本申请是中国发明专利申请(申请日：2014年2月27日；申请号：201480018978.9(国际申请号：pct/ib2014/000954)；发明名称：制备2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸的方法)的分案申请。
本申请请求保护于2013年2月28日提交的美国临时申请号61/770,601的优先权，将其全部内容引入本文作为参考。
本公开涉及制备脂肪酸衍生物的方法。特别地，本公开涉及制备2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)的方法
背景技术：
多不饱和脂肪酸(pufa)，例如epa和dha，对影响正常健康和慢性疾病的多种不同生理过程具有作用，这些生理过程例如血脂水平、心血管和免疫功能、胰岛素作用、神经元发育及视觉功能的调控。一些多不饱和脂肪酸衍生物也已显示出具有有益的生物学性质。
本公开提供了制备2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)的新方法。这个化合物和其他类似化合物以及它们的合成公开于wo2010/128401中，其概括性地描述了，脂肪醇可由天然存在的脂肪酸(例如二十碳五烯酸(epa))的羧酸酯通过还原剂(如氢化铝锂(lah)或二异丁基氢化铝(dibal-h))的还原作用直接制备。根据wo2010/128401，该酸(3)是通过合成制备的，其中脂肪醇(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)被2-溴丁酸叔丁酯取代，且在随后的步骤中，该叔丁基被除去，得到所需的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)。
上述方法具有多个缺点。它需要大量的试剂，无论是溶剂还是起始材料。并且由例如鱼油制备的起始脂肪酸酯，尤其是高纯化的epa酯，是相当昂贵的。即使是被优化，上述由epa乙酯(1)合成2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)提供了小于25％的总产率，其由5kg的epa乙酯(纯度≥97％)起始。因此，从商业角度来看，增加总产率以及降低所产生废物的量显然是非常有利的。另一个重要因素是，当该合成被放大时，实现最终产物所需的纯度性质。由于大多数有机反应均产生副产物，因此希望得到能很容易地进行纯化的产物。
本文提供的方法相比于wo2010/128401中公开的方法减少试剂和溶剂的量并产生较少的废物。此外，本方法以较高的总产率和提高的纯度性质生产2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)。
应理解，正如所声称的，无论是上述概述还是以下详述都仅是示例性和说明性的，且并不限定本公开。
发明详述
本公开的特别方面将在下文中更为详细地进行说明。本申请所使用且本文所阐述的术语和定义旨在表示本公开中的意义。
除非本文另有指明，单数形式的“一”、“一种(个)”及“该/此”包括复数的含义。
术语“近似”和“(大)约”表示与所提及的数字或数值几乎相同。通常理解的是，本文所使用的“近似”和“(大)约”包括指定量、频率或数值的±10％。
本公开涉及由式(i)的epa衍生物制备2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)的方法，其包括以下步骤：
a)将式(i)的epa衍生物：
其中-c(＝o)x代表羧酸或羧酸酯，
通过还原剂的还原作用，还原成其对应的醇(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)
b)将该醇(2)从步骤a)中分离；
c)将步骤b)中分离的醇(2)与2-溴丁酸反应，形成2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)
d)将2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)从步骤c)中分离；和
e)任选地纯化2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)。
如上所述，式(i)的epa衍生物的基团-c(＝o)x代表羧酸或羧酸酯。在一个实施方案中，-c(＝o)x为羧酸，也就是说式(i)化合物为二十碳五烯酸(epa)。在另一实施方案中，-c(＝o)x代表羧酸酯。在一个实施方案中，该羧酸酯选自甲酯、乙酯和丙酯，也就是说式(i)的epa衍生物可为epa甲酯、epa乙酯或epa丙酯。在一个实施方案中，-c(＝o)x代表c1-c3羧酸酯。在至少一个实施方案中，式(i)的epa衍生物为epa乙酯(1)
所用的式(i)的epa衍生物可为小于99％的纯度，例如，它的纯度可为小于98％、小于95％、小于90％、小于85％、小于80％、小于75％、小于70％、小于65％、小于60％、小于55％、小于50％、小于45％或小于40％的纯度。在至少一个实施方案中，所述式(i)的epa衍生物为约98％的纯度(经gc检测)。在至少一个实施方案中，所述式(i)的epa衍生物为市售可得的。
所用的epa乙酯(1)可为小于99％的纯度，例如，它的纯度可为小于98％、小于95％、小于90％、小于85％、小于80％、小于75％、小于70％、小于65％、小于60％、小于55％、小于50％、小于45％或小于40％的纯度。在至少一个实施方案中，所述epa乙酯为约98％的纯度。在至少一个实施方案中，所述epa乙酯为约97％的纯度。在至少一个实施方案中，所用的epa乙酯为市售可得的。
可以预见的是，可使用纯度低于60％的式(i)的epa衍生物，例如epa乙酯(1)且可能提供划算且有效的替代方案来代替使用高纯度的epa衍生物，尤其是在大规模，前提是有效且有竞争力的纯化方法是可用的。
所述式(i)的epa衍生物可来源于植物、微生物和/或动物。在至少一个实施方案中，所述epa衍生物为epa且可来源于植物、微生物和/或动物。在至少一个实施方案中，所述epa衍生物为epa甲酯且可来源于植物、微生物和/或动物。在至少一个实施方案中，所述epa衍生物为epa乙酯(1)且可来源于植物、微生物和/或动物。在至少一个实施方案中，所述epa衍生物为epa丙酯且可来源于植物、微生物和/或动物。在至少一个实施方案中，所述动物来源为海产品油(marineoil)。
在至少一个实施方案中，所述海产品油为鱼油。
