本发明涉及一种香豆素类化合物，特别涉及含有苯并呋喃环的香豆素类化合物，其制备方法和应用，属于生物工程
技术领域：
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背景技术：
：：现代医学认为，当人体受到氧化胁迫，体内会产生大量的自由基，过量的自由基就会对细胞膜、细胞器等发起攻击，继而导致组织的损伤，细胞的死亡或者退化，包括老化、癌症、心血管疾病以及炎症等一系列的疾病。肿瘤是危害人类生命健康的主要疾病之一，它与氧化损伤紧密相关，机体内过多的自由基与细胞内重要的生物大分子相互作用从而导致细胞的结构以及功能发生变化，由此引起一系列癌症的发生和发展。目前的抗氧化类药物主要包括一些从植物中发现的黄酮苷类、酚类化合物，还有一些人工合成的抗氧化药物如丁基羟基茴香醚(bha)和二丁基羟基甲苯(bht)。由于人工合成抗氧化药物如bha和bht等的毒性较大，国内外对研究和开发天然抗氧化药物十分重视。因此，越来越多的学者致力于寻找新型、高效、低毒的抗氧化化合物，这对疾病的预防和治疗都具有重要意义。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种含有苯并呋喃环的香豆素类化合物。本发明的另一目的是提供一种制备含有苯并呋喃环的香豆素类化合物的方法。本发明的目的还在于提供一种含有苯并呋喃环的香豆素类化合物在制备抗氧化药物中的应用。为了实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：本发明提供的含有苯并呋喃环的香豆素类化合物的结构式如通式(i)所示：通式(i)如下：本发明还给出了制备通式(i)所示化合物的方法。其制备方法如下：(1)取卷边网褶菌子实体，去掉杂物，置于烘箱中干燥，控制烘箱的温度40℃—45℃，干燥24h后，粉碎，用石油醚浸提卷边网褶菌子实体干粉，其中，卷边网褶菌干粉与石油醚按质量体积比1:10(g/ml)比例混合，搅拌2h后，静置过夜，然后将萃取液进行抽滤，如此反复抽提三次；(2)把经石油醚抽提后的子实体干粉与乙酸乙酯按质量体积比1:10(g/ml)比例混合，搅拌2h后，静置过夜，然后将萃取液进行抽滤，将滤液在旋转蒸发仪上进行减压蒸馏，控制温度不大于45℃，收集浸膏，如此，反复用乙酸乙酯萃取3次，得到的产物用真空干燥箱，温度低于40℃干燥，得到卷边网褶菌乙酸乙酯浸膏；(3)将卷边网褶菌乙酸乙酯浸膏与1.5倍质量、100目～200目的硅胶混合充分搅拌，干燥，研磨均匀成粉末状，使浸膏样品充分吸附于硅胶颗粒上，然后进行常压硅胶柱层析，硅胶柱的规格为200目～300目，用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,95:5,9:1,4:1,2:1,1:1,0:100,收集洗脱液，45℃减压蒸馏，在上述0:100梯度洗脱下来的组分进一步进行常压硅胶柱层析，用氯仿/甲醇梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0，50：1，25:1，15:1,10:1，5:1,1:1,0:100，收集洗脱液，45℃减压蒸馏，在5:1梯度得到一个组分，对该组分进行凝胶柱层析，用氯仿：甲醇＝1:1洗脱，便可得到如通式(i)所示的化合物。本发明提供的如通式(i)所示的化合物在制备抗氧化药物中的应用，通过以下方式实现：经过dpph自由基清除实验和超氧阴离子自由基清除实验两种外抗氧化实验证实，本发明的如通式(i)所示的化合物具有显著的抗氧化活性。实验方法：(1)dpph自由基清除实验：dpph·(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼)是一种以氮原子为中心的自由基，其醇溶液呈深紫色并且在517nm处具有最大吸收峰。当dpph溶液中加入自由基清除剂后，其单一电子被配对而使溶液褪色，其褪色程度与配对电子成正比，可以通过吸光度的减少量测定自由基清除剂的清除能力。首先将样品用甲醇配制成不同浓度的溶液，dpph用无水乙醇配制成0.2mm溶液，于4℃避光保存。