本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种从动物肝脏中提取肝素钠和蛋白肽的联产工艺。
背景技术：
我国是一个畜牧业生产大国，生猪、肉羊和肉牛生产总量位居世界前列，每年出栏生猪约6亿头，按每头猪的肝重量1.5公斤计算，全年猪肝产量达到90万吨，肉羊每年出栏近3亿只，全年羊肝产量达到10万吨，肉牛每年出栏近5000万头，全年牛肝产量达到20万吨，动物肝中以干物计粗蛋白含量达到75%以上，油脂含量约12%，碳水化合物9%，同时肝素含量相对较高，是一类廉价的资源十分丰富的蛋白质和肝素制取原料。然而由于各种原因，除有少量的猪肝直接烹调食用外，大部分动物肝通过初级加工制成肝渣，用于饲料工业，附加值不高，还有相当一部分被弃之浪费，造成了生物资源浪费，同时又带来严重的环境污染。猪肝中肝素虽然含量高，但是由于大量杂蛋白和类肝素存在，不易纯化，难以利用。
近年来，国内已有少数科研工作者在研究提取猪肝肝素，并取得了一些进步，但是真正实现产业化生产、产品质量达到市场收购要求的很少，而且从已有的研究报道来看，现有的技术方案基本上只是生产肝素钠一个产品，没有解决提取肝素钠后的废液和废渣的综合利用问题，生产成本高昂，开发价值不大。
技术实现要素：
本发明的目的就是为了克服现有技术的不足，提供一种原料廉价易得，操作简便，成本低廉，无浪费，无污染，综合效益显著的从动物肝脏中提取肝素钠和蛋白肽的联产工艺。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案来实现的：一种从动物肝脏中提取肝素钠和蛋白肽的联产工艺，其工艺步骤如下：
1）打浆：取鲜鲜（或经冷冻保存后自然解冻）动物肝，清洗去血水，去除筋膜，用斩拌机绞碎成肉糜状，再经细磨机研磨匀浆5-10min，得到肝浆料；
（2）盐解：往肝浆料中加入其重量3-5倍的去离子水，搅拌均匀后得肝浆液，往肝浆液中加入其重量3-6%的氯化钠，缓慢升温至40℃，用naoh调ph值至8.5-9.0，搅拌下继续升温至50-55℃，保温反应3-6小时后，快速升温至95℃，保温10min，使蛋白质高温变性，冷却至60℃，得到肝盐解液；
（3）过滤：将肝盐解液经60目滤袋过滤，分别收集滤渣（ⅰ）和滤液（ⅰ）；
（4）酶解：调整滤液（ⅰ）ph值至8.0-9.0，升温至50-55℃，按每公斤肝添加6-10克蛋白酶的比例加入2709蛋白酶，保温酶解3-5小时后，升温至85℃，保温30min灭酶，冷却至60℃，用100目滤袋过滤，分别收集滤渣（ⅱ）和滤液（ⅱ）；
（5）吸附：将滤液（ⅱ）经去除表面油脂层后，升温至45-60℃，按每公斤肝加入25-35g的d-254树脂，搅拌状态下保温吸附处理8-10小时后，用100目滤袋过滤，分别收集滤液（ⅲ）和吸附有肝素钠的树脂；
（6）洗脱：
（6-1）：将收集的树脂先用水反复冲洗至水变清为止，滤干树脂，再以完全浸没树脂为量，加入质量分数为5-7%的氯化钠溶液，温度保持在45-55℃，搅拌30-60min，滤干得洗涤后的树脂；
（6-2）：以完全浸没洗涤后的树脂为量，加入质量分数为20-25%的氯化钠溶液，温度保持在45-55℃，搅拌3-4小时后，分离树脂，收集洗脱液；
（6-3）：重复步骤（6-2）一次，将两次收集的洗脱液合并，并用100目滤袋过滤，收集洗脱液待用；
（7）酸处理：往洗脱液中加入其总重量0.1-0.3%的保护剂搅拌均匀后，用稀盐酸调节ph值至3.0-3.5，静置10-15分钟，用150目滤袋过滤，分别收集滤渣（ⅲ）和滤液（ⅳ）待用；
