本发明属于微生物农药技术领域，具体涉及防治蔬菜真菌病害的菌剂及其所用菌株。
背景技术：
近年来，草莓的种植面积不断扩大，而草莓根腐病的危害却越来越严重。每年9月草莓定植后，草莓根腐病大量发生，植株发病后，下部老叶叶缘变紫红色或紫褐色，逐渐向上扩展，最后全株萎蔫枯死，造成了严重损失。目前已报道的能引起草莓根腐病的炭疽病菌主要有3种，分别为胶孢炭疽菌(colletotrichumgloeosporioides)、尖孢炭疽菌(c.acutatum)和草莓炭疽菌(c.fragariae)。
黄瓜是一种世界性蔬菜作物，黄瓜枯萎病(cucumberfusariumwilt)作为一种土传病害，是世界各国黄瓜生产中的主要病害之一，由尖孢镰刀菌(fusariumoxysporum)引发。长期以来，化学农药在黄瓜枯萎病的防治方面发挥了重要作用，但过度使用化学农药，容易使病菌产生抗药性、降低黄瓜品质、污染环境、影响人体健康。因此采用高效、安全、环境友好型生物防治成为最佳选择。
草莓根腐病和黄瓜枯萎病等蔬菜真菌病害的生物防治的大力开展，不仅保证了农产品的质量，也符合农业可持续发展的需要，更是保障了人民健康和环境安全的需要，同时也是贯彻绿色植保理念的需要。开发具有良好防治效果的生防制剂的前提是要筛选出具有较强拮抗能力、广谱抗病性、良好稳定性的拮抗菌。在发掘高效生防作用的拮抗菌的基础上，将其与优质有机肥料混合制成生物有机肥不仅可以为草莓和黄瓜提供优质营养，也为拮抗菌提供了优质载体，并且还能有效防治草莓根腐病和黄瓜枯萎病害。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是如何抑制果蔬作物病原菌和/或防治草莓根腐病和黄瓜枯萎病。
为解决以上技术问题，本发明提供了一株黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)。
本发明所提供的黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)，其菌株号为sq11，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为cgmccno.14567。在下文简称黄赭色链霉菌sq11。
黄赭色链霉菌sq11具有序列表中序列1所示的16srdna序列。
为解决以上技术问题，本发明提供了病原菌抑制剂。
本发明所提供的病原菌抑制剂含有黄赭色链霉菌sq11。
上述病原菌抑制剂可为植物病原菌抑制剂。
上述病原菌抑制剂中，所述病原菌抑制剂对下述至少一种病原菌具有抑制作用：
a、草莓根腐病菌；
b、枯萎病菌；
c、辣椒炭疽病菌；
d、灰霉病菌；
e、桃褐腐病菌。
上述病原菌抑制剂的活性成分可为黄赭色链霉菌sq11，上述病原菌抑制剂的活性成分还可含有其他生物成分或非生物成分，上述病原菌抑制剂的其他活性成分本领域技术人员可根据对病原菌的抑制效果确定。
上述病原菌抑制剂中，所述病原菌抑制剂的活性成分可为黄赭色链霉菌sq11和多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001，所述多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为cgmccno.5563(下文简称多粘类芽孢杆菌jzb120001)。
上述病原菌抑制剂中，黄赭色链霉菌sq11和所述多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001的配比本领域技术人员可根据对病原菌的抑制效果确定，如黄赭色链霉菌sq11和所述多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001的菌落形成单位数目比可为1:1。
为解决以上技术问题，本发明提供了病害抑制剂。
本发明所提供的病害抑制剂，含有黄赭色链霉菌sq11。
上述病害抑制剂可为植物病害抑制剂。
上述病害抑制剂中，所述病害为下述至少一种：
a、草莓根腐病；
b、枯萎病；
c、辣椒炭疽病；
d、灰霉病；
e、桃褐腐病。
上述病害抑制剂的活性成分可为黄赭色链霉菌sq11，上述病害抑制剂的活性成分还可含有其他生物成分或非生物成分，上述病害抑制剂的其他活性成分本领域技术人员可根据对病害的抑制效果确定。
上述病害抑制剂中，所述病害抑制剂的活性成分为黄赭色链霉菌sq11和多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001，所述多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为cgmccno.5563。
上述病害抑制剂中，黄赭色链霉菌sq11和所述多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001的配比本领域技术人员可根据对病害的抑制效果确定，如黄赭色链霉菌sq11和所述多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001的菌落形成单位数目比可为1:1。
下述1)-4)中的任一种应用也属于本发明的保护范围：
