物在缩合剂存在下，所述的缩合剂如hatu、hoat、hobt、dipea或者前三者的任意组合，在合适的有机溶剂如：二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、thf、1,4-二氧六环、dmf、dmso或乙腈等溶剂中，控制反应温度如-10-100℃，可以制备相应构型的氟代烯烃类的大环化合物8；

第八步：相应构型的氟代烯烃类的大环化合物8经巯基保护基的脱除反应、酰化反应制备largazole的氟代烯烃类似物9，即通式(i)所述化合物：

所述的巯基保护基的脱除反应是指大环化合物8，在有机溶剂如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、thf、1,4-二氧六环、dmf、dmso或乙腈等溶剂中，在优选的反应温度范围内如-10-100℃，经三异丙基硅烷和三氟乙酸单独或协同作用下，发生巯基保护基的脱除，获得游离的硫醇中间体；

所述的酰化反应是指大环化合物8，经巯基保护基的脱除反应制得游离的硫醇中间体，在有机溶剂如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、thf、1,4-二氧六环、dmf、dmso或乙腈等溶剂中，在优选的反应温度范围内如-10-100℃，在碱的作用下，与酰化试剂发生酰化反应合成largazole的氟代烯烃类似物，所述的碱包括无机碱或有机碱，如nahco3、khco3、k2co3、na2co3、cs2co3，或三乙胺、二异丙基乙基胺、吡啶、dmap等，所述的酰化剂指的是c1-10的烷基酰氯、芳基酰氯、c1-10烷氧基碳酰氯、c1-10烷胺基碳酰氯、芳基酰氯、芳基氧基碳酰氯、芳基胺基碳酰氯；

其中在上文所述中，涉及了有关官能团、化学试剂或溶剂代号，参照国际通用命名规则或通用习惯，有关官能团、化学试剂或溶剂代号定义如下：

ac：acetyl；

bn：benzyl；

boc：tert-butoxycarbonyl；

cbz：benzyloxycarbonyl；

dibalh：diisobutylaluminiumhydride；

dce：dichloromethane；

dcm：dichloromethane；

dipea：diisopropylethyamine；

dme：1,2-ethanedioldimethylether；

dmap：4-dimethylaminopyridine；

dmf：n,n-dimethylformamide；

dmp：dess-martinperiodinane；

dmso：dimethylsulfoxide；

dppa：diphenylphosphonicazide；

dmpu：1,3-dimethyl-3,4,5,6-tetrahydro-2(1h)-pyrimidinone；

ea：ethylacetate；

edci：dimethylaminopropyl-n’-enthylcarbodiimidehydrochloride；

fmoc-cl：9-fluorenylmethylchloroformate；

fmoc：9-fluorenylmethylformyl；

hatu：2-(7-aza-1h-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium

hexafluorophosphate；

hoat：1-hydroxy-7-azabenzotriazole；

hobt：1-hydroxybenzotriazole；

lda：lithiumdiisopropylamide；

mecn：acetonitrile；

nahmds：sodiumbis(trimethylsilyl)amide；

py：pridine；

thf：tetrahydrofuran；

tips：triisopropylsilane；

tfa：trifluoroaceticacid；

tmsotf：trimethylsilyltrifluoromethanesulfonate；

tol：toluene。

本发明对所述的部分化合物进行了体外hdacs的抑制活性测试，分别考察其对6种商业购得的hdacs(如：hdac1,2,3,6,8和10)的抑制活性，并与largazole作比较；结果显示，本发明所述的化合物具有强的、选择性的抑制hdacs的作用；代表性的化合物对hdacs的ic50值如表1所示；

表1

本发明还提供了所述的化合物和一种以上的辅药组成的药物成分，其中药物成分中含有通式所述的化合物，进一步所述，药物成分用于抑制哺乳动物细胞增殖，即给患有肿瘤的哺乳动物服用治疗有效剂量的通式所述的药物，其中哺乳动物患有的肿瘤包括实体瘤，癌，淋巴瘤，霍奇金病，肿瘤疾病，新生瘤疾病等。

本发明提供了一种药物组合物，其含有治疗有效剂量的本发明通式化合物或其盐和药学载体，在制备抗肿瘤药物中的用途。换言之，本发明还提供含有效剂量的上述化合物的组合物，本发明的中通式(i)所示化合物的盐可以是游离形式和酸式加成盐或羧酸盐的形式。酸式加成盐的例子包括无机酸盐如：硫酸盐、硝酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、磷酸盐等，或者有机酸盐如酒石酸盐、乙酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、乳酸盐等。