用于还原式(i)的epa衍生物的合适的还原剂包括，但不限于，氢化铝锂(lah)、dibal-h(ibu2alh)和乙硼烷(b2h6)。在一个实施方案中，所述式(i)的epa衍生物是使用氢化铝锂(lah)进行还原的。在至少一个实施方案中，epa乙酯(1)是使用氢化铝锂(lah)进行还原的。在另一实施方案中，epa甲酯是使用氢化铝锂(lah)进行还原的。在另一实施方案中，epa丙酯是使用氢化铝锂(lah)进行还原的。还在另一实施方案中，epa是使用氢化铝锂(lah)进行还原的。
用于还原式(i)的epa衍生物(例如epa乙酯)的合适的溶剂包括四氢呋喃(thf)、乙醚、甲基叔丁基醚(mtbe)、甲苯、1,4-二噁烷、2-甲基四氢呋喃(methf)或其混合物。在至少一个实施方案中，用于还原式(i)的epa衍生物的合适的溶剂包括thf、mtbe、甲苯或其混合物。在一个实施方案中，所述epa衍生物在thf的存在下被还原。在至少一个实施方案中，epa乙酯(1)在thf的存在下被还原。在其他实施方案中，epa乙酯(1)是在thf的存在下使用lah进行还原的。在一个实施方案中，可存在共溶剂(例如甲苯)。在至少一个实施方案中，lah可作为在thf:甲苯(2.4:1)混合物中的15％的lah溶液提供。
根据步骤a)，式(i)的epa衍生物(例如epa乙酯(1))到(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)的还原可在各种温度条件下进行。例如，在至少一个实施方案中，epa乙酯(1)在约23℃的环境温度被还原。在另一实施方案中，epa乙酯(1)在低于23℃的温度被还原。在至少一个实施方案中，式(i)的epa衍生物(例如epa乙酯(1))的还原在0℃至15℃的温度范围内进行。
在步骤b)中，将在步骤a)中形成的醇(2)通过任意合适的方法进行分离。在至少一个实施方案中，步骤b)包括在将该反应淬灭后的萃取后处理。用于淬灭该反应的有用试剂包括，例如，各种氢化物受体(氧化剂)，例如酸(质子供体)、酯、醛和酮。在至少一个实施方案中，该反应是通过加入乙酸乙酯(etoac)和氯化铵淬灭的。在一个实施方案中，所述氯化铵以饱和氯化铵水溶液加入。然后通过加入酸性溶液，将该水相的ph值调节至约2。合适的酸性溶液可例如包括hcl或h2so4的水溶液。在一个实施方案中，所述酸溶液为6m的hcl水溶液。然后将该有机相用盐水洗涤并蒸发。最终，将该后处理混合物的甲苯含量调节至0-30w/w％，例如20-30w/w％。
在步骤b)后，通过这个方法制备的(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)可以大于85％的纯度，例如大于90％，或大于95％的纯度获得。该起始材料可完全转化成该醇(2)，且产率至少为90％，例如至少95％。
通过本公开的方法制备的(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)是制备脂肪酸衍生物(包括2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3))有用的中间体。
使用本文所公开的方法，使用由式(i)的epa衍生物(例如epa乙酯(1))制备的(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)提供了2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)划算且有效的合成。此外，用2-溴丁酸直接烷基化(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)比其他报道过的方法更有利。这些优势包括对烷基化过程改善的控制、更高的产率、更少的化学步骤、更少的浪费、更低的花费和整体上更加有效的方法。这些优点尤其用于进行大规模的化合物(3)的合成。此外，本公开的方法不使用氯化溶剂，这对环境有利。(v.antonucci等人.org.processres.dev.(2011)15:939-941.)
本公开的直接烷基化反应可在碱的存在下进行。在至少一个实施方案中，步骤c)的直接烷基化反应是在碱的存在下进行的。合适的碱包括，但不限于，naotbu、naoh、naoet或nah。在至少一个实施方案中，该碱包括naotbu或naoh。在至少一个实施方案中，所述碱为naotbu。在至少一个实施方案中，该碱为naotbu在mtbe中的溶液。在至少一个实施方案中，所述碱为5-30％的naotbu在mtbe中的溶液，例如10-20％naotbu的mtbe溶液，例如17％naotbu的mtbe溶液。
直接烷基化反应可在溶剂的存在下进行。在至少一个实施方案中，所述步骤c)的反应是在溶剂或溶剂混合物的存在下进行的。合适的溶剂包括二甲基甲酰胺(dmf)、n-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)、thf、甲苯、二甲苯、甲基叔丁基醚(mtbe)、2-甲基四氢呋喃(2-methf)、乙醚、二甲基亚砜(dmso)、叔丁醇(t-buoh)或其混合物。
在至少一个实施方案中，在步骤c)中所用的溶剂为四氢呋喃(thf)、甲基叔丁基醚(mtbe)、甲苯或其混合物。在至少一个实施方案中，步骤c)是在thf和mtbe的混合物中进行的。在至少一个实施方案中，步骤c)中所用的溶剂为thf。或者，所述溶剂为mtbe。
步骤c)的直接烷基化反应可以多种方式进行。在至少一个实施方案中，将所述溶剂(例如thf)、醇(2)和2-溴丁酸同时装入反应容器中。在另一实施方案中，(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)可，例如，存在于溶剂或多种溶剂的溶液中。可将碱直接加至该溶液中。或者，可将该碱作为在相同或不同溶剂中的溶液加至(2)的溶液中。同样地，可加入纯(neat)2-溴丁酸，即没有溶剂的2-溴丁酸，或者可将其以溶剂或溶剂混合物的溶液加至反应容器中。在至少一个实施方案中，可将该碱加至溶剂或溶剂混合物中并将其作为溶液或混悬液加至步骤c)的反应中。
可将2-溴丁酸分一批或多批次加至步骤c)的反应中。例如，可将2-溴丁酸分一批、两批次、三批次、四批次、五批次或更多批次加至该反应中。在至少一个实施方案中，分两批次或更多批次加入2-溴丁酸。在至少一个实施方案中，可将2-溴丁酸连续地加至该反应混合物中。在至少一个实施方案中，可将2-溴丁酸以分批和连续加入的组合的方式加至该反应混合物中。
