本发明涉及化妆品领域，具体涉及一种具有皮肤细胞增殖促进作用五肽及其应用。
背景技术：
：皮肤与其他的生物体组织同样，随着年龄增长而不断老化，并且由于暴露于紫外线而促进老化。通过近年的研究发现，在由于年龄增长所导致的皮肤老化和由于紫外线所导致的皮肤老化中具有若干重要的生物学共通点。皮肤从外侧开始由角质层、表皮层、真皮层、皮下组织构成。表皮层中，表皮最深部的基底层处产生的表皮细胞逐渐向外界方向移动，从而不断替换成新的细胞(称作表皮细胞的更新)。作为皮肤老化的要因，已知构成表皮层的表皮细胞的更新的降低以及存在于真皮层的成纤维细胞的细胞间的胶原蛋白减少(archdermatol.2002；138：1462-1470)。胶原蛋白是真皮层的主要成分，与维持皮肤的弹性有关，但已知由于年龄增长或紫外线所带来的损伤，皮肤的胶原蛋白量减少、皮肤的弹性受损、形成皱纹或促进皮肤老化。皮肤的斑、松弛也是皮肤老化的主要症状，皱纹的形成在其中占很大要素，一直以来采取了各种方法预防这种皱纹。例如，促进支撑皮肤构造的胶原蛋白纤维的合成且预防其减少的方法。另外，还认为促进与皮肤的保湿维持功能或防御功能有关的角质层以及表皮细胞的再生、即促进表皮层和角质层的重生(表皮更新)的这一行为(表皮细胞赋活)也是皱纹的有效预防方法。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。根据不同功能活动状态，可将细胞划分成成纤维细胞和纤维细胞，成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。2013年12月，英国伦敦国王学院研究人员发现成纤维细胞具有不同类型，它们的独特性能可帮助修复受损皮肤，并降低年龄老化对皮肤的影响。技术实现要素：为了防止和改善以皱纹为主要症状的皮肤老化，认为特别有效的是促进皮肤的成纤维细胞增殖，因而期待开发具有对成纤维细胞增殖而言具有显著改善或支持作用的、特别是适于以化妆品形式来使用的有效成分。因而，本发明目的之一为提供具有促进皮肤的成纤维细胞增殖效果的适于以化妆品形式来使用的肽和包含其的组合物。而且，本发明提供具有促进皮肤的成纤维细胞增殖效果的化妆品组合物。本发明提供了具有促进皮肤的成纤维细胞增殖效果的适于以化妆品形式来使用的肽，其具有如下的序列：pro-pro-phe-leu-val(peptide.01)。特别地，本发明还提供了具有促进皮肤的成纤维细胞增殖效果的适于以化妆品形式来使用的肽，其由如下的序列组成：pro-pro-phe-leu-val(peptide.01)。本发明还提供了包含peptide.01的五肽的组合物，优选以用于化妆品组合物的形式。本发明的组合物具有促进皮肤的成纤维细胞增殖的效果。本发明的肽具有促进皮肤的成纤维细胞增殖效果，因此，本发明提供了peptide.01的肽在制备用于促进皮肤的成纤维细胞增殖的组合物中的用途。本发明的肽和组合物能够防止和改善以皱纹为主要症状的皮肤老化，促进皮肤的成纤维细胞增殖，其对成纤维细胞增殖而言具有显著改善或支持作用。特别的是，本发明的肽和组合物适于以化妆品形式来使用。具体实施方式本发明的肽可以使用有机化学的合成方法，例如可以使用固相法(boc法、fmoc法)或液相法等一般的方法，例如可以是使用肽合成装置自动合成。对于肽合成的反应条件等而言，可以基于本领域技术人员的技术常识任意地设定所选择的合成方法或适当的反应条件等。化学合成的肽的纯化方法也是本领域技术人员所熟知的。通过固相合成法得到的肽可以通过高压液相色谱纯化，冷冻干燥而得。本说明书中在言及这些肽时，除了特别明示的情况或者在文字上明显排除的情况下之外，“肽”包含它们的盐。这种盐中，包含钠盐、钾盐等可在生理条件下存在的盐。作为本发明组合物，根据添加形态或制品形态而不同，相对于最终制品本发明的肽的含量为0.01质量％～50质量％、优选为0.1质量％～30质量％、更优选为1质量％～10质量％。本发明的肽是在美容上可接受的载体中提供的。载体可以是疏水的或亲水的。适当的疏水载体包括例如，化妆品中常用蜡样非离子物质，例如脂肪醇和脂肪酸的酯和醚，碳链长度为c4到c22，优选c8到c18，最优选c12到c18。