本发明属于天然产物及药物化学领域，具体涉及冬凌草甲素的14位以及1，6,7,14位同时修饰的冬凌草甲素衍生物，及其制备方法和用于制备抗肿瘤药物的用途。
背景技术：
冬凌草作为一种重要的传统中草药，由于其对炎症治疗的显著疗效通过了中国食品药品监督管理局的认证，冬凌草作为非处方(otc)中药用于治疗炎症等疾病，尤其是急性扁桃体炎，食道炎，口腔炎，牙龈炎等(见chen,s；liu,j；zhang,h.j.huazhonguniv.sci.technol.med.sci.2009,29,659)。在河南民间，冬凌草更是作为中药广泛应用于治疗食道癌和喷门癌。对其治疗疾病的机理研究表明，冬凌草不仅能通过调节mapk和akt信号通路来抑制乳腺癌细胞(见m.r.sartippour,n.p.seeram,d.heber,m.hardy,a.norris,q.lu,l.zhang,m.lu,j.y.rao,m.n.brooks,rabdosiarubescensinhibitsbreastcancergrowthandangiogenesis,int.j.oncol.2005,26,121-127)，还能通过抑制肿瘤坏死因子-α(tnf-α)而达到治疗主动脉炎症的作用(见c.desilva,r.stevens,k.m.jordan,inflammatoryaortitiscontrolledbythechineseherbalremedydonglingcaopian,rheumatology2008,47,1257-1259)。
冬凌草甲素(ori)作为其主要成分受到越来越多的关注。近30年的研究发现，冬凌草甲素可以通过调节分子内活性氧(ros)的水平，调节bcl-2/bax,nf-κb,p53/p21,mapk,pi3k,mrna和脂肪酸合酶等信号通路来引发细胞自噬，抑制血管的生成，阻滞细胞周期进程以及促进细胞凋亡最终发挥其抗广谱的肿瘤作用(见z.zhao,y.chen,oridonin,apromisingantitumornaturalproductinthechemotherapyofhematologicalmalignancies,curr.pharm.biotechnol.2014,15,1083-1092；w.tian,s.y.chen,recentadvancesinthemolecularbasisofanti-neoplasticmechanismsoforidonin,chin.j.integr.med.2013,19,315-320；z.liu,l.ouyang,h.peng,w.z.zhang,oridonin:targetingprogrammedcelldeathpathwaysasananti-tumouragent,cellprolif.2012,45,499-507；c.y.li,e.q.wang,y.cheng,j.k.bao,oridonin:anactivediterpenoidtargetingcellcyclearrest,apoptoticandautophagicpathwaysforcancertherapeutics,int.j.biochem.cellbiol.2011,43,701-704)。尽管其在肿瘤治疗中有较好的安全性和功效，但是由于相对生物活性较低，水溶性较差，生物利用度较低，以及其作用机制不明确等缺点，极大的限制了它的进一步开发。因此，为了提高冬凌草甲素的水溶性和抗肿瘤生物活性，xu等设计在冬凌草甲素的c-1和c-14位羟基上引入各种侧链基团合成了一系列冬凌草甲素衍生物(见cn102295649；cn103467474；cn103896958；cn104327089；cn104039796)。
虽然xu等在冬凌草甲素14位引入芳香环侧链以改善其抗肿瘤活性，但并未对苯环与冬凌草甲素c-14位之间不同连接链对其活性，水溶性和毒性的影响进行研究。另外在c-14位也有引入氨基酸结构侧链以提高其活性，但仅有丙氨酸和苯丙氨酸两种氨基酸，未对引入其它氨基酸结构进行深入研究，而不同氨基酸结构(疏水性和亲水性)的引入对其活性和水溶性的提高也有很大区别，且氨基上连接有大基团后，其活性、选择性、毒性、脂溶性和水溶性等由于空间位阻等原因也会发生很大变化。而且目前在该领域所得化合物在抗肿瘤活性、水溶性和减小毒性方面均未得到极大地提高。尤其对人肺癌细胞a549细胞、人多发骨髓瘤细胞rpmi-8226细胞和人肝癌细胞hepg2细胞这三个细胞株活性方面，未对其进行检测，未比较衍生物在不同癌细胞之间的选择性差异，以及也未从减小用药量从而减小其毒性角度出发对其进行结构改造。以上这些缺点都极大地限制了将冬凌草甲素开发成新的抗肿瘤药物。
因此，急需要制备更高活性、更低毒性、更好的水溶性及脂溶性的冬凌草甲素衍生物，尤其是在不同癌细胞之间具有选择性的更高活性的衍生物。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明的目的是在不破坏冬凌草甲素活性中心的前提下，通过改变1位、6位和14位的羟基，或6,7位进行变环改造，提供一种具有更高抗肿瘤活性、更高细胞间选择性和更低用药量、更低毒性的冬凌草甲素衍生物。
本发明的另一个目的是提供上述冬凌草甲素衍生物的制备方法及其用于制备抗肿瘤药物的应用。
本发明的构思如下：
本发明在冬凌草甲素14位引入由不同连接链连接的芳香侧链，确定了不同连接链与水溶性、活性之间的关系；氟原子的引入能够增强药物分子的膜通透性以及与靶标蛋白的特定位点形成疏水相互作用，也可能增加其药物在体内的生物利用度，可以大大减小用药剂量，从而减小其在体内的毒性，且氟原子在小分子中引入也可能会降低药物毒性，因此芳香侧链中部分含氟原子。当连接链内含有杂原子及共轭结构时，可以极大地提高其抗肿瘤活性，当连接有亲水性连接链时，可极大地提高其水溶性。
