本发明涉及植物有效成分提取技术领域，涉及一种天然高纯罗汉果甙的提取方法，得到的高纯高纯罗汉果甙可以直接作为于食品的天然甜味剂。
背景技术：
罗汉果主产我国广西桂林市临桂县和永福县的山区，在其他省偶有种植。罗汉果果实营养价值很高，富含维生素ｃ、e、果糖、人体必须氨基酸、微量元素等多种营养素，以及黄酮、多糖、甜甙和多酚等多种活性成分。日本学者竹本常松研究发现，罗汉果对各种疾病起主要作用的就是果中所含的比砂糖甜300倍的物质——罗汉果甜甙，学名为“葫芦素烷三萜”，是属于三萜系的砂糖以外的甜味物质之一，由于罗汉果的甜味是一种非糖成分，所以糖尿病人也可服食。目前，利用罗汉果高甜味代替部分其它甜味剂用于制作各种食品，包括饮料，酸奶，果醋，冰激凌，酒，冰糖，营养粉等。
但是，罗汉果甙传统的提取方法使用大量有机溶剂，萃取效率不高，高纯的罗汉果甙制备方法通常需要通过柱层析以及膜过滤的方式，这些方法生产周期长且成本高。专利cn103570789a《一种高纯罗汉果甙的制备方法》采用水提-浓缩成浸膏-乙醚、乙酸乙酯混合液两相液液萃取-乙醚、乙酸乙酯混合液/磷酸氢二钾双水相萃取-高分子聚合物反萃-正丁醇液液萃取-浓缩干燥的制备流程得到了高纯的罗汉果甙，但是该方法步骤繁琐，耗时耗力，且使用了大量的有机溶剂，对环境污染大。因此，开发高效，便捷，绿色的高纯罗汉果甙的提取方法对提高生产效率以及环保具有重要的作用。
技术实现要素：
本发明的目的是公开一种高效，便捷，绿色的高纯罗汉果甙的提取方法。
本发明的技术方案是：一种天然高纯罗汉果甙的提取方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将罗汉果用清水洗净，自然晾干后，在真空干燥箱中干燥10-12小时后，利用中药粉碎机将其粉碎后过60目筛后，将过筛后的粉末进一步粉碎得到纳米级超微细粉；
（2）将罗汉果超微细粉与水按1：5-20的质量体积比混合后，在100-300w，20-50℃的条件下超声15-40分钟后，过滤后将滤渣再次超声提取2-3次，合并提取液，减压蒸馏得到提取浸膏；
（3）将一定量的四氢呋喃、烷醇、水混合均匀后，自然静置1-2小时后，体系分相，取除上相得到纳米尺寸的超分子溶剂；
（4）将浸膏溶于水后加入一定量的超分子溶剂，涡旋10-20秒后离心，取下清液，上清液再用超分子溶剂萃取2-3次后，将清液减压蒸馏得到浸膏，浸膏用乙酸乙酯洗涤后干燥，得到高纯罗汉果甙的提取物。
进一步的，步骤（1）中所述的真空干燥温度为40-50℃；所述纳米级超微细粉粒径小于200nm。
进一步的，步骤（2）中所述超声功率为200-300；超声温度为30-40℃；超声时间为15-25分钟。
进一步的，步骤（3）中所述烷醇为正己醇、正辛醇、正癸醇中的一种。
进一步的，步骤（3）中所述四氢呋喃、烷醇、水分别占总体系体积的15-20;5-15;65-85%。
进一步的，步骤（3）中所述纳米尺寸超分子中存在粒径为50-200nm的胶束。
进一步的，步骤（4）中所述浸膏水溶液的浓度为0.2-0.4g/ml；所述超分子溶剂与浸膏水溶液的体积比为1：10。
进一步的，步骤（4）中所述高纯罗汉果甙的提取物中罗汉果总甜甙纯度不低于95%，罗汉果甜甙v纯度不低于68%。
本发明的特点为
本发明制备的高纯罗汉果甙利用超微粉碎技术将罗汉果粉碎成纳米级粉末，加强有效成分的浸出率，提高萃取效率；采用超声波辅助提取降低萃取流程。采用四氢呋喃、烷醇、水形成的超分子溶剂除去罗汉果提取物中脂溶性化合物；本发明的提取方法与传统的方法相比操作简单，不需要使用特殊的分离膜以及柱层析，降低了生产成本；与现有专利技术相比，本方法萃取流程简单，萃取时间短且显著的减小了有机溶剂的使用量，更为高效和环保。此外，经本发明得到的高纯罗汉果甙化合物可以直接作为食品甜味添加剂。