该碱可同样地分一批或多批次加至步骤c)的反应中。例如，可将naotbu在mtbe中的溶液分一批、两批次、三批次、四批次、五批次、六批次、七批次或更多批次加至该反应中。在至少一个实施方案中，可将naotbu在mtbe中的溶液分三批次或更多批次加至步骤c)的反应中。在至少一个实施方案中，可将naotbu在mtbe中的溶液连续地加至步骤c)的反应中。在至少一个实施方案中，可将naotbu在mtbe中的溶液以分批和连续加入的组合的方式加至步骤c)的反应中。在另一实施方案中，naotbu可以固体形式加至步骤c)的反应中。
在至少一个实施方案中，该批次可经约30至60分钟的时间加入。在一个实施方案中，该批次可经约30分钟的时间加入。在一个实施方案中，该批次可经约60分钟的时间加入。在至少一个实施方案中，该批次可以约30分钟的加入间隔进行加入。在至少一个实施方案中，该批次可以至少30分钟(例如60分钟)的加入间隔进行加入。逐步加入该批次能有效地改善对烷基化过程的控制并形成较低量的杂质。
步骤c)的直接烷基化反应可在各种温度条件下进行。例如，在至少一个实施方案中，步骤c)的直接烷基化反应在约23℃的环境温度进行。在另一实施方案中，步骤c)的直接烷基化反应在低于23℃的温度进行。在至少一个实施方案中，步骤c)的直接烷基化反应在5℃至15℃的温度范围内进行，例如5℃至10℃。
步骤d)的分离可通过各种方法进行。在至少一个实施方案中，步骤d)包括水萃取，以分批或连续的方式(即，逆流萃取(cce)或逆流色谱(ccc)(包括hpccc和hsccc))。在至少一个实施方案中，通过将含有低含量水的酸加至步骤c)的反应混合物中将该反应淬灭，以避免产物的共轭、顺/反异构化或这二者。在一个实施方案中，该酸为甲酸。在一个实施方案中，酸加入过程的温度为约5℃至10℃。然后，将水加至步骤c)的反应混合物中。在一个实施方案中，水加入过程的温度为约5℃至10℃。然后将ph调节至ph低于2.5。在一个实施方案中，将该ph调节至约2-2.5。在一个实施方案中，用浓hcl和水的1:1混合物调节该ph。分离相并将水相用合适的有机溶剂萃取一或多次。合适的溶剂可为mtbe、甲苯、庚烷、戊烷、2-甲基四氢呋喃、甲基环己烷或其混合物。在一个实施方案中，所述溶剂为mtbe。在至少一个实施方案中，将合并的有机相用水洗涤一次或多次。在至少一个实施方案中，将合并的有机相用水洗涤至少一次，优选为三次。然后可将有机相用硫酸钠干燥并经硅藻土(diatomaceousearth)(例如硅藻土celite)过滤，然后将该溶剂蒸发，得到粗制的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)。
根据一个实施方案(步骤d1)，可进一步将该粗制的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)溶于合适的有机溶剂中，例如2-甲基四氢呋喃、mtbe、甲苯、庚烷、戊烷、甲基环己烷或其混合物。在一个实施方案中，将该残余物溶于2-甲基四氢呋喃中。将该溶解的残余物用饱和的nahco3(aq)和nacl(aq)溶液连续洗涤一或多次。将水和2-甲基四氢呋喃加至有机相中并将ph调节至高于8，例如ph12-13，使得在分离相之前将产物转移至水相。在一个实施方案中，通过加入50％naoh水溶液来调节ph。将水相用合适的有机溶剂洗涤，例如2-甲基四氢呋喃、mtbe、甲苯、庚烷、戊烷、甲基环己烷或其混合物。在一个实施方案中，将水相用2-甲基四氢呋喃洗涤。将水相用例如木炭和硅藻土净化，且用酸，例如，hcl(aq)将ph调节至约2-2.5。在一个实施方案中，该ph用浓hcl进行调节。将产物萃取至有机溶剂中，并用水洗涤。在一个实施方案中，该有机溶剂为甲基叔丁基醚(mtbe)。将该溶剂蒸发。可将该残余物进一步溶于有机溶剂中。在一个实施方案中，该溶剂为戊烷。可将该溶解的产物用二氧化硅进一步净化。可在真空蒸发前将稳定剂(例如，丁基羟基苯甲醚(bha)或3,5-二-叔丁基-4-羟基甲苯(bht))加至该产物中。在一个实施方案中，该稳定剂为bha。应将该终产物在惰性气氛、避光和湿的条件下保存。
或者，根据一个实施方案(步骤d2)，将该粗制的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)用cce纯化。有机相为适用于cce的溶剂或溶剂混合物(例如，mtbe、甲苯、戊烷、己烷、庚烷、乙酸乙酯、甲基环己烷、2-甲基四氢呋喃或甲苯或其混合物)。有机相可含有酸(例如，甲酸、乙酸或三氟乙酸(tfa))或碱(例如三乙胺)。在一个实施方案中，将该残余物溶于戊烷中，例如，得到5-50w/w％的戊烷溶液，例如10w/w％的戊烷溶液。该水相为水或例如，醇(例如，甲醇、乙醇、丙醇、丁醇)、乙腈或丙酮的水溶液。该水相可含有酸(例如，甲酸、乙酸或tfa)或碱(例如三乙胺)。在一个实施方案中，水溶液为甲醇水溶液，例如67％的甲醇水溶液。将该相以合适的流速施加到cce仪器中。继续/重复该cce直至杂质水平，例如2-溴丁酸和丁烯酸符合ich指南(ichtopicq3b(r2)impuritiesinnewdrugproducts)。根据实际情况，将合适的级分合并，然后真空浓缩。可将该残余物进一步溶于合适的有机溶剂(例如，2-甲基四氢呋喃、mtbe、甲苯、庚烷、戊烷或甲基环己烷)中。在一个实施方案中，将该残余物溶于2-甲基四氢呋喃中。将水或例如，醇(例如，甲醇、乙醇、丙醇、丁醇)、乙腈或丙酮的水溶液加至该有机相中。在一个实施方案中，该溶液为水且将该ph调节至高于8，例如ph12-13，使得在分离相之前将该产物转移至水相。在一个实施方案中，通过加入50％naoh水溶液调节ph。将该水相用合适的有机溶剂(例如，2-甲基四氢呋喃、mtbe、甲苯、庚烷、戊烷、甲基环己烷或其混合物)洗涤。在一个实施方案中，将该水相用2-甲基四氢呋喃洗涤。该水相可使用木炭和硅藻土来净化，且将该ph用酸(例如，hcl(aq))调节至低于2.5，例如2-2.5。在一个实施方案中，将该ph用浓hcl进行调节。将该产物萃取至合适的有机溶剂(例如，2-甲基四氢呋喃、mtbe、甲苯、庚烷、戊烷、甲基环己烷或其混合物)中并用水洗涤。在一个实施方案中，该有机溶剂是mtbe。将该溶剂真空蒸发。可将该残余物溶于合适的有机溶剂(例如，2-甲基四氢呋喃、mtbe、甲苯、庚烷、戊烷、甲基环己烷或其混合物)中。在一个实施方案中，该溶剂为戊烷。可将该溶解的产物用二氧化硅进一步净化。可在真空蒸发前将稳定剂(例如，bha或bht)加至该产物中。在一个实施方案中，所述稳定剂为bha。应将该终产物在惰性气氛、避光和湿的条件下保存。