具体实施方式

以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制本发明的范围。

实施例1苄基取代的largazole氟代类似物的合成

第一步，化合物2的制备：

100ml干燥的反应瓶中加入化合物三苯甲硫醇(1.28g,4.62mmol)和20ml的无水二氯甲烷，室温搅拌溶解，加入三乙胺(0.9ml,6.50mmol)，随后滴加丙烯醛(0.43ml,6.50mmol)，室温搅拌反应1h(tlc跟踪)。停止搅拌，旋干溶剂，得白色粗品，不做进一步纯化，直接用于化合物2的制备。rf＝0.13(pe:ea＝40:1).¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ9.56(brs,1h),7.23–7.43(m,15h),2.47(t,j＝7.0hz,2h),2.37(t,j＝6.7hz,2h).

第二步化合物3的制备：

100ml干燥的反应瓶中加入pph3(3.15g,12.0mmol)、二溴氟乙酸乙酯(0.83ml,6.0mmol)和30ml无水thf，室温下搅拌溶解，快速滴入1.0m的二乙基锌的己烷溶液(12.0ml,12.0mmol)，混合物搅拌10min后，快速加入溶有化合物2(1.0g,3.0mmol)，反应过夜。加入10ml的无水乙醇淬灭，析出固体，搅拌10min后，减压浓缩，加入100ml无水乙醚，室温搅拌30min，经硅藻土助滤，乙醚冲洗，滤液浓缩，残留物硅胶柱层析(洗脱条件：pe/ea＝40：1)，得白色固体，其中e式结构0.325g,收率26％；z式结构0.730g，收率58％。z式结构：

rf＝0.35(pe/ea＝40:1).¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ7.40(m,6h),7.25(m,6h),7.18(m,3h),5.75(dt,j＝20.9,7.9hz,1h),4.23(q,j＝7.1hz,2h),2.56(m,2h),2.26(t,j＝7.2hz,2h),1.29(t,j＝7.1hz,3h).¹³c-nmr(150mhz,cdcl3):δ160.58(d,²jc-f＝34.5hz),147.91(d,¹jc-f＝252hz),144.65,129.48,127.81,126.60,121.24(d,²jc-f＝19.6hz),66.71,61.28,31.30,24.55(d,³jc-f＝5.1hz),14.00.¹⁹f-nmr(376mhz,cdcl3):δ-121.29(d,22.6hz).esi-ms(m/z):443.6[m+na]⁺.hrms-esi(m/z):[m+na]⁺calcd.forc26h25fo2sna:443.1452,found:443.1452.e式结构：

rf＝0.27(pe/ea＝40:1).¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ7.41(m,6h),7.28(m,6h),7.22(m,3h),5.97(dt,j＝32.8,7.2hz,1h),4.25(q,j＝7.1hz,2h),2.25(m,4h),1.31(t,j＝7.1hz,3h).¹³c-nmr(150mhz,cdcl3):δ155.83(d,²jc-f＝34.5hz),143.62(d,¹jc-f＝256.5hz),139.93,124.82,123.19,121.99,113.57(d,²jc-ff＝11.4hz),62.15,56.85,25.79,18.90,9.39.¹⁹f-nmr(376mhz,cdcl3):δ-128.95(d,j＝32.8hz).esi-ms(m/z):443.6[m+na]⁺.hrms-esi(m/z):[m+na]⁺calcd.forc26h25fo2sna:443.1452,found:443.1454.

第三步化合物4的制备：

500ml干燥的反应瓶中加入化合物z-3(4.028g,9.60mmol)，氩气保护下加入100ml的无水甲苯，搅拌溶解。冷却至-78℃，滴加1.5m的二异丁基氢化铝(22.0ml,33.5mmol)，滴加完毕后，保持该温度反应1h，小心加入50ml甲醇淬灭，恢复至室温，加入100ml的饱和酒石酸钠钾，室温搅拌过夜。静置分液，水相用ea提取(100ml×2)，合并有机相，饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经硅胶柱层析(洗脱条件：pe/dcm/ea＝35：5：1)，得到化合物4，其中化合物z-构型的4，为白色固体2.74g，收率76％.rf＝0.35(pe/dcm/ea＝35:5:1).¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ9.13(d,j＝18.2hz,1h),7.43(m,6h),7.27(m,9h),5.75(dt,j＝32.1,7.2hz,1h),2.35(m,4h).¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ183.49(d,j＝24.9hz),156.48(d,j＝261hz),146.88,144.53,129.54,128.71(d,j＝10.2hz),127.99(d,j＝10.1hz),127.29,126.86,67.09,30.22,24.01.¹⁹f-nmr(376mhz,cdcl3):δ-132.15(dd,j＝32.1,18.2hz).esi-ms(m/z):399.6[m+na]⁺.hrms-esi(m/z):[m+na]⁺calcd.forc24h21fosna:399.1189,found:399.1192.

