本发明涉及菌种的保藏技术领域，具体涉及一种金针菇菌丝球的保藏方法。
背景技术：
目前金针菇的菌种保藏方法有斜面低温保藏法，麦粒保藏法，斜面生理盐水保藏法，石蜡封口斜面低温保藏法(此法是在斜面低温保藏法的基础上用石蜡封住试管口，待石蜡凝固即可)，麸皮保藏法等；斜面低温保藏法和石蜡封口保藏法保藏周期不长，一般半年左右，时间长，培养基干固，菌丝变黄老化变异；麦粒保藏法制作工艺复杂，麦粒浸泡时间不好掌握，易产生粉孢子；斜面生理盐水保藏操作简单，但存放时间长了斜面易脱壁，斜面培养基漂浮出水面，造成露出部分干固，菌种老化，容易变异，活化时易产生粉孢子影响出菇产量和质量。
技术实现要素：
为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种金针菇菌丝球的保藏方法，保藏时间长，不易产生粉孢子，能够保持原菌种优良基因稳定。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种金针菇菌丝球的保藏方法，包括以下步骤：
(1)配料：分别配制斜面培养基、液体培养基和保藏液；
(2)制备斜面菌种：将金针菇菌种接种到所述步骤(1)制备的斜面培养基进行培养，得到斜面菌种；
(3)制备金针菇菌丝球：将所述步骤(2)得到的斜面菌种接种到所述步骤(1)制备的液体培养基中进行培养，得到金针菇菌丝球；
(4)保藏：将所述步骤(3)得到的金针菇菌丝球接种到所述步骤(1)制备的保藏液中在0-4℃温度下保藏。
本发明的金针菇菌种依次通过斜面培养、液体培养基培养、最后将得到的金针菇菌丝球接种在保藏液中并在低温环境下进行保藏，使金针菇菌丝球的培养保藏时间较长，且不易产生粉孢子，并能够保持原菌种优良基因稳定。
本发明通过采用斜面培养，相对于平面培养，斜面为金针菇菌种的繁殖提供更大的繁殖面积，能有效地提高了金针菇菌种的培养效率和培养效果；
本发明通过采用液体培养基培养，通过温和、有序地对培养基进行摇动，能使金针菇菌种的繁殖更均匀，避免金针菇菌种集中繁殖于某空间，提高了金针菇菌种的繁殖效率和繁殖效果。
本发明金针菇菌丝球的保藏方法操作简单，成本低，可行性高，保藏金针菇菌丝球的时间长，且在保藏过程中，金针菇菌丝球不易产生粉孢子，保持原菌种优良基因稳定，不易变异退化，对于优良菌种的保藏有着重大的作用。
本发明的原理是在保藏过程中不对金针菇菌丝球提供营养物质，并且金针菇菌丝球保藏的温度较低，在低温环境中大大地降低或停止了金针菇菌丝球的生长，同时使金针菇菌丝球保持着菌种的生理活性和细胞形态。
所述步骤(1)中，每升斜面培养基的原料包括：马铃薯100-300g、葡萄糖10-30g、琼脂10-30g、硫酸镁0.2-1g、磷酸氢二钾0.5-2g、豆粕3-10g、蛋白胨3-10g和酵母粉1-5g。
