本发明涉及第二类体外诊断试剂，具体涉及一种精液游离弹性蛋白酶检测试剂盒及其应用。
背景技术：
：弹性蛋白酶是机体内能水解弹性蛋白的酶，存在于中性粒细胞中的弹性蛋白酶称为中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophilelastase,ne)。ne是一种重要的中性蛋白水解酶，直接参与体内各种生理和病理过程，在感染性疾病发生、组织损伤和炎症等诸多方面起着重要介质作用。各种体液或组织中弹性蛋白酶水平的高低可很好地反映该组织脏器损伤的严重程度，且是判断其预后的敏感指标。正常生理情况下，由巨噬细胞、中性粒细胞分泌的弹性蛋白酶量很少，并不断与抗蛋白酶系统如α1-抗胰蛋白酶(α1-at)和α2-巨球蛋白(α2-mg)结合形成复合物而被巨噬细胞、中性粒细胞吞噬清除，蛋白酶和抗蛋白酶之间保持着一种动态平衡，因而不会引起正常组织的破坏和损伤。炎症反应过程中，中性粒细胞分泌大量弹性蛋白酶，使得弹性蛋白酶含量和活性明显增高，而抗蛋白酶含量相对不足，又易受到氧自由基的氧化失活，有活性的弹性蛋白酶会降解邻近组织的弹性蛋白、多黏蛋白、基底膜和胶原纤维，从而使组织脏器遭受破坏和损伤。当炎症发生于男性生殖系统时，中性粒细胞释放大量的ne于精液中，随后，精液中α1-胰蛋白酶抑制剂与一定量的ne结合形成复合物，使之失去活性。而未结合的游离的弹性蛋白酶能刺激细胞合成活性氧自由基(ros)，导致细胞损伤甚至死亡。精液ne作为男性生殖道感染尤其是隐性感染诊断的重要炎症指标，对男性生育能力有潜在的负面影响。精液ne浓度不仅与精液白细胞数、精浆ros水平显著相关，而且与其他炎症相关细胞因子如il-6、il-8、tnf-α水平密切相关。ne对精子质量亦有影响，可以削弱精子活力，影响精子形态和dna完整性等。精液中存在ne抑制剂，可与ne形成复合物，两者比例的失衡可以促进慢性炎症的发生，进而可能导致男性不育。研究表明：在不育人群中有34％的ne水平升高，明显高于生育组；精浆中ne水平与患者年龄及精浆中的白细胞数呈正相关，与患者的精液量及精子单链dna的比例呈负相关。同时还发现：较高的精浆ne水平常常与患者配偶的生殖道感染有关。目前男科实验室检测精浆弹性蛋白酶的方法为酶联免疫吸附分析法(elisa法)。elisa法是基于抗原抗体的特异性反应，用羊抗ne抗体包被酶标板，精浆中的ne-α1-抗胰蛋白酶复合物被俘获，经洗涤后，加入酶标记的兔抗人α1-抗胰蛋白酶抗体；经孵育、洗涤、底物显色后，测定吸光度值；根据标准曲线可确定与α1-抗胰蛋白酶结合的ne浓度。该法只能检测被α1-抗胰蛋白酶抑制的ne水平，而真正在炎症过程中起作用的游离ne水平不能被反映，因此，该法在反映男性生殖系统炎症程度上存在明显的局限性，同时该方法为手工法，加样程序多，操作步骤复杂，不仅耗时耗力，而且人为误差也比较大，因此该方法不适宜在临床上推广应用。技术实现要素：发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种精液游离弹性蛋白酶检测试剂盒，该试剂盒只需要对样本进行简单处理，就能将细胞内未释放出的弹性蛋白酶完全释放出来，从而快速定量检测精液中所有游离弹性蛋白酶的活性来直接反映男性生殖系统炎症的严重程度，为准确诊断包括隐性感染在内的男性生殖道感染提供依据，并且该试剂盒检测速度快，时间短，线性范围宽，结果的准确度和精密度高。本发明还提供一种精液游离弹性蛋白酶检测试剂盒的应用，该试剂盒可以在全自动生化分析仪上应用。技术方案：为了实现上述目的，如本发明所述一种精液游离弹性蛋白酶检测试剂盒，包括r1试剂、r2试剂、校准品、质控品和样本处理液；所述的r1试剂为包含二甲基亚砜的hepes缓冲液；r2试剂为包含n-甲氧基琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-缬氨酸-4-硝基酰苯胺和二甲基亚砜的hepes缓冲溶液；所述校准品为弹性蛋白酶溶液，所述质控品为含有弹性蛋白酶的冻干粉，所述样本处理液为曲拉通x-100溶液。