1)黄赭色链霉菌sq11在抑制植物病原菌中的应用；所述植物病原菌为下述至少一种病原菌：
a、草莓根腐病菌；
b、枯萎病菌；
c、辣椒炭疽病菌；
d、灰霉病菌；
e、桃褐腐病菌；
2)黄赭色链霉菌sq11和多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001在抑制植物病原菌中的应用；所述多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为cgmccno.5563；所述植物病原菌为下述至少一种病原菌：
a、草莓根腐病菌；
b、枯萎病菌；
c、辣椒炭疽病菌；
d、灰霉病菌；
e、桃褐腐病菌；
3)黄赭色链霉菌sq11在制备所述病原菌抑制剂和/或所述病害抑制剂中的应用；
4)黄赭色链霉菌sq11和多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001在制备所述病原菌抑制剂和/或所述病害抑制剂中的应用；所述多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为cgmccno.5563。
上文中，所述草莓根腐病菌可为胶孢炭疽病菌(colletotrichumgloeosporioides)；所述枯萎病菌可为黄瓜枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)、棉花枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.vasinfectum)和/或甘兰枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.conglutinans)。
上文中，所述草莓根腐病可为由胶孢炭疽病菌(colletotrichumgloeosporioides)引起的草莓根腐病；所述枯萎病可为由黄瓜枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)引起的黄瓜枯萎病、由棉花枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.vasinfectum)引起的棉花枯萎病和/或由甘兰枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.conglutinans)引起的甘兰枯萎病。所述辣椒炭疽病可为由辣椒炭疽病菌(colletotrichumcapsici)引起的辣椒炭疽病。所述番茄灰霉病可为由灰霉病菌(botrytiscinerea)引起的番茄灰霉病，所述桃褐腐病为由桃褐腐病菌(moniliniafructicola)引起的桃褐腐病。
上文中，所述病原菌抑制剂和病害抑制剂中，除所述活性成分外，还含有载体。所述载体可为农药领域常用的且在生物学上是惰性的载体。所述载体可为固体载体或液体载体；所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物；所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种；所述植物材料可为玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种；所述高分子化合物可为聚乙烯醇和/或聚二醇；所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水；所述有机溶剂可为癸烷和/或十二烷。
所述病原菌抑制剂和病害抑制剂的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
根据需要，所述病原菌抑制剂和病害抑制剂中还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、ph调节剂等。
本发明的黄赭色链霉菌sq11对包括草莓根腐病菌和黄瓜枯萎病菌在内的多种植物病原真菌具有良好的广谱拮抗活性。以黄赭色链霉菌sq11为活性成分的sq11菌剂对草莓根腐病的防治效果达到65.1％，与化学药剂多菌灵对草莓根腐病的防治效果(65.6％)相当；以黄赭色链霉菌sq11和多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001为活性成分的sq11+jzb120001复合菌剂对草莓根腐病的防治效果达到90.7％，显著高于化学药剂多菌灵对草莓根腐病的防治效果(65.6％),比sq11菌剂处理和jzb120001菌剂(以多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001为活性成分)处理对草莓根腐病的防治效果之和还要高，说明在sq11+jzb120001复合菌剂处理中，黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)sq11和多粘类芽孢杆菌jzb120001在草莓根腐病防治方面产生了协同作用。