本发明领域属于药物合成领域，具体涉及一种用于治疗炎症的大麻素受体激动剂4-(4-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯及其合成工艺。
背景技术：
：大麻素受体（cannabinoidreceptors）是g蛋白偶联受体超家族中一类细胞膜受体，位于全身，属于内源性大麻素系统的一部分，其涉及各种生理过程，包括食欲，疼痛感，心情和记忆。正如通常的g蛋白偶联受体一样，大麻素受体含有七个跨膜跨膜结构域。大麻素受体由三种主要的配体活化：由哺乳动物体产生的内源性大麻素;植物大麻素（如大麻植物生产的大麻二醇）和合成大麻素（如hu-210）。所有的内源性大麻素和植物大麻素都是亲脂性的，例如脂溶性化合物。大麻素受体接受受体后，多个细胞内信号转导途径被激活。起初，大麻素受体主要抑制腺苷酸环化酶（从而产生第二信使分子环amp），并且积极影响内向整流钾通道（kir或irk）。然而，在不同的细胞类型中出现了更复杂的情况，其他钾离子通道，钙通道，蛋白激酶a和c，raf-1，erk，jnk，p38，c-fos，c-jun等都有可能受其影响。目前有两种已知的大麻素受体亚型，称为cb1和cb2。cb1受体主要在脑（中枢神经系统或“cns”）中表达，但也在肺，肝和肾中表达。cb2受体主要在免疫系统和造血细胞中表达。证据表明，存在新的大麻素受体，即在内皮细胞和cns中表达的非cb1和非cb2。cb1和cb2受体的蛋白质序列约为44％。当仅考虑受体的跨膜区时，两种受体亚型之间的氨基酸相似性约为68％。此外，已经确定了每种受体的微小变化。大麻素与大麻素受体可逆地立体选择性结合。已经开发了亚型选择性大麻素，其理论上可能具有治疗某些疾病如肥胖症的优点。研究表明，人和啮齿动物的心肌细胞，冠状动脉内皮细胞和炎症细胞中cb1受体的活化促进了体外激活丝裂原活化蛋白（map）激酶p38和jnk，活性氧生成，细胞死亡和心血管炎症反应。基于大麻素受体在众多疾病中的重要作用，开发新型的大麻素受体激动剂在治疗炎症方面具有很大的医疗价值。技术实现要素：本发明提供的化合物4-(4-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯能激活大麻素受体，具有治疗炎症的潜在应用。为了能进一步展开对大麻素受体激动剂4-(4-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯后续的药学试验，本发明提供了一种能较大规模的制备4-(4-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯，并且其纯度能满足后续试验的要求。本发明采用如下的路线合成用于治疗炎症的大麻素受体激动剂4-(4-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯，所述工艺的路线如下；。4-(4-甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯2的合成条件为：将4-氨基烟酸甲酯1、4-甲基-1-萘甲酸（1-3当量）、碱b1（1-5当量）、dmap（0.1-5当量）和溶剂s1（1-20倍体积）混合，于20-80℃下搅拌12-20小时；向体系中加入溶剂s2（1-20倍体积），搅拌2-5小时，过滤得到4-(4-甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯2。碱b1选自三乙胺、二异丙基乙基胺、dbu、dabco或n-甲基吗啉；优选的碱b1是三乙胺、二异丙基乙基胺或n-甲基吗啉。溶剂s1选自二甲基甲酰胺、二氧六环、四氢呋喃、乙腈或二氯甲烷；优选的溶剂s1是二甲基甲酰胺、四氢呋喃或二氯甲烷。溶剂s2选自水、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯或正庚烷；优选的溶剂s2是水、甲苯或正庚烷。4-(4-溴甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯3的合成条件为：将4-(4-甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯2、溴代试剂（1-5当量）、过氧化苯甲酰（0.1-1当量）和溶剂s3（1-20倍体积）混合，于60-120℃下搅拌1-4小时；降温至20-30℃，向体系中加入水（1-20倍体积），分液得到有机相；向有机相中加入溶剂s4（1-20倍体积），搅拌1-2小时，过滤得到4-(4-溴甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯3。溴代试剂选自n-溴代丁二酰亚胺、二溴海因或n-溴乙酰胺；优选的溴代试剂是液溴、二溴海因或n-溴代丁二酰亚胺，最优选的溴代试剂是n-溴代丁二酰亚胺。溶剂s3选自二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二氯甲烷、氯仿或四氯化碳；优选的溶剂s3是二氯甲烷、氯仿或四氯化碳。