第四步化合物5的制备：

250ml干燥的反应瓶中加入化合物z-构型的4(1.12g,4.46mmol)，氩气保护下加入无水二氯甲烷50ml，搅拌溶解。冰盐浴下下滴加四氯化钛(0.82ml,7.43mmol),搅拌反应0.5h，成橘黄色悬浊液。冷却至-40℃，滴加dipea(1.23ml,7.43mmol),并在该温度下反应2h；降至-90℃，缓慢滴加溶有化合物67(1.44g,3.71mmol)的无水二氯甲烷溶液约20ml，并保持该温度反应3h，加入20ml的饱和氯化铵溶液淬灭，恢复至室温。加入20ml水，静置分液，水相用二氯甲烷提取(20ml×3)，合并有机相，饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经硅胶柱层析(洗脱条件：pe/ea＝8：1)，得两个黄色异构体化合物5，5s(1.027g,收率44％)和化合物5r(0.956g,收率40％)。

其中化合物5s：

rf＝0.19(pe/ea＝4:1).¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ7.29(m,20h),5.33(m,1h),4.86(dd,j＝36.8,7.1hz,1h),4.63(brs,1h),3.67(m,1h),3.47(dd,j＝17.9,8.8hz,1h),3.36(dd,j＝11.2,7.2hz,1h),3.21(m,1h),3.03(m,1h),2.95(d,j＝4.1hz,1h),2.87(d,j＝11.6hz,1h),2.19(m,4h).¹³c-nmr(150mhz,cdcl3):δ201.27,172.02,158.60(d,¹jc-f＝257.2hz),144.87,136.32,129.60,129.45,128.97,127.88,127.34,126.63,104.96(d,³jc-f＝12.9hz),68.32,66.63,42.81,36.79,32.18,31.52,22.72.¹⁹f-nmr(376mhz,cdcl3):δ-129.15(dd,j＝32.1,18.2hz).esi-ms(m/z):650.4[m+na]⁺.hrms-esi(m/z):[m+na]⁺calcd.forc36h34fno2s3na:650.1628,found:650.1621.

第五步化合物6的制备：

50ml干燥的反应瓶中加入如上反应式所述的化合物取代的噻唑胺(0.603g,1.636mmol)、dmap(0.520g,4.253mmol)和20ml的无水二氯甲烷，室温下搅拌混匀5min。滴加溶有化合物5s(1.027g,1.636mmol)的无水二氯甲烷溶液约10ml，室温下搅拌反应1h(tlc跟踪)。停止搅拌，浓缩，残留物经硅胶柱层析(洗脱条件：pe/ea＝1:2)，得白色固体0.759g，收率65％。rf＝0.26(pe/ea＝1：1).(c＝0.4,chcl3).¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ7.89(s,1h),4.79(m,2h),4.68(m,2h),4.49(brs,1h),3.87(d,j＝11.4hz,1h),3.79(s,3h),3.27(d,j＝11.4hz,1h),2.56(m,2h),2.15(m,5h),1.63(s,3h).¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ173.62,171.49,167.63,162.78,158.92(d,j＝257.4hz),148.20,144.83,129.58,127.91,126.67,122.56,104.67(d,j＝12.3hz),84.49,67.09,66.87,66.62,53.01,41.54,40.80,39.72,31.49,24.02,22.70(d,j＝3.5hz).¹⁹f-nmr(376mhz,cdcl3):δ-124.95(dd,j＝36.2,20.3hz).esi-ms(m/z):712.4[m+na]⁺.hrms-esi(m/z):[m+na]⁺calcd.forc36h36fn3o4s3na:712.1744,found:712.1748.