所述斜面培养基的制备方法包括如下步骤：取马铃薯100-300g加入1l的水煮熟，然后过滤，得到滤液，向滤液中依次加入葡萄糖10-30g、琼脂10-30g、硫酸镁0.2-1g、磷酸氢二钾0.5-2g、豆粕3-10g、蛋白胨3-10g和酵母粉1-5g加热至溶解，并补水至1l，将得到的培养液在115-130℃温度下灭菌20-40min，待培养液冷却到50-70℃时摆成斜面，然后冷却至20-30℃后即得到斜面培养基。另一优选的，所述步骤(1)中，斜面培养基的制备方法包括如下步骤：取马铃薯200g加入1l的水煮熟，然后过滤，得到滤液，向滤液中依次加入葡萄糖20g、琼脂20g、硫酸镁0.5g、磷酸氢二钾1g、豆粕5g、蛋白胨5g和酵母粉2g加热至溶解，并补水至1l，将得到的培养液在124℃温度下灭菌30min，待装有培养液的试管冷却到60℃时摆成斜面，然后冷却至23℃后即得到斜面培养基。
本发明采用pda培养基原料制备斜面菌种，能够使得金针菇菌种的能极大的培养效率和培养效果。
斜面培养基的制备方法具体操作过程为，按上述质量称取取马铃薯、葡糖糖、琼脂、硫酸镁、磷酸氢二钾、豆粕5g、蛋白胨和酵母粉，先将马铃薯切成小方块，加入1l的水煮熟而保持不烂，然后用纱布过滤，虑后的滤液与称好的其它原料一起煮，至全部药品溶解，混合均匀为准，最后分装到每一支试管内塞好棉花塞，每支试管分装约10ml；将分装好的试管分每7支一扎放在高压蒸汽灭菌锅中在115-130℃，灭菌20-40min，灭菌结束后，待高压炉中的试管冷却到60摄氏度左右时将试管摆成斜面，尽量让斜面占试管的2/3，摆好后用毛巾盖好，待冷却后使用，即得到斜面培养基。
所述步骤(1)中，每2.1l液体培养基的原料包括：白糖60-80g、磷酸氢二钾1-2.5g、硫酸镁1-2.5g、蛋白胨1-2.5g和豆粕粉3-15g。
所述液体培养基的制备方法包括如下步骤：取白糖60-80g、磷酸氢二钾1-2.5g、硫酸镁1-2.5g、蛋白胨1-2.5g和豆粕粉3-15g，依次溶于2.1l水中加热溶解，补水至2.1l，调ph值6.9-7.5，然后在115-135℃温度下灭菌20-45min，冷却至20-30℃，即得到液体培养基。另一优选的，所述步骤(1)中，液体培养基的制备方法包括如下步骤：取白糖60g，磷酸氢二钾1.75g，硫酸镁1.75g，蛋白胨1.75g，豆粕粉8g，依次溶于2.1l水中加热溶解，待药品溶解后，补水至2.1l，调ph值6.9-7.5，然后在124℃下灭菌35min，冷却至23℃，即得到液体培养基。
本发明通过采用上述原料和方法配置液体培养基制备金针菇菌丝球，能使金针菇菌种的繁殖更均匀，避免金针菇菌种集中繁殖于某空间，提高了金针菇菌种的繁殖效率和繁殖效果。
所述步骤(1)的液体培养基的制备方法具体操作过程为，按照上述质量称取白糖、磷酸氢二钾、硫酸镁、蛋白胨和豆粕粉溶于2.1l水中加热搅拌溶解，分装在1000ml三角瓶中，每个三角瓶600ml，剩下300ml装在500ml三角瓶，加入磁力子，要求溶液均匀一致，磁力子大小一致，ph值6.9-7.5。塞上棉塞，再用牛皮纸包住棉塞，橡皮筋扎紧，放入高压灭菌锅中，115-135℃，灭菌20-45min，冷却到23℃以下备用，即制得液体培养基。
优选的，所述液体培养基的原料还包括消泡剂。在分装后的每个三角瓶中滴加消泡剂1-2滴，加入磁力子，搅拌均匀，消泡剂用于减少培养液的表面张力，本发明中的消泡剂为：(请添加消泡剂的种类)
优选的，所述步骤(1)中，保藏液的制备方法包括如下步骤：配制85％的生理盐水分装到试管中，然后在115-135℃温度下灭菌20-45min，即得到保藏液。另一优选的，灭菌温度为124℃，灭菌时间为30min。