脂肪性疏水载体的例子包括肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、棕榈酸辛酯、羊毛酸异丙酯、乙酰化羊毛脂醇、c12-c15醇的苯甲酸酯、辛酸鲸蜡酯、棕榈酸鲸蜡酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、乳酸肉豆蔻酯、醋酸鲸蜡酯、二辛酸/癸酸丙二醇酯、油酸癸酯、乙酰化羊毛脂、庚酸硬脂酸酯、苹果酸二异硬脂酸酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛酯、异硬脂酸异丙酯等等。适当的亲水载体溶液可以是，例如二醇和化妆品中常用的烷氧基化的二醇，包括乙二醇、二乙二醇、三乙二醇、丙二醇、二丙二醇等等。促进伤口愈合组合物可以配制成营养液、精华液、美白霜、膏霜、化妆水、浆液、喷雾剂、棒剂和本领域技术人员已知的其他形式。精华液是当前优选的产品形式。在美容上可接受的载体中，肽的浓度范围可以是1μm到200μm，优选10ppb到150μm，更优选20μm到100μm，最优选36μm到50μm。促进伤口愈合组合物典型地包含上述的载体溶液，其水平为约0.01％到约90％重量，优选约0.1％到约50％重量，更优选约0.1％到约20％重量，最优选约1％到约10％重量。作为抗氧化剂，可列举例如丁基羟基苯甲醚、二丁基羟基甲苯、亚硫酸氢钠、异抗坏血酸及其盐、谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化酶、谷胱甘肽-s-转移酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、硫氧还蛋白、牛磺酸、硫代牛磺酸、亚牛磺酸、维生素e等。其中，优选谷胱甘肽、维生素e和过氧化氢酶。这些抗氧化剂可以使用1种或将2种以上组合使用，优选为谷胱甘肽和维生素e的组合。在本发明的皮肤外用组合物(例如膏霜)中添加抗氧化剂时，其添加比例没有特别限定，但相对于皮肤外用组合物的总量，通常为0.001～6重量％，优选为0.01～3重量％，进一步优选为0.2～2重量％。作为保湿剂，可列举例如丙氨酸、丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、甘氨酸、脯氨酸、羟基脯氨酸、天冬氨酸、精氨酸、茶氨酸等氨基酸及其衍生物；乙二醇、1,3-丙二醇、1，3-丁二醇、二甘醇、三甘醇、四甘醇、二丙二醇、二甘油、聚乙二醇等多元醇；乙二醇单甲基醚、乙二醇单乙基醚、乙二醇单丙基醚、二乙二醇单甲基醚、二乙二醇单乙基醚、二乙二醇单丙基醚、二乙二醇单丁基醚、丙二醇单乙基醚、丙二醇单丙基醚、二丙二醇单乙基醚、二丙二醇单丙基醚等二醇醚；甘露醇、山梨糖醇、赤藓醇、木糖醇、海藻糖等糖醇；卵磷脂、氢化卵磷脂等磷脂；透明质酸钠、乙酰基透明质酸钠、肝素类似物、软骨素硫酸钠等粘多糖；骨胶原、弹性蛋白、角蛋白、甲壳质、脱乙酰壳多糖、明胶、聚谷氨酸等高分子化合物；乳酸钠、吡咯烷酮羧酸钠等成分；洋甘菊提取物、芦荟提取物、库拉索芦荟提取物、金缕梅提取物、迷迭香提取物、百里香提取物、茶提取物、紫苏提取物等植物提取物等。其中，优选甘氨酸、1，3-丙二醇、二丙二醇、二甘油、二乙二醇单乙基醚、透明质酸钠、乙酰基透明质酸钠、吡咯烷酮羧酸钠、聚谷氨酸。这些保湿剂可以使用1种或将2种以上组合使用，优选为1,3-丙二醇和透明质酸钠。在本发明的皮肤外用组合物(例如膏霜)中添加保湿剂时，其添加比例没有特别限定，但相对于皮肤外用组合物(例如膏霜)的总量，通常为0.001～40重量％，优选为0.1～30重量％，进一步优选为5～20重量％。作为植物油，其选自玫瑰果油、甜杏仁油、玫瑰果油、荷荷巴油、小麦胚芽油、玫瑰果油胡萝卜油、酪梨油、蓖麻油、鳄梨油、椰子油、棕榈油、可可油、可可脂、棕榈仁油、大豆油、米糠油、芦荟油、婆罗月旨、雾冰藜脂、牛油树脂、花生油、玉米油、澳洲坚果油、石栗子油、沙刺油、亚麻油、西番莲花油、金盏花、芒果核油、蔷薇果油，优选为甜杏仁油、霍霍巴油玫瑰果油的一种或者两种以上的组合。优选地，本发明的组合物中的植物油是玫瑰果油油。