本发明在冬凌草甲素14位引入硫辛酸结构和烟酸结构侧链，确定了饱和烷烃侧链及杂环侧链与活性、水溶性的关系。
本发明在冬凌草甲素14位引入不同氨基酸结构(疏水性和亲水性)，以及在氨基酸结构中氨基上引入大基团改变其空间构型，确定了氨基酸及大基团保护氨基的氨基酸侧链与水溶性、活性之间的关系。
大基团保护氨基的氨基酸侧链对其活性有巨大提升，对水溶性也有一定改善，不同氨基酸保护之后由于空间位阻，以及构型之间转换的难易程度，其活性差异也较大，如空间上比较小的亮氨酸其不同构型之间转换较快，前手性对其影响较小。而连接有苯环的苯丙氨酸以及含有五元环的脯氨酸，其构型之间转化困难或缓慢，前手性影响较大，而这些差异造成了其活性提升程度的差异。且相比较裸露的氨基，大基团保护的氨基在结构上更为稳定。
本发明同时提供了一种全新的方法在冬凌草甲素c-6位引入侧链，合成通式ⅱ、ⅳ化合物，提高其抗肿瘤活性和水溶性，减小其毒副作用。
本发明还提供了一种全新的方法对冬凌草甲素6,7位进行变环改造，得到了一种全新的冬凌草甲素骨架，提高其抗肿瘤活性和水溶性，减小其毒副作用。
本发明目的是通过以下具体技术方案实现的。
通式ⅰ、ⅱ、ⅳ所示冬凌草甲素衍生物及通式ⅲ所示6,7-变环冬凌草甲素衍生物或其可药用盐：
通式ⅰ中r9代表羟基或氧代；
z代表5-(1,2-二硫-3-环戊基)戊酰基、2-氯-3-吡啶甲酸或boc-l-脯氨酸残基；
通式ⅱ、ⅲ、ⅳ中：
r1代表羟基、氧代、烷氧基、烷氨基、烷基酰胺基、烷基酰氧基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基或含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰胺基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的苯磺酰基；其中烷氧基、烷氨基、烷基酰胺基或烷基酰氧基中烷基为1-10个碳的烷基；
r2代表氢；1-10个碳的烷基；含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、巯基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的烷基；或含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、巯基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的苯基烷基；其中烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基或苯基烷基中烷基为1-10个碳的烷基；
r3代表羟基；含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、巯基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的烷基酰氧基或含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、巯基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的苯基烷基酰氧基；其中烷氧基、烷氨基或烷基酰氧基中烷基为1-10个碳的烷基；苯基烷基酰氧基中烷基为1-10个碳的烷基；
r4、r5、r6、r7、r8代表氢、羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰胺基、烷酰氧基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基或含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰胺基、烷基酰氧基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的苯基烷基酰基；其中烷氧基、烷氨基、烷基酰胺基、烷基酰氧基或苯基烷基酰基中烷基为1-10个碳的烷基；
x代表氢、1-10个碳的烷基；含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、巯基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的烷基、烷基酰基或烷基磺酰基；或含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、巯基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的苯基烷基、苯基烷基酰基或苯磺酰基；其中烷基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、烷基酰基、烷基磺酰基、苯基烷基、苯基烷基酰基或苯磺酰基中烷基为1-10个碳的烷基；
y代表氢、1-10个碳的烷基；含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、巯基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的烷基、烷基酰基或烷基磺酰基；或含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、巯基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的苯基烷基、苯基烷基酰基或苯磺酰基；其中烷基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、烷基酰基、烷基磺酰基、苯基烷基、苯基烷基酰基或苯磺酰基中烷基为1-10个碳的烷基；