或者，根据一个实施方案(步骤d3)，将粗制的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)用cce纯化。有机相为适用于cce的溶剂或溶剂混合物(例如，mtbe、甲苯、戊烷、己烷、庚烷、乙酸乙酯、甲基环己烷、2-甲基四氢呋喃或甲苯或其混合物)。有机相可含有酸(例如，甲酸、乙酸或三氟乙酸(tfa))或碱(例如三乙胺)。在一个实施方案中，将该残余物溶于戊烷中，例如，得到5-50w/w％的戊烷溶液，例如10w/w％的戊烷溶液。该水相为水或例如，醇(例如，甲醇、乙醇、丙醇、丁醇)、乙腈或丙酮的水溶液。该水相可含有酸(例如，甲酸、乙酸或tfa)或碱(例如三乙胺)。在一个实施方案中，该水溶液为甲醇水溶液，例如67％的甲醇水溶液。将该相以合适的流速施加到cce仪器中。继续/重复该cce直至杂质水平，例如2-溴丁酸和丁烯酸符合ich指南(ichtopicq3b(r2)impuritiesinnewdrugproducts)。根据实际情况，将合适的级分合并，然后真空浓缩。可将该残余物进一步溶于合适的有机溶剂(例如，2-甲基四氢呋喃、mtbe、甲苯、庚烷、戊烷、甲基环己烷或其混合物)中。在一个实施方案中，将该残余物溶于戊烷中。(如果用于将2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)通过cce的溶剂/洗脱液为戊烷，那么只能通过浓缩或加入戊烷来调节其体积至合适的水平)。向该戊烷溶液中加入合适的共溶剂(例如，2-甲基四氢呋喃、mtbe、甲苯、庚烷或甲基环己烷)。在一个实施方案中，该溶剂为mtbe。然后向该溶液中加入水或例如，醇(例如，甲醇、乙醇、丙醇、丁醇)、乙腈或丙酮的水溶液。在一个实施方案中，向该溶液中加入甲醇和水，并将该ph调节至高于8，例如ph12-13，使得在分离相之前将该产物转移至水相。在一个实施方案中，该ph通过碱(例如，naoh)进行调节。在一个实施方案中，加入40％naoh水溶液。将该水相用合适的有机溶剂(例如，2-甲基四氢呋喃、mtbe、甲苯、庚烷、戊烷、甲基环己烷或其混合物)洗涤。在一个实施方案中，将该水相用mtbe洗涤。该水相可用木炭和硅藻土进行净化。然后向该水相中加入合适的有机溶剂(例如，mtbe、甲苯、庚烷、戊烷、2-甲基四氢呋喃或甲基环己烷)。在一个实施方案中，该溶剂为戊烷。将该ph调节至低于ph2.5。在一个实施方案中，将该ph用hcl(aq)调节至约2-2.5。在一个实施方案中，将该ph用浓hcl和水的1:1混合物进行调节。将各相搅拌并分离。可将水相用上述有机溶剂萃取一或多次。可将合并的有机溶剂用水和/或盐水洗涤。将该溶剂蒸发。可将残余物进一步溶于合适的有机溶剂中。在一个实施方案中，该溶剂为戊烷。可将该溶解的产物用二氧化硅进一步净化。可在真空蒸发前将稳定剂(例如，bha或bht)加至该产物中。在一个实施方案中，该稳定剂为bha。应将该终产物在惰性气氛、避光和湿的条件下保存。
或者，根据一个实施方案(步骤d4)，将粗制的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)用ccc纯化。有机相为适用于ccc的溶剂或溶剂混合物(例如，mtbe、甲苯、戊烷、己烷、庚烷、乙酸乙酯、甲基环己烷、2-甲基四氢呋喃或甲苯或其混合物)。有机相可含有酸(例如，甲酸、乙酸或tfa)或碱(例如三乙胺)。在一个实施方案中，该有机溶剂为含有0.1％乙酸的己烷。该水相为水或例如，醇(例如，甲醇、乙醇、丙醇、丁醇)、乙腈或丙酮的水溶液。该水相可含有酸(例如，甲酸、乙酸或tfa)或碱(例如三乙胺)。在一个实施方案中，该水溶剂为含有0.1％乙酸的甲醇水溶液，例如15％水在甲醇中的溶液，其含有0.1％乙酸。该ccc可以合适的流速，在反相模式、正相模式或双重模式下运行。继续/重复该纯化直至得到所需纯度的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)，即直至杂质达到合适的水平。将该溶解的产物在加工工程中用木炭和/或二氧化硅净化。可在真空蒸发前，将稳定剂(例如，bht或bha)加至该产物中。在一个实施方案中，该稳定剂为bha。应将该终产物在惰性气氛、避光和湿的条件下保存。
或者，根据一个实施方案(步骤d5)，将该粗制的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)通过合并上述cce和ccc进行纯化。继续纯化直至杂质的水平符合2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)的药物规格。将该溶解的产物在加工过程中用木炭和/或二氧化硅净化。在真空蒸发前可将稳定剂(例如，bht或bha)加至该产物中。在一个实施方案中，所述稳定剂为bha。应将该终产物在惰性气氛、避光和湿的条件下保存。
或者，根据一个实施方案(步骤d6)，将该粗制的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)通过合并分批萃取和上述ccc进行纯化。继续纯化直至杂质的水平符合2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)的药物规格。将该溶解的产物在加工过程中用木炭和/或二氧化硅净化。在真空蒸发前可将稳定剂(例如，bht或bha)加至该产物中。在一个实施方案中，该稳定剂为bha。应将该终产物在惰性气氛、避光和湿的条件下保存。
进一步纯化步骤e)的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)的合适的技术包括色谱法(例如，使用快速色谱法、hplc、超临界流体、模拟移动床(smb)、多分离管逆流溶剂梯度纯化(mcsgp)和高效逆流色谱(hpccc))或蒸馏，其通过本领域技术人员已知的方法。
手性拆分步骤e)的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)的合适的技术包括通过手性拆分剂和柱色谱(例如，使用快速色谱法、hplc、超临界流体、模拟移动床(smb)、多分离管逆流溶剂梯度纯化(mcsgp)和高效逆流色谱(hpccc))或蒸馏，或通过手性柱色谱法进行的分离，其通过本领域技术人员已知的方法。使用手性拆分剂对2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)进行手性拆分的一个实例描述于wo2012/059818的实施例3-5中。
