本发明涉及药物化学领域，具体是一类含脲基的神经氨酸酶抑制剂奥司他韦衍生物、其制备方法及其医药用途，医药用途主要用于治疗由病毒引起的感染性疾病。
背景技术：
：流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道感染病，其中甲型流感具有很强的传播性，并且有较高的致病率和致死率，容易造成大流行或大暴发。抗流感病毒药物主要有两种，m2蛋白抑制剂和神经氨酸酶抑制剂，m2蛋白抑制剂主要有盐酸金刚烷胺和盐酸金刚乙胺，盐酸金刚烷胺口服吸收后，能穿透血脑屏障，引起中枢神经系统毒副反应，并且很容易产生耐药性，美国centersfordiseasecontrol已经不推荐这两种药物用于甲型流感的预防和治疗(recommendationsandreports,2007,56,rr-6,1-54)。神经氨酸酶能促进宿主细胞释放子代病毒，故神经氨酸酶抑制剂能抑制病毒释放，阻断传播途径，从而起到治疗流感的作用。神经氨酸酶活性中心的结构相对比较保守，所以它是一个比较理想的治疗流感的靶点。全世界范围内使用的这一类药物有扎那米韦和磷酸奥司他韦。其中磷酸奥司他韦是唯一的口服用药，它在体内经酯酶水解成为游离酸(gs4071)后才能发挥药效，活性成分分布至所有流感病毒感染的部位，包括肺、气管、鼻黏膜和中耳，从而大大减少并发症的发生，是公认的抗甲型流感、禽流感的特效药之一。但是，临床上不可避免地出现了一些耐药株。技术实现要素：本发明中为了克服现有技术的缺陷，提供了一系列奥司他韦的伯胺基团修饰改造的衍生物。药理活性测试结果表明，本发明的衍生物对神经氨酸酶a/anhui/1/2005(h5n1)有酶抑制活性，部分化合物表现了较强的酶抑制活性。本发明提供具有通式(i)所示的衍生物及其药学上可接受的盐或异构体：其中：r1、r2独立的表示氢原子、氨基、羟基、甲基、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的5-10元芳香环，所述取代基为：c1-c6烷基，卤素；r3表示氢原子、c1-c6烷基。r1、r2同时为氢时，r3为不能为乙基。本发明优选通式(i)所示的衍生物及其药学上可接受的盐或异构体：其中，r1、r2独立的表示氢原子、氨基、羟基、甲基、取代或未取代的c1-c4烷基、取代或未取代的5-6元芳香环，所述取代基为c1-c4烷基、卤素。本发明优选通式(i)所示的化合物及其药学上可接受的盐或异构体：其中，r1、r2独立的表示氢原子、氨基、羟基、甲基、取代或未取代的c1-c4烷基、取代或未取代的苯环，所述取代基为c1-c4烷基，f、cl、br。本发明优选通式(i)所示的化合物及其药学上可接受的盐和异构体：其中，r1表示氨基、羟基、c1-c4烷基、卤素取代的苯环；r2表示氢原子、c1-c4烷基。本发明优选如下化合物及其药学上可接受的盐和异构体：(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3-酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸(i-1)(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3-胺基酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸(i-2)(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3,3-二甲基酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸(i-3)(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3,3-二异丙基酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸(i-4)(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3-(3-溴苯基)酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸(i-5)本发明中的化合物制备如下：当r1、r2同时表示氢原子时，合成方法如下：当r1和r2不同时表示氢原子时，合成方法如下：本发明中的化合物进行了神经氨酸酶的抑制活性测试。其中阳性对照药为奥司他韦羧酸(oseltamiviracid)。测试原理为munana(2’-(4-methylumbelliferyl)-α-n-acetylneuraminicacid)是神经氨酸酶的特异性底物，经神经氨酸酶代谢所生成的物质，在355nm的光照激发下，能够产生460nm的荧光，当测试的化合物与神经氨酸酶作用时，导致该特异性底物的结合率发生变化，从而产生荧光强度的变化，通过荧光强度变化反映神经氨酸酶的活性，从而计算出化合物在特定浓度下对神经氨酸酶的抑制率，根据不同浓度的抑制率得到相应的ic50值。试验方法：往96孔板中每孔加入10μl含有酶的溶液，70μl缓冲液(33mm吗啉乙磺酸，4mmcacl2)，10μl一定浓度的待测化合物，37°条件下孵育十分钟，然后加入100μm的荧光底物10μl，在37°条件下孵育30分钟，加150μl终止液(14mmnaoh的83％乙醇溶液)测定荧光强度，其中激发波长355nm，发射波长460nm。活性测试结果为：化合物名称i-1i-2i-3i-4i-5ic50/μm0.2540.0724.83230.816.98实验结果表明i-1和i-2表现了较强的神经氨酸酶抑制活性，优于达菲活性成分——奥司他韦羧酸,有进一步开发的价值。