l代表含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、巯基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的烷基连接链、烷基酰基连接链或烷基磺酰基连接链；或含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、巯基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的苯基烷基连接链、苯基烷基酰基连接链或苯磺酰基连接链；其中烷基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、烷基酰基、烷基磺酰基、苯基烷基、苯基烷基酰基或苯磺酰基中烷基为1-10个碳的烷基；
本发明包含但不仅限于以上取代基或侧链，一切符合本发明要求的衍生物都应包含在本发明保护范围以内。
本发明通式ⅰ的冬凌草甲素衍生物，其中：
r9优先代表羟基或氧代；
z优先代表5-(1,2-二硫-3-环戊基)戊酰基、2-氯-3-吡啶甲酸或boc-l-脯氨酸残基。
本发明通式ii、iii和ⅳ的冬凌草甲素衍生物，其中：
r1优先代表羟基、乙酰氧基或氧代；
r2优先代表氢、异丙基、异丁基、2-甲基丙基、苄基或叔丁氧羰基；
r3优先代表乙酰氧基或3,4-二甲氧基肉桂酰基；
x优先代表boc或fmoc。
通式ⅳ中l-ar优先代表3-(2-哌啶乙氧基)-4-甲氧基苯甲酰基、3-(2-溴乙氧基)-4-甲氧基苯甲酰基、3,4,5-三甲氧基苯乙酰基、3-(三氟甲氧基苯甲酰胺基)-4-氟苯甲酰基、3-(3-苄氧基-4-甲氧基苯甲酰胺基)-4-氟苯甲酰基、3-(3,4-二甲氧基苯乙酰胺基)-4-氟苯甲酰基、(4-甲氧基苯基)-3-丙酰基、(3,4-二甲氧基苯基)-3-丙酰基、(3,4,5-三甲氧基苯基)-3-丙酰基、4-氯甲基苯甲酰基、(4s,5r)-3-(叔丁氧羰基)-2-(4-甲氧基苯基)-4-苯基-1,3-噁唑烷-5-甲酰基、(2r，3s)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-羟基苯丙酰基、对氰基苯甲酰基、2,5-二氟苯甲酰基、2-氟-4-苄氧基苯甲酰基、2,3,4-三氟苯甲酰基3,4,5-三甲氧基肉桂酰基或3-(2-(1-苯并三氮唑肟基)乙氧基)-4-甲氧基苯甲酰基。
通式ⅲ中y优先代表氢、boc-l-亮氨酸残基、boc-l-缬氨酸残基、boc-l-异亮氨酸残基、boc-l-苯丙氨酸残基、boc-l-脯氨酸残基、3,4-二甲氧基肉桂酰基或4-甲氧基肉桂酰基。
本发明所述通式ⅱ或ⅳ化合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)以冬凌草甲素或1位取代的冬凌草甲素衍生物为原料，二氯甲烷为溶剂，在无水无氧、氮气保护、dmap和edci存在条件下，与含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、巯基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的烷基酸或含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、巯基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的苯基烷基酸反应，得到14位引入侧链的冬凌草甲素衍生物；
(2)再以二氯甲烷为溶剂，在无水无氧、氮气保护和二乙氨基三氟化硫试剂存在条件下，上述得到的14位引入侧链的冬凌草甲素衍生物与含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、巯基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的烷基酸或含有羟基、烷氧基、烷氨基、烷基酰氧基、巯基、卤素、含碳、氮、氧、硫中一种或多种原子的三元环、四元环、五元环或六元环取代基的苯基烷基酸反应，制备得到如通式ⅱ或ⅳ所述冬凌草甲素衍生物。
本发明所述通式ⅲ化合物的制备方法，包括以下步骤：
以冬凌草甲素或6,7位存在羟基的冬凌草甲素衍生物为原料，以二氯甲烷为溶剂，在无水无氧和氮气保护条件下，与二乙氨基三氟化硫试剂反应，制备得到如通式ⅲ所述冬凌草甲素衍生物。
本发明通式i、ii、iii和ⅳ所述的冬凌草甲素衍生物分别作用于人肺癌细胞a549、人多发骨髓瘤细胞rpmi-8226细胞和人肝癌细胞hepg2细胞，测得新合成化合物的ic50。
本发明通式i、ii、iii和ⅳ所述的冬凌草甲素衍生物用于制备抗肿瘤药物，如治疗肝癌、多发性骨髓瘤、肺癌等的药物的应用。
本发明的化合物可作为口服用药或非肠道用药。作为口服用药可以是片剂、胶囊剂或包衣剂，非经肠道用药剂型有注射剂和栓剂等。这些制剂均可按照本领域的技术人员所熟知的方法制备。为制造片剂、胶囊剂、包衣剂所用的辅料是常规用的助剂，例如淀粉、明胶、阿拉伯胶、硅石或聚乙二醇；液体剂型所用的溶剂例如水、乙醇、丙二醇、植物油类如玉米油、花生油或橄榄油等。含有本发明化合物的制剂中还可有其他助剂，例如表面活性剂、润滑剂、崩解剂、防腐剂，矫味剂或色素等。
本发明测定了全部新合成化合物以及部分已知化合物的核磁谱图及高分辨质谱，确定了新合成化合物结构，及更新了部分已知化合物的核磁谱图。
本发明测试了部分新化合物和部分已知化合物在三种癌细胞中的ic50，比较了这些衍生物对这三种癌细胞的抑制活性和在这三种癌细胞之间选择性的差异。