使用生理盐水制作保藏液，成本低，制作方便，使用生理盐水保藏，不为金针菇菌丝提供营养物质，配合低温，使菌丝的保藏时间长，不易产生孢子，同时使金针菇菌丝球保持着菌种的生理活性和细胞形态，保持原菌种优良基因稳定，不易变异退化。
优选的，所述步骤(2)中，培养温度为15-23℃，培养时间为7-9d。
斜面培养基的具体接种方式为：在冷却好的斜面培养基内接入金针菇菌种块，每个斜面培养基的接种量为1-2块2mm*2mm需要保藏的金针菇菌种块，在本发明中斜面培养基为试管培养，一共接种8-12支试管，然后将接种完的斜面培养基放入恒温培养箱中，在15-23℃温度下培养7-9d。
优选的，所述步骤(3)中，培养温度为15-23℃，培养时间为5-9d，得到金针菇菌丝球。
液体培养基的具体接种方式为：在超净工作台开启强风情况下先消毒操作台面和接种器具，接种针火焰消毒，待冷却后切取挑选好的斜面菌种块，接种接入液体培养基中，接种量为每个液体培养基中接入6-8块2mm*2mm的金针菇菌种块，在本发明中液体培养基为摇瓶培养，接种完后，将摇瓶塞上棉塞后用牛皮纸包住，橡皮筋扎紧，让后在摇瓶中放入磁力子，搅拌速度为1600-2200r/min搅拌15-30min，至摇瓶中的培养基完全搅碎为止。搅拌后的摇瓶防止在摇床内，恒温，摇床转速为120-200r/min，培养时间为5-9d，培养完成后，选取摇瓶内溶液澄清，菌球大小均匀无异状，鞭毛发散的菌种作为金针菇菌丝球。
优选的，所述步骤(4)具体为：将步骤(3)中选好的金针菇菌丝球中挑取大小均匀，鞭毛发散的圆形菌球放入无菌水清洗后接种入所述步骤(4)的保藏液中，并在0-4℃温度下保藏。
本发明的有益效果在于：本发明的金针菇菌种依次通过斜面培养、液体培养基培养、最后将得到的金针菇菌丝球接种在保藏液中并在低温环境下进行保藏，使金针菇菌丝球的培养保藏时间较长，且不易产生粉孢子，并能够保持原菌种优良基因稳定。
本发明通过采用斜面培养，相对于平面培养，斜面为金针菇菌种的繁殖提供更大的繁殖面积，能有效地提高了金针菇菌种的培养效率和培养效果；
本发明通过采用液体培养基培养，通过温和、有序地对培养基进行摇动，能使金针菇菌种的繁殖更均匀，避免金针菇菌种集中繁殖于某空间，提高了金针菇菌种的繁殖效率和繁殖效果。
本发明金针菇菌丝球的保藏方法操作简单，成本低，可行性高，保藏金针菇菌丝球的时间长，且在保藏过程中，金针菇菌丝球不易产生粉孢子，保持原菌种优良基因稳定，不易变异退化，对于优良菌种的保藏有着重大的作用。
本发明的原理是在保藏过程中不对金针菇菌丝球提供营养物质，并且金针菇菌丝球保藏的温度较低，在低温环境中大大地降低或停止了金针菇菌丝球的生长，同时使金针菇菌丝球保持着菌种的生理活性和细胞形态。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
实施例1
一种金针菇菌丝球的保藏方法，包括以下步骤：
(1)配料：分别配制斜面培养基、液体培养基和保藏液；
(2)制备斜面菌种：将金针菇菌种接种到所述步骤(1)制备的斜面培养基中进行斜面培养，得到斜面菌种；
(3)制备金针菇菌丝球：将所述步骤(2)得到的斜面菌种接种到所述步骤(1)制备的液体培养基中进行培养，得到金针菇菌丝球；
