本发明属于生物医药领域，特涉及一种具有抗焦虑功效的化合物及其制备方法。
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：：雪灵芝学名甘肃蚤缀(arenariakansuensismaxim.)，系石竹科蚤缀属多年生垫状草本植物，主要生于青藏高原海拔3700～5500m的高山草甸和砾石流带。雪灵芝以全草入药，其性味苦、寒，有清热利肺、止咳、散肿、降血压、通淋止痛之功效，常用于黄疸、淋病、子宫病、肺炎及各种肺病的治疗。中亚紫菀木(asterothamnuscentrali-asiaticus)是菊科紫菀木属的植物，主要生长于海拔1,300米至3,900米的草原及荒漠地区，由于其营养价值较高，目前主要作饲草用。黑果枸杞(lyciumruthenicummurr.)为茄科枸杞属的一种多年生多棘刺灌木，主要分布于我国西北盐碱荒漠地、沙地、干河床或渠路旁，其成熟果实常被用于治疗心热病、月经不调、停经等症状，民间用作滋补强壮、明目及降压药。现代研究表明，雪灵芝、中亚紫菀木、黑果枸杞的化学成分主要包括黄酮和生物碱类以其较强的抗炎、抗氧化活性被人孰知，而抗焦虑活性研究还未见文献报道。目前，从雪灵芝、中亚紫菀木和黑果枸杞中分离制备出8个黄酮类化合物(图1)的抗焦虑活性研究未见文献报道。γ-氨基丁酸蛋白a受体(gaba-a受体)为配体闸门离子通道超家族成员之一，是由镶嵌于神经细胞质膜中的5个亚基组成的五边形异质性多肽类寡聚体。自70年代末被确认其存在以来，有关gaba-a受体的研究引起了相当大的关注。其原因是：(1)gaba是哺乳动物中枢神经系统中主要的抑制性神经递质，约50％的中枢突触部位使用gaba作为递质，通过其特异受体的介导，在控制神经元兴奋性方面发挥重要作用；(2)至少有4种互相变构的药物结合位点存在于同一受体复合物上，包括镇静剂苯二氮类、抑制剂巴比妥类、痉挛剂印防己毒素、神经活性甾体类，具有丰富的药理学内涵。随着现代社会生活、工作节奏加快，各种压力加剧，应激性心理障碍和神经系统性疾病发病率逐年上升。近些年，尤其是焦虑症和抑郁症罹患人数日益增多。2015年，据不完全统计，我国抑郁症发病率高达5％-6％；另据一项流行病学调查估算，中国抑郁焦虑患者已达9000万人。目前市场上常用于治疗焦虑的药物主要有地西泮、阿普唑仑、劳拉西泮、帕罗西汀等，虽然见效快，但都具有严重的副作用，如产生依赖、嗜睡、恶心、头痛、学习和记忆能力下降等，加之效果持续时间短、不适合长期使用，从而使这些药物的应用受到很大限制。近年来抗焦虑药的研发虽有一定进展，但仍缺乏较为理想的药物。因此，寻找并开发出天然的、高效低副作用的抗焦虑药物十分必要。近些年，基于gaba-a受体介导的抗焦虑药研发取得了一些进展，中国专利cn200980120286报道了一种gaba-a受体调节剂三唑并喹唑啉酮类化合物，在哺乳动物中具有抗焦虑、抗惊厥、镇静催眠等作用；中国专利cn201010604032报道了一种抗焦虑的药物及其制备方法，涉及红景天、贯叶连翘、天麻、熟地原料药配制而成，动物实验表明，能明显升高血清中抑制性神经递质gaba的分泌水平，提高小鼠抗焦虑的行为能力，但并未揭示原料药抗焦虑的药效物质基础。技术实现要素：为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种具有抗焦虑功效的化合物及其制备方法，以青海特色药用植物雪灵芝、中亚紫菀木、黑果枸杞为原料、成功筛选出含量高的抗焦虑活性化合物。为实现本发明的目的，本发明采用的技术方案如下；一种具有抗焦虑功效的化合物，其特征在于，所述化合物有8种，其结构式如下：其中化合物一：r1＝och3,r2＝oh,r3＝och3,r4＝oh,r5＝h(5,7,4’-trihydroxy-6,8-dimethoxyflavone)化合物二：r1＝och3,r2＝och3,r3＝oh,r4＝oh,r5＝h(6,7-dimethoxy-5,8,4’-trihydroxyflavone)化合物三：r1＝h,r2＝oh,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(apigenin)化合物四：r1＝och3,r2＝oh,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(hispidulin)化合物五：r1＝h,r2＝oh,r3＝och3,r4＝h,r5＝h(wogonin)化合物六：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(cirsimaritin)化合物七：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝och3,r5＝h(salvigenin)化合物八：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝oh,r5＝och3(cirsilineol)。