本发明所提供通式ⅰ、ⅱ、ⅳ的化合物是在不破坏原有的基本骨架的基础上，通过对冬凌草甲素的1位、6位和14位羟基进行修饰改造，从而发现以通式ⅰ、ⅱ、ⅳ所示的冬凌草甲素衍生物具有更高的抗肿瘤活性。因此，与现有技术相比，本发明所得冬凌草甲素衍生物具有很高的抗肿瘤活性，其中部分化合物活性是冬凌草甲素的3～5倍，而活性最佳者高出冬凌草甲素的11倍。发明人采用体外活性测定法对本发明提供的化合物的抗癌活性进行了测试，以紫杉醇注射液为阳性对照，发现本发明化合物对人体肝癌、人体多发性骨髓瘤、人体肺癌等癌细胞的直接杀伤作用较冬凌草甲素高出3～5倍,而活性最佳者高出冬凌草甲素的11倍。
本发明所提供通式ⅲ的化合物是对其原有的基本骨架做了改变，得到全新变环的冬凌草甲素衍生物，从而发现以通式ⅲ所示的冬凌草甲素衍生物具有更高的抗肿瘤活性。因此，与现有技术相比，本发明所得冬凌草甲素衍生物具有很高的抗肿瘤活性，其中部分化合物活性是冬凌草甲素的3～5倍。发明人采用体外活性测定法对本发明提供的化合物的抗癌活性进行了测试，以紫杉醇注射液为阳性对照，发现本发明化合物对人体肝癌、人体多发性骨髓瘤、人体肺癌等癌细胞的直接杀伤作用较冬凌草甲素高出3～5倍。
具体实施方式
下面通过具体实施例来详细说明本发明。
本发明通式ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ的衍生物可用以下方法制备得到：
反应图解化合物1的合成方法见cn102002051a，通式为i的化合物合成如下：
a、将化合物1和含有z的羧酸化合物、4-二甲氨基吡啶、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐加入双口瓶中，抽真空，用氮气保护，加入回流收集的二氯甲烷，室温搅拌过夜反应；
b、将a所得反应物经水洗，柱层析纯化，得到化合物3(通式ⅰ化合物)。
通式ⅱ的化合物合成如下：
a、将冬凌草甲素与r2ch(nhx)cooh、4-二甲氨基吡啶、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐加入双口瓶中，抽真空，用氮气保护，加入回流收集的二氯甲烷，之后室温搅拌过夜反应；
b、将a所得反应物经水洗，柱层析纯化，得到化合物4(通式ⅱ化合物)；
c、将化合物3与r3cooh加入双口瓶中，抽真空，用氮气保护，加入回流收集的二氯甲烷，在-78℃加入二乙氨基三氟化硫，反应10分钟，之后室温反应过夜；
d、将c所得反应物经水洗，柱层析纯化，得到化合物5(通式ⅱ化合物)；
通式ⅲ的化合物合成如下：
a、将化合物1和含有y的羧酸化合物、4-二甲氨基吡啶、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐加入双口瓶中，抽真空，用氮气保护，加入回流收集的二氯甲烷，室温搅拌过夜反应；
b、将a所得反应物经水洗，柱层析纯化，得到化合物2；
c、将化合物2，加入双口瓶中，抽真空，用氮气保护，加入回流收集的二氯甲烷，在-78℃加入二乙氨基三氟化硫，反应10分钟，之后室温反应过夜；
d、将c所得反应物经水洗，柱层析纯化，得到化合物6(通式ⅲ化合物).
通式ⅳ的化合物合成如下：
a、将化合物1和含有l-ar的羧酸化合物、4-二甲氨基吡啶、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐加入双口瓶中，抽真空，用氮气保护，加入回流收集的二氯甲烷，室温搅拌过夜反应；
b、将a所得反应物经水洗，柱层析纯化，得到化合物7(通式ⅳ化合物)。
c、将化合物7与r3cooh加入双口瓶中，抽真空，用氮气保护，加入回流收集的二氯甲烷，在-78℃加入二乙氨基三氟化硫，反应10分钟，之后室温反应过夜；
d、将c所得反应物经水洗，柱层析纯化，得到化合物8(通式ⅳ化合物)；
本发明的部分化合物为：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-甘氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(1)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-亮氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(2)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(fmoc-l-苯丙氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(3)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(2-溴乙氧基)-4-甲氧基苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(4)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(2-哌啶乙氧基)-4-甲氧基苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(5)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3,4,5-三甲氧基苯乙酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(6)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(三氟甲氧基苯甲酰胺)-4-氟苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(7)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