(4)保藏：将所述步骤(3)得到的金针菇菌丝球接种到所述步骤(1)制备的保藏液中在0℃温度下保藏。
所述步骤(1)中，斜面培养基的制备方法包括如下步骤：取马铃薯100g，切成小方块，加入1l的水煮熟而保持不烂，然后用纱布过滤，得到滤液，向滤液中分别加入葡萄糖10g、琼脂10g、硫酸镁0.2g、磷酸氢二钾0.5g、豆粕3g、蛋白胨3g和酵母粉1g加热至溶解并混合均匀，并补水至1l，最后分装到每一支试管内塞好棉花塞，每支试管分装约10ml；将分装好的试管分每7支一扎放在高压蒸汽灭菌锅中在115℃温度下灭菌20min，灭菌结束后，待高压炉中的试管冷却到50℃时将试管摆成斜面，尽量让斜面占试管的2/3，摆好后用毛巾盖好，然后冷却至20℃以下，即得到斜面培养基。
所述步骤(1)中，液体培养基的制备方法包括如下步骤：取白糖60g、磷酸氢二钾1g、硫酸镁1g、蛋白胨1g、豆粕粉3g、依次溶于2.1l水中加热搅拌溶解，补水至2.1l，调ph值6.9，降配置好的培养液分装在三个1000ml三角瓶中，每个三角瓶600ml，剩下300ml装在500ml三角瓶，在每个三角瓶中分别加入磁力子，要求溶液均匀一致，磁力子大小一致。分别将三角瓶塞上棉塞，再用牛皮纸包住棉塞，橡皮筋扎紧，放入高压灭菌锅中，在115℃温度下灭菌20min，冷却到20℃以下，即制得液体培养基。
所述步骤(1)中，保藏液的制备方法包括如下步骤：配制85％的生理盐水，然后在115℃温度下灭菌20min，即得到保藏液。
所述步骤(2)中，斜面培养的培养温度为15℃，培养时间为7d。
所述步骤(3)中，液体培养基的培养为摇瓶培养，培养温度为15℃，摇床转速为120r/min，培养时间为5d，选取溶液澄清，菌球大小均匀无异状，鞭毛发散的菌种作为金针菇菌丝球。
所述步骤(3)中还包括，将所述斜面菌种接入液体培养基后将斜面菌种搅拌至搅碎状态，搅拌速度为1600r/min。
所述步骤(4)中，保藏的具体具体步骤为：将步骤(3)中选好的金针菇菌丝球中挑取大小均匀，鞭毛发散的圆形菌球放入无菌水清洗后接种入所述步骤(4)的保藏液中，并在0℃温度下保藏。
实施例2
一种金针菇菌丝球的保藏方法，包括以下步骤：
(1)配料：分别配制斜面培养基、液体培养基和保藏液；
(2)制备斜面菌种：将金针菇菌种接种到所述步骤(1)制备的斜面培养基中进行斜面培养，得到斜面菌种；
(3)制备金针菇菌丝球：将所述步骤(2)得到的斜面菌种接种到所述步骤(1)制备的液体培养基中进行培养，得到金针菇菌丝球；
(4)保藏：将所述步骤(3)得到的金针菇菌丝球接种到所述步骤(1)制备的保藏液中在1℃温度下保藏。
所述步骤(1)中，斜面培养基的制备方法包括如下步骤：取马铃薯150g，切成小方块，加入1l的水煮熟而保持不烂，然后用纱布过滤，得到滤液，向滤液中依次加入葡萄糖15g、琼脂15g、硫酸镁0.3g、磷酸氢二钾0.8g、豆粕4g、蛋白胨4g和酵母粉2g加热至溶解并混合均匀，并补水至1l，最后分装到每一支试管内塞好棉花塞，每支试管分装约10ml；将分装好的试管分每7支一扎放在高压蒸汽灭菌锅中在118℃温度下灭菌25min，灭菌结束后，待高压炉中的试管冷却到55℃时将试管摆成斜面，尽量让斜面占试管的2/3，摆好后用毛巾盖好，然后冷却至23℃以下，即得到斜面培养基。