具体实施方式实施实例1(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3-酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸(i-1)往50ml圆底烧瓶中加入磷酸奥司他韦(500mg,1.218mmol)、氢氧化钡(355mg,2.071mmol)和尿素(146mg,2.436mmol)，加入10ml去离子水，回流反应。反应结束后，反应液冷却至室温，过滤，滤液的ph值调节至1-2，过滤，干燥得白色固体262mg，收率为65.7％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.50(brs,1h),7.80(d,j＝8.8hz,1h),6.60(s,1h),5.69(d,j＝8.2hz,1h),5.54(s,2h),4.01(d,j＝7.4hz,1h),3.78–3.57(m,2h),3.40–3.35(m,1h),2.63-2.53(m,1h),2.05–1.92(m,1h),1.80(s,3h),1.49-1.32(m,4h),0.83(t,j＝7.4hz,3h),0.77(t,j＝7.4hz,3h)；lc-ms(esi):350.3[m+na]+,326.0[m-h]-。实施实例2(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(1-(咪唑)-胺基甲酰胺基)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸乙酯(ⅱ)往100ml圆底烧瓶中加入500mg(1.60mmol)奥司他韦，加入30ml二氯甲烷溶解，冰水浴下，分批加入260mg(1.60mmol)羰基二咪唑，搅拌。反应结束后，有机相用饱和的氯化铵溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品530mg，不经纯化直接投入下一步反应。实施实例3(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3-胺基酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸乙酯(ⅱ-2)取(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(1-(咪唑)-胺基甲酰胺基)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸乙酯(ⅱ)(600mg,1.477mmol)和2.00g无水na2so4加入到圆底烧瓶中，接着加入30ml干燥chcl3和0.5ml水合肼溶液，室温搅拌0.5h，升温至35℃，随后补加0.3ml水合肼溶液。反应结束后，往反应液中加入适量的饱和氯化钠溶液，搅拌5min，分液，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水na2so4干燥，过滤，浓缩，粗产品经柱层析纯化得白色固体334mg，收率61.1％。实施实例4(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3-胺基酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸乙酯(i-2)取上一步产物(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3-胺基酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸乙酯(ⅱ-2)(334mg,0.902mmol)，加入10ml甲醇和1.13ml2nnaoh水溶液，补加0.83ml去离子水，使v甲醇：v水＝5:1，室温搅拌反应。反应结束后，用离子交换树脂(amberliteir120,hform)调节反应液ph至6.0–7.0，过滤，纯化得白色固体96mg，收率30.2％。1hnmr(600mhz,methanol-d4)δ6.79(s,1h),4.13(d,j＝7.3hz,1h),4.04–3.94(m,2h),3.44(p,j＝5.7hz,1h),2.82–2.75(m,1h),2.37–2.30(m,1h),2.00(s,2h),1.94(s,3h),1.87(s,2h),1.58–1.46(m,4h),0.93(t,j＝7.4hz,3h),0.90(t,j＝7.4hz,3h)；lc-ms(esi):340.9[m-h]-.实施实例5(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3,3-二甲基酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸乙酯(ⅱ-3)往50ml圆底烧瓶中加入(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(1-(咪唑)-胺基甲酰胺基)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸乙酯(ⅱ)(200mg,0.492mmol)和10ml氯仿溶液，接着加入dipea(318mg,2.46mmol)和盐酸二甲胺(60mg,0.738mmol)，室温搅拌0.5h，加热至回流。反应结束后，缓慢冷却至室温，反应液依次用3nhcl水溶液、1nnaoh水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤，无水na2so4干燥，过滤，浓缩，粗品经柱层析纯化得白色固体72mg，收率38.3％。