具体实施方案
实施例一
将罗汉果用清水洗净，自然晾干后，在40℃真空干燥箱中干燥11小时后，利用中药粉碎机将其粉碎后过60目筛后，将过筛后的粉末进一步粉碎得到纳米级超微细粉；将300g罗汉果超微细粉与3l水混合后，在200w，45℃的条件下超声20分钟后，过滤后将滤渣再次超声提取2次，合并提取液，减压蒸馏得到提取浸膏；将一定量的200ml四氢呋喃、100ml正辛醇、700ml水混合均匀后，自然静置1小时后，体系分相，取除上相得到纳米尺寸的超分子溶剂；将浸膏溶于水后得到0.3g/ml浸膏水溶液，取1l浸膏水溶加入75ml的超分子溶剂，涡旋20秒后离心，取下清液，上清液再用50ml超分子溶剂萃取3次后，将清液减压蒸馏得到浸膏，浸膏用乙酸乙酯洗涤后干燥，得到高纯罗汉果甙的提取物,其中罗汉果总甜甙纯度为97%，罗汉果甜甙v纯度为70%。
实施例二
将罗汉果用清水洗净，自然晾干后，在45℃真空干燥箱中干燥10小时后，利用中药粉碎机将其粉碎后过60目筛后，将过筛后的粉末进一步粉碎得到纳米级超微细粉；将500g罗汉果超微细粉与12l水混合后，在250w，50℃的条件下超声25分钟后，过滤后将滤渣再次超声提取3次，合并提取液，减压蒸馏得到提取浸膏；将一定量的350ml四氢呋喃、200ml正癸醇、1000ml水混合均匀后，自然静置1小时后，体系分相，取除上相得到纳米尺寸的超分子溶剂；将浸膏溶于水后得到0.35g/ml浸膏水溶液，取1.5l浸膏水溶加入150ml的超分子溶剂，涡旋15秒后离心，取下清液，上清液再用100ml超分子溶剂萃取2次后，将清液减压蒸馏得到浸膏，浸膏用乙酸乙酯洗涤后干燥，得到高纯罗汉果甙的提取物,其中罗汉果总甜甙纯度为96.2%，罗汉果甜甙v纯度为71%。
实施例三
将罗汉果用清水洗净，自然晾干后，在40℃真空干燥箱中干燥12小时后，利用中药粉碎机将其粉碎后过60目筛后，将过筛后的粉末进一步粉碎得到纳米级超微细粉；将400g罗汉果超微细粉与10l水混合后，在300w，40℃的条件下超声25分钟后，过滤后将滤渣再次超声提取2次，合并提取液，减压蒸馏得到提取浸膏；将一定量的200ml四氢呋喃、150ml正己醇、800ml水混合均匀后，自然静置1小时后，体系分相，取除上相得到纳米尺寸的超分子溶剂；将浸膏溶于水后得到0.25g/ml浸膏水溶液，取1.5l浸膏水溶加入100ml的超分子溶剂，涡旋20秒后离心，取下清液，上清液再用80ml超分子溶剂萃取2次后，将清液减压蒸馏得到浸膏，浸膏用乙酸乙酯洗涤后干燥，得到高纯罗汉果甙的提取物,其中罗汉果总甜甙纯度为97.2%，罗汉果甜甙v纯度为72%。
对比例一
将500g罗汉果用清水洗净，利用中药粉碎机将其粉碎后过筛后与3l水混合后，在100℃条件下反复提取3次，每次1小时，合并提取液，减压蒸馏得到提取浸膏；浸膏溶于水中配成500ml水溶液，加入500ml乙醚：乙酸乙酯混合液体积比为7：3，萃取4次，合并萃取液回收，向水溶液中加入50g磷酸氢二钾，再加500ml乙醇：乙酸乙酯混合液体积比为9：1的混合液，震荡静置，形成双水相，得到上相为乙醇、乙酸乙酯混合萃取液，混合萃取液与500ml1.5%聚丙酰胺水溶液萃取一次，乙醇、乙酸乙酯混合萃取液减压蒸干，既得高纯罗汉果甙的提取物,其中罗汉果总甜甙纯度为95%，罗汉果甜甙v纯度为65%。
实施例1-3以及对比例1制备高纯罗汉果甙的对比分别如表1所示。
对于本领域的普通技术人员而言，具体实施例只是对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质性的改进，或未经改进将本发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。