其中，所述hepes缓冲液配制方法为在纯化水中加入n-(2-羟乙基)哌嗪-n＇-2-乙磺酸、聚氧乙烯月桂醚、氯化钠后溶解完全，调节溶液ph值为7.0～9.0，使n-(2-羟乙基)哌嗪-n＇-2-乙磺酸、聚氧乙烯月桂醚、氯化钠终浓度分别为0.01～0.05mol/l、0.3～1.2g/l、0.1～0.5mol/l，即得到的溶液为hepes缓冲液。所述r1试剂配制方法为向hepes缓冲液中加入二甲基亚砜，使其终浓度0.8％～3％ml/ml。所述r2试剂配制方法为将n-甲氧基琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-缬氨酸-4-硝基酰苯胺完全溶于二甲基亚砜后，再加入hepes缓冲液摇匀得到r2试剂，使n-甲氧基琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-缬氨酸-4-硝基酰苯胺、二甲基亚砜、n-(2-羟乙基)哌嗪-n＇-2-乙磺酸的终浓度为2.4～5.0mmol/l、0.8％～3％ml/ml、0.0097～0.0485mol/l。所述的校准品中弹性蛋白酶活性为5～10u/l，并含有防腐剂proclin300、硫酸庆大霉素或nan3中的任意一种，溶剂为r1试剂，防腐剂在溶液中的终浓度分别为0.03％(ml/ml)proclin300、0.01％(g/ml)硫酸庆大霉素或0.01％(g/ml)nan3。所述的质控品为含活性10～20u/l弹性蛋白酶的乳糖冻干粉，未冻干前溶液中乳糖含量3％-5％(g/ml)，加入防腐剂proclin300、硫酸庆大霉素或nan3中的任意一种冻干得到，终溶液中防腐剂的浓度为：0.03％(ml/ml)proclin300、0.01％(g/ml)硫酸庆大霉素或0.01％(g/ml)nan3。本发明中弹性蛋白酶的酶活定义为：在25℃ph8.0时，每分钟裂解1mmoln-琥珀酰-l-丙氨酰-l-丙氨酸-p-硝基苯胺所需要的酶即为1个弹性蛋白酶活力单位。所述的样本处理液为1％～5％(ml/ml)曲拉通x-100水溶液。作为优选，所述精液游离弹性蛋白酶检测试剂盒包括r1试剂、r2试剂、校准品、质控品和样本处理液、说明书和内衬。本发明所述的精液游离弹性蛋白酶检测试剂盒在全自动生化分析仪上应用。所述应用的检测步骤为：(1)样本的准备：手淫法采集禁欲2～7天的精液于采样杯中，置37℃水浴箱中液化，取液化良好的精液样本，按照样本处理液︰精液比例为1︰10～20(ml/ml)，混合均匀，3000～12000rpm离心5～10min，吸取上清，即刻用于检测。(2)试剂准备：试剂盒从2～8℃取出后，于试剂仓中平衡30min。(3)设置全自动生化分析仪的主、副波长分别为400～420nm、600～700nm，r1/样本/r2加样量按体积比15︰1︰5，范围为(150～255μl)︰(10～17μl)︰(50～85μl)；(4)检测方法：通过速率法，加入r1和样本后混匀，37℃孵育2～6min；加入r2后混匀，37℃孵育2～5min；连续测定2～3min内的吸光度，仪器计算吸光度变化率△a/min；具体过程见表1；表1精液游离弹性蛋白酶检测流程(5)计算样本中游离弹性蛋白酶活性；(6)取纯化水复溶质控品，通常取4ml纯化水复溶冻干前4ml/瓶质控品，混匀后，分装成300μl/支，-25～-20℃保存；每天取出一支复溶，用试剂盒检测此复溶的质控品(检测方法和仪器的设定同上述样品的检测)，重复检测5-20天，每天重复5-10次，将检测结果进行统计分析，求平均值和标准差(s)，以为质控线绘制质控图；此后将质控品随着样本一起检测(检测方法与上述相同)，根据质控品的检测结果是否在质控线内判断样本检测结果是否在控。