在本发明的皮肤外用组合物(例如膏霜)中添加植物油时，其添加比例没有特别限定，但相对于皮肤外用组合物(例如膏霜)的总量，通常为0.001～10重量％，优选为0.5～8重量％，进一步优选为1.0～8.0重量％。作为基质，其选自植物油、氢化植物油、蜂蜡、虫蜡、鲸蜡、固体石蜡、液体石蜡、凡士林、硅酮、聚丙烯酸、纤维素衍生物等的组合，可以是选自其中的一种或者两种以上的组合。优选地，本发明的组合物中的基质为选自液体石蜡、凡士林中的一种或者两种以上的组合。在本发明的皮肤外用组合物(例如膏霜)中添加基质时，其添加比例没有特别限定，但相对于皮肤外用组合物(例如膏霜)的总量，通常为0.001～10重量％，优选为0.5～8重量％，进一步优选为1.0～8.0重量％。作为防腐剂，其选自苯甲醇、苯乙醇、苯氧乙醇和月桂酰精氨酸乙酯，优选为月桂酰精氨酸乙酯。在本发明的皮肤外用组合物(例如膏霜)中添加防腐剂时，其添加比例没有特别限定，但相对于皮肤外用组合物(例如膏霜)的总量，通常为0.001～5重量％，优选为0.1～5重量％，进一步优选为0.2～3重量％。优选地，本发明的膏霜包含0.0005-0.001重量％的peptide.01肽，以及以重量％计的谷胱甘肽2.0-4.0、牛磺酸0.5-2.5、1.3丙二醇2.0-4.0、茶提取物4.0-6.0、玫瑰果油2.0-4.0、羊毛脂2.0-4.0、液体石蜡2.0-4.0、凡士林8.0-12.0、月桂酰精氨酸乙酯适量。优选地，本发明的膏霜包含0.001重量％的peptide.01肽，以及以重量％计的谷胱甘肽2.0-4.0、牛磺酸0.5-2.5、1.3丙二醇2.0-4.0、茶提取物4.0-6.0、玫瑰果油2.0-4.0、羊毛脂2.0-4.0、液体石蜡2.0-4.0、凡士林8.0-12.0、月桂酰精氨酸乙酯适量。本发明的精华液除了包含本发明的肽之外，还含有谷胱甘肽、白黎芦醇、1.3丙二醇、大豆卵磷脂、玫瑰果油、卡波姆、聚谷氨酸、葡聚糖、薰衣草提取物、铁皮石斛提取物、芦荟提取物和月桂酰精氨酸乙酯。优选地，本发明的精华液以重量％包含：0.0005-0.001重量％的peptide.01肽，以及以重量％计的谷胱甘肽2.0-4.0、白黎芦醇0.5-2.5、1.3丙二醇2.0-4.0、大豆卵磷脂4.0-6.0、玫瑰果油2.0-4.0、卡波姆2.0-4.0、聚谷氨酸2.0-4.0、葡聚糖8.0-12.0、薰衣草提取物1.0-2.0、铁皮石斛提取物1.0-2.0、芦荟提取物1.0-2.0、和月桂酰精氨酸乙酯适量；余量为水。更优选地，本发明的精华液以重量％包含：0.001重量％的peptide.01肽，以及以重量％计的谷胱甘肽2.0-4.0、白黎芦醇0.5-2.5、1.3丙二醇2.0-4.0、大豆卵磷脂4.0-6.0、玫瑰果油2.0-4.0、卡波姆2.0-4.0、聚谷氨酸2.0-4.0、葡聚糖8.0-12.0、薰衣草提取物1.0-1.5、铁皮石斛提取物1.0-1.5、芦荟提取物1.0-1.5、和月桂酰精氨酸乙酯适量；余量为水。最优选地，本发明的精华液以重量％包含：0.0005重量％的peptide.01肽，以及以重量％计的谷胱甘肽2.0-4.0、白黎芦醇0.5-2.5、1.3丙二醇2.0-4.0、大豆卵磷脂4.0-6.0、玫瑰果油2.0-4.0、卡波姆2.0-4.0、聚谷氨酸2.0-4.0、葡聚糖8.0-12.0、薰衣草提取物1.2-1.5、铁皮石斛提取物1.2-1.5、芦荟提取物1.2-1.5、和月桂酰精氨酸乙酯适量；余量为水。本发明的促进伤口愈合产品中所包含的涉及该促进伤口愈合产品的说明书可以含有如下内容：作用与功效(例如促进伤口愈合)、施用方法(例如均匀涂抹至皮肤，例如脸部和颈部)以及可能产生的副作用等等。本文已采用的术语和表述用作描述性而不是限制性术语，并且在此种术语和表述的使用中不预期排除所示和所述特征或其部分的任何等价物，但应认识到各种修饰在请求保护的本发明的范围内是可能的。因此，应当理解尽管本发明已通过优选实施方案和任选特征具体公开，但本领域技术人员可以采用本文公开的概念的修饰和变化，并且此类修饰和变化被视为在如由附加权利要求定义的本发明的范围内。