因为pufa是高度不饱和的，因此应控制它们对氧气的暴露。因此，在至少一个实施方案中，进行本公开步骤a)-e)时应尽量减少对氧气的暴露。在至少一个实施方案中，步骤a)-e)是在惰性气氛下进行的，例如氮气或氩气。
在至少一个实施方案中，从epa乙酯(1)起始，以至少50％、例如至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％或至少80％的总产率获得2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)。
在至少一个实施方案中，2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)以至少90％的纯度获得，例如至少95％的纯度，例如至少97％的纯度或至少99％的纯度。
该反应步骤可以大规模进行。在至少一个实施方案中，“大规模”是指使用至少1kg的起始材料、中间体或试剂，例如使用至少5kg、至少8kg、至少10kg、至少25kg、至少50kg、至少100kg、至少250kg或至少500kg。
实施例
本文所用的缩写表示以下化合物、试剂和取代基：叔丁醇钠(naotbu或tbuona)；氢氧化钠(naoh)；四氢呋喃(thf)；甲基叔丁基醚(mtbe)；去离子水(di水)；丁基羟基苯甲醚(bha)；氢化铝锂(lah)。本文所用的其他缩写为：水溶液(aq.)、当量(eq.)。如果没有定义缩写，它具有其通常所接受的含义。
现将本公开用以下非限制性实例进行描述，其中在适当地情况下，可使用化学技术人员已知的标准技术和与这些实施例中所述的类似的技术。除非另外提及：否则所有的反应，例如产品的处理和储存，均在氮气氛下进行；所有的反应均在环境温度进行，通常在18-25℃的范围，溶剂在无水条件下具有至少98％的纯度；产率的给出仅用于说明且不一定是可获得的最大值。
实施例1
(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)的制备
将thf(380kg)装入反应器中并冷却至10-15℃。加入36.7kg量的15％lah(5.5kg活性成分)在thf-甲苯混合物(2.4:1)中的溶液。缓慢加入epa乙酯(1)(80kg，≥97％的纯度)，保持温度在0-15℃。将该反应混合物在0-15℃搅拌直至反应完成。
在5-15℃，经30-45分钟的时间段加入乙酸乙酯(6.4kg)，并将该反应混合物在0-15℃搅拌约30-40分钟。加入108kg量的饱和氯化铵水溶液，然后加入水(160kg)并将该ph用6mhcl水溶液调节至约2。分离该相并将有机相用盐水(190kg)洗涤。将有机相蒸发并将甲苯的含量调节至约22w/w％。标题化合物(2)的纯度确定为至少95％(hplc)。
实施例2
2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)的制备
在环境温度，将(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)(10kg，1.0当量)、thf(94kg)和2-溴丁酸(8.6kg，1.5当量)装入反应器中。将该反应混合物冷却至5-10℃。经30-60分钟的时间加入47kg的17％naotbu(8kg活性成分，2.4当量)在mtbe中的溶液。加入完成后，将该反应在5-10℃搅拌30分钟。经30分钟加入7.6kg的17％naotbu(0.4当量)在mtbe中的溶液。加入完成后，将该反应在5-10℃搅拌60分钟。经30分钟加入2-溴丁酸(5.8kg，1.0当量)。加入完成后，将该反应在5-10℃搅拌60分钟。经30分钟加入15.9kg的17％naotbu(0.8当量)在mtbe中的溶液。加入完成后，将该反应在5-10℃搅拌60分钟。经30分钟，加入7.7kg的17％naotbu(0.4当量)在mtbe中的溶液。加入完成后，将该反应在5-10℃搅拌60分钟。将该反应温度维持在5-10℃，并加入甲酸(0.8kg，0.5当量)和水(26.5kg)。将该反应在15-25℃搅拌，并使用1:1的浓hcl和di水将ph调节至2-2.5。分离有机相和水相，并将该水相用mtbe(2x17.6kg)萃取。将合并的有机相用di水(26.6kg)洗涤三次。如果需要，可将有机相用di水洗涤第四次。将有机相用硅藻土(2.0kg)和na2so4(8.0kg)净化，并将固体过滤并用mtbe(15kg)洗涤。将有机相使用薄膜蒸发器蒸发。将粗产品混合物溶于2-甲基四氢呋喃(2-methf)(48kg)中，并用饱和nahco3水溶液(28kg)洗涤三次，然后用饱和nacl水溶液(27.5kg)洗涤三次。任选地，重复该洗涤步骤以除去剩余的2-溴丁酸和/或丁烯酸。将2-methf(282kg)和di水(285kg)加至该粗产品中，并将该ph用50％naoh水溶液调节至12-13，使得将该产品转移至水相。将该混合物搅拌30分钟，然后使各相分离至少30分钟。分离各相并将2-methf(280kg)加至水相，将该混合物搅拌30分钟。再次使各相分离至少30分钟并分离各相。将该水相用硅藻土(2.2kg)和木炭(1kg)净化，并将固体过滤并用12kg的20％naoh水溶液洗涤。将该ph用浓hcl(aq.)调节至2-2.5，并将所得混合物用mtbe(3x22kg)萃取。将合并的有机相用di水(30kg)洗涤，并将有机相用二氧化硅(9.4kg)净化，并将固体过滤并用mtbe(20kg)洗涤。通过将有机相两次通过薄膜蒸发器而浓缩该有机相。将该残余物溶于戊烷(54kg)，并使用二氧化硅(0.8kg)净化两次，每次都要进行过滤并用戊烷(7kg)洗涤。加入bha稳定剂(0.03％)。将该混合物在0.5μm过滤器上过滤，并将溶剂真空蒸发，得到2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)。从epa乙酯(1)起始的总产率约为53％。用hplc确定该纯度为96.9％。
实施例3
2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)的制备