溶剂s4选自乙腈、甲苯、四氢呋喃、乙酸乙酯或正庚烷；优选的溶剂s4是甲苯、乙酸乙酯或正庚烷。4-(4-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯的合成条件为：将4-(4-溴甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯3、1,2,3-三唑（1-5当量）、碱b2（1-5当量）和溶剂s5（1-20倍体积）混合，于50-100℃下搅拌15-20小时；向体系中加入水（1-20倍体积），搅拌1-3小时，过滤得到4-(4-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯。碱b2选自三乙胺、二异丙基乙基胺、碳酸钾、氢氧化钾或吡啶；优选的碱b2是碳酸钾、氢氧化钾或吡啶。溶剂s5选自二氯甲烷、乙腈、二甲基甲酰胺、四氢呋喃或乙酸乙酯；优选的溶剂s5是二氯甲烷、二甲基甲酰胺或乙酸乙酯；最优选的溶剂s5是二甲基甲酰胺。本发明所用的合成条件和方法，操作简单，原料廉价易购买，生产周期短，可以较大规模的制备大麻素受体激动剂4-(4-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯，为后续的药学试验提供足够的4-(4-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯。本发明通过4-氨基烟酸甲酯1与4-甲基-1-萘甲酸发生酰化反应，得到4-(4-甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯2。随后，4-(4-甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯2在n-溴代丁二酰亚胺的作用下溴化，得到的4-(4-溴甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯3与1,2,3-三唑缩合得到4-(4-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明作进一步说明：实施例14-(4-甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯2的合成条件为：将4-氨基烟酸甲酯1（22g）、4-甲基-1-萘甲酸（70g）、三乙胺（44g）、dmap（7g）和二氯甲烷（120ml）混合，于20-80℃下搅拌12-20小时；向体系中加入甲苯（150ml），搅拌2-5小时，过滤得到4-(4-甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯2（34g）。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ=2.77(s,3h),4.00(s,3h),7.42(d,1h),7.55−7.66(m,3h),7.80(d,1h),8.03−8.14(m,1h),8.49(dd,1h),8.53−8.6(m,1h),9.42(dd,1h),11.59(s,1h)ppm;m/z(ms-esi):321.35[m+1]+.4-(4-溴甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯3的合成条件为：将4-(4-甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯2（26g）、n-溴代丁二酰亚胺（22g）、过氧化苯甲酰（10g）和氯仿（60ml）混合，于60-120℃下搅拌1-4小时；降温至20-30℃，向体系中加入水（100ml），分液得到有机相；向有机相中加入甲苯（320ml），搅拌1-2小时，过滤得到4-(4-溴甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯3。hplc纯度99％（保留时间:10.7min.）;1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ=3.85(s,3h),6.22(s,2h),7.45(d,1h),7.64−7.75(m,3h),7.79(s,1h),7.82(d,1h),8.22(s,1h),8.33(dd,1h),8.39(dd,1h),8.46−8.54(m,2h),11.12(s,1h)ppm;m/z(ms-esi):400.42[m+1]+.4-(4-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯的合成条件为：将4-(4-溴甲基-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯3（22g）、1,2,3-三唑（6g）、吡啶（9g）和二甲基甲酰胺（90ml）混合，于50-100℃下搅拌15-20小时；向体系中加入水（180ml），搅拌1-3小时，过滤得到4-(4-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-萘甲酰胺)烟酸甲酯（17g，80%）。