所述步骤(1)中，液体培养基的制备方法包括如下步骤：取白糖65g、磷酸氢二钾1.5g、硫酸镁1.5g、蛋白胨1.5g和豆粕粉5g，依次溶于2.1l水中加热搅拌溶解，补水至2.1l，调ph值7.0，降配置好的培养液分装在三个1000ml三角瓶中，每个三角瓶600ml，剩下300ml装在500ml三角瓶，在每个三角瓶中分别加入磁力子，要求溶液均匀一致，磁力子大小一致。分别将三角瓶塞上棉塞，再用牛皮纸包住棉塞，橡皮筋扎紧，放入高压灭菌锅中，在118℃温度下灭菌25min，冷却到23℃以下，即制得液体培养基。
所述步骤(1)中，保藏液的制备方法包括如下步骤：配制85％的生理盐水，然后在115-135℃温度下灭菌20-45min，即得到保藏液。
所述步骤(2)中，斜面培养的培养温度为17℃，培养时间为8d。
所述步骤(3)中，液体培养基的培养为摇瓶培养，培养温度为17℃，摇床转速为135r/min，培养时间为6d，选取溶液澄清，菌球大小均匀无异状，鞭毛发散的菌种作为金针菇菌丝球。
所述步骤(3)中还包括，将所述斜面菌种接入液体培养基后将斜面菌种搅拌至搅碎状态，搅拌速度为1700r/min。
所述步骤(4)中，保藏的具体具体步骤为：将步骤(3)中选好的金针菇菌丝球中挑取大小均匀，鞭毛发散的圆形菌球放入无菌水清洗后接种入所述步骤(4)的保藏液中，并在1℃温度下保藏。
实施例3
一种金针菇菌丝球的保藏方法，包括以下步骤：
(1)配料：分别配制斜面培养基、液体培养基和保藏液；
(2)制备斜面菌种：将金针菇菌种接种到所述步骤(1)制备的斜面培养基中进行斜面培养，得到斜面菌种；
(3)制备金针菇菌丝球：将所述步骤(2)得到的斜面菌种接种到所述步骤(1)制备的液体培养基中进行培养，得到金针菇菌丝球；
(4)保藏：将所述步骤(3)得到的金针菇菌丝球接种到所述步骤(1)制备的保藏液中在2℃温度下保藏。
所述步骤(1)中，斜面培养基的制备方法包括如下步骤：取马铃薯180g，切成小方块，加入1l的水煮熟而保持不烂，然后用纱布过滤，得到滤液，向滤液中依次加入葡萄糖18g、琼脂18g、硫酸镁0.5g、磷酸氢二钾1g、豆粕6g、蛋白胨6g和酵母粉3g加热至溶解并混合均匀，并补水至1l，最后分装到每一支试管内塞好棉花塞，每支试管分装约10ml；将分装好的试管分每7支一扎放在高压蒸汽灭菌锅中在120℃温度下灭菌28min，灭菌结束后，待高压炉中的试管冷却到60℃时将试管摆成斜面，尽量让斜面占试管的2/3，摆好后用毛巾盖好，然后冷却至25℃以下，即得到斜面培养基。
所述步骤(1)中，液体培养基的制备方法包括如下步骤：取白糖70g、磷酸氢二钾1.8g、硫酸镁1.8g、蛋白胨1.8g和豆粕粉8g，依次溶于2.1l水中加热搅拌溶解，补水至2.1l，调ph值7.1，降配置好的培养液分装在三个1000ml三角瓶中，每个三角瓶600ml，剩下300ml装在500ml三角瓶，在每个三角瓶中分别加入磁力子，要求溶液均匀一致，磁力子大小一致。分别将三角瓶塞上棉塞，再用牛皮纸包住棉塞，橡皮筋扎紧，放入高压灭菌锅中，在120℃温度下，灭菌30min，冷却到25℃以下，即制得液体培养基。