(8)碱处理：用naoh调节滤液（ⅳ）ph值至11.0，搅拌均匀后静置15分钟，用150目滤袋过滤，分别收集滤渣（ⅳ）和滤液（ⅴ）待用；
（9）沉淀：将滤液（ⅴ）用稀盐酸调节其ph值至7.0-8.0，加入其体积1.5-2.0倍的质量分数为80-85%的预冷过的乙醇，搅拌均匀后密封沉淀18-24小时，虹吸法除去上层乙醇清液，收集沉淀物（ⅰ）待用；
（10）复沉：往上述沉淀物（ⅰ）中加入其重量3倍的质量分数为3%的氯化钠溶液，搅拌溶解后升温至80℃，保温处理10分钟后，冷却到60℃，用150目滤袋过滤，收集滤液（ⅵ），往滤液（ⅵ）中加入其体积1.0-1.5倍的质量分数为85-95%的预冷过的乙醇，搅拌均匀静置30分钟，虹吸法除去上层乙醇清液，收集沉淀物（ⅱ）待用；
（11）脱水干燥：往上述沉淀物（ⅱ）中加入其重量2倍的质量分数为95-100%的乙醇脱水2-3次，收集沉淀物，置于60-70℃下干燥8-16小时即得肝素钠；
（12）滤渣酶解：将步骤（3）中的滤渣（ⅰ）、步骤（4）中的滤渣（ⅱ）、步骤（7）中的滤渣（ⅲ）和步骤（8）中的滤渣（ⅳ）合并，加入合并滤渣重量1-3倍的去离子水溶解并搅拌均匀，调节ph值至8.0～9.0，按每公斤滤渣加入碱性蛋白酶2.0-5.0克，加热至40-50℃，保温酶解3-5h，将酶解液升温至85℃灭酶10分钟，即得到肝蛋白酶解液；
（13）纳滤脱盐：将步骤（5）中的滤液（ⅲ）与步骤（12）所得的肝蛋白酶解液合并，搅拌均匀后通过截留分子量为200da的纳滤膜装置系统进行纳滤脱盐、浓缩，收集浓缩液；
（14）喷雾干燥：将上述纳滤浓缩液进行喷雾干燥，即得肝蛋白肽粉。
上述步骤（7）所述的保护剂是亚硫酸氢钠。
上述步骤（12）所述的碱性蛋白酶为枯草杆菌碱性蛋白酶，酶活力为200000u/ml。
上述步骤（14）所述的喷雾干燥的进风口温度为200-240℃，出风口温度为80-100℃。
本发明的优点和有益效果为：
（1）本发明采用动物肝脏为原料，应用盐解、酶解、树脂吸附与洗脱、酸碱处理、纳滤、喷雾干燥等现代生化技术与生物集成技术，在同一生产工艺流程中，制定出联合提取肝素钠和蛋白肽的联产工艺。该联产工艺未见同类专利报导。
（2）本发明工艺采用盐解、酶解与树脂提纯相结合，酸处理、碱处理与精处理（复沉）相结合，最大限度地去除与肝素结合紧密的蛋白质、硫酸软骨素和硫酸皮肤素等杂质，所得肝素钠产品纯度高、效价高，平均效价达到80u/mg以上，达到市场收购的标准。
（3）本发明工艺对动物肝脏提取肝素钠后的废渣，采取酶解、纳滤脱盐、喷雾干燥处理制成肝脏蛋白肽，其蛋白质含量达到75%以上，含有多肽、小肽、氨基酸类物质，其中分子量小于5000da的肽类物质占总蛋白质83%以上，分子量在180-1000da的寡肽占42%以上，是一类优质的动物蛋白饲料原料，在饲料工业中具有广泛的应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的说明，但是本发明的实施方式并不局限于此实施例表示的范围。
实施例1
（1）打浆：取新鲜猪肝100公斤，清洗去血水，去除筋膜后，用斩拌机绞碎成肉糜状，再经细磨机研磨匀浆5min，得到猪肝浆料；
（2）盐解：往猪肝浆料中加入300公斤的去离子水，搅拌均匀后，加入15公斤氯化钠，缓慢升温至40℃，用naoh调ph值至8.5，搅拌下继续升温至50℃，保温反应5小时后，快速升温至95℃，保温10min，降温至60℃，得到猪肝盐解液；