一种具有抗焦虑功效的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤；⑴将药材全草或果实经人工挑拣、清洗、除杂后，室内阴干，得到全草干样或干果，经粉碎，过20～320目筛，得到药材粉；⑵将上述药材粉与体积分数为20～100％的乙醇按1：8～100(g/ml)的料液体积比在30～90℃温度下进行加热提取，0.5～72h后得到浸提液；⑶所述浸提液经胶体磨研磨1～10次后，得到胶体状浸提溶液，再在5～200mpa的压力下进行均质后，经离心分离，得到上清液和滤渣；⑷弃滤渣，将上清液过大孔树脂，先用去离子水洗脱至无糖，再用2～40倍床层体积、体积分数为20～100％的乙醇溶液洗脱，将得到的醇溶液浓缩至浸膏，经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，收集各萃取部位；⑸将萃取部分经微孔树脂(mci)以及硅胶柱处理，利用二维反相/亲水色谱分析制备方法，制得单体化合物；⑹通过a型γ-氨基丁酸蛋白受体(gaba-a受体)介导的行为效应以及高架十字迷宫实验(elevatedplusmaze)、孔板实验(holeboardtest)、运动协调实验(motorcoordinationtest)或动物行为学实验，筛选出8个具有抗焦虑活性的化合物(编号为1、2、3、4、5、6、7、8)，如图1所示，其中，化合物dms为上述8个活性化合物中的一个。所述药材全草或果实为青海特色药用植物雪灵芝、中亚紫菀木、黑果枸。所述步骤⑶中的胶体磨的转子转速为2000r/min～20000r/min；使用的高压均质机为连续对射型(如图2)，是在撞击阀体型(如图3)的基础上改装所得；离心速度为2000～20000r/min，离心时间为10～60min。所述步骤⑷中所用大孔吸附树脂类型有hpd300、d101、ab-8、nka-9、hp-20。所述步骤⑸中涉及的微孔树脂(mci)颗粒大小为10～300μm；涉及的色谱柱有unitaryc18、symmetryc18、megressc18、hedera-ods-c18、dubhec18、rp-c18hce、eclipsexdb、zorbaxstablebond、xamide、xaquac3。所述步骤⑹中化合物通过对gaba-a受体的别构调节来增强γ-氨基丁酸(gaba)对受体的作用，作用位点为苯二氮位点。本发明与现有技术相比具有以下优点：1、由于本发明将胶体磨磨合技术与高压均质技术联合应用，因此，不仅有效地缩短了提取时间，减少了工艺过程中的提取溶剂消耗量及能耗，而且所得黄酮性质稳定，含量高，生物活性高。2、化合物通过对gaba-a受体的别构调节来增强γ-氨基丁酸(gaba)对受体的作用(图4)，作用位点为苯二氮位点，从而显著提高小鼠抗焦虑的行为能力(图5、图6)，且不产生肌肉松弛、抑郁等副作用(图7)。3、由于本发明采用资源量丰富的雪灵芝、中亚紫菀木和黑果枸杞为原料，因此，有效地降低了生产成本。4、建立的二维反相/亲水色谱系统，能纯化分离复杂样品尤其包含大量难分离的化合物样品，且所得化合物纯度高(98％以上)，同时克服了常规分离制备方法在样品制备、选择性和分离效率方面的局限性。5、筛选出的8个黄酮化合物，不仅可利用二维反相/亲水色谱系统易于分离制备得到，而且抗焦虑活性高，还不产生肌肉松弛、抑郁等副作用。6、本发明所涉及的仪器、设备、耗材操作简便，技术参数易于控制，适应范围广，可用于工业化大规模生产，形成生物医药产品产业链。本发明涉及的一种具有抗焦虑功效的化合物筛选及制备方法，在提取制备方法上结合了胶体磨高压均质联用技术；目前，生产企业使用的高压均质机主要是撞击阀体型(图3)，由于溶液中的物料与撞击阀剧烈碰撞，会形成许多金属微粒，这样生产出的产品很不利于人体健康；本发明使用的高压均质机为连续对射型(图2)，是在撞击阀体型的基础上改装所得，主要利用对射流原理及独特的灯罩形结构，使高压溶液中高速运动的物料颗粒自相碰撞，同时经过连续两次均质，均质效率显著提高。因此，使用连续对射型高压均质机，不仅解决了金属微粒残落问题，延长腔体使用寿命，还使均质性能显著增加，活性成分更加稳定，工作效率也得到大大的提高。此外，基于不同色谱柱选择和反向/亲水混合模式建立的二维反相/亲水色谱系统，可使其在纯化分离复杂样品尤其包含大量难分离的化合物时能够发挥很大的作用，同时克服了常规分离制备方法在样品制备、选择性和分离效率方面的局限性。本发明关键技术及创新点：a.本发明综合利用胶体磨与高压均质联合技术应用于黄酮类化合物的提取中，不仅大大提高了工作效率，而且所得黄酮性质稳定，含量高；通过系统对比研究，发现改装后的连续对射型高压均质机，在均质性能、工作效率、生产及产品安全等方面与撞击阀体型均质机明显提高，且适合于规模化生产；b.基于不同色谱柱选择和反向/亲水混合模式建立的二维反相/亲水色谱系统，不仅使复杂样品(包含大量难分离的化合物)得到分离纯化，且纯度高(超过98％)，同时克服了常规分离制备方法在样品制备、选择性和分离效率方面的局限性；c.基于gaba-a受体介导的、从青海特色药用植物中筛选出具有抗焦虑的天然活性化合物，不仅易于分离制备得到，活性高，还不产生肌肉松弛、抑郁等副作用。