第六步化合物7的制备：

将化合物fmoc-l-phe-oh(0.079g,0.20mmol)、dmap(0.014g,0.11mmol)加入50ml干燥洁净的单口反应瓶中，充入氩气保护，用一次性针筒加入15ml的无水二氯甲烷，冰浴下搅拌溶解，降至0℃，分别用一次性针筒滴加2,4,6-三氯苯甲酰氯(0.04ml,0.25mmol)和dipea(0.05ml,0.3mmol)，保持该温度反应1h。将化合物6(0.280g,0.406mmol)溶于5ml的无水thf溶液后滴入反应体系，恢复至室温反应6h,停止搅拌，浓缩，粗品经硅胶柱层析(洗脱条件：pe/ea＝1：1)，得白色固体0.063g，收率60％。

rf＝0.26(pe/ea＝1：1).(c＝0.097,chcl3).1hnmr(600mhz,cdcl3)δ7.89(s,1h),7.76(d,j＝7.5hz,2h),7.53(t,j＝7.2hz,2h),7.39(d,j＝7.4hz,8h),7.33–7.25(m,9h),7.19(dd,j＝16.7,7.7hz,6h),7.04(d,j＝6.9hz,2h),6.60(s,1h),5.77–5.57(m,1h),5.26(d,j＝7.5hz,1h),4.81(dt,j＝36.0,7.0hz,1h),4.70–4.61(m,2h),4.52(dd,j＝12.9,6.3hz,1h),4.45–4.27(m,2h),4.18(t,j＝6.8hz,1h),3.86(d,j＝11.3hz,1h),3.78(s,3h),3.25(d,j＝11.3hz,1h),3.03(m,j＝48.0,13.9,6.1hz,2h),2.66(m,j＝19.6,14.9,6.5hz,2h),2.18(t,j＝6.5hz,3h),2.15–2.07(m,2h),1.63(s,4h).¹³cnmr(151mhz,cdcl3)δ172.56(s),169.70(s),167.54(s),167.03(s),162.15(s),154.99(d,j＝11.5hz),154.46(d,j＝14.7hz),152.56(d,j＝74.3hz),147.53(d,j＝54.5hz),144.14(s),143.09(d,j＝14.9hz),140.69(s),134.75(s),128.94(s),128.73(s),127.94(s),127.29(s),127.11(s),126.50(d,j＝7.5hz),126.07(s),124.44(d,j＝7.6hz),121.71(s),119.37(s),109.04(d,j＝12.3hz),83.92(s),69.32(d,j＝29.3hz),66.25(d,j＝46.7hz),54.26(s),52.28(s),46.50(s),40.89(s),40.41(s),37.41(s),37.18(s),30.43(s),23.36(s),22.31(s)..¹⁹f-nmr(376mhz,cdcl3):δ-126.27(dd,j＝35.4,21.1hz).esi-ms(m/z):1059.2[m+h]⁺.hrms-esi(m/z):[m+na]⁺calcd.forc60h55fn4o7s3na:1081.3109,found:1081.3126.

第七步化合物8的制备：

将化合物7(0.37g,0.35mmol)加入100ml洁净干燥的反应瓶中，加入45ml的thf/h2o＝4：1的混合溶剂，搅拌溶解，降至0℃，滴加5.25ml的0.1m的lioh的thf/h2o＝4:1的混合溶液,保持该温度反应1h,tlc检测反应，反应结束后加入5ml的0.1m的稀盐酸溶液酸化，ea萃取(100ml×3),50ml饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(洗脱条件：ea:meoh:acoh＝20:1:1),得白色固体0.256g。将得到的产物溶于洁净干燥的50ml单口反应瓶中，充入氩气保护，用一次性针筒加入15ml的无水二氯甲烷，室温搅拌5min，用一次性针筒滴加二异胺(1.50ml,14.561mmol)，室温下反应过夜，tlc检测反应，反应结束后，减压浓缩，加入10ml无水甲苯，减压浓缩，重复两次，以除去多余的二异胺。将粗品用氩气保护，加入hatu(0.157g,0.412mmol)和hoat(0.057g,0.416mmol)，用一次性注射器加入400ml的无水二氯甲烷溶液，滴加dipea(0.13ml,0.786mmol)，室温下反应30h。tlc检测反应，反应结束后浓缩，粗品过硅胶短柱(洗脱条件：先pe/ea＝2：1，后ea冲洗)，得白色固体30mg，三步总收率11％。