其中，步骤(5)所述样本中游离弹性蛋白酶活性的计算公式为(u/l)＝k×△a/min+b式中，k和b分别为校准曲线的斜率和截距，通过全自动生化分析仪自动测定校准品得到，△a/min通过全自动生化仪自动测定样本得到。本发明的精液游离弹性蛋白酶检测试剂盒，其中n-甲氧基琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-缬氨酸-4-硝基酰苯胺是弹性蛋白酶的一种特异性的合成荧光底物，底物n-甲氧基琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-缬氨酸-4-硝基酰苯胺能被样本中弹性蛋白酶分解产生对硝基苯胺，对硝基苯胺的生成量与弹性蛋白酶活性成正比，通过测定400～420nm波长处对硝基苯胺的吸光度变化率，即可计算出样本中游离弹性蛋白酶活性。有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点：(1)本发明提供一种检测精液游离弹性蛋白酶活性的试剂盒，只需要对样本进行简单处理，就能将细胞内未释放出的弹性蛋白酶完全释放出来，从而对样本中所有的游离的弹性蛋白酶进行全面检测，相比检测精液中弹性硬蛋白酶-α1-胰蛋白酶抑制剂复合物的含量更能直接地反映男性生殖系统炎症的严重程度；本发明的试剂盒组成简单，不需要终止液，便于生产和使用，检测时间短；最低检测限低，线性范围宽，重复性好，检测结果准确。(2)该试剂盒在全自动生化分析仪上配套使用，适用于临床上大批量样本的检测；同时可以通过反应曲线的变化实时监测整个反应过程，通过质控品的检测可以反映检测系统的稳定性和检测结果的准确性；同时样本的检测结果由仪器直接给出，不需要做标准曲线。附图说明图1为确认试剂盒1的定标、样本1和样本2检测结果关系图；其中a：水的定标结果，b：校准品的定标结果，c：样本1的检测结果，d：样本2的检测结果；图2为本发明实施例1试剂盒的线性范围参数确认关系图。具体实施方式以下结合附图和实施例对本发明作进一步说明。实施例1精液游离弹性蛋白酶检测试剂盒，包括如下成分：r1试剂：二甲基亚砜溶于hepes缓冲液，每升hepes缓冲溶液中0.75g聚氧乙烯月桂醚、0.3mol氯化钠和0.03moln-(2-羟乙基)哌嗪-n＇-2-乙磺酸，调节其ph＝8.0即得到hepes缓冲溶液，向此缓冲溶液(1l)中加入19ml二甲基亚砜得到r1试剂。r2试剂：将n-甲氧基琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-缬氨酸-4-硝基酰苯胺完全溶于二甲基亚砜后，再加入hepes缓冲溶液(与r1中相同)溶解即得r2试剂，每升r2试剂中含有3.7mmoln-甲氧基琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-缬氨酸-4-硝基酰苯胺、19ml二甲基亚砜和0.0245moln-(2-羟乙基)哌嗪-n＇-2-乙磺酸。校准品为弹性蛋白酶溶液，其中，弹性蛋白酶的活性为7.5u/l，防腐剂为0.01％(g/ml)叠氮化钠，溶剂为r1试剂。质控品：15u/l弹性蛋白酶的乳糖冻干粉，防腐剂浓度为0.01％(g/ml)叠氮化钠，乳糖浓度为4％(g/ml)，混匀后分装4ml/瓶、冻干得到。样本处理液：含3％(ml/ml)曲拉通x-100水溶液。实施例2精液游离弹性蛋白酶检测试剂盒，包括如下成分：r1试剂：二甲基亚砜溶于hepes缓冲液，每升hepes缓冲溶液中含有1.2g聚氧乙烯月桂醚、0.1mol氯化钠和0.05moln-(2-羟乙基)哌嗪-n＇-2-乙磺酸，调节其ph＝9.0即得到hepes缓冲溶液，向此缓冲溶液中(1l)加入30ml二甲基亚砜得到r1试剂。