本发明属于化学药物领域，涉及臭参素c及其在治疗与sirt1相关疾病中的应用。
背景技术：
沉默信息调节因子1(silentmatingtypeinformationregulation2homolog-1,sirt1)是一种广泛存在于哺乳动物细胞中的核蛋白，主要通过对组蛋白、转录因子及其他蛋白修饰的赖氨酸残基进行去乙酰化而调节基因的表达，进而广泛参与多种生理活动如：(1)sirt1与能量代谢方面：sirt1可与过氧化物酶体增殖物活化受体γ(ppar-γ)协同刺激因子a(pgc-1a)及肝细胞核因子4a(hnf4a)结合成一种蛋白复合物，在nad参与下，sirt1通过去乙酰化pgc-1a来激活hnf4a，从而调节糖异生相关基因转录，进而增强肝脏糖异生。另一方面，sirt1通过结合ppar-γ上2个辅助蛋白核受体共抑制蛋白(nuclearreceptorcorepressor，ncor)和视黄酸及甲状腺激素受体沉默中介蛋白(silencingmediatorofretinoidandhormonereceptor，smrt)抑制ppar-γ活性，进而在热量摄入减少时，促进白色脂肪组织中的脂肪动员。(2)sirt1与胰岛素分泌:sirt1通过抑制解偶联蛋白2(ucp-2)来促进胰岛b细胞分泌胰岛素。ucp-2作为线粒体内膜上的转运蛋白，使线粒体呼吸作用中的氧化磷酸化解偶联。由于此过程中能量以热能形式释放，使atp合成减少，此时β细胞内atp/adp比值降低。atp敏感的k+通道开放受其影响所导致的细胞内[ca2+]下降，抑制了细胞胞吐作用，使胰岛素释放减少。(3)sirt1与细胞寿命：sirt1可与多种蛋白相互作用，最初研究认为sirt1的主要功能是应激条件下减少细胞凋亡及衰老，增加细胞存活率。sirt1可负调控肿瘤抑制子p53，这是一种最早发现的sirt1非组蛋白底物，sirt1将p53中382位lys残基去乙酰化，降低p53与dna顺式元件结合力，减少由其诱导的细胞凋亡。因此，sirt1也被看作为一种有潜力的肿瘤激动子。(4)sirt1与肿瘤多药耐药:sirt1在许多耐药的肿瘤株中高表达。最近研究表明，sirt1在肿瘤耐药中的作用可能主要与其能靶向并调节肿瘤抑制子p53、p73、e2f1和foxo3a的活化相关。换言之，在sirt1依赖的转录因子去乙酰化用于调节基因表达期间，细胞避开了化疗药物所致的增殖阻滞和细胞死亡。而这些生理活动与代谢综合征、2型糖尿病、肿瘤和衰老等密切相关，因此寻找调节sirt1的小分子抑制剂或激动剂对于研究疾病生理、病理过程及开发相关药物意义重大。
臭参生长在云南寻甸、宜良一带，经权威鉴定发现其为党参(codonopsispilosula)，由于云南独特的地理环境包括气候因素，臭参(根)的功能与北方产党参明显不同，我们对其进行了持续研究，本发明从中发现的臭参素c是新化合物，其作为sirt1抑制剂属于首次发现。
技术实现要素：
本发明是对臭参(codonopsisipilosula)进行了更深入研究，从其水溶性部位中发现了臭参素c及其抑制sirt1活性，本发明的目的在于提供具有sirt1抑制活性的化合物臭参素c及其该发明的化合物在制备与sirt1相关疾病中的应用，以及以该化合物为有效成分的药物组合物。本发明的另一目的还在于提供制备臭参素c的天然分离方法。
本发明的上述目的是由下述的技术方案得以实现的：
下述结构式所示的臭参素c(1)，
制备臭参素c的方法，取干燥臭参(codonopsispilosula)根(20kg)，粉碎，85％乙醇浸渍提取(80l×4×24h)，合并提取液并减压回收溶剂得粗提取物，将粗提取物混悬于水中，然后用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯萃取物，剩余水层减压浓缩得水提取物，水层提取物行d101大孔树脂(乙醇：水，5％，40％，95％)，1.5-2倍柱体积溶剂洗脱，得三个组份(fr.1–fr.3)。fr.2(30g)行sephadexlh-20(甲醇)，tlc指导合并相同成分，得二个组份(fr.2.1和fr.2.2)。其中，fr.2.2(19g)经rp-18柱层析(甲醇：水，10％–70％)得八个组份(fr.2.2.1–fr.2.2.8)。fr.2.2.2(2.3g)经sephadexlh-20(甲醇)层析，tlc指导合并相同成分，然后经hplc(甲醇：水，11％)纯化得臭参素c(3.2mg)。
治疗与sirt1相关的疾病的药物组合物，含有治疗有效量的臭参素c和药学上可接受的载体。
所述的臭参素c在制备治疗与sirt1相关的疾病的药物中的应用。
所述的臭参素c在制备与sirt1相关疾病的保健食品中的应用。
本发明化合物可以单独直接应用或组合应用，也可以与其它药物包括植物提取物组成复方的形式使用，可以使用不同的药用辅料，制成多种固体制剂和液体制剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经不同给药途径给药。使用量可根据给药途径、患者的年龄、体重、所治疗疾病的类型和严重程度等变化进行一次或多次使用。
附图说明
图1为化合物抑制sirt1活性试验结果(n＝3)。采用graphprism5统计学软件，应用单因素方差分析的统计学方法，计量数据以均数±标准差
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述。