以黄赭色链霉菌sq11为活性成分的sq11菌剂对黄瓜枯萎病的防治效果达到63.6％，与化学药剂多菌灵对黄瓜枯萎病的防治效果(62.3％)相当；以黄赭色链霉菌sq11和多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001为活性成分的sq11+jzb120001复合菌剂对黄瓜枯萎病的防治效果达到90.4％，显著高于化学药剂多菌灵对黄瓜枯萎病的防治效果(62.3％)，比sq11菌剂和jzb120001菌剂对黄瓜枯萎病的防治效果(分别为63.6％和24.8％)之和还要高，说明黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)sq11和多粘类芽孢杆菌jzb120001在黄瓜枯萎病防治方面产生了协同作用。说明sq11+jzb120001复合菌剂、sq11菌剂对草莓根腐病和黄瓜枯萎病等蔬菜真菌病害具有良好的防治作用。
保藏说明
菌种名称：黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)
菌株编号：sq11
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：cgmcc
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2017年08月25日
保藏中心登记入册编号：cgmccno.14567
菌种名称：多粘类芽孢杆菌
拉丁名：(paenibacilluspolymyxa)
菌株编号：jzb120001
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：cgmcc
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2011年12月9日
保藏中心登记入册编号：cgmccno.5563
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中所用到的病原菌如下，公众可从野外采集，也可从北京市农林科学院获得：番茄灰霉病菌(botrytiscinerea)、黄瓜枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)、桃褐腐病菌(moniliniafructicola)、辣椒炭疽病菌(colletotrichumcapsici)、棉花枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.vasinfectum)、甘兰枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.conglutinans)、草莓根腐病菌——胶孢炭疽病菌(colletotrichumgloeosporioides)(王俊丽等.一株芽孢杆菌qd-10的鉴定及生防特性分析.中国生物防治学报,2014,30(4):564-572)。
下述实施例中的多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001已于2011年12月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmccno.5563，已被2013年01月02日公开的公开号为cn102851243a的中国发明专利申请公开。下文简称多粘类芽孢杆菌jzb120001。
下述实施例中所用的培养基如下：
pda培养基：取去皮的马铃薯200.0g，切成小块，加水1000ml煮沸30min后过滤，收集滤液；将滤液补足至1000ml，并加入加葡萄糖20.0g，琼脂15.0g，熔化后分装，121℃灭菌15min。
nb培养基：葡萄糖5.0g，蛋白胨5.0g，牛肉膏3.0g，蒸馏水定容1000ml，ph7.0-7.2，121℃灭菌20min。
na培养基：葡萄糖5.0g，蛋白胨5.0g，牛肉膏3.0g，琼脂18g，水1000ml，ph7.0-7.2，121℃灭菌20min。
实施例1、菌株的分离与鉴定
1、菌株分离
先后两次从中国青海省青海湖周边土壤分离获得两株对黄瓜枯萎病原菌有拮抗作用的放线菌菌株-菌株11f和菌株sq11。菌株采用稀释平板法分离，具体操作方法如下：称取土壤样品10g，倒入装有小玻璃珠和90ml无菌水的三角瓶中，振荡30min后静置5min，依次稀释10倍，分别配制成10-2、10-3、10-4、10-5、10-6的悬浮液，吸取不同浓度的悬浮液各0.1ml加到高氏一号培养基平板上，均匀涂布后置于28℃培养观察，5-7天后挑取不同的单菌落划线纯化。将纯化后的菌株转接到高氏一号斜面培养基上培养，4℃保存备用。采用平板对峙实验从纯化的菌株中筛选到两株对黄瓜枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)具有拮抗作用的菌株，即菌株11f和菌株sq11。