(3-苄氧基-4-甲氧基苯甲酰胺)-4-氟苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(8)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(3,4-二甲氧基苯乙酰胺)-4-氟苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(9)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(4-甲氧基苯基)丙酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(10)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(3,4-二甲氧基苯基)丙酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(11)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(3,4,5-三甲氧基苯基)丙酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(12)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(4-氯甲基苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(13)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(5-(1,2-二硫-3-环戊基)戊酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(14)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-((4s,5r)-3-(叔丁氧羰基)-2-(4-甲氧基苯基)-4-苯基-1,3-噁唑烷-5-甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(15)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(2-(1-苯并三氮唑肟基)乙氧基)-4-甲氧基苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(16)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3,4,5-三甲氧基肉桂酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(17)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-缬氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(18)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-异亮氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(19)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(fmoc-l-天冬氨酸-1-叔丁酯)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(20)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-boc-l-脯氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(21)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(对氰基苯甲酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(22)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(2-氯-3-吡啶甲酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(23)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(2,5-二氟苯甲酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(24)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(2-氟-4-苄氧基苯甲酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(25)；
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(2,3,4-三氟苯甲酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(26)；
ent-1–氧代-6β,7β-二羟基-[14β-o-((4s,5r)-3-(叔丁氧羰基)-2-(4-甲氧基苯基)-4-苯基-1,3-噁唑烷-5-甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(27)；