在环境温度，将(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)(25kg，1.0当量)、thf(235kg)、甲苯(7kg)和2-溴丁酸(21.5kg，1.5当量)装入反应器中。将bht水平调节至3000ppm。将该反应混合物冷却至5-10℃。经30-60分钟加入117.6kg的17％naotbu(20kg活性成分，2.4当量)在mtbe中的溶液。加入完成后，将该反应在5-10℃搅拌30分钟。经30分钟加入19.4kg的17％naotbu(0.4当量)在mtbe中的溶液。加入完成后，将该反应在5-10℃搅拌60分钟。经30分钟加入2-溴丁酸(14.5kg，1.0当量)。加入完成后，将该反应在5-10℃搅拌60分钟。经30分钟加入40kg17％naotbu(0.8当量)在mtbe中的溶液。加入完成后，将该反应在5-10℃搅拌60分钟。经30分钟加入19.4kg17％naotbu(0.4当量)在mtbe中的溶液。加入完成后，将该反应在5-10℃搅拌60分钟。将该反应温度保持在5-10℃，并加入甲酸(2kg，0.5当量)和水(66kg)。将该反应在15-25℃搅拌，并使用1:1浓hcl和di水将ph调节至2-2.5。分离有机相和水相，并将该水相用mtbe(2x44kg)萃取。将合并的有机相用di水(66kg)洗涤三次。如果需要，可将有机相用di水洗涤第四次。将有机相用na2so4(20.0kg)和硅藻土(5.0kg)干燥并将固体过滤并用mtbe(15kg)洗涤。使用薄膜蒸发器将有机相蒸发。将粗产品混合物(crudea)溶于2-甲基四氢呋喃(2-methf)(140kg)，并用饱和nahco3水溶液(70kg)洗涤三次，然后用饱和nacl水溶液(70kg)洗涤三次。任选地，重复该洗涤步骤以除去剩余的2-溴丁酸和/或丁烯酸。将2-methf(710kg)和di水(710kg)加至该粗产品(粗品b)中，并将该ph用50％naoh水溶液调节至12-13，使得将产品转移至水相。将该混合物搅拌30分钟，然后使各相分离。分离各相并将2-methf(700kg)加至水相，并将该混合物搅拌30分钟。再次使各相分离并分离各相。将水相用木炭(2.5kg)和硅藻土(5.5kg)净化，并将固体过滤并用30kg20％naoh水溶液洗涤。将合并的水相用硅藻土(5.5kg)净化，并将固体过滤并用30kg20％naoh水溶液洗涤。用浓hcl(aq.)将该ph调节至2-2.5，并将所得混合物用mtbe(3x55kg)萃取。将合并的有机相用di水(74kg)洗涤。通过将有机相两次经过薄膜蒸发器来浓缩该有机相。将该残余物溶于戊烷(135kg)，并使用二氧化硅(2kg)净化两次，每次都要进行过滤并用戊烷(17.5kg)洗涤。加入bha稳定剂(0.03％)。将该混合物在0.5μm过滤器上过滤并将溶剂真空蒸发，得到2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)。从epa乙酯(1)起始的总产率为约65％。用hplc确定的纯度为96％。
实施例4
使用cce来纯化粗制的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)。
使用实心柱型提取器(filled-column-typeextractor)进行纯化；内径：40mm，长度：520mm，填充：1/8"dixon-环(不锈钢)。以20ml/min的流速将10w/w％粗制的prb-01022(相当于实施例3中的粗品a)在戊烷中的溶液引入提取器底部并将67％甲醇水溶液引入提取器的顶部，同样以20ml/min的流速。使用milton-roylmi计量泵来传送溶液。第一次运行后，丁烯酸在戊烷溶液中的水平为<0.0118w/w％且2-溴丁酸的水平为0.49w/w％。该戊烷相通过重复上述操作进一步被纯化。第二次运行后，丁烯酸在该戊烷溶液中的水平为0.0002w/w％(2ppm)且2-溴丁酸的水平为0.015w/w％(150ppm)。可重复该操作来进一步降低丁烯酸和2-溴丁酸的水平。
实施例5
使用分批萃取对粗制的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)的其他纯化。
将粗制的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)(50g，相当于实施例3中的浓缩的粗品b)溶于戊烷(240ml)，然后加入mtbe(680ml)、meoh(200ml)和di-水(400ml)。用40％naoh(aq，18ml)将ph设定在12-13。在各相静置前，将该混合物搅拌30分钟。分离各相并将水相用mtbe(2x820ml)洗涤两次。然后向该水相中加入戊烷(200ml)并将所得混合物用浓hcl和水的1:1混合物(30ml)酸化至ph＝2。将该混合物搅拌，然后让其静置。分离各相并将有机相真空浓缩，得到43g产品(hplc纯度95,63％)。
实施例6
使用ccc来纯化粗制的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)。
由62％的纯度(gc)的epa乙酯起始，制备粗制的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)(300mg，相当于实施例3中的浓缩的粗品b)(hplc，60％的纯度)。通过以反相模式运行等度ccc(即，水相为移动相)来纯化粗产品，其使用己烷:甲醇:水(20:17:3)+0.1％乙酸作为溶剂系统。合并合适的级分，得到96％的纯度的产品。
本申请包括以下实施方式：
1.从式(i)的epa衍生物制备2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)的方法，其包括以下步骤
a)将式(i)的epa衍生物：
其中-c(＝o)x代表羧酸或羧酸酯，
通过还原剂的还原作用，还原成其对应的醇(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)
b)分离来自步骤a)中的醇(2)；
c)将步骤b)中分离的醇(2)与2-溴丁酸反应，形成2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)
d)将2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)从步骤c)中分离；和
e)任选地纯化2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)。
2.实施方式1的方法，其中基团-c(＝o)x为羧酸，且式(i)化合物为二十碳五烯酸(epa)。