附图说明图1为高压均质机连续对射型示意图图2为高压均质机撞击阀体型示意图图3为活性化合物dmb抑制[3h]氟硝西泮结合示意图图4为高架十字迷宫实验(elevatedplusmazeassay)示意图图5为孔板实验(holeboardtest)示意图图6为水平抓线实验(horizontalwiretest)示意图图7为旋杆实验(rotarodtest)示意图图8为活动能力实验(locomotoractivitytest)示意图具体实施方式实施例1一种具有抗焦虑功效的化合物，所述化合物其结构式如下：其中化合物一：r1＝och3,r2＝oh,r3＝och3,r4＝oh,r5＝h(5,7,4’-trihydroxy-6,8-dimethoxyflavone)化合物二：r1＝och3,r2＝och3,r3＝oh,r4＝oh,r5＝h(6,7-dimethoxy-5,8,4’-trihydroxyflavone)化合物三：r1＝h,r2＝oh,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(apigenin)化合物四：r1＝och3,r2＝oh,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(hispidulin)化合物五：r1＝h,r2＝oh,r3＝och3,r4＝h,r5＝h(wogonin)化合物六：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(cirsimaritin)化合物七：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝och3,r5＝h(salvigenin)化合物八：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝oh,r5＝och3(cirsilineol)。一种具有抗焦虑功效的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤；⑴将药材全草经人工挑拣、清洗、除杂后，室内阴干，得到全草干样，经粉碎，过20目筛，得到药材粉；⑵将上述药材粉与体积分数为20％的乙醇按1：8(g/ml)的料液体积比在30℃温度下进行加热提取，0.5h后得到浸提液；⑶所述浸提液经胶体磨研磨1次后，得到胶体状浸提溶液，再在5mpa的压力下进行均质后，经离心分离，得到上清液和滤渣；⑷弃滤渣，将上清液过大孔树脂，先用去离子水洗脱至无糖，再用2倍床层体积、体积分数为20％的乙醇溶液洗脱，将得到的醇溶液浓缩至浸膏，经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，收集各萃取部位；⑸将萃取部分经微孔树脂(mci)以及硅胶柱处理，利用二维反相/亲水色谱分析制备方法，制得单体化合物；⑹通过a型γ-氨基丁酸蛋白受体(gaba-a受体)介导的行为效应以及高架十字迷宫实验(elevatedplusmaze)、孔板实验(holeboardtest)、运动协调实验(motorcoordinationtest)或动物行为学实验，筛选出8个具有抗焦虑活性的化合物(编号为1、2、3、4、5、6、7、8)，如图1所示，其中，化合物dms为上述8个活性化合物中的一个。所述药材全草或果实为青海特色药用植物雪灵芝、中亚紫菀木、黑果枸。所述步骤⑶中的胶体磨的转子转速为2000r/min；使用的高压均质机为连续对射型(如图2)，是在撞击阀体型(如图3)的基础上改装所得；离心速度为2000r/min，离心时间为10min。所述步骤⑷中所用大孔吸附树脂类型有hpd300。所述步骤⑸中涉及的微孔树脂(mci)颗粒大小为100μm；涉及的色谱柱有unitaryc18、symmetryc18、megressc18、hedera-ods-c18、dubhec18、rp-c18hce、eclipsexdb、zorbaxstablebond、xamide、xaquac3。所述步骤⑹中化合物通过对gaba-a受体的别构调节来增强γ-氨基丁酸(gaba)对受体的作用，作用位点为苯二氮位点。实施例2一种具有抗焦虑功效的化合物，所述化合物其结构通式如下：其中化合物一：r1＝och3,r2＝oh,r3＝och3,r4＝oh,r5＝h(5,7,4’-trihydroxy-6,8-dimethoxyflavone)化合物二：r1＝och3,r2＝och3,r3＝oh,r4＝oh,r5＝h(6,7-dimethoxy-5,8,4’-trihydroxyflavone)化合物三：r1＝h,r2＝oh,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(apigenin)化合物四：r1＝och3,r2＝oh,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(hispidulin)化合物五：r1＝h,r2＝oh,r3＝och3,r4＝h,r5＝h(wogonin)化合物六：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(cirsimaritin)化合物七：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝och3,r5＝h(salvigenin)化合物八：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝oh,r5＝och3(cirsilineol)。