平板对峙实验具体实验方法如下：将菌株11f、菌株sq11和黄瓜枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)分别转接在pda培养基上活化，25℃培养48h后，用直径0.6mm打孔器在菌落边缘打取菌饼，将拮抗菌(菌株11f或菌株sq11)菌饼接种到培养皿一端(距培养皿边缘3cm)，将病原菌(黄瓜枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum))菌饼接种到培养皿另一端(距培养皿边缘3cm)，实验设3次重复，同时以只接黄瓜枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)的处理作对照，25℃培养7天后观察是否具有拮抗作用。实验重复三次，按照如下公式计算抑菌率。抑菌率％＝(对照病原菌直径-与拮抗菌对峙的病原菌直径)/对照病原菌直径×100％。
结果表明菌株11f对黄瓜枯萎病菌的抑菌率为68.6％，菌株sq11对黄瓜枯萎病菌的抑菌率为85.4％，菌株sq11对黄瓜枯萎病菌的抑菌率是菌株11f对黄瓜枯萎病菌的抑菌率的1.2倍(表1和表2)。
按照上述平板对峙实验测定菌株11f和菌株sq11对草莓根腐病菌——胶孢炭疽病菌(colletotrichumgloeosporioides)、番茄灰霉病菌(botrytiscinerea)、桃褐腐病菌(moniliniafructicola)、辣椒炭疽病菌(colletotrichumcapsici)、棉花枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.vasinfectum)和甘兰枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.conglutinans)这6株病原菌的抑菌率。结果表明菌株11f和菌株sq11均有广谱的抑菌作用，菌株sq11对草莓根腐病菌、黄瓜枯萎病菌和辣椒炭疽病菌的抑菌率显著高于菌株11f：菌株sq11对草莓根腐病菌的抑菌率是菌株11f对草莓根腐病菌的抑菌率的1.5倍，菌株sq11对黄瓜枯萎病菌的抑菌率是菌株11f对黄瓜枯萎病菌的抑菌率的1.3倍，菌株sq11对辣椒炭疽病菌的抑菌率是菌株11f对辣椒炭疽病菌的抑菌率的2.1倍。菌株sq11对其它4种病原菌的抑菌率与菌株11f相似(表1和表2)。
表1、菌株11f的抑菌率
表2、菌株sq11的抑菌率
2、菌株的鉴定
取步骤1的菌株11f和菌株sq11进行下述鉴定。
2.1形态特征
对高氏一号琼脂平板上的菌株11f和菌株sq11进行菌落形态观察，并使用显微镜观察其显微形态。其中高氏一号琼脂：可溶性淀粉20.0g，nacl0.5g，kno31.0g，k2hpo40.5g，mgso4·7h2o0.5g，feso40.02g，琼脂18.0g，蒸馏水1000ml，ph7.2-7.4，121℃灭菌30min。
菌株11f和菌株sq11的形态特征均如下：在高氏一号琼脂平板上呈粉色，菌落小而紧密、干而不透明，边缘呈放线状，表面起粉，有刺激性气味。其菌丝体较为发达。
2.2生理生化特征
通过对菌株11f和菌株sq11进行淀粉水解、明胶液化、牛奶凝固与胨化、产h2s、对盐的耐受性，对不同碳源的利用等检测，从而对其进行生理生化鉴定。菌株11f和菌株sq11的这些生理生化特征相同，如表3所示。
表3、菌株11f和菌株sq11的生理生化特征
注：“+”表示阳性、产酸或耐盐；“－”表示阴性、不产酸或不耐盐。
3.2.416srdna
提取菌株11f和菌株sq11的基因组dna，pcr扩增16srdna，回收pcr扩增产物，经连接、转化、鉴定后，阳性克隆测序，结果表明菌株11f和菌株sq11均具有序列表中序列1的16srdna序列，与黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)的16srdna同一性达到99％。
根据形态特征、生理生化特征和16srdna，将菌株11f和菌株sq11均鉴定为黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)。
菌株11f已记载在如下文献中：白雪莲.黄瓜枯萎病拮抗菌的筛选及其生防效应的研究.硕士论文，2017)，下文称为黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)f11。
菌株sq11已于2017年08月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmccno.14567。下文称为黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)sq11。
实施例2、防治草莓根腐病和黄瓜枯萎病
1、菌剂的制备
1.1sq11菌剂的制备
接种环挑取平板上生长好的黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)sq11接种到装有100ml液体发酵培养基的500ml三角瓶中，28℃摇床180rpm振荡培养7d，收集发酵液，得到黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)sq11发酵液，该黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)sq11发酵液即为sq11菌剂。其中，液体发酵培养基为高氏一号液体培养基：可溶性淀粉20g，kno31g，k2hpo40.5g，mgso4·7h2o0.5g，nacl0.5g，feso4·7h2o0.01g用蒸馏水定容到1000ml，121℃条件下灭菌20min，得液体发酵培养基。