所述步骤(1)中，保藏液的制备方法包括如下步骤：配制85％的生理盐水，然后在120℃温度下灭菌30min，即得到保藏液。
所述步骤(2)中，斜面培养的培养温度为18℃，培养时间为9d。
所述步骤(3)中，液体培养基的培养为摇瓶培养，培养温度为18℃，摇床转速为140r/min，培养时间为7d，选取溶液澄清，菌球大小均匀无异状，鞭毛发散的菌种作为金针菇菌丝球。
所述步骤(3)中还包括，将所述斜面菌种接入液体培养基后将斜面菌种搅拌至搅碎状态，搅拌速度为1800r/min。
所述步骤(4)中，保藏的具体具体步骤为：将步骤(3)中选好的金针菇菌丝球中挑取大小均匀，鞭毛发散的圆形菌球放入无菌水清洗后接种入所述步骤(4)的保藏液中，并在2℃温度下保藏。
实施例4
一种金针菇菌丝球的保藏方法，包括以下步骤：
(1)配料：分别配制斜面培养基、液体培养基和保藏液；
(2)制备斜面菌种：将金针菇菌种接种到所述步骤(1)制备的斜面培养基中进行斜面培养，得到斜面菌种；
(3)制备金针菇菌丝球：将所述步骤(2)得到的斜面菌种接种到所述步骤(1)制备的液体培养基中进行培养，得到金针菇菌丝球；
(4)保藏：将所述步骤(3)得到的金针菇菌丝球接种到所述步骤(1)制备的保藏液中在2℃温度下保藏。
所述步骤(1)中，斜面培养基的制备方法包括如下步骤：取马铃薯200g，切成小方块，加入1l的水煮熟而保持不烂，然后用纱布过滤，得到滤液，向滤液中分别加入葡萄糖20g、琼脂20g、硫酸镁0.5g、磷酸氢二钾1g、豆粕5g、蛋白胨5g和酵母粉2g加热至溶解并混合均匀，并补水至1l，最后分装到每一支试管内塞好棉花塞，每支试管分装约10ml；将分装好的试管分每7支一扎放在高压蒸汽灭菌锅中在124℃的温度下灭菌30min，灭菌结束后，待高压炉中的试管冷却到60℃时将试管摆成斜面，尽量让斜面占试管的2/3，摆好后用毛巾盖好，然后冷却至23℃以下，即得到斜面培养基。
所述步骤(1)中，液体培养基的制备方法包括如下步骤：取白糖70g、磷酸氢二钾1.75g、硫酸镁1.75g、蛋白胨1.75g和豆粕粉8g，依次溶于2.1l水中加热搅拌溶解，补水至2.1l，调ph值7，降配置好的培养液分装在三个1000ml三角瓶中，每个三角瓶600ml，剩下300ml装在500ml三角瓶，在每个三角瓶中分别加入磁力子，要求溶液均匀一致，磁力子大小一致。分别将三角瓶塞上棉塞，再用牛皮纸包住棉塞，橡皮筋扎紧，放入高压灭菌锅中，在124℃温度下灭菌35min，冷却到23℃以下，即制得液体培养基。
所述液体培养基的原料还包括消泡剂，分装后在每个三角瓶中滴加消泡剂2滴，加入磁力子，搅拌均匀。
所述步骤(1)中，保藏液的制备方法包括如下步骤：配制85％的生理盐水，然后在124℃温度下灭菌35min，即得到保藏液。
所述步骤(2)中，斜面培养的培养温度为18℃，培养时间为7d。
所述步骤(3)中，液体培养基的培养为摇瓶培养，培养温度为18℃，摇床转速为160r/min，培养时间为7d，选取溶液澄清，菌球大小均匀无异状，鞭毛发散的菌种作为金针菇菌丝球。
所述步骤(3)中还包括，将所述斜面菌种接入液体培养基后将斜面菌种搅拌至搅碎状态，搅拌速度为2000r/min。