（3）过滤：将猪肝盐解液经60目尼龙滤袋过滤，分别收集滤渣（ⅰ）和滤液（ⅰ）；
（4）酶解：调整滤液（ⅰ）ph值至9.0，升温至50℃，添加600克2709蛋白酶，搅拌均匀，保持料液ph值8.5-9.0，50℃下酶解4小时后，升温至85℃，保温30min，冷却至60℃，用100目滤袋过滤，分别收集滤渣（ⅱ）和滤液（ⅱ）；
（5）吸附：将滤液（ⅱ）经去除表面油脂层后，升温至55℃，搅拌状态下加入2500克d-254树脂，保温吸附处理10小时后，用100目滤袋过滤，分别收集滤液（ⅲ）和吸附有肝素钠的树脂待用；
（6）洗脱：
（6-1）：将收集的树脂先用水反复冲洗至水变清为止，滤干树脂，再以完全浸没树脂为量，加入质量分数为6%的氯化钠溶液，温度保持在50℃，搅拌45min，滤干得洗涤后的树脂；
（6-2）：以完全浸没洗涤后的树脂为量，加入质量分数为22%的氯化钠溶液，温度保持在50℃，搅拌3.5小时后，分离树脂，收集洗脱液；
（6-3）：重复步骤（6-2）一次，将两次收集的洗脱液合并，并用100目滤袋过滤，收集洗脱液待用；
（7）酸处理：往洗脱液中加入20克亚硫酸氢钠，搅拌均匀后用稀盐酸溶液调节ph值至3.5，静置15分钟，用150目滤袋过滤，分别收集滤渣（ⅲ）和滤液（ⅳ）待用；
(8)碱处理：用naoh调节滤液（ⅳ）ph值至11.0，搅拌均匀后静置15分钟，用150目滤袋过滤，分别收集滤渣（ⅳ）和滤液（ⅴ）待用；
（9）沉淀：将滤液（ⅴ）用稀盐酸溶液调节其ph值至7.5，加入其体积1.5倍的质量分数为85%的预冷过的乙醇，搅拌均匀后密封沉淀24小时，虹吸法除去上层乙醇清液，收集沉淀物（ⅰ）待用；
（10）复沉：往上述沉淀物（ⅰ）中加入其重量3倍的质量分数为3%的氯化钠溶液，搅拌溶解后,升温至80℃，保温处理10分钟后，冷却到60℃，用150目滤袋过滤，收集滤液（ⅵ），往滤液（ⅵ）中加入其体积1.2倍的质量分数为95%的预冷过的乙醇，搅拌均匀后静置30分钟，虹吸法除去上层乙醇清液，收集沉淀物（ⅱ）待用；
（11）脱水干燥：往上述沉淀物（ⅱ）中加入其重量2倍的质量分数为95%的乙醇脱水2次，收集沉淀物，置于65℃下干燥10小时，得肝素钠粗品38.6克，经检测其效价为85u/mg；
（12）滤渣酶解：将步骤（3）中的滤渣（ⅰ）、步骤（4）中的滤渣（ⅱ）和步骤（7）中的滤渣（ⅲ）、步骤（8）中的滤渣（ⅳ）合并得滤渣56公斤，往滤渣中加去离子水100公斤，搅拌均匀后调节ph值至8.3，然后加入碱性蛋白酶180克，升温至50℃，保持ph值8.0-8.3，保温酶解4h，将酶解液升温至85℃灭酶10分钟，得到猪肝蛋白酶解液待用；
（13）纳滤脱盐：将步骤（5）中的滤液（ⅲ）与步骤（12）所得的猪肝蛋白酶解液合并，搅拌均匀后通过截留分子量为200da的纳滤膜装置系统进行纳滤脱盐、浓缩，收集浓缩液；
（14）喷雾干燥：将上述纳滤浓缩液进行喷雾干燥，得到猪肝蛋白肽粉19.6kg。
实施例2
（1）打浆：取冷冻猪肝500公斤，经自然解冻后清洗去血水，去除筋膜，然后用斩拌机绞碎成肉糜状，再经细磨机研磨匀浆8min，得到猪肝浆料；
（2）盐解：往猪肝浆料中加入2500公斤的去离子水，搅拌均匀后，加入150公斤氯化钠，缓慢升温至40℃，用naoh调ph值至9.0，继续升温至50℃，保温反应4小时后，快速升温至95℃，保温10min，降温至60℃，得到猪肝盐解液；