r2试剂：将n-甲氧基琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-缬氨酸-4-硝基酰苯胺完全溶于二甲基亚砜后，再加入hepes缓冲溶液(与r1中相同)溶解即得r2试剂，每升r2试剂中含有5.0mmoln-甲氧基琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-缬氨酸-4-硝基酰苯胺、30ml二甲基亚砜、0.0485moln-(2-羟乙基)哌嗪-n＇-2-乙磺酸。校准品为弹性蛋白酶溶液，其中，弹性蛋白酶的活性为10u/l，防腐剂为0.01％(g/ml)硫酸庆大霉素，溶剂为r1试剂。质控品：20u/l弹性蛋白酶的乳糖冻干粉，防腐剂浓度为0.01％(g/ml)硫酸庆大霉素，乳糖浓度为5％(g/ml)，混匀后分装4ml/瓶、冻干得到。样本处理液：含5％(ml/ml)曲拉通x-100水溶液。实施例3精液游离弹性蛋白酶检测试剂盒，包括如下成分：r1试剂：二甲基亚砜溶于hepes缓冲液，每升hepes缓冲溶液中含有0.3g聚氧乙烯月桂醚、0.5mol氯化钠和0.01moln-(2-羟乙基)哌嗪-n＇-2-乙磺酸，调节其ph＝7.0即得到hepes缓冲溶液，向此缓冲溶液(1l)中加入8ml二甲基亚砜得到r1试剂。r2试剂：将n-甲氧基琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-缬氨酸-4-硝基酰苯胺完全溶于二甲基亚砜后，再加入hepes缓冲溶液(与r1中相同)溶解即得r2试剂，每升r2试剂中含有2.4mmoln-甲氧基琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-缬氨酸-4-硝基酰苯胺、8ml二甲基亚砜、0.0097moln-(2-羟乙基)哌嗪-n＇-2-乙磺酸。校准品为弹性蛋白酶溶液，其中，弹性蛋白酶的活性为5u/l，防腐剂proclin300的终浓度为0.03％(ml/ml)，溶剂为r1试剂。质控品：10u/l弹性蛋白酶的乳糖冻干粉，防腐剂浓度为0.03％(ml/ml)proclin300，乳糖浓度为3％(g/ml)，混匀后分装4ml/瓶、冻干得到。样本处理液：含1％(ml/ml)曲拉通x-100水溶液。实施例4实施例1～3的精液游离弹性蛋白酶检测试剂盒各成分采用如下步骤制得，其中不同实施例的各物质的质量或体积根据最终的浓度分别计算配制：(1)r1的制备工艺称定氯化钠、聚氧乙烯月桂醚和n-(2-羟乙基)哌嗪-n＇-2-乙磺酸溶解完全，用氢氧化钠溶液调节使其ph值为7.0～9.0，得到hepes缓冲溶液，再向此缓冲溶液中加入二甲基亚砜，使其浓度为0.8％～3％(ml/ml)，混匀，分装，贴标签，检验，置于2～8℃保存，待用。(2)r2的制备工艺称量一定量的n-甲氧基琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-缬氨酸-4-硝基酰苯胺于二甲基亚砜中，使其溶解完全，用hepes缓冲液定容、混匀，分装，贴标签，检验，置于2～8℃保存。(3)校准品的制备工艺称量一定量的弹性蛋白酶和防腐剂(proclin300、硫酸庆大霉素或nan3中的任意一种)于r1试剂中混匀，分装，贴标签，检验，置于2～8℃保存。(4)样本处理液的制备工艺量取一定量的曲拉通于纯化水中，混匀，分装，贴标签，检验，置于2～8℃保存。(5)质控品的制备工艺称量一定量的弹性蛋白酶、乳糖和防腐剂(proclin300、硫酸庆大霉素或nan3中的任意一种)于纯化水中，搅拌、溶解、混匀、分装4ml/瓶、冻干。真空冷冻干燥机的冻干步骤：设置冻干程序，如表2。启动真空冷冻干燥机，～30℃预冻6h后，启动冻干程序。冻干结束，放气取出，封盖，得到干粉状的质控品。表2质控品冻干程序温度(℃)时间(min)-20720-15360-1024002405180101801518020240实施例5用精液游离弹性蛋白酶检测试剂盒检测精液中游离弹性蛋白酶的活性，反应原理为：n-甲氧基琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-缬氨酸-4-硝基酰苯胺是弹性蛋白酶的一种特异性的合成荧光底物。