为更清楚地说明本发明，现结合如下实施例进行详细说明，但这些实施例仅仅是对本发明的示例性描述，并不能解释为对本申请的限制。实施例下面的实施例是用于以非限制性的方式说明本发明。实施例1肽的固相合成选用高分子树脂，按照氨基酸序列pro-pro-phe-leu-val的特征，先将pro的羧基以共价键的形式与树脂相连，然后pro的氨基和pro的羧基缩水反应，处理后，再添加phe，pro的氨基和phe的羧基反应，依次从右到左添加氨基酸，加好最后一个val氨基酸后，再切除树脂即得到目标合成五肽。高效液相色谱纯化得到最后的产品，纯化过程使用phenomenexc18(4.6*250mm)色谱柱，流速为1.0ml/min。采用两个通道进行洗脱，溶剂a:含有0.1％三氟乙酸的水；溶剂b:含有0.09％三氟乙酸的溶液(80％乙腈+20％水)；洗脱梯度过程中b初始比例为39％，在20min内，b的比例上升到49％，检测波长220nm。收集合成五肽溶液，液氮速冷，然后冻干。得到纯度为95％以上的产品，并经esi-ms鉴定结构。实施例2合成的peptide.01的五肽对人皮肤成纤维细胞的增殖作用将正常人皮肤成纤维细胞以1.0×104个细胞/ml的浓度接种于96孔板中，每孔100μl，在37℃、5％co2、加湿条件下培养3日。接着，以各个浓度添加用100μl(50μm、100μm、150μm和200μm)含有peptide.01的肽的试验样品进行培养。将添加有100μlpbs的孔作为对照使用。在培养7天后舍弃培养液，添加pbs100μl，测定细胞数。以用对照培养液培养的细胞数为100％，peptide.01的肽对应的孔中细胞数为120±2％(50μm)、134±4％(100μm)、135±3％(150μm)、和138±7％(200μm)。实施例3合成的peptide.01的五肽对人皮肤成纤维细胞uvb损伤的保护应用人皮肤成纤维细胞培养在完全培养基中，完全培养基主要由基础培养基高糖dmem，10％胎牛血清(v/v)，以及1％双抗(由青霉素和链霉素组成，v/v)组成。置于37℃、co2体积分数为5％的饱和湿度培养箱中。每隔2天换液1次。待细胞长满培养平的90％左右，取其接种于96孔培养板中,每孔100μl,浓度为5×104细胞/ml。细胞生长24h后,吸弃培养液，用200μlpbs洗1次，加入200μlpbs，用100mj/cm2uvb照射，吸弃pbs，每孔加入200μl10μg/ml样品(零浓度用完全培养基取代，即为正常对照)，继续培养72h，吸弃培养液，采用mtt法检测细胞存活率，结果表明，添加样品的细胞的平均存活率是正常对照的1.34倍。实施例4：精华液的配制成分含量(重量％)本发明的肽(peptide.01)0.001谷胱甘肽3.0白黎芦醇1.51.3丙二醇3.0大豆卵磷脂5.0玫瑰果油3.0卡波姆3.0聚谷氨酸3.0葡聚糖10.0薰衣草提取物1.0铁皮石斛提取物1.0芦荟提取物1.0月桂酰精氨酸乙酯0.1纯化水残余量总计100将卡波姆、聚谷氨酸、葡聚糖、玫瑰果油混合，搅拌均匀后加入其他组分后搅拌并调制成精华液。实施例5：精华液的配制将卡波姆、聚谷氨酸、葡聚糖、玫瑰果油混合，搅拌均匀后加入其他组分后搅拌并调制成精华液。实施例6：精华液的配制成分含量(重量％)本发明的肽(peptide.01)0.0005谷胱甘肽4.0白黎芦醇0.51.3丙二醇4.0大豆卵磷脂4.0玫瑰果油2.0卡波姆4.0聚谷氨酸4.0葡聚糖8.0薰衣草提取物1.2铁皮石斛提取物1.2芦荟提取物1.2月桂酰精氨酸乙酯0.3纯化水残余量总计100将卡波姆、聚谷氨酸、葡聚糖、玫瑰果油混合，搅拌均匀后加入其他组分后搅拌并调制成精华液。虽然用上述实施方式描述了本发明，应当理解的是，在不背离本发明的精神的前提下，本发明可进行进一步的修饰和变动，且这些修饰和变动均属于本发明的保护范围之内。序列表<110>温州千瑞生物科技有限公司<120>促进细胞再生的肽及其在化妆品中的应用<130>1<160>1<170>patentinversion3.5<210>1<211>10<212>prt<213>人工序列<220><223>peptide.01<400>1propropheleuval15当前第1页12