1.2f11菌剂的制备
接种环挑取平板上生长好的黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)f11接种到装有100ml1.1所述液体发酵培养基的500ml三角瓶中，28℃摇床180rpm振荡培养7d，收集发酵液，得到黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)f11发酵液，该黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)f11发酵液即为f11菌剂。
1.3jzb120001菌剂的制备
将多粘类芽孢杆菌jzb120001在na培养基斜面上活化培养后取2－3环接种到500ml三角瓶内的50mlnb培养基中。28℃，26mm振幅，170r/min振荡培养24h作为种子培养液；将其按2％(v/v)的接种量转接于500ml三角瓶内的50mlnb培养基中，28℃，170r/min振荡培养48h，得多粘类芽孢杆菌jzb120001发酵液，该多粘类芽孢杆菌jzb120001发酵液即为jzb120001菌剂。
1.4sq11+jzb120001复合菌剂的制备
将1.1的sq11菌剂和1.3的jzb120001菌剂按照黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)sq11和多粘类芽孢杆菌jzb120001的菌落形成单位(cfu)数目比为1：1的比例混合在一起，得到sq11+jzb120001复合菌剂。
1.5f11+jzb120001复合菌剂的制备
将1.2的f11菌剂和1.3的jzb120001菌剂按照黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)f11和多粘类芽孢杆菌jzb120001的菌落形成单位(cfu)数目比为1：1的比例混合在一起，得到f11+jzb120001复合菌剂。
2防治黄瓜枯萎病盆栽实验
2.1带菌种芽的制备：使用胚根浸种法制备带菌种芽，将芽长0.5cm的中农6号黄瓜的种子浸泡在事先制备好的100ml黄瓜枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)含量为1×106cfu·ml-1的黄瓜枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)菌悬液中3h，得带菌种芽。
2.2实验设8个处理，分别为2.2.1-2.2.8。
2.2.1病原菌接种处理对照：将带菌种芽播种在装有栽培土的栽培钵中，每个栽培钵装有40g栽培土，播种1个带菌种芽。
2.2.2多菌灵处理：将带菌种芽播种在装有多菌灵栽培土的栽培钵中，每个栽培钵装有40g多菌灵栽培土，播种1个带菌种芽。多菌灵栽培土是将25％多菌灵可湿性粉剂2克与2000克栽培土(与2.2.1中的栽培土相同)混合得到多菌灵栽培土。
2.2.3sq11菌剂处理：将带菌种芽播种在装有sq11菌剂生防基质的栽培钵中，每个栽培钵播种1个带菌种芽。sq11菌剂生防基质是将1200g栽培土(与2.2.1中的栽培土相同)与1.1的sq11菌剂混匀得到生防基质，sq11菌剂生防基质中黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)sq11的含量为106cfu/g，分装于30个栽培钵中，每个栽培钵装40gsq11菌剂生防基质。
2.2.4f11菌剂处理：将带菌种芽播种在装有f11菌剂生防基质的栽培钵中，每个栽培钵播种1个带菌种芽。f11菌剂生防基质是将1200g栽培土(与2.2.1中的栽培土相同)与1.2的f11菌剂混匀得到生防基质，f11菌剂生防基质中黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)f11的含量为106cfu/g，分装于30个栽培钵中，每个栽培钵装40gf11菌剂生防基质。
2.2.5jzb120001菌剂处理：将带菌种芽播种在装有jzb120001菌剂生防基质的栽培钵中，每个栽培钵播种1个带菌种芽。jzb120001菌剂生防基质是将1200g栽培土(与2.2.1中的栽培土相同)与1.3的jzb120001菌剂混匀得到生防基质，jzb120001菌剂生防基质中多粘类芽孢杆菌jzb120001的含量为106cfu/g，分装于30个栽培钵中，每个栽培钵装40gjzb120001菌剂生防基质。