取100μl不同浓度的样品溶液，加入100μl的dpph溶液，充分混匀，避光反应30min，测定517nm处的吸光值，记为ai；同样操作，测定100μl样品溶液和100μl无水乙醇溶液于517nm处的吸光值，记为aj；同样操作，测定100μl甲醇和100μldpph溶液于517nm处的吸光值，记为a0。以抗坏血酸作为阳性对照，每组设置三个平行实验，按下述公式计算dpph·清除活性：dpph·清除率(％)＝[a0-(ai-aj)]/a0×100(2)超氧阴离子自由基清除实验：超氧自由基难于用一般方法产生和检测，但是在弱碱性条件下，邻苯三酚能发生自氧化反应，生成o2-·和有色中间产物，该中间产物在λ＝320nm处有一特征吸收峰。在初始阶段，中间产物的量与时间成线性关系。当加入o2-·清除剂时，它能迅速与o2-·反应，从而阻止中间产物的积累，致使溶液在λ＝320nm处吸收减弱。故可以通过测定a320值来评价清除剂对o2-·的清除作用。采用邻苯三酚自氧化法。将样品用超纯水配制成不同浓度的溶液。取100μl不同浓度的样品溶液和100μltris-hcl缓冲液(50mmph＝8.2)混合，25℃水浴加热20min，然后加入25℃水浴预热的7μl邻苯三酚溶液(30mm)，迅速混匀于25℃水浴中反应6min，加7μlhcl(10m)以终止反应，测定325nm处的吸光值，记为ai；同样操作，以0.1mhcl代替邻苯三酚溶液，测定325nm处的吸光值，记为aj；同样操作，以超纯水代替样品溶液，测定325nm处的吸光值，记为a0。以抗坏血酸作为阳性对照，每组设置三个平行实验，按下述公式计算o2-·清除活性：o2-·清除率(％)＝[a0-(ai-aj)]/a0×100通过以上实验证实本发明的如通式(i)所示化合物具有很强的抗氧化作用，与人工合成的抗氧化药物羟基茴香醚(bha)对比，该化合物在0.15mg·ml-1、0.3mg·ml-1、0.6mg·ml-1、1.2mg·ml-1、2.4mg·ml-1的dpph自由基清除活性和超氧阴离子自由基清除活性都大于bha。因此该化合物可用于制备治疗和预防抗氧化的药物。本发明取得的有益效果是：本发明的如通式(i)所示化合物具有显著的体外清除dpph自由基和超氧阴离子自由基的抗氧化活性，预示其具有很好的药用前景，可用于制备治疗和预防抗氧化的药物。本发明的制备过程原料来源丰富、价廉、制备工艺简单。附图说明图1：13,14-二羟基-7,8苯并呋喃-香豆素的dpph自由基清除活性图。图2：13,14-二羟基-7,8苯并呋喃-香豆素的超氧阴离子自由基清除活性图。具体实施方式以下将结合实施例对发明作进一步说明，但下面的实施例并不限制本发明的范围。实施例113,14-二羟基-7,8苯并呋喃-香豆素的制备方法(1)取卷边网褶菌子实体，去掉杂物，置于烘箱中干燥，控制烘箱的温度40℃—45℃，干燥24h后，粉碎，用石油醚浸提卷边网褶菌子实体干粉，其中，卷边网褶菌干粉与石油醚按质量体积比1:10(g/ml)比例混合，搅拌2h后，静置过夜，然后将萃取液进行抽滤，如此反复抽提三次；(2)把经石油醚抽提后的子实体干粉与乙酸乙酯按质量体积比1:10(g/ml)比例混合，搅拌2h后，静置过夜，然后将萃取液进行抽滤，将滤液在旋转蒸发仪上进行减压蒸馏，控制温度不大于45℃，收集浸膏，如此，反复用乙酸乙酯萃取3次，得到的产物用真空干燥箱，温度低于40℃干燥，得到卷边网褶菌乙酸乙酯浸膏；(3)将卷边网褶菌乙酸乙酯浸膏与1.5倍质量、100目～200目的硅胶混合充分搅拌，干燥，研磨均匀成粉末状，使浸膏样品充分吸附于硅胶颗粒上，然后进行常压硅胶柱层析，硅胶柱的规格为200目～300目，用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,95:5,9:1,4:1,2:1,1:1,0:100,收集洗脱液，45℃减压蒸馏，在上述0:100梯度洗脱下来的组分进一步进行常压硅胶柱层析，用氯仿/甲醇梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0，50：1，25:1，15:1,10:1，5:1,1:1,0:100，收集洗脱液，45℃减压蒸馏，在5:1梯度得到一个组分，对该组分进行凝胶柱层析，用氯仿：甲醇＝1:1洗脱，便可得到如通式(i)所示的化合物。