本发明涉及一种慢病毒工作液及利用其调控鸭产蛋性能的方法，属于家禽品种遗传选育
技术领域：
。技术背景蛋鸭产业我国一大特色家禽产业，因此国内相关选育研究较多，但是国外由于蛋鸭养殖数量相对有限，固鸭产蛋性能选育改良方面的研究较少，主要的研究团队和成果也主要集中国内相关科研院所。鸭产蛋性能选育改良是地方鸭种单用生产性能选育改良的一个重要方面，但以往产蛋性能选育改良工作一般要等到种鸭达到性成熟后开始测定，一般是直接以鸭72周龄产蛋个数或重量来决定个体的产蛋性能的育种值，并对其后代个体或群体进行数个世代的选育提高来进行鸭产蛋性能选育改良的方法。这种方法存在以下的不足：第一，选育测定的时间较晚，增加了淘汰个体的饲料消耗量，加大了鸭产蛋性能选育改良成本；第二，选育改良周期较长，一般需要3-10个饲养周期进行选育改良提高；第三，该选育改良是基于统计学理论进行实施，因此存在由于选育误差造成选育方向错误的可能性。为此，这种传统方法产蛋性能选育改良的方法已经不能适应现在对于多变的市场需求和快速选育改良技术的要求，许多研究者不断探索新的更为有效的鸭产性能选育改良的方法，以改变上述传统鸭产蛋性能选育改良方法的不足。国内相关于鸭产蛋性能选育改良方面的研究主要集中在分子标记方面研究和开发方面，但通过遗传物质之间的调控关系进行产蛋性能的选育改良的方法还不曾有过报道。我国地方鸭种相对于国内蛋鸡品种平均产蛋数量相对较低，一般年产蛋数集中在120-180枚，而产蛋数又是影响鸭产蛋性能选育及产业化推广的重要因素之一，是制约养鸭业发展的瓶颈。因此建立一种快速的鸭产蛋性能选育改良的方法是非常必要的，这可为加快鸭产蛋性能选育改良工作提供必要的技术支持。技术实现要素：本发明目的是，针对传统鸭产蛋性能选育改良方法存在的缺陷，提供一种鸭产蛋性能选育改良的方法，既能缩短产蛋性能选育改良的周期，又能节约产蛋性能选育改良的投入，并保证产蛋性能在当代就起到很好的改良。技术方案本发明人利用特异性小rna(核糖核酸)序列，并包装成慢病毒感染载体，注射到北京鸭腹腔近卵巢部位，能够干扰正处在产蛋期北京鸭的产蛋量，在注射后第二周产蛋量下降10％-12％左右。反之在蛋鸭停产期到来之前通过表达将其包装成表达载体，能够延长北京鸭的停产期到来的时间。具体方案如下：一种慢病毒工作液，由如下方法制备而成：(1)感染或表达载体质粒构建：以小rna序列或表达rna序列为基础序列，合成到慢病毒表达质粒上，并利用慢病毒质粒u6启动子通用测序引物进行测序，对测序正确包含小rna序列或表达rna序列的重组质粒，进行无内毒素提取、纯化，得到不含内毒素的重组质粒；(2)慢病毒包装纯化：将步骤(1)制得的重组质粒和慢病毒包装质粒混匀，共转染293t细胞，进行病毒包装，收集病毒液，测定滴度，对收集的病毒液滴度不足109的利用慢病毒浓缩实际盒进行浓缩、纯化；(3)扩繁与病毒定量：用纯化后的病毒液感染293t细胞，并通过定量pcr精确测定病毒滴度，将病毒液稀释调正到109滴度形成工作液。步骤(1)中，所述小rna序列为：5’ggagtaatcccaagagcaaac’3。步骤(1)中，所述表达rna序列如seqidno.1所示。上述慢病毒工作液在调控鸭产蛋性能上的应用。应用方法：将病毒工作液以200-1000微升的注射量，注射到鸭腹腔内。本发明的有益效果是：一、通过注射包含有小rna或rna表达序列包装好的的慢病毒工作液，即可实现对于产蛋鸭产蛋性能的调控，达到产蛋期缩短或延长的效果，较传统方法需测定多个世代完整的产蛋记录并计算育种值进行选育改良的方法，当代就可以实现产蛋性能的改良，可明显节约鸭产蛋性能选育改良的工作量。二、本发明建立的通过小rna感染序列，能够降低鸭产蛋期的产蛋量10％-12％之间，另外表达rna序列能够延长鸭的产期10-20天，达到提高产蛋量量10％左右的效果。三、在种鸭产蛋期中使用能够促进鸭多产蛋，达到当代就可实现产蛋性能改良提高的效果，节约量选育改良中3-10世代个体饲养的成本和物料投入。具体实施方式通过以下实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的内容并不局限于此。实施例1：(鸭产蛋期产蛋性能下调的方法)(1)感染或表达载体质粒构建：以小rna序列5’ggagtaatcccaagagcaaac’3基础序列，合成到慢病毒表达质粒上，并利用慢病毒质粒u6启动子通用测序引物进行测序，对于测序正确的重组质粒，进行无内毒素提取、纯化，得到不含内毒素的重组质粒；(2)慢病毒包装纯化：将步骤(1)制得的重组质粒和慢病毒包装质粒混匀，共转染293t细胞，进行病毒包装，收集病毒液，测定滴度，对收集的病毒液滴度不足109的利用慢病毒浓缩实际盒进行浓缩、纯化；(3)扩繁与病毒定量：用纯化后的病毒液感染293t细胞，并通过定量pcr精确测定病毒滴度，将病毒液稀释调正到109滴度形成工作液。