底物n-甲氧基琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-缬氨酸-4-硝基酰苯胺能被样本中弹性蛋白酶分解产生对硝基苯胺，对硝基苯胺生成量与弹性蛋白酶活性成正比，通过测定400～420nm波长处对硝基苯胺的吸光度的变化率，即可计算出样本中弹性蛋白酶活性。其反应方程式为：具体步骤为：1、样本准备及要求手淫法采集禁欲2天的精液于采样杯中，置37℃水浴箱中液化。取液化良好的300μl精液样本于30μl样本处理液中，混合均匀，3000rpm离心10min吸取上清，即刻用于检测。不能立即检测的精液样本于-20℃可保存14天，-20℃可反复冻融3次。2、试剂准备选取实施例1～3中任意一组试剂盒。将试剂盒从2～8℃取出，于试剂仓中平衡30min，待用。3、检测方法(1)基本参数：采用迈瑞bs380型全自动生化分析仪，主/副波长：420nm/600nm；温度：37℃；方法：速率法；反应方向：上升。(2)操作步骤：(3)计算公式：样本中ne活性(u/l)＝k×△a/min+b式中，k和b分别为校准曲线的斜率和截距，通过迈瑞bs380全自动生化分析仪自动测定校准品得到；△a/min通过迈瑞bs380全自动生化分析仪自动测定样本得到。(4)质控品的赋值和检测：取4ml纯化水复溶冻干前4ml/瓶质控品，混匀后，分装，-25℃保存，备用；每天从-25℃中取出一支分装后的质控品，室温复溶、混匀，用该试剂盒检测此复溶后的质控品，检测方法和仪器的设定同本实施例样本的检测，重复检测10次，共5天，统计分析5天共50个数据，求平均值和标准差(s)，以为质控线绘制质控图；以后复溶混匀的质控品随着样本一起检测(检测方法同上述检测方法)，根据质控品的检测结果判断样本检测结果是否在控。4、该试剂盒的主要性能指标(1)试剂空白吸光度(420nm，光径1cm)≤0.15；(2)试剂空白吸光度变化率(δa/min)≤0.0008；(3)线性范围：[0.5～50]u/l，r≥0.990；(4)重复性：cv≤8％；(5)准确度(相对偏差)：-10％≤b≤10％；(6)校准品均一性：cv≤5％。5、报告结果样本检测结束后，以汇总报告的形式输出。6、参考区间根据正常生育男性精液样本中游离弹性蛋白酶活性检测结果呈偏态分布并结合该试剂盒的临床意义，以第95百分位数确定正常参考值区间，精液游离弹性蛋白酶检测试剂盒的正常参考区间为≤4.4u/l。7、临床适应症本试剂盒用于体外检测精液中游离弹性蛋白酶的活性。弹性蛋白酶是机体内能水解弹性蛋白的酶，存在于中性粒细胞中。当炎症发生于男性生殖系统时，由中性粒细胞释放弹性蛋白酶，随后，α1-蛋白酶抑制剂与弹性蛋白酶结合形成复合物，使之失去活性。而未能被结合的游离弹性蛋白酶能刺激细胞合成活性氧自由基，导致细胞损伤甚至死亡。因此检测精液中游离弹性蛋白酶的活性可以直接反映男性生殖系统炎症程度，为男性不育诊断提供可靠依据。实施例6用精液游离弹性蛋白酶检测试剂盒检测精液中游离弹性蛋白酶的活性，具体步骤为：1、样本准备及要求手淫法采集禁欲7天的精液于采样杯中，置37℃水浴箱中液化。取液化后的300μl精液样本于60μl样本处理液中，混合均匀，12000rpm离心5min，吸取上清用于检测。2、试剂准备选取实施例1～3中任意一组试剂盒。将试剂盒从8℃取出，于试剂仓中平衡30min，待用。3、检测方法(1)基本参数：采用奥林巴斯au400型全自动生化分析仪，主/副波长：400nm/700nm；温度：37℃；方法：速率法；反应方向：上升。(2)操作步骤：(3)计算公式：样本中ne活性(u/l)＝k×△a/min+b式中，k和b分别为校准曲线的斜率和截距，通过奥林巴斯au400全自动生化分析仪自动测定校准品得到；△a/min通过奥林巴斯au400全自动生化分析仪自动测定样本得到。