3.实施方式1的方法，其中式(i)中的基团-c(＝o)x为羧酸酯。
4.实施方式3的方法，其中所述酯选自甲酯、乙酯和丙酯。
5.实施方式1、3或4中任一项的方法，其中所述式(i)的epa衍生物为epa乙酯(1)
6.实施方式1的方法，其中所述式(i)的epa衍生物为小于99％的纯度。
7.实施方式6的方法，其中所述式(i)的epa衍生物为约98％的纯度。
8.实施方式2的方法，其中所述epa为小于99％的纯度。
9.实施方式8的方法，其中所述epa为约98％的纯度。
10.实施方式4的方法，其中所述epa甲酯、epa乙酯或epa丙酯为小于99％的纯度。
11.实施方式10的方法，其中所述epa甲酯、epa乙酯或epa丙酯为约98％的纯度。
12.实施方式5的方法，其中所述epa乙酯(1)为小于99％的纯度。
13.实施方式12的方法，其中所述epa乙酯(1)为约97％或约98％的纯度。
14.前述实施方式中任一项的方法，其中所述还原剂选自氢化铝锂(lah)、dibal-h(ibu2alh)和乙硼烷(b2h6)。
15.实施方式14的方法，其中所述还原剂为氢化铝锂(lah)。
16.前述实施方式中任一项的方法，其中步骤a)的反应是在四氢呋喃、乙醚、甲基叔丁基醚、甲苯、1,4-二噁烷、2-甲基四氢呋喃或其混合物的存在下进行的。
17.实施方式16的方法，其中步骤a)的反应是在四氢呋喃、甲基叔丁基醚、甲苯或其混合物的存在下进行的。
18.实施方式17的方法，其中步骤a)的反应是在四氢呋喃的存在下进行的。
19.实施方式1-15中任一项的方法，其中lah可以15％lah在thf:甲苯(2.4:1)混合物中的溶液提供。
20.实施方式1-19中任一项的方法，其中步骤a)的反应是在约23℃的温度进行的。
21.实施方式1-19中任一项的方法，其中步骤a)的反应是在低于23℃的温度进行的。
22.实施方式1-19中任一项的方法，其中步骤a)的反应是在0℃-15℃的温度范围内进行的。
23.实施方式1的方法，其中步骤a)的反应包括在lah的存在下在四氢呋喃中，在0℃-15℃的温度范围内还原具有约98％纯度的式(i)的epa衍生物。
24.实施方式1或23中任一项的方法，其中步骤a)的反应包括在lah的存在下在四氢呋喃中，在0℃-15℃的温度范围内还原具有约97％或约98％纯度的epa乙酯(1)。
25.前述实施方式中任一项的方法，其中步骤a)的反应还包括通过加入乙酸乙酯和氯化铵淬灭该反应。
26.实施方式25的方法，其中氯化铵以氯化铵的饱和水溶液加入。
27.实施方式1-25中任一项的方法，其中步骤b)中(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)的分离包括萃取后处理。
28.实施方式27的方法，其中步骤b)中(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)的分离包括加入水并通过加入酸性溶液调节水相ph至约2。
29.实施方式28的方法，其中所述酸性溶液包括hcl水溶液。
30.实施方式28的方法，其中步骤b)中(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)的分离还包括用盐水洗涤有机相、分离各相并蒸发有机溶剂。
31.实施方式1-30中任一项的方法，其中在步骤b)后以大于85％的纯度获得(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)。
32.实施方式1-30中任一项的方法，其中以大于90％的纯度获得(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)。
33.实施方式1-30中任一项的方法，其中以大于95％的纯度获得(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)。
34.实施方式1-30中任一项的方法，其中以至少90％的产率获得(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)。
35.实施方式1-30中任一项的方法，其中以至少95％的产率获得(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)。
36.实施方式1-35中任一项的方法，其中步骤c)的反应是在碱的存在下进行的。
37.实施方式36的方法，其中所述碱选自naoh、naoet、nah和naotbu。
38.实施方式37的方法，其中所述碱选自naoh和naotbu。
39.实施方式37或38的方法，其中所述碱为naotbu。
40.实施方式1-39中任一项的方法，其中步骤c)的反应是在溶剂的存在下进行的。
41.实施方式40的方法，其中所述溶剂选自二甲基甲酰胺、四氢呋喃、n-甲基-2-吡咯烷酮、甲苯、二甲苯、甲基叔丁基醚、2-甲基四氢呋喃、乙醚、二甲基亚砜、叔丁醇及其混合物。
42.实施方式41的方法，其中所述溶剂选自四氢呋喃、甲基叔丁基醚、甲苯及其混合物。
43.实施方式42的方法，其中所述溶剂为四氢呋喃和甲基叔丁基醚的混合物。
44.实施方式1-43中任一项的方法，其中至少步骤c)的一部分反应是在23℃进行的。
45.实施方式1-43中任一项的方法，其中至少步骤c)的一部分反应是在低于23℃的温度下进行的。
46.实施方式1-43中任一项的方法，其中至少步骤c)的一部分反应是在约5℃至15℃或约5℃至10℃进行的。
47.实施方式1-46中任一项的方法，其中在步骤c)中，将2-溴丁酸分一批或多批次加至反应混合物中。
48.实施方式1-47中任一项的方法，其中在步骤c)中，将2-溴丁酸分两批次或更多批次加至反应混合物中。
49.实施方式1-46中任一项的方法，其中在步骤c)中，将2-溴丁酸连续地加至反应混合物中。
50.实施方式1-46中任一项的方法，其中在步骤c)中，将2-溴丁酸以分批和连续加入的组合的方式加至反应混合物中。
51.实施方式39的方法，其中将naotbu作为在mtbe中的溶液加至反应混合物中。
52.实施方式39的方法，其中将naotbu以固体形式加至反应混合物中。
53.实施方式51的方法，其中将naotbu/mtbe溶液分一批或多批次加至反应混合物中。
54.实施方式53的方法，其中将naotbu/mtbe溶液分三批次或更多批次加至反应混合物中。
55.实施方式50的方法，其中将naotbu/mtbe溶液连续地加至反应混合物中。