一种具有抗焦虑功效的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤；⑴将药材果实经人工挑拣、清洗、除杂后，室内阴干，得到干果，经粉碎，过320目筛，得到药材粉；⑵将上述药材粉与体积分数为20～100％的乙醇按1：100(g/ml)的料液体积比在90℃温度下进行加热提取，72h后得到浸提液；⑶所述浸提液经胶体磨研磨0次后，得到胶体状浸提溶液，再在200mpa的压力下进行均质后，经离心分离，得到上清液和滤渣；⑷弃滤渣，将上清液过大孔树脂，先用去离子水洗脱至无糖，再用40倍床层体积、体积分数为100％的乙醇溶液洗脱，将得到的醇溶液浓缩至浸膏，经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，收集各萃取部位；⑸将萃取部分经微孔树脂(mci)以及硅胶柱处理，利用二维反相/亲水色谱分析制备方法，制得单体化合物；⑹通过a型γ-氨基丁酸蛋白受体(gaba-a受体)介导的行为效应以及高架十字迷宫实验(elevatedplusmaze)、孔板实验(holeboardtest)、运动协调实验(motorcoordinationtest)或动物行为学实验，筛选出8个具有抗焦虑活性的化合物(编号为1、2、3、4、5、6、7、8)，如图1所示，其中，化合物dms为上述8个活性化合物中的一个。所述药材全草或果实为青海特色药用植物雪灵芝、中亚紫菀木、黑果枸。所述步骤⑶中的胶体磨的转子转速为20000r/min；使用的高压均质机为连续对射型，是在撞击阀体型的基础上改装所得；离心速度为20000r/min，离心时间为60min。所述步骤⑷中所用大孔吸附树脂类型有d101。所述步骤⑸中涉及的微孔树脂(mci)颗粒大小为300μm；涉及的色谱柱有unitaryc18、symmetryc18、megressc18、hedera-ods-c18、dubhec18、rp-c18hce、eclipsexdb、zorbaxstablebond、xamide、xaquac3。所述步骤⑹中化合物通过对gaba-a受体的别构调节来增强γ-氨基丁酸(gaba)对受体的作用，作用位点为苯二氮位点。实施例3一种具有抗焦虑功效的化合物，其特征在于，所述化合物其结构式如下：其中化合物一：r1＝och3,r2＝oh,r3＝och3,r4＝oh,r5＝h(5,7,4’-trihydroxy-6,8-dimethoxyflavone)化合物二：r1＝och3,r2＝och3,r3＝oh,r4＝oh,r5＝h(6,7-dimethoxy-5,8,4’-trihydroxyflavone)化合物三：r1＝h,r2＝oh,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(apigenin)化合物四：r1＝och3,r2＝oh,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(hispidulin)化合物五：r1＝h,r2＝oh,r3＝och3,r4＝h,r5＝h(wogonin)化合物六：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(cirsimaritin)化合物七：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝och3,r5＝h(salvigenin)化合物八：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝oh,r5＝och3(cirsilineol)。一种具有抗焦虑功效的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤；⑴将药材全草经人工挑拣、清洗、除杂后，室内阴干，得到全草干样，经粉碎，过200目筛，得到药材粉；⑵将上述药材粉与体积分数为75％的乙醇按1：50(g/ml)的料液体积比在50℃温度下进行加热提取，0.5～72h后得到浸提液；⑶所述浸提液经胶体磨研磨1～10次后，得到胶体状浸提溶液，再在100mpa的压力下进行均质后，经离心分离，得到上清液和滤渣；⑷弃滤渣，将上清液过大孔树脂，先用去离子水洗脱至无糖，再用20倍床层体积、体积分数为50％的乙醇溶液洗脱，将得到的醇溶液浓缩至浸膏，经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，收集各萃取部位；⑸将萃取部分经微孔树脂(mci)以及硅胶柱处理，利用二维反相/亲水色谱分析制备方法，制得单体化合物；⑹通过a型γ-氨基丁酸蛋白受体(gaba-a受体)介导的行为效应以及高架十字迷宫实验(elevatedplusmaze)、孔板实验(holeboardtest)、运动协调实验(motorcoordinationtest)或动物行为学实验，筛选出8个具有抗焦虑活性的化合物(编号为1、2、3、4、5、6、7、8)，如图1所示，其中，化合物dms为上述8个活性化合物中的一个。