ent-1-氧代-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-亮氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(28)；
ent-1-氧代-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-脯氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(29)；
ent-1α-氧代-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-缬氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(30)；
ent-1α-氧代-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-异亮氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(31)；
ent-1α,6β-二乙酰氧基-7β,14β-二羟基-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉(32)；
ent-1α-乙酰氧基-[6β-o-(3,4-二甲氧基肉桂酰基)]-7β-羟基-[14β-o-(3,4-二甲氧基肉桂酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯(33)；
ent-1α-乙酰氧基-6β-氢-14β-羟基-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯(34)；
ent-1α-乙酰氧基-6β-氢-[14β-o-(3,4-二甲氧基肉桂酰基)]-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯(35)；
ent-1-氧代-6β-氢-[14β-o-(3,4-二甲氧基肉桂酰基)]-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16贝壳杉烯(36)；
ent-1-氧代-6β-氢-[14β-o-(4-二甲氧基肉桂酰基)]-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯(37)；
ent-1-氧代-6β-氢-[14β-o-(boc-l-亮氨酸)]-7，15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯(38)；
ent-1-氧代-6β-氢-[14β-o-(boc-l-苯丙氨酸)]-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯(39)；
ent-1-氧代-6β-氢-[14β-o-(boc-l-脯氨酸)]-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯(40)；
ent-1-氧代-6β-氢-[14β-o-(boc-l-缬氨酸)]-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯(41)；
ent-1-氧代-6β-氢-[14β-o-(boc-l-异亮氨酸)]-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯(42)；
本发明通过以下具体实施例对发明内容做进一步的详细说明，但不应将本发明内容仅仅理解为以下实例，凡基于本发明以上内容在本领域所能实现的所有技术都应归于本发明的内容。
实施例1：
将冬凌草甲素(100mg,0.27mmol)、n-boc-甘氨酸(48mg,0.27mmol)、edci(157mg,0.82mmol)和dmap(101mg,0.82mmol)加入到50ml茄型瓶中，在氮气保护条件下加入干燥过的二氯甲烷10ml，冰浴反应1h后室温条件下搅拌反应过夜，tlc检测反应完全。将反应液转移至分液漏斗中，用1m的稀盐酸洗涤两次，取有机相，无水硫酸镁干燥，硅胶柱层析得到白色固体。
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-甘氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.20(d,j＝10.7hz,1h),6.12(s,1h),5.95(s,1h),5.50(s,1h),5.37(t,j＝5.2hz,1h),4.52(s,1h),4.27(d,j＝10.3hz,1h),4.02(d,j＝10.3hz,1h),3.79(ddd,j＝23.2,18.2,5.7hz,2h),3.69(dd,j＝10.8,7.0hz,1h),3.44(dd,j＝11.3,5.5hz,1h),3.11(d,j＝9.7hz,1h),2.56(dt,j＝13.8,9.1hz,1h),2.28–2.13(m,1h),2.05(s,1h),1.89(dd,j＝13.0,5.6hz,1h),1.76(dd,j＝14.0,6.8hz,1h),1.71–1.62(m,1h),1.57(dt,j＝19.4,8.7hz,2h),1.46–1.35(m,10h),1.07(d,j＝2.2hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.48,169.40,155.90,149.84,120.35,95.98,79.87,75.67,74.39,73.32,63.36,62.09,59.37,54.70,42.92,41.36,41.26,38.72,33.67,32.65,30.56,29.75,28.27,21.67,19.86.hresimsm/z522.2698[m+h]+。