rf＝0.15(pe/ea＝2:3).(c＝0.021,chcl3)¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ7.61(s,1h),7.38(d,j＝7.6hz,6h),7.27(dd,j＝11.0,4.3hz,6h),7.20(t,j＝7.3hz,3h),7.13(d,j＝7.7hz,1h),6.94–6.70(m,5h),6.15(d,j＝8.3hz,1h),5.71(m,j＝18.9,10.1,1.9hz,1h),5.05(d，12hz，1h),5.00(dt,36hz，7.5hz，1h),4.88(m,1h),4.17(dd,j＝17.4,2.8hz,1h),4.08(d,j＝11.3hz,1h),3.25(d,j＝11.3hz,1h),3.20(dd,j＝14.0,23hz,1h),3.06(dd,j＝14.0,5.9hz,1h),2.99(dd,j＝16.4,10.2hz,1h),2.62(dd,j＝16.4,2.1hz,1h),2.17(dt,j＝11.0,4.0hz,2h),2.10(dt,j＝14.4,7.2hz,2h),1.79(s,3h).¹³cnmr(150mhz,cdcl3)δ173.67(s),168.89(s),168.16(s),166.97(s),163.73(s),155.33(s),153.63(s),147.26(s),144.78(s),135.11(s),129.60(d,j＝8.8hz),127.88(d,j＝7.6hz),126.65(s),125.93(s),123.68(s),109.17(d,j＝12.5hz),84.19(s),70.18(d,j＝30.9hz),66.61(s),54.19(s),42.46(s),40.98(s),37.70(s),37.46(s),31.12(s),24.98(s),22.88(d,j＝3.8hz).¹⁹f-nmr(376mhz,cdcl3):δ-124.43(dd,j＝36.2,20.3hz).esi-ms(m/z):827.2[m+na]⁺.hrms-esi(m/z):[m+na]⁺calcd.forc44h41fn4o4s3na:827.2166,found:827.2166.

第8步化合物9的制备：

将化合物8(49mg,0.061mmol)加入50ml洁净干燥单口反应瓶中，充入氩气保护，用一次性针筒加入10ml的无水二氯甲烷，冰水浴下搅拌溶解30min。0℃下用一次性针筒滴加三异丙基硅烷(25ul,0.12mmol),接着滴入三氟乙酸(0.27ml,3.7mmol)。自然升至室温反应1h，tlc检测反应，减压浓缩，粗品快速硅胶柱层析(ea)，得白色固体20mg，收率59％。

rf＝0.42(pe/ea＝2：3).¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ7.66(s,1h),7.19(m,2h),6.84(m,5h),6.15(s,1h),5.78(dd,j＝17.9,9.4hz,1h),5.16(dt,j＝36.3,7.5hz,1h),5.04(dd,j＝17.4,8.2hz,1h),4.93(m,1h),4.27(d,j＝17.1hz,1h),4.11(d,j＝11.2hz,1h),3.26(d,j＝11.3hz,1h),3.22(dd,j＝14.0,3.0hz,1h),3.12–3.08(m,1h),3.07(d,j＝5.9hz,1h),2.67(d,j＝14.8hz,1h),2.54(dd,j＝14.4,7.1hz,1h),2.40(m,2h),1.83(s,3h).esi-ms(m/z):563.0[m+h]⁺.hrms-esi(m/z):[m+h]⁺calcd.forc25h27fn4o4s3h:563.1251,found:563.1254.

将所述的硫醇(0.033g,0.06mmol)加入50ml洁净干燥的单口反应瓶中，用一次性针筒加入10ml的无水二氯甲烷，冰水浴下搅拌30min,0℃下用微量注射器滴入et3n(16ul,0.070mmol)和辛酰氯(51ul,0.3mmol)，恢复至室温。在室温下搅拌反应4h,tlc跟踪检测反应，反应结束后加入2ml甲醇淬灭反应，浓缩，加入50ml的乙酸乙酯溶解，饱和碳酸氢钠洗(10ml×1)，水洗(10ml×1),饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物硅胶柱层析(洗脱条件：meoh:ch2cl2＝1:200)，得白色无定型固体13mg,收率61％.