所述药材全草或果实为青海特色药用植物雪灵芝、中亚紫菀木、黑果枸。所述步骤⑶中的胶体磨的转子转速为15000r/min；使用的高压均质机为连续对射型，是在撞击阀体型的基础上改装所得；离心速度为10000r/min，离心时间为30min。所述步骤⑷中所用大孔吸附树脂类型有ab-8。所述步骤⑸中涉及的微孔树脂(mci)颗粒大小为150μm；涉及的色谱柱有unitaryc18、symmetryc18、megressc18、hedera-ods-c18、dubhec18、rp-c18hce、eclipsexdb、zorbaxstablebond、xamide、xaquac3。所述步骤⑹中化合物通过对gaba-a受体的别构调节来增强γ-氨基丁酸(gaba)对受体的作用，作用位点为苯二氮位点。实施例4一种具有抗焦虑功效的化合物，其特征在于，所述化合物其结构式如下：其中化合物一：r1＝och3,r2＝oh,r3＝och3,r4＝oh,r5＝h(5,7,4’-trihydroxy-6,8-dimethoxyflavone)化合物二：r1＝och3,r2＝och3,r3＝oh,r4＝oh,r5＝h(6,7-dimethoxy-5,8,4’-trihydroxyflavone)化合物三：r1＝h,r2＝oh,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(apigenin)化合物四：r1＝och3,r2＝oh,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(hispidulin)化合物五：r1＝h,r2＝oh,r3＝och3,r4＝h,r5＝h(wogonin)化合物六：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝oh,r5＝h(cirsimaritin)化合物七：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝och3,r5＝h(salvigenin)化合物八：r1＝och3,r2＝och3,r3＝h,r4＝oh,r5＝och3(cirsilineol)。一种具有抗焦虑功效的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤；⑴将药材全草经人工挑拣、清洗、除杂后，室内阴干，得到全草干样，经粉碎，过180目筛，得到药材粉；⑵将上述药材粉与体积分数为60％的乙醇按1：60(g/ml)的料液体积比在60℃温度下进行加热提取，42h后得到浸提液；⑶所述浸提液经胶体磨研磨8次后，得到胶体状浸提溶液，再在120mpa的压力下进行均质后，经离心分离，得到上清液和滤渣；⑷弃滤渣，将上清液过大孔树脂，先用去离子水洗脱至无糖，再用15倍床层体积、体积分数为45％的乙醇溶液洗脱，将得到的醇溶液浓缩至浸膏，经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，收集各萃取部位；⑸将萃取部分经微孔树脂(mci)以及硅胶柱处理，利用二维反相/亲水色谱分析制备方法，制得单体化合物；⑹通过a型γ-氨基丁酸蛋白受体(gaba-a受体)介导的行为效应以及高架十字迷宫实验(elevatedplusmaze)、孔板实验(holeboardtest)、运动协调实验(motorcoordinationtest)或动物行为学实验，筛选出8个具有抗焦虑活性的化合物(编号为1、2、3、4、5、6、7、8)，如图1所示，其中，化合物dms为上述8个活性化合物中的一个。所述药材全草或果实为青海特色药用植物雪灵芝、中亚紫菀木、黑果枸。所述步骤⑶中的胶体磨的转子转速为10000r/min；使用的高压均质机为连续对射型，是在撞击阀体型的基础上改装所得；离心速度为18000r/min，离心时间为40min。所述步骤⑷中所用大孔吸附树脂类型有nka-9。所述步骤⑸中涉及的微孔树脂(mci)颗粒大小为150μm；涉及的色谱柱有unitaryc18、symmetryc18、megressc18、hedera-ods-c18、dubhec18、rp-c18hce、eclipsexdb、zorbaxstablebond、xamide、xaquac3。所述步骤⑹中化合物通过对gaba-a受体的别构调节来增强γ-氨基丁酸(gaba)对受体的作用，作用位点为苯二氮位点。当前第1页12当前第1页12