实施例1
本发明所述臭参素c的提取分离及结构鉴定：
制备臭参素c的方法，取干燥臭参(codonopsispilosula)根(20kg)，粉碎，85％乙醇浸渍提取(80l×4×24h)，合并提取液并减压回收溶剂得粗提取物，将粗提取物混悬于水中，然后用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯萃取物，剩余水层减压浓缩得水提取物，水层提取物行d101大孔树脂(乙醇：水，5％，40％，95％)，1.5-2倍柱体积溶剂洗脱，得三个组份(fr.1–fr.3)。fr.2(30g)行sephadexlh-20(甲醇)，tlc指导合并相同成分，得二个组份(fr.2.1和fr.2.2)。其中，fr.2.2(19g)经rp-18柱层析(甲醇：水，10％–70％)得八个组份(fr.2.2.1–fr.2.2.8)。fr.2.2.2(2.3g)经sephadexlh-20(甲醇)层析，tlc指导合并相同成分，然后经hplc(甲醇：水，11％)纯化得臭参素c(3.2mg)。
化合物结构鉴定如下：
臭参素c是黄色固体，通过质谱高分辨，13cnmr与dept谱可以确定其分子式为c42h46o6，计算其不饱和度为20。进一步分析13cnmr，dept谱以及hsqc谱发现，共有42个碳信号，其中包括4个亚甲基，22个次甲基(8个苯环次甲基，14个脂肪次甲基)和16个季碳(其中8个为连氧季碳)。化合物的1h,13cnmr以及dept谱提示臭参素c包含两个典型的2,3-trans-(catechin-type)flavan-3-ol结构[δh4.57(d,j＝6.2hz,h-2),3.81(m,h-3),2.85(dd,j＝16.5,4.9hz,h-4a),and2.41(dd,j＝16.4,6.5hz,h-4b),δc26.8(c-4),66.0(c-3),80.5(c-2)]and[δh4.64(d,j＝5.7hz,h-2″′),3.90(m,h-3″′),2.80(dd,j＝16.5,4.8hz,h-4″′a),and2.41(dd,j＝16.4,7.2hz,h-4″′b),δc26.1(c-4″′),64.2(c-3″′),78.2(c-2″′)]。臭参素c的结构主要通过二维核磁确定1h-1hcosy谱中h-2/h-3/h-4；h-2″′/h-3″′/h-4″′有相关，确定c-2-c-3-c-4,c-2″′c-3″′-c-4″′的连接顺序。hmbc谱中h-2/c-9(δc152.1),h-4/c-9,c-10(δc101.3),c-5(δc153.6),h-6(δh6.27)/c-5,c-7(δc154.9),c-8(δc108.0),c-10以及h-4″″/c-1″″(δc130.0),c-6″″(δc125.0),c-8的相关确定a环的c-8位与b′环c-6″″相连。同时从hmbc谱中h-1″(δh4.70)/c-5,h-1″″′(δh4.70)/c-7″′(δc156.6)的相关可以确定葡萄糖分别连在c-5和c-7″′位上。
取臭参素c0.5mg酸水解后将得到的葡萄糖残渣制成l-半胱氨酸甲酯衍生物，然后进行gc-ms分析与标准糖的衍生物进行比较。d-葡萄糖衍生物rt＝21.081min，l-葡萄糖衍生物rt＝21.615min，臭参素c水解后得到的葡萄糖衍生物rt＝21.135min。可以确定臭参素c结构中葡萄糖是d构型。
化合物臭参素c的结构式如下所示：
表1化合物臭参素c的结构鉴定数据1h(600mhz)
and13cnmr(125mhz)dataindmso-d6(δinppm,jinhz)
臭参素c：
实施例2
本发明所述臭参素c(qcsq-26b)抑制sirt1活性测试：
利用sirt1fluorometricdrugdiscoverykit以检测化合物对sirt1体外活性的影响。首先，配制含0.5u(1u＝1pmol·min-1at37℃)sirt1(除空白组外)，1000μmol·l-1nad+，100μmol·l-1去乙酰酶底物，sirt1试验缓冲液(50mmol·l-1tris-hcl,ph8.0,137mmol·l-1nacl,2.7mmol·l-1kcl,1mmol·l-1mgcl2,1mg·ml-1bsa)的试验体系。实验组加入待检测化合物，空白组与对照组加入等量溶解化合物的溶剂；再加入已配好的试验体系，使加入待检测化合物与试验体系的总体积为25μl。37℃条件下孵育30min后于每个试验孔中加入1×fluordelysdevelopersolution(含有2mmol·l-1烟酰胺)25μl终止反应(nicotinamide终浓度为100μm)，反应在半区96孔板中进行。多功能酶标仪360nm激发光，460nm发射光条件下测取各孔荧光值。
实施例3：
实施例1中化合物臭参素c，按常规法加注射用溶媒，精滤，灌封灭菌后可制成注射液。
实施例4：
实施例1中化合物臭参素c，将其溶于无菌注射用水中，用无菌漏斗过滤，分装，低温冷冻干燥后无菌熔封即得粉针剂。
实施例5：
实施例1中化合物臭参素c，按常规法配以各种药用辅料可制成片剂或胶囊剂。
使用实施例1中化合物臭参素c作为药物活性成分，使用几种常规赋形剂作为制备组合药物片剂或胶囊剂的辅料成分，按照常规方法制成每片或每粒胶囊含有药物成分10-300mg的样品。