所述步骤(4)中，保藏的具体具体步骤为：将步骤(3)中选好的金针菇菌丝球中挑取大小均匀，鞭毛发散的圆形菌球放入无菌水清洗后接种入所述步骤(4)的保藏液中，并在2℃温度下保藏。
实施例5
一种金针菇菌丝球的保藏方法，包括以下步骤：
(1)配料：分别配制斜面培养基、液体培养基和保藏液；
(2)制备斜面菌种：将金针菇菌种接种到所述步骤(1)制备的斜面培养基中进行斜面培养，得到斜面菌种；
(3)制备金针菇菌丝球：将所述步骤(2)得到的斜面菌种接种到所述步骤(1)制备的液体培养基中进行培养，得到金针菇菌丝球；
(4)保藏：将所述步骤(3)得到的金针菇菌丝球接种到所述步骤(1)制备的保藏液中在3℃温度下保藏。
所述步骤(1)中，斜面培养基的制备方法包括如下步骤：取马铃薯220g，切成小方块，加入1l的水煮熟而保持不烂，然后用纱布过滤，得到滤液，向滤液中分别加入葡萄糖23g、琼脂23g、硫酸镁0.6g、磷酸氢二钾1.5g、豆粕9g、蛋白胨9g和酵母粉3g加热至溶解并混合均匀，并补水至1l，最后分装到每一支试管内塞好棉花塞，每支试管分装约10ml；将分装好的试管分每7支一扎放在高压蒸汽灭菌锅中在125℃温度下灭菌32min，灭菌结束后，待高压炉中的试管冷却到65℃时将试管摆成斜面，尽量让斜面占试管的2/3，摆好后用毛巾盖好，然后冷却至27℃以下，即得到斜面培养基。
所述步骤(1)中，液体培养基的制备方法包括如下步骤：取白糖60-80g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁2g、蛋白胨2g和豆粕粉10g，依次溶于2.1l水中加热搅拌溶解，补水至2.1l，调ph值7.2，降配置好的培养液分装在三个1000ml三角瓶中，每个三角瓶600ml，剩下300ml装在500ml三角瓶，在每个三角瓶中分别加入磁力子，要求溶液均匀一致，磁力子大小一致。分别将三角瓶塞上棉塞，再用牛皮纸包住棉塞，橡皮筋扎紧，放入高压灭菌锅中，在125℃温度下灭菌32min，冷却到27℃以下，即制得液体培养基。
所述液体培养基的原料还包括消泡剂，分装后在每个三角瓶中滴加消泡剂1滴，加入磁力子，搅拌均匀。
所述步骤(1)中，保藏液的制备方法包括如下步骤：配制85％的生理盐水，然后在125℃温度下灭菌32min，即得到保藏液。
所述步骤(2)中，斜面培养的培养温度为20℃，培养时间为9d。
所述步骤(3)中，液体培养基的培养为摇瓶培养，培养温度为20℃，摇床转速为180r/min，培养时间为8d，选取溶液澄清，菌球大小均匀无异状，鞭毛发散的菌种作为金针菇菌丝球。
所述步骤(3)中还包括，将所述斜面菌种接入液体培养基后将斜面菌种搅拌至搅碎状态，搅拌速度为2100r/min。
所述步骤(4)中，保藏的具体具体步骤为：将步骤(3)中选好的金针菇菌丝球中挑取大小均匀，鞭毛发散的圆形菌球放入无菌水清洗后接种入所述步骤(4)的保藏液中，并在3℃温度下保藏。
实施例6
一种金针菇菌丝球的保藏方法，包括以下步骤：
(1)配料：分别配制斜面培养基、液体培养基和保藏液；
(2)制备斜面菌种：将金针菇菌种接种到所述步骤(1)制备的斜面培养基中进行斜面培养，得到斜面菌种；
(3)制备金针菇菌丝球：将所述步骤(2)得到的斜面菌种接种到所述步骤(1)制备的液体培养基中进行培养，得到金针菇菌丝球；