rf＝0.42(dcm/ea＝3:1).(c＝0.025,chcl3).¹hnmr(150mhz,cdcl3)δ7.64(s,1h),7.14(d,j＝7.7hz,2h),7.00–6.74(m,5h),6.15(d,j＝8.0hz,1h),5.76(dd,j＝19.2,9.9hz,1h),5.12(dt,j＝36.3hz，7.5hz,1h),5.06(d,j＝9.0hz,1h),4.92(t,j＝8.1hz,1h),4.92(t,j＝8.1hz,1h),4.24(dd,j＝17.4,2.1hz,1h),4.10(d,j＝11.2hz,1h),3.23(d,j＝11.2hz,1h),3.21(d,j＝2.8hz,1h)，3.06(m,2h),2.88(t,j＝7.1hz,2h),2.66(d,j＝16.0hz,1h),2.53(t,j＝7.5hz,2h),2.36(dd,j＝14.4,7.2hz,2h),1.83(s,3h),1.64(dd,j＝14.0,7.0hz,3h),1.27(m,8h),0.89(dd,j＝9.0,4.6hz,3h).¹³cnmr(150mhz,cdcl3)δ198.61(s),173.12(s),168.27(s),167.47(s),166.35(s),163.04(s),146.63(d,j＝28.5hz),134.52(s),129.03(s),127.22(s),125.29(s),123.03(s),107.82(d,j＝23.4hz),83.63(s),69.52(d,j＝30.9hz),53.57(s),43.52(s),41.84(s),40.37(s),37.00(d,j＝18.3hz),30.98(s),29.07(s),28.27(s),27.27(s),24.99(s),24.35(s),23.20(s),21.95(s),13.45(d,j＝8.6hz).¹⁹f-nmr(376mhz,cdcl3):δ-124.76(dd,j＝36.1,19.3hz).esi-ms(m/z):689.2[m+h]⁺.hrms-esi(m/z):[m+h]⁺calcd.forc33h41fn4o5s3:689.2296,found:689.2302.。

实施例2甲硫基甲基取代的largazole氟代类似物硫醇的合成

按实施例1的方法和实验步骤制备甲硫基甲基取代的的largazole氟代类似物的合成，在实验第六步中，用相应的fmoc-l-mes-oh代替fmoc-l-phe-oh。实施例3甲硫基甲基取代的largazole氟代类似物的合成

按实施例1的方法和实验步骤制备甲硫基甲基取代的的largazole氟代类似物的合成，在实施例1实验第八步中，用实施例2制得的甲硫基甲基取代的largazole氟代类似物硫醇为原料。

实施例4去异丙基的largazole氟代类似物的合成

按照实施例1的方法和实验步骤制备甲硫基甲基取代的的largazole氟代类似物的合成，在实验第六步中，用相应的fmoc-l-gly-oh代替fmoc-l-phe-oh。

实施例5测试实验

本发明对所述的部分化合物进行了体外hdacs的抑制活性测试，分别考察其对6种商业购得的hdacs(如：hdac1,2,3,6,8和10)的抑制活性，并与largazole作比较；

抑制活性的测试原理：荧光基团4-氨基-7-香豆素偶联在乙酰化的肽段上(lys-ac-amc)，此时在激发光下荧光基团并不产生发射光。以lys-ac-amc为底物，hdac去乙酰基后的结构正是胰蛋白酶特异识别的反应位点，所以在酶联反应后amc游离出来，在激发光下会产生发射光；

化合物体外抑制hdac活性测试具体步骤如下：hdac蛋白均购买自bpsbioscience公司，反应缓冲液体系为改良的tris-hcl溶液(ph7.0)。所有小分子化合物由100％dmso溶解配制。对于hdac1,2,3,6，hdac按一定浓度配制于缓冲液中作为酶溶液；胰蛋白酶和偶联荧光基团的乙酰化肽段底物按一定浓度配制于缓冲液中作为底物溶液。化合物按设计浓度加入384孔板中的反应孔，然后反应孔中加入15ulhdac酶溶液，在室温孵育15分钟，随后加入10ul底物溶液开始反应，室温孵育1小时后，用酶标仪测定荧光强度(发射波长355nm，吸收波长460nm)；结果数据通过graphpadprism软件分析；

对于hdac8,10，hdac按一定浓度配制于缓冲液中作为酶溶液；偶联荧光基团的乙酰化肽段底物按一定浓度配制于缓冲液中作为底物溶液。化合物按设计浓度加入384孔板中的反应孔，然后反应孔中加入15ulhdac酶溶液，在室温孵育15分钟，随后加入10ul底物溶液开始反应，室温孵育4小时后，再加入15ul的胰蛋白酶溶液，在37℃继续孵育90min后用酶标仪测定荧光强度(发射波长355nm，吸收波长460nm)；结果数据通过graphpadprism软件分析；

代表性的化合物对hdacs的ic50值如表1所示，结果显示，本发明所述的化合物具有强的、选择性的抑制hdacs的作用。

表1