该方法分离得到的化合物其化学名称为13,14-二羟基-7,8苯并呋喃-香豆素，分子量为268，分子式为c15h8o5.淡黄色粉末。溶于甲醇、氯仿等有机溶剂。13,14-二羟基-7,8苯并呋喃-香豆素的结构是基于它的高分辨质谱和和核磁图谱等波谱数据确认的。紫外光谱数据：uv(meoh)λmax(logε)208(5.42),245(5.21),364(5.14)nm。质谱数据：hresi-msm/z267.0284[m-h]-calcdfor267.0299有关核磁数据见下表：table1.1hand13c-nmrdataofcompound1indmso-d6,inppm,jinhz1hand13c-nmrdatawererecordedat500mhzand125mhz,respectively。实施例213,14-二羟基-7,8苯并呋喃-香豆素的dpph自由基清除实验实验方法：dpph·(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼)是一种以氮原子为中心的自由基，其醇溶液呈深紫色并且在517nm处具有最大吸收峰。当dpph溶液中加入自由基清除剂后，其单一电子被配对而使溶液褪色，其褪色程度与配对电子成正比，可以通过吸光度的减少量测定自由基清除剂的清除能力。首先将样品用甲醇配制成不同浓度的溶液，dpph用无水乙醇配制成0.2mm溶液，于4℃避光保存。取100μl不同浓度的样品溶液，加入100μl的dpph溶液，充分混匀，避光反应30min，测定517nm处的吸光值，记为ai；同样操作，测定100μl样品溶液和100μl无水乙醇溶液于517nm处的吸光值，记为aj；同样操作，测定100μl甲醇和100μldpph溶液于517nm处的吸光值，记为a0。以bha作为阳性对照，每组设置三个平行实验，按下述公式计算dpph·清除活性：dpph·清除率(％)＝[a0-(ai-aj)]/a0×100实验结果：不同浓度的13,14-二羟基-7,8苯并呋喃-香豆素与阳性对照bha的dpph自由基清除率如图1所示，从图1可以看出随着浓度的增加13,14-二羟基-7,8苯并呋喃-香豆素的dpph自由基清除率也逐渐增加，且与阳性对照bha的清除率相近，因此该化合物具有很强的抗氧化活性。实施例313,14-二羟基-7,8苯并呋喃-香豆素的超氧阴离子自由基清除实验实验方法：超氧自由基难于用一般方法产生和检测，但是在弱碱性条件下，邻苯三酚能发生自氧化反应，生成o2-·和有色中间产物，该中间产物在λ＝320nm处有一特征吸收峰。在初始阶段，中间产物的量与时间成线性关系。当加入o2-·清除剂时，它能迅速与o2-·反应，从而阻止中间产物的积累，致使溶液在λ＝320nm处吸收减弱。故可以通过测定a320值来评价清除剂对o2-·的清除作用。采用邻苯三酚自氧化法。将样品用超纯水配制成不同浓度的溶液。取100μl不同浓度的样品溶液和100μltris-hcl缓冲液(50mmph＝8.2)混合，25℃水浴加热20min，然后加入25℃水浴预热的7μl邻苯三酚溶液(30mm)，迅速混匀于25℃水浴中反应6min，加7μlhcl(10m)以终止反应，测定325nm处的吸光值，记为ai；同样操作，以0.1mhcl代替邻苯三酚溶液，测定325nm处的吸光值，记为aj；同样操作，以超纯水代替样品溶液，测定325nm处的吸光值，记为a0。以bha作为阳性对照，每组设置三个平行实验，按下述公式计算o2-·清除活性：o2-·清除率(％)＝[a0-(ai-aj)]/a0×100实验结果：不同浓度的13,14-二羟基-7,8苯并呋喃-香豆素与阳性对照bha的超氧阴离子自由基清除率如图2所示，从图2可以看出随着浓度的增加13,14-二羟基-7,8苯并呋喃-香豆素的超氧阴离子自由基清除率也逐渐增加，且各个浓度的超氧阴离子自由基清除率都要高于bha，因此可以证明该化合物具有很强的抗氧化活性。当前第1页12当前第1页12