(4)保藏：将所述步骤(3)得到的金针菇菌丝球接种到所述步骤(1)制备的保藏液中在4℃温度下保藏。
所述步骤(1)中，斜面培养基的制备方法包括如下步骤：取马铃薯300g，切成小方块，加入1l的水煮熟而保持不烂，然后用纱布过滤，得到滤液，向滤液中分别加入葡萄糖30g、琼脂30g、硫酸镁1g、磷酸氢二钾2g、豆粕10g、蛋白胨10g和酵母粉5g加热至溶解并混合均匀，并补水至1l，最后分装到每一支试管内塞好棉花塞，每支试管分装约10ml；将分装好的试管分每7支一扎放在高压蒸汽灭菌锅中在130℃，灭菌40min，灭菌结束后，待高压炉中的试管冷却到70℃时将试管摆成斜面，尽量让斜面占试管的2/3，摆好后用毛巾盖好，然后冷却至30℃以下，即得到斜面培养基。
所述步骤(1)中，液体培养基的制备方法包括如下步骤：取白糖80g、磷酸氢二钾2.5g、硫酸镁2.5g、蛋白胨2.5g和豆粕粉15g，依次溶于2.1l水中加热搅拌溶解，补水至2.1l，调ph值7.5，降配置好的培养液分装在三个1000ml三角瓶中，每个三角瓶600ml，剩下300ml装在500ml三角瓶，在每个三角瓶中分别加入磁力子，要求溶液均匀一致，磁力子大小一致。分别将三角瓶塞上棉塞，再用牛皮纸包住棉塞，橡皮筋扎紧，放入高压灭菌锅中，在135℃温度下灭菌45min，冷却到23℃以下备用，即制得液体培养基。
所述液体培养基的原料还包括消泡剂，分装后在每个三角瓶中滴加消泡剂2滴，加入磁力子，搅拌均匀。
所述步骤(1)中，保藏液的制备方法包括如下步骤：配制85％的生理盐水，然后在135℃下灭菌45min，即得到保藏液。
所述步骤(2)中，斜面培养的培养温度为23℃，培养时间为9d。
所述步骤(3)中，液体培养基的培养为摇瓶培养，培养温度为23℃，摇床转速为200r/min，培养时间为9d，选取溶液澄清，菌球大小均匀无异状，鞭毛发散的菌种作为金针菇菌丝球。
所述步骤(3)中还包括，将所述斜面菌种接入液体培养基后将斜面菌种搅拌至搅碎状态，搅拌速度为2200r/min。
所述步骤(4)中，保藏的具体具体步骤为：将步骤(3)中选好的金针菇菌丝球中挑取大小均匀，鞭毛发散的圆形菌球放入无菌水清洗后接种入所述步骤(4)的保藏液中，并在4℃温度下保藏。
实施例7
在冰箱保藏21个月后，试管中液面漂浮着气生菌丝和粉孢子，液体倒掉以后用接种针将单个菌丝球接种到马铃薯培养基斜面试管上活化提纯，培养出来的菌丝浓白，粗壮，无粉孢子，进行第二次转代后开始接种摇瓶培养，发酵罐培养，接种到栽培瓶，并同一时间与原菌种进行同期的三组对照试验(从母种开始直到挑采结束)，最终的出菇挑采后，每次各自随机挑采两筐，每筐16瓶，共32瓶(1400ml栽培瓶)进行数据对比：
第一组对照试验
第二组对照试验
第三组对照试验
结论：根据三组的数据表明，用本发明金针菇菌丝球保藏法保藏的金针菇菌丝球具有保藏时间长，能够稳定遗传菌种的优良基因，不易变异退化，且操作简单，成本低，可行性高，对于优良菌种的保藏有着重大的作用。
上述实施例为本发明较佳的实现方案，除此之外，本发明还可以其它方式实现，在不脱离本发明构思的前提下任何显而易见的替换均在本发明的保护范围之内。