56.实施方式39中任一项的方法，其中将naotbu/mtbe溶液以分批和连续加入的组合的方式加至反应混合物中。
57.实施方式47、48、53或54中的方法，其中所述批次经约30分钟至约60分钟的时间加入。
58.实施方式47、48、53或54中的方法，其中所述批次经约30分钟的时间加入。
59.实施方式47、48、53或54中的方法，其中所述批次以约60分钟的时间间隔加入。
60.实施方式1-59中任一项的方法，其中步骤d)包括水萃取。
61.实施方式60的方法，其中所述萃取是分批的。
62.实施方式60的方法，其中所述萃取是以连续的方式。
63.实施方式60的方法，其中所述萃取是逆流萃取(cce)、逆流色谱(ccc)或其组合。
64.实施方式60的方法，其中所述逆流色谱(ccc)包括高效逆流色谱(hpccc)或高速逆流色谱(hsccc)。
65.实施方式1-64中任一项的方法，其中式(i)的epa衍生物来源于植物、微生物和/或动物来源。
66.实施方式65的方法，其中所述动物来源为海产品油。
67.实施方式66的方法，其中所述海产品油为鱼油。
68.实施方式1-67中任一项的方法，其中步骤a)-e)以尽量少地暴露于氧气的方式进行。
69.实施方式68的方法，其中步骤a)-e)在惰性气氛中进行。
70.实施方式69的方法，其中所述惰性气氛为氮气或氩气。
71.实施方式1-70中任一项的方法，其中2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)以至少55％的总产率获得。
72.实施方式1-70中任一项的方法，其中2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)以至少60％的总产率获得。
73.实施方式1-70中任一项的方法，其中2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)以至少65％的总产率获得。
74.实施方式1-70中任一项的方法，其中2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)以至少90％的纯度获得。
75.实施方式1-70中任一项的方法，其中2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)以至少95％的纯度获得。
76.实施方式1-70中任一项的方法，其中2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)以至少97％的纯度获得。
77.实施方式1的方法，其用于由epa乙酯(1)制备2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)，该方法包括以下步骤：
a)将具有约97或约98％纯度的epa乙酯(1)：
在氢化铝锂的存在下，在四氢呋喃中，在0℃-15℃的温度范围内，还原成其对应的醇(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)
b)在通过加入乙酸乙酯和氯化铵淬灭该反应后，通过萃取后处理分离来自步骤a)中的醇(2)；
c)将步骤b)中分离的醇(2)与2-溴丁酸在四氢呋喃和甲基叔丁基醚的混合物中、在naotbu的存在下，至少部分地在5℃至15℃的温度反应，形成2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)
d)通过水萃取，分离来自步骤c)中的2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)；和
e)任选地纯化2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)。
78.实施方式77的方法，其中步骤b)的萃取后处理包括将水加至该淬灭的反应混合物中，通过加入hcl水溶液调节该水相ph至约2，并用盐水进一步洗涤有机相，分离各相，并蒸发该有机相的有机溶剂。
79.实施方式77的方法，其中步骤c)的反应是在甲苯的存在下进行的。
80.实施方式77的方法，其中在步骤c)中，将2-溴丁酸分两批次或更多批次加至反应混合物中。
81.实施方式77的方法，其中在步骤c)中，将2-溴丁酸连续地加至反应混合物中。
82.实施方式77的方法，其中在步骤c)中，将2-溴丁酸以分批和连续加入的组合方式加至反应混合物中。
83.实施方式77的方法，其中在步骤c)中，将作为在mtbe中的溶液的naotbu分三批次或更多批次加至反应混合物中。
84.实施方式77的方法，其中在步骤c)中，将作为在mtbe中的溶液的naotbu连续地加至反应混合物中。
85.实施方式77的方法，其中作为在mtbe中的溶液的naotbu以分批或连续加入的组合的方式加入。
86.实施方式80或83的方法，其中所述批次经约30分钟至约60分钟的时间段加入且所述批次以约60分钟的加入间隔加入。
87.实施方式77的方法，其中所述epa乙酯(1)来源于植物、微生物和/或动物来源。
88.实施方式87的方法，其中所述动物来源为海产品油。
89.实施方式88的方法，其中所述海产品油为鱼油。
90.实施方式77-78中任一项的方法，其中在步骤b)后，(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)以大于85％的纯度获得，例如大于90％的纯度，例如大于95％的纯度。
91.实施方式77-78中任一项的方法，其中(5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(2)以至少90％的产率获得，例如至少95％的产率。
92.实施方式77-91中任一项的方法，其中2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)以至少55％的总产率获得，例如至少60％的总产率，例如至少65％的总产率。
93.实施方式77-91中任一项的方法，其中2-((5z,8z,11z,14z,17z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3)以至少90％的纯度获得，例如至少95％的纯度，例如至少97％的纯度。
94.实施方式77-89中任一项的方法，其中步骤a)-e)以尽量少地暴露于氧气的方式进行。
95.实施方式94的方法，其中步骤a)-e)是在惰性气氛中进行的。
96.实施方式95的方法，其中所述惰性气氛为氮气或氩气。