实施实例6(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3，3-二甲基酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸(i-3)取上一步产物(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3，3-二甲基酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸乙酯(ⅱ-3)(72mg,0.188mmol)加到圆底烧瓶中，接着加入10ml甲醇溶液中和0.47ml1nnaoh水溶液，补加1.53ml去离子水，使v甲醇：v水＝5:1，室温搅拌反应。反应结束后，调节ph至1-2，减压蒸除甲醇，用2×10ml乙酸乙酯萃取水相，合并两次有机相，用饱和氯化钠水溶液洗涤有机相，无水mgso4干燥，过滤，浓缩得白色固体50mg，收率为74.4％。1hnmr(400mhz,dmso)δ9.02(s,1h),7.91(d,j＝8.3hz,1h),6.80(d,j＝7.5hz,1h),6.71(s,1h),4.15(q,j＝7.0hz,2h),4.07–4.00(m,1h),3.94–3.87(m,1h),3.86–3.76(m,1h),3.43(p,j＝5.6hz,1h),2.65(dd,j＝17.8,4.6hz,1h),2.32–2.19(m,1h),1.84(s,3h),1.80(s,3h),1.77(s,3h),1.52–1.35(m,4h),1.23(t,j＝7.1hz,3h),0.83(dt,j＝11.3,7.4hz,6h)；lc-ms(esi):356.3[m+h]+,354.1[m-h]-.实施实例7(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3，3-二异丙基酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸乙酯(ⅱ-4)实施操作同实施实例5，以250mg(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(1-(咪唑)-胺基甲酰胺基)-2-氧代乙基氨基)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸乙酯(ⅱ)反应原料，得到白色固体214mg，收率为79.1％。实施实例8(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3,3-二异丙基酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸(i-4)实施操作同实施实例6，以214mg(0.514mmol)(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3，3-二异丙基酰脲)-2-氧代乙基氨基)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸乙酯(ⅱ-4)为反应原料，经处理得到白色固体154mg，收率为82.4％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.50(s,br1h),7.86(d,j＝8.4hz,1h),6.60(s,1h),5.59(d,j＝7.2hz,1h),4.04(d,j＝3.4hz,1h),3.85–3.70(m,2h),3.64(dt,j＝13.4,6.7hz,2h),3.43–3.38(m,1h),2.56–2.50(m,1h),2.29–2.14(m,1h),1.50–1.32(m,4h),1.14(d,j＝6.6hz,12h),0.83(t,j＝7.4hz,3h),0.78(t,j＝7.4hz,3h)；lc-ms(esi):412.4[m+h]+,410.1[m-h]-。实施实例9(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3-(3-溴苯基)酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸乙酯(ⅱ-5)实施操作同实施实例5，以280mg(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(1-(咪唑)-胺基甲酰胺基)-2-氧代乙基氨基)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸乙酯(ⅱ)反应原料，经处理得到白色固体231mg，收率为65.7％。实施实例10(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3-(3-溴苯基)酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸(i-5)实施操作同实施实例6，以(3r，4r，5s)-4-乙酰胺基-5-(3-(3-溴苯基)酰脲)-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烯-1-羧酸乙酯(ⅱ-5)为反应原料，经处理得到白色固体160mg，收率为73.2％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ12.58(s,1h),8.92(s,1h),7.93(d,j＝8.7hz,1h),7.82(t,j＝1.9hz,1h),7.24–7.11(m,2h),7.08–7.01(m,1h),6.64(t,j＝2.0hz,1h),6.01(d,j＝7.9hz,1h),4.07(d,j＝6.4hz,1h),3.84-3.75(m,2h),3.41(p,j＝5.6hz,1h),2.68(dd,j＝17.3,4.1hz,1h),2.12-2.05(m,1h),1.79(s,3h),1.48-1.34(m,4h),0.85(t,j＝7.4hz,3h),0.78(t,j＝7.4hz,3h)；lc-ms(esi):480.0[m-h]-。当前第1页12