(4)质控品的赋值和检测：取4ml纯化水复溶冻干前4ml/瓶质控品，混匀后，分装，-20℃保存，备用；每天从-20℃中取出一支分装后的质控品，室温复溶、混匀，用本实施例的试剂盒检测此复溶后的质控品，检测方法和仪器的设定同本实施例样本的检测，重复检测5次，共20天，统计分析20天共100个数据，求平均值和标准差(s)，以为质控线绘制质控图；以后复溶混匀的质控品随着样本一起检测(检测方法同上述检测方法)，根据质控品的检测结果判断样本检测结果是否在控。试验例1采用实施例5的检测方法和实施例1所制备的试剂盒确认该试剂盒的定标、样本1和样本2检测结果，各反应曲线如图1所示。由图1可知，当该试剂盒中的r1试剂加入后于第10周期(1周期＝12s)加入样本/校准品，再孵育5min(25个周期)加入r2试剂，孵育2min后计算吸光度的变化率。由此可见，该试剂盒相对于elisa方法组成简单，不需要终止液，可实时监测反应过程，检测时间短，适用于临床上大批量样本的检测。同时采用实施例2和3的试剂盒或者实施例6的检测方法，结果与上述类似。试验例2采用实施例5的检测方法和实施例1所制备的试剂盒确认该试剂盒的线性范围。线性范围确认：用含0.5、1、2、5、10、15、20、25、30、40、50u/l弹性蛋白酶标准品进行检测，每个活性重复检测3次，分别求出每个活性检测结果的均值(yi)。以理论活性为自变量，以每个活性检测结果均值为因变量求出线性回归方程，并计算线性回归的相关系数。将理论活性代入线性回归方程，计算理论活性的估计值及检测均值与估计值的相对偏差，结果如表3。表3试剂盒线性范围参数确认检测结果由表3可知，通过该试验例说明试剂盒在[0.5～50]u/l内理论活性与检测活性呈现很好的线性关系。因为该试剂盒的参考区间为：≤4.4u/l，临床上正常样本中游离弹性蛋白酶的活性很低，故定义该试剂盒的线性范围为[0.5～50]u/l。同时采用实施例2和3的试剂盒或者实施例6的检测方法，结果与上述类似。试验例3采用实施例5的检测方法和实施例1所制备的试剂盒进行试剂盒的最低检测限确定。最低检测限的确定方法：以5％牛血清白蛋白溶液作为空白样本重复测定20次，计算20次结果的均值与标准差，以空白均值加两倍标准差确定为试剂盒最低检测限。结果如表4所示。表4试剂盒的最低检测限检测结果由表4的结果可知，该试剂盒最低检测限为0.26u/l。结合表3，试剂盒的线性范围[0.5～50]u/l，说明试剂盒在检测低值样本(正常样本)时检测结果可靠。同时采用实施例2和3的试剂盒或者实施例6的检测方法，结果与上述类似。试验例4采用实施例5的方法和实施例1所制备的试剂盒进行试剂盒的重复性评价。重复性确定方法：分别用该试剂盒测定3份精液样本，重复检测10次，取平均值按下列公式计算每份样本变异系数(cv)，式中，重复检测10次所得结果的平均值；s：重复检测10次所得结果的标准差；结果如表5所示。表5试剂盒重复性检测结果由表5的结果可知，该试剂盒检测结果的重复性较好，同时采用实施例2和3的试剂盒或者实施例6的检测方法，结果与上述类似。试验例5采用实施例5的检测方法，分别采用实施例1～3所制备的试剂盒进行试剂盒的准确性检测。检测方法：分别使用不同实施例的试剂盒检测企业内部质控品(弹性蛋白酶活性为10u/l)，重复检测3次，计算测试结果的平均值(m)，按下列公式计算相对偏差(b)。式中：m：测试结果的平均值；t：企业内部质控品定值。结果如表6所示。表6实施例1～3试剂盒的准确度检测结果从表6的结果可知，试剂盒的测试准确度比较好，同时采用实施例6的检测方法，结果与上述类似。结论：通过以上的试验结果表明，该试剂盒的突出优点是检测样本中游离弹性蛋白酶活性，试剂组成简单，不需要终止液，可实时监测反应过程，检测时间短；最低检测限低，线性范围宽，重复性好，检测结果准确。当前第1页12