hplc纯度99％（保留时间:17.1min.）;1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ=3.83(s,3h),6.21(s,2h),7.44(d,1h),7.66−7.74(m,3h),7.77(s,1h),7.85(d,1h),8.23(s,1h),8.32(dd,1h),8.38(dd,1h),8.46−8.52(m,2h),11.06(s,1h)ppm;13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ=165.9,164.8,155.0,151.4,148.9,140.5,133.9,133.6,131.8,131.2,129.8,128.9,126.2,124.7,123.1,120.3,108.2,104.7,53.6,51.3ppm;m/z(ms-esi):388.21[m+1]+.生物活性研究hcb1和hcb2受体结合试验使用表达克隆的hcb2受体的杆状病毒系统从表达克隆的hcb1受体（克隆编号24）或sf9细胞的hek293s细胞产生膜。将膜在37℃解冻，通过23号钝头针3次，并在大麻素结合缓冲液（50mmtris，2.5mmedta，5mmmgcl2和0.5mg/ml不含bsa脂肪酸，ph7.4）中，并将含有适量蛋白质的80μl等分试样分配在96孔板中。使用每孔20000-25000dpm（0.17-0.21nm）的3h-cp55940（70μl）在10μm的剂量反应曲线中评价本发明化合物（150μl）在hcb1和hcb2处的ic50值，最终体积为300μl。在不存在和存在0.2μmhu210（150μl）的情况下测定总和非特异性结合。将平板涡旋振荡，在室温下温育60分钟，并用packard收获机使用3ml洗涤缓冲液（50mmtris，5mmmgcl2，0.05％bsa，ph7.5）通过unifiltersgf/b（预浸在0.1％聚乙烯亚胺中）ph7.0）。过滤器在55℃下干燥1小时。以tb-ns计算特异性结合（sb），并且在各种配体存在下的sb以对照sb的百分比表示。用xlfit4（idbs，inc.）在activitybase中计算取代特异性结合的放射性配体的配体的ic50值和hill系数（nh）。另外。还通过activitybase计算使用的化合物浓度和稀释度。在加入65μl/孔microscint20（packardbiosciences）闪烁液后，在topcount（packard）中计数放射性（cpm）。gtpγ[35s]结合试验在hek293s细胞的膜中克隆的人cb1受体或在sf9细胞的膜中克隆的人cb2受体测量gtpγ[35s]结合。将膜在37℃解冻，通过23号钝头针3次，用gtpγ[35s]结合缓冲液（50mmn-2-羟乙基哌嗪-n-乙磺酸（hepes））稀释，20mmnaoh，100mmnacl，1mmedta，5mmmgcl2，ph7.4,0.1％bsa和15μmgdp）。从10点剂量-响应曲线评估化合物在hcb1和hcb2处的ec50和emax。在96孔板中进行的测定由300μl组成，其中含有150μl单独的缓冲液或不同浓度的化合物，80μl与56μmgdp（15μm终浓度）混合的膜（5μg蛋白质/孔）。最后，加入70μl示踪剂gtpγ[35s]（dupont/nen，mandelscientific，st-laurent）（100000-130000dpm/孔）以开始反应。8孔用于定义基础（阴性对照）结合，另外8孔使用10μmrimonabant，用于阳性对照（最大结合）。然后将板在轨道式混合器上手动混合并在室温下孵育1小时，在unifiltersgf/b（在去离子水中预浸），使用3ml洗涤缓冲液（50mmtris，5mmmgcl2，50mmnacl，ph7.4）与packard收获机混合。将滤膜在55℃下干燥1小时，然后加入50μlmicroscint20（packardbiosciences）闪烁液。在topcount（packard）中计数过滤板上的放射性（cpm）。将含有gtpγ[35s]和膜的8个孔中的gtpγ[35s]结合的cpm值平均以定义基础结合，并且将含有10μmrimonabant的8个孔的值平均以定义gtpγ[35s]最大结合。对每个化合物浓度观察到的gtpγ[35s]结合的刺激表示为10μmrimonabant引起的最大效应的百分比。通过减去基础结合计算gtpγ[35s]特异性结合。使用xlfit4（idbs，inc。）进行曲线拟合和ec50计算。测得的本发明化合物的生物活性数据如下所示：hcb1ic50(nm)hcb2ic50(nm)hcb1ec50(nm)hcb1emax(%)0.851101.3110当前第1页12