将病毒工作液按照每只300微升的注射量，注射到调控10只产蛋北京鸭腹腔内，作为干扰组，并与10只没有注射病毒工作液的对照组北京鸭进行比较，结果见表1：表1北京鸭产蛋性能下调控制结果天数干扰组每天产蛋数对照组每天产蛋数11010210938104910591068107810由表1可以看出，对照组产蛋量显著高于干扰组12％以上。实施例2：(鸭产蛋期延长的方法)(1)感染或表达载体质粒构建：表达rna序列如下：5’ttcaaaagtgtctcttaagcgagagtaattgcaggctctgccagataagtttagagctatccacgcttagggtctgtgtcagattagcaaagctggtttccaaattgatttggttattgttacataaattctgtgtctcgctcagatggctggtacaggcatttaggacaaagttgcagggatcttcatctgtaaccttctcccacgcacaaagtcctgcaggaggaggttgagagcccaggaggaaggaatgtcagagcctgagcctccagaatctgtgatggagtggcaacacagaaggatccagccaacatctttcacaccacctgaagcctcacctctttctggtccttctccacgtgagactgaagacattcctcaagaatcactggctcgcgcccagctgcttagcactactgcagtgccctttccacgacacatagccctctaccctggagcttgtggcatcctcctagccctggagcagaattattgttttaatgtgtttttcagcttacgttgtgatatgtcagggctgtgcaacaacctctcagagtgatgttgttacagcttgaaatgaaacgtatgtattatgtgcactgggatacaagtaagtgtctgggtagagggtttgctgagcctgccagaatggtgttggacaacaccgtggatctcagggagccaaataaaaagtttgtggccttatttgtgcttgggagtaatcccaagagcaaactacccgagatccatgccttatcctgaagacacgagatgtacctcgatggattcccaaggagaacgctaacagttaagtaggaagctcaaactcattccctctaactgcactgtagacacagtgtaaatgtctaagtgcccaatttagtctcctgaaggaatgggtacaatacaactacacaggttcagacagagtaactgagtgcatgtggtaagtgtaaacaaattttgggaacagaagtggttaatgccatatatcacaagcacctgaacgtttcatacatgctgctgaattaaagctgcttgcatccccg’3以表达rna序列为基础序列，合成到慢病毒表达质粒上，并利用慢病毒质粒u6启动子通用测序引物进行测序，对于测序正确的重组质粒，进行无内毒素提取、纯化，得到不含内毒素的重组质粒；(2)慢病毒包装纯化：将步骤(1)制得的重组质粒和慢病毒包装质粒混匀，共转染293t细胞，进行病毒包装，收集病毒液，测定滴度，对收集的病毒液滴度不足109的利用慢病毒浓缩实际盒进行浓缩、纯化；(3)扩繁与病毒定量：用纯化后的病毒液感染293t细胞，并通过定量pcr精确测定病毒滴度，将病毒液稀释调正到109滴度形成工作液。将病毒工作液按照每只300微升的注射量，注射到调控10只产蛋期即将结束的北京鸭腹腔内，作为实验组，以10只同期的北京鸭作为对照组，不注射病毒工作液，与实验组进行比较，结果见表2：表2北京鸭产蛋性能下调控制结果天数实验组每天产蛋数对照组每天产蛋数110721083108499510106101071010由表2可以看出，对照组产蛋量显著低于表达组11％以上。seqidno.15’ttcaaaagtgtctcttaagcgagagtaattgcaggctctgccagataagtttagagctatccacgcttagggtctgtgtcagattagcaaagctggtttccaaattgatttggttattgttacataaattctgtgtctcgctcagatggctggtacaggcatttaggacaaagttgcagggatcttcatctgtaaccttctcccacgcacaaagtcctgcaggaggaggttgagagcccaggaggaaggaatgtcagagcctgagcctccagaatctgtgatggagtggcaacacagaaggatccagccaacatctttcacaccacctgaagcctcacctctttctggtccttctccacgtgagactgaagacattcctcaagaatcactggctcgcgcccagctgcttagcactactgcagtgccctttccacgacacatagccctctaccctggagcttgtggcatcctcctagccctggagcagaattattgttttaatgtgtttttcagcttacgttgtgatatgtcagggctgtgcaacaacctctcagagtgatgttgttacagcttgaaatgaaacgtatgtattatgtgcactgggatacaagtaagtgtctgggtagagggtttgctgagcctgccagaatggtgttggacaacaccgtggatctcagggagccaaataaaaagtttgtggccttatttgtgcttgggagtaatcccaagagcaaactacccgagatccatgccttatcctgaagacacgagatgtacctcgatggattcccaaggagaacgctaacagttaagtaggaagctcaaactcattccctctaactgcactgtagacacagtgtaaatgtctaagtgcccaatttagtctcctgaaggaatgggtacaatacaactacacaggttcagacagagtaactgagtgcatgtggtaagtgtaaacaaattttgggaacagaagtggttaatgccatatatcacaagcacctgaacgtttcatacatgctgctgaattaaagctgcttgcatccccg’3organizationapplicant----------------------street:石桥路145号city:杭州state:浙江省country:中国postalcode:310021phonenumber:faxnumber:emailaddress:<110>organizationname:浙江省农业科学院applicationproject-------------------<120>title:一种慢病毒工作液及利用其调控鸭产蛋性能的方法<130>appfilereference:------<140>currentappnumber:<141>currentfilingdate:____-__-__sequence--------<213>organismname:transcriptomesequencing<400>presequencestring:ttcaaaagtgtctcttaagcgagagtaattgcaggctctgccagataagtttagagctat60ccacgcttagggtctgtgtcagattagcaaagctggtttccaaattgatttggttattgt120tacataaattctgtgtctcgctcagatggctggtacaggcatttaggacaaagttgcagg180gatcttcatctgtaaccttctcccacgcacaaagtcctgcaggaggaggttgagagccca240ggaggaaggaatgtcagagcctgagcctccagaatctgtgatggagtggcaacacagaag300gatccagccaacatctttcacaccacctgaagcctcacctctttctggtccttctccacg360tgagactgaagacattcctcaagaatcactggctcgcgcccagctgcttagcactactgc420agtgccctttccacgacacatagccctctaccctggagcttgtggcatcctcctagccct480ggagcagaattattgttttaatgtgtttttcagcttacgttgtgatatgtcagggctgtg540caacaacctctcagagtgatgttgttacagcttgaaatgaaacgtatgtattatgtgcac600tgggatacaagtaagtgtctgggtagagggtttgctgagcctgccagaatggtgttggac660aacaccgtggatctcagggagccaaataaaaagtttgtggccttatttgtgcttgggagt720aatcccaagagcaaactacccgagatccatgccttatcctgaagacacgagatgtacctc780gatggattcccaaggagaacgctaacagttaagtaggaagctcaaactcattccctctaa840ctgcactgtagacacagtgtaaatgtctaagtgcccaatttagtctcctgaaggaatggg900tacaatacaactacacaggttcagacagagtaactgagtgcatgtggtaagtgtaaacaa960attttgggaacagaagtggttaatgccatatatcacaagcacctgaacgtttcatacatg1020ctgctgaattaaagctgcttgcatccccg1049<212>type:rna<211>length:1049sequencename:表达rna序列sequencedescription:当前第1页12