2.2.6sq11+jzb120001复合菌剂处理：将带菌种芽播种在装有sq11+jzb120001复合菌剂生防基质的栽培钵中，每个栽培钵播种1个带菌种芽。sq11+jzb120001复合菌剂生防基质是将1200g栽培土(与2.2.1中的栽培土相同)与1.4的sq11+jzb120001复合菌剂混匀得到生防基质，sq11+jzb120001复合菌剂生防基质中黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)sq11的含量为103cfu/g,多粘类芽孢杆菌jzb120001的含量为103cfu/g，分装于30个栽培钵中，每个栽培钵装40gsq11+jzb120001复合菌剂生防基质。
2.2.7f11+jzb120001复合菌剂处理：将带菌种芽播种在装有f11+jzb120001复合菌剂生防基质的栽培钵中，每个栽培钵播种1个带菌种芽。f11+jzb120001复合菌剂生防基质是将1200g栽培土(与2.2.1中的栽培土相同)与1.5的f11+jzb120001复合菌剂混匀得到生防基质，f11+jzb120001复合菌剂生防基质中黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)f11的含量为103cfu/g,多粘类芽孢杆菌jzb120001的含量为103cfu/g，分装于30个栽培钵中，每个栽培钵装40gf11+jzb120001复合菌剂生防基质。
2.2.8空白对照：将未经病原菌接种处理的黄瓜种芽播种在装有栽培土(与2.2.1中的栽培土相同)的栽培钵中，每个栽培钵装有40g栽培土，播种1个种芽。
每个处理3次重复，每次重复30株苗。播种后，每天观察记录发病情况，15天后计算病情指数和防治效果。黄瓜枯萎病病害分级标准：0级(根、茎、叶生长正常，无病症)，1级(胚轴或子叶上出现轻微症状，但生长正常)，2级(胚轴或子叶明显的坏死斑，或一片子叶黄化，生长受到一定影响)，3级(坏死斑引起局部性萎蔫，或一片子叶枯萎生长僵化)，4级(整体萎蔫，倒伏枯死)。采用spss17.0进行差异显著分析，p≤0.05
病情指数＝σ(各级病株数×相应级别)/(调查总株数×最大级数)×100。
防治效果(％)＝(病原菌接种处理对照病情指数—处理病情指数)/病原菌接种处理对照病情指数×100％。
表4.各菌剂对黄瓜枯萎病的防治效果
结果如表4，表明以黄赭色链霉菌sq11为活性成分的sq11菌剂对黄瓜枯萎病的防治效果达到63.6％，与化学药剂多菌灵对黄瓜枯萎病的防治效果(62.3％)相当；sq11菌剂处理对黄瓜枯萎病的防治效果显著高于f11菌剂处理，是f11菌剂处理的1.6倍。以黄赭色链霉菌sq11和多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001为活性成分的sq11+jzb120001复合菌剂对黄瓜枯萎病的防治效果达到90.4％，显著高于化学药剂多菌灵对黄瓜枯萎病的防治效果(62.3％),sq11+jzb120001复合菌剂处理比sq11菌剂处理和jzb120001菌剂处理对黄瓜枯萎病的防治效果之和还要高，说明在sq11+jzb120001复合菌剂处理中，黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)sq11和多粘类芽孢杆菌jzb120001在黄瓜枯萎病防治方面产生了协同作用；而f11+jzb120001复合菌剂处理比f11菌剂处理对黄瓜枯萎病的防治效果还要低，说明黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)f11和多粘类芽孢杆菌jzb120001在黄瓜枯萎病防治方面并未产生协同作用。说明sq11+jzb120001复合菌剂、sq11菌剂对黄瓜枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)引起的黄瓜枯萎病具有良好的防治作用。
3防治草莓根腐病盆栽实验
3.1带菌种芽的制备：使用胚根浸种法制备带菌种芽，将出芽的明宝草莓的种子浸泡在事先制备好的100ml草莓根腐病菌——胶孢炭疽病菌(colletotrichumgloeosporioides)含量为1×106cfu·ml-1的胶孢炭疽病菌(colletotrichumgloeosporioides)菌悬液中3h，得带菌种芽。
3.2实验设8个处理，分别为3.2.1-3.2.8。
3.2.1病原菌接种处理对照：将带菌种芽播种在装有栽培土的栽培钵中，每个栽培钵装有40g栽培土，播种1个带菌种芽。
3.2.2多菌灵处理：将带菌种芽播种在装有多菌灵栽培土的栽培钵中，每个栽培钵装有40g多菌灵栽培土，播种1个带菌种芽。多菌灵栽培土是将25％多菌灵可湿性粉剂2克与2000克栽培土(与3.2.1中的栽培土相同)混合得到多菌灵栽培土。
3.2.3sq11菌剂处理：将带菌种芽播种在装有sq11菌剂生防基质的栽培钵中，每个栽培钵播种1个带菌种芽。sq11菌剂生防基质是将1200g栽培土(与3.2.1中的栽培土相同)与1.1的sq11菌剂混匀得到生防基质，sq11菌剂生防基质中黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)sq11的含量为106cfu/g，分装于30个栽培钵中，每个栽培钵装40gsq11菌剂生防基质。
