本发明涉及一种超生波辅助提高日本医蛭素提取收率的方法，属水蛭素提取技术领域。
背景技术：
现代药理学研究表明，从医用水蛭虫体提取的水蛭素的活性物质肽类化合物，具有很好的抗凝血，抗血栓形成的作用，如今水蛭素已在临床医学治疗心脑血管疾病上取得不错的疗效。从医用水蛭虫体中提取水蛭素，以往一般是通过盐浸+化学药剂方法来提取的，不仅水蛭素提取率低，费时费力，浪费大量水蛭虫体资源，而且难以保证提取纯度和质量。因此，非常有必要研发一种提取率高，提取纯度和质量好，省时省力，节省水蛭虫体资源，提取方法简单，操作方便的提高日本医蛭素提取收率的方法。
技术实现要素：
本发明的目的在于，针对上述现有技术的不足，提供一种提取方法简单，操作方便，省时省力，节省水蛭虫体资源，水蛭素提取率高，提取纯度和质量好的超生波辅助提高日本医蛭素提取收率的方法。
本发明是通过如下的技术方案来实现上述目的的：
一种超生波辅助提高日本医蛭素提取收率的方法，其特征在于：它是通过如下的步骤完成的：
1）、制备日本医蛭虫体浸提液：取日本医蛭虫体，放入高速匀浆机匀浆20～50s；
2）、将匀浆后的日本医蛭虫体放入磁力搅拌器中，加入日本医蛭虫体总重量4～10倍的生理盐水，在磁力搅拌器中搅拌提取30～60min，即制得日本医蛭虫体浸提液；
3）、取上述日本医蛭虫体浸提液200～500ml放入加有冰块的容器中，控制日本医蛭虫体浸提液温度在4～30℃，再将容器放入超声波机中，设定：超声功率200～950w，超声频率20～25khz，超声时间1～4秒，超声间隙2～8s，超声提取10～30min；以上条件设定好后，将变幅杆插入日本医蛭虫体浸提液中,启动超声波机运转；
4）、超声处理完成后，从超声波机中取出容器，对超声前的日本医蛭虫体浸提液与超声后的日本医蛭虫体浸提液分别取样20ml，离心机温度设定为4℃，转速设定为6000rpm，将前述两份样品分别放入离心机离心10min后，分别取两份上清样品采用凝血酶滴定法测定活性；
5）、测定结果表明超声后的浸提液的抗凝活性比超声前的浸提液的抗凝活性提高15%～20%即可。
本发明与现有技术相比的有益效果在于：
一种超生波辅助提高日本医蛭素提取收率的方法，运用超声波独有的物理特性使日本医蛭虫体细胞组织破壁或变形，破坏日本医蛭虫体的细胞，让生理盐水快速渗透到日本医蛭虫体细胞中，使日本医蛭虫体的活性有效成分提取更充分，提高了溶出率，经检测，通过超声波处理后的日本医蛭虫体浸提液的抗凝活性显著提高。同时，使尽可能多的日本医蛭虫体内的水蛭素溶解到浸提生理盐水中，为更好、更进一步地开发利用水蛭素，提高水蛭素的提取率提供了参考数据。提取方法简单，操作方便，省时省力，节省水蛭虫体资源，水蛭素提取率高，提取纯度和质量好。解决了现有盐浸+化学药剂提取方法，不仅提取率低，费时费力，浪费大量水蛭虫体资源，而且难以保证提取纯度和质量的问题。
具体实施方式
一种超生波辅助提高日本医蛭素提取收率的方法，其特征在于：它是通过如下的步骤完成的：
1）、制备日本医蛭虫体浸提液：取日本医蛭虫体，放入高速匀浆机匀浆20～50s；
2）、将匀浆后的日本医蛭虫体放入磁力搅拌器中，加入日本医蛭虫体总重量4～10倍的生理盐水，在磁力搅拌器中搅拌提取30～60min，即制得日本医蛭虫体浸提液；