（3）过滤：将猪肝盐解液经60目尼龙滤袋过滤，分别收集滤渣（ⅰ）和滤液（ⅰ）；
（4）酶解：调整滤液（ⅰ）ph值至8.5，升温至55℃，添加4000克2709蛋白酶，搅拌均匀，保持料液ph值8.0-8.5，55℃下酶解3小时后，升温至85℃，保温30min，冷却至60℃，用100目滤袋过滤，分别收集滤渣（ⅱ）和滤液（ⅱ）；
（5）吸附：将滤液（ⅱ）经去除表面油脂层后，升温至50℃，搅拌状态下加入15000克d-254树脂，保温吸附处理9小时后，用100目滤袋过滤，分布收集滤液（ⅲ）和吸附有肝素钠的树脂；
（6）洗脱：
（6-1）：将收集的树脂先用水反复冲洗至水变清为止，滤干树脂，再以完全浸没树脂为量，加入质量分数为7%的氯化钠溶液，温度保持在50℃，搅拌30min，滤干得洗涤后的树脂；
（6-2）：以完全浸没洗涤后的树脂为量，加入质量分数为20%的氯化钠溶液，温度保持在50℃，搅拌4小时后，分离树脂，收集洗脱液；
（6-3）：重复步骤（6-2）一次，将两次收集的洗脱液合并，并用100目滤袋过滤，收集洗脱液待用；
（7）酸处理：往洗脱液中加入150克亚硫酸氢钠，搅拌均匀后用稀盐酸溶液调节ph值至3.0，静置10分钟，用150目滤袋过滤，分别收集滤渣（ⅲ）和滤液（ⅳ）待用；
(8)碱处理：用naoh调节滤液（ⅳ）ph值至11.0，搅拌均匀后静置15分钟，用150目滤袋过滤，分别收集滤渣（ⅳ）和滤液（ⅴ）待用；
（9）沉淀：将滤液（ⅴ）用稀盐酸溶液调节其ph值至8.0，加入其体积2倍的质量分数为85%的预冷过的乙醇，搅拌均匀后密封沉淀18小时，虹吸法除去上层乙醇清液，收集沉淀物（ⅰ）待用；
（10）复沉：往上述沉淀物（ⅰ）中加入其重量3倍的质量分数为3%的氯化钠溶液，搅拌溶解后,升温至80℃，保温处理10分钟后，冷却到60℃，用150目滤袋过滤，收集滤液（ⅵ），往滤液（ⅵ）中加入其体积1.5倍的质量分数为95%的预冷过的乙醇，搅拌均匀后静置30分钟，虹吸法除去上层乙醇清液，收集沉淀物（ⅱ）待用；
（11）脱水干燥：往上述沉淀物（ⅱ）中加入其重量2倍的质量分数为95%的乙醇脱水2次，收集沉淀物，置于70℃下干燥12小时，得肝素钠粗品171克，经检测其效价为92u/mg；
（12）滤渣酶解：将步骤（3）中的滤渣（ⅰ）、步骤（4）中的滤渣（ⅱ）和步骤（7）中的滤渣（ⅲ）、步骤（8）中的滤渣（ⅳ）合并得滤渣295公斤，往滤渣中加去离子水500公斤，搅拌均匀后调节ph值至8.6，然后加入碱性蛋白酶1400克，升温至45℃，保持ph值8.3-8.6，保温酶解3.5h，将酶解液升温至85℃灭酶10分钟，得到猪肝蛋白酶解液；
（13）纳滤脱盐：将步骤（5）中的滤液（ⅲ）与步骤（12）所得的猪肺蛋白酶解液合并，搅拌均匀后通过截留分子量为100-150da的纳滤膜装置系统进行纳滤脱盐、浓缩，收集浓缩液；
（14）喷雾干燥：将上述纳滤浓缩液进行喷雾干燥，得到猪肝蛋白肽粉116.2kg。
肝蛋白肽粉蛋白含量及肽分子量分布检测：
分别取上述实施例1和实施例2得到的猪肝蛋白肽粉，按照常规方法测定其粗蛋白含量；用高效液相色谱仪，以已知分子量蛋白质做参照检测蛋白肽分子量分布。
结果见表1：
从表1中可以看出，本发明联产工艺制取的猪肝蛋白肽粉，蛋白质含量达到75%以上，其中分子量小于5000da的肽类物质占总蛋白质的比例达到83%以上，分子量在180-1000da的小肽占比达到42%以上，分子量小于180da的游离氨基酸占比在10%左右。