3.2.4f11菌剂处理：将带菌种芽播种在装有f11菌剂生防基质的栽培钵中，每个栽培钵播种1个带菌种芽。f11菌剂生防基质是将1200g栽培土(与3.2.1中的栽培土相同)与1.2的f11菌剂混匀得到生防基质，f11菌剂生防基质中黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)f11的含量为106cfu/g，分装于30个栽培钵中，每个栽培钵装40gf11菌剂生防基质。
3.2.5jzb120001菌剂处理：将带菌种芽播种在装有jzb120001菌剂生防基质的栽培钵中，每个栽培钵播种1个带菌种芽。jzb120001菌剂生防基质是将1200g栽培土(与3.2.1中的栽培土相同)与1.3的jzb120001菌剂混匀得到生防基质，jzb120001菌剂生防基质中多粘类芽孢杆菌jzb120001的含量为106cfu/g，分装于30个栽培钵中，每个栽培钵装40gjzb120001菌剂生防基质。
3.2.6sq11+jzb120001复合菌剂处理：将带菌种芽播种在装有sq11+jzb120001复合菌剂生防基质的栽培钵中，每个栽培钵播种1个带菌种芽。sq11+jzb120001复合菌剂生防基质是将1200g栽培土(与3.2.1中的栽培土相同)与1.4的sq11+jzb120001复合菌剂混匀得到生防基质，sq11+jzb120001复合菌剂生防基质中黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)sq11的含量为103cfu/g,多粘类芽孢杆菌jzb120001的含量为103cfu/g，分装于30个栽培钵中，每个栽培钵装40gsq11+jzb120001复合菌剂生防基质。
3.2.7f11+jzb120001复合菌剂处理：将带菌种芽播种在装有f11+jzb120001复合菌剂生防基质的栽培钵中，每个栽培钵播种1个带菌种芽。f11+jzb120001复合菌剂生防基质是将1200g栽培土(与3.2.1中的栽培土相同)与1.5的f11+jzb120001复合菌剂混匀得到生防基质，f11+jzb120001复合菌剂生防基质中黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)f11的含量为103cfu/g,多粘类芽孢杆菌jzb120001的含量为103cfu/g，分装于30个栽培钵中，每个栽培钵装40gf11+jzb120001复合菌剂生防基质。
3.2.8空白对照：将未经病原菌接种处理的草莓种芽播种在装有栽培土(与2.2.1中的栽培土相同)的栽培钵中，每个栽培钵装有40g栽培土，播种1个种芽。
每个处理3次重复，每次重复30株苗。播种后，每天观察记录发病情况，40天后计算病情指数和防治效果。草莓根腐病病害分级标准：0级，无病斑；1级，0％＜病斑面积占总面积(以下用“x”表示)≤5％；3级，5％＜x≤15％；5级，15％＜x≤25％；7级，25％＜x≤50％；9级，x＞50％。病情指数＝σ(各级病株数×相应级别)/(调查总株数×最大级数)×100。
防治效果(％)＝(病原菌接种处理对照病情指数—处理病情指数)/病原菌接种处理对照病情指数×100％。
表5.各菌剂对草莓根腐病的防治效果
结果如表5，表明以黄赭色链霉菌sq11为活性成分的sq11菌剂对草莓根腐病的防治效果达到65.1％，与化学药剂多菌灵对草莓根腐病的防治效果(65.6％)相当；sq11菌剂处理对草莓根腐病的防治效果显著高于f11菌剂处理，是f11菌剂处理的1.5倍。以黄赭色链霉菌sq11和多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)jzb120001为活性成分的sq11+jzb120001复合菌剂对草莓根腐病的防治效果达到90.7％，显著高于化学药剂多菌灵对草莓根腐病的防治效果(65.6％),sq11+jzb120001复合菌剂处理比sq11菌剂处理和jzb120001菌剂处理对草莓根腐病的防治效果之和还要高，说明在sq11+jzb120001复合菌剂处理中，黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)sq11和多粘类芽孢杆菌jzb120001在草莓根腐病防治方面产生了协同作用；而f11+jzb120001复合菌剂处理比f11菌剂处理对草莓根腐病的防治效果还要低，说明黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)f11和多粘类芽孢杆菌jzb120001在草莓根腐病防治方面并未产生协同作用。说明sq11+jzb120001复合菌剂、sq11菌剂对胶孢炭疽病菌(colletotrichumgloeosporioides)引起的草莓根腐病具有良好的防治作用。
<110>北京市农林科学院
<120>防治草莓根腐病等蔬菜真菌病害的菌剂及其所用菌株
<160>1
<170>patentinversion3.5
<210>1
<211>1353
<212>dna
<213>黄赭色链霉菌(streptomycessilaceus)
<400>1
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