3）、取上述日本医蛭虫体浸提液200～500ml放入加有冰块的容器中，控制日本医蛭虫体浸提液温度在4～30℃，再将容器放入超声波机中，设定：超声功率200～950w，超声频率20～25khz，超声时间1～4秒，超声间隙2～8s，超声提取10～30min；（实验结果表明，短时间、多次超声比连续长时间持续超声的效果要好。）以上条件设定好后，将变幅杆插入日本医蛭虫体浸提液中,启动超声波机运转；
4）、超声处理完成后，从超声波机中取出容器，对超声前的日本医蛭虫体浸提液与超声后的日本医蛭虫体浸提液分别取样20ml，离心机温度设定为4℃，转速设定为6000rpm，将前述两份样品分别放入离心机离心10min后，分别取两份上清样品采用凝血酶滴定法测定活性；
5）、测定结果表明超声后的浸提液的抗凝活性比超声前的浸提液的抗凝活性提高15%～20%即可。
超生波辅助提高菲牛蛭素提取收率的方法的具体实施例如下：
准备实验材料：日本医蛭虫体、生理盐水；
实验仪器：匀浆机、超声波细胞粉碎机；
实例1：
取日本医蛭虫体，经匀浆机匀浆30秒，加入4倍生理盐水，放入磁力搅拌器搅拌提取60分钟，制得日本医蛭虫体浸提液；
取日本医蛭虫体浸提液500ml，放入加有冰块的容器中，控制日本医蛭虫体浸提液温度在4～30℃，再将容器放入超声波机中，将变幅杆插入日本医蛭虫体浸提液中,设定：超声功率250w，超声频率25hz，超声时间2秒，超声间隙3秒，超声提取30分钟；
对超声前的浸提液与超声后的浸提液分别取样20ml，在离心机4℃6000rpm离心10分钟，取上清样分别测定活性；活性测定方法采用凝血酶滴定法；
测定结果：超声前的浸提液的活性为12u/ml，超声后的浸提液的活性为14u/ml，表明抗凝活性显著提高，即制得成品。
实例2：
取日本医蛭虫体，经匀浆机匀浆40秒，加入4倍生理盐水，在磁力搅拌器中搅拌提取40分钟，得医蛭虫体浸提液；
取日本医蛭虫体浸提液500ml，放入加有冰块的容器中，控制日本医蛭虫体浸提液温度在4～30℃，再将容器放入超声波机中，将变幅杆插入日本医蛭虫体浸提液中,设定超声功率900w，超声频率25hz，超声时间2秒，超声间隙4秒，超声提取30分钟。浸提液与超声后的浸提液分别取样20ml，在离心机4℃6000rpm离心10分钟，取上清样分别测定活性，活性测定方法采用凝血酶滴定法；
测定结果：超声前的浸提液的活性为13u/ml，超声后的浸提液的活性为16u/ml，表明抗凝活性显著提高，即制得成品。
实例3
取日本医蛭虫体，经匀浆机匀浆40秒，加入5倍生理盐水，在磁力搅拌器中搅拌提取40分钟，得医蛭虫体浸提液；
取日本医蛭虫体浸提液500ml，放入加有冰块的容器中，控制日本医蛭虫体浸提液温度在4～30℃，再将容器放入超声波机中，将变幅杆插入日本医蛭虫体浸提液中,设定超声功率600w，超声频率20hz，超声时间3秒，超声间隙5秒，超声提取30分钟。浸提液与超声后的浸提液分别取样20ml，在离心机4℃6000rpm离心10分钟，取上清样分别测定活性，活性测定方法采用凝血酶滴定法；
测定结果：超声前的浸提液的活性为12u/ml，超声后的浸提液的活性为14u/ml，表明抗凝活性显著提高，即制得成品。
实验结果表明，超声波机短时间、多次工作比连续长时间工作的处理效果要好。
以上所述只是本发明的较佳实施例而已，上述举例说明不对本发明的实质内容作任何形式上的限制，所属技术领域的普通技术人员在阅读了本说明书后依据本发明的技术实质对以上具体实施方式所作的任何简单修改或变形，以及可能利用上述揭示的技术内容加以变更或修饰为等同变化的等效实施例，均仍属于本发明技术方案的范围内，而不背离本发明的实质和范围。