实施例2：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-亮氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1的合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.10(d,j＝12.4hz,1h),5.87(s,1h),5.47(s,1h),4.90(d,j＝7.6hz,1h),4.28(d,j＝10.4hz,1h),4.23(s,1h),4.18(s,1h),4.05(d,j＝10.4hz,1h),3.73(dd,j＝10.6,6.9hz,1h),3.51–3.44(m,1h),3.12(d,j＝9.8hz,1h),2.63–2.54(m,1h),2.31–2.18(m,1h),1.99–1.90(m,1h),1.75(dt,j＝20.2,6.4hz,1h),1.72–1.63(m,1h),1.63–1.52(m,2h),1.48–1.42(m,1h),1.38(s,4h),1.29–1.22(m,1h),1.10(s,3h),0.87(t,j＝5.9hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.25,171.84,155.28,149.89,119.99,96.01,79.96,77.24,76.52,74.40,73.37,63.38,62.01,59.51,54.71,52.52,41.30,40.89,38.70,33.70,32.62,30.49,29.89,28.23,24.77,22.71,21.94,21.73,19.84.hresimsm/z578.3324[m+h]+。
实施例3：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(fmoc-l-苯丙氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1的合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.76(d,j＝7.4hz,2h),7.55(d,j＝7.3hz,2h),7.40(t,j＝7.4hz,2h),7.32(t,j＝7.4hz,2h),7.24(d,j＝9.6hz,2h),7.12(d,j＝6.9hz,2h),6.17(d,j＝10.9hz,1h),6.07(s,1h),5.95(s,1h),5.51–5.45(m,1h),5.40(s,1h),4.53(dd,j＝13.4,6.6hz,1h),4.37(dd,j＝10.2,7.5hz,1h),4.32(s,1h),4.30–4.23(m,2h),4.17(t,j＝7.0hz,1h),4.03(d,j＝10.3hz,1h),3.72(dd,j＝10.8,7.1hz,1h),3.41(d,j＝5.9hz,1h),3.12(dd,j＝13.9,6.5hz,1h),2.99(dd,j＝13.8,6.3hz,1h),2.93(d,j＝9.7hz,1h),2.52(dt,j＝13.6,8.9hz,1h),2.17(dt,j＝21.5,13.4hz,1h),1.92(s,1h),1.87(dd,j＝12.9,5.3hz,1h),1.77–1.68(m,1h),1.63(d,j＝3.5hz,2h),1.60–1.48(m,2h),1.42(d,j＝13.5hz,1h),1.08(d,j＝13.7hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.20,170.35,155.67,149.86,143.83,143.75,141.24,135.93,129.38,128.56,128.51,127.69,127.13,127.10,127.02,125.22,125.15,120.22,119.93,95.97,75.89,74.71,73.41,67.14,63.36,62.14,59.31,55.40,54.72,47.08,41.44,41.26,38.70,37.74,33.67,32.69,30.49,29.82,21.75,19.91；hresimsm/z612.3167[m+h]+。
实施例4：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(2-溴乙氧基)-4-甲氧基苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.54(dd,j＝8.5,1.9hz,1h),7.47(d,j＝1.9hz,1h),6.85(d,j＝8.5hz,1h),6.20–6.16(m,2h),6.03(s,1h),5.49(s,1h),4.35–4.30(m,2h),4.17(d,j＝2.9hz,1h),4.08(d,j＝10.4hz,1h),3.90(d,j＝7.3hz,3h),3.75(dd,j＝10.6,6.7hz,1h),3.65(t,j＝6.4hz,2h),3.51(dd,j＝11.1,5.4hz,1h),3.29(d,j＝9.9hz,1h),2.70–2.62(m,1h),2.34(ddd,j＝27.4,13.1,8.1hz,1h),2.01(dd,j＝12.9,5.7hz,1h),1.83–1.74(m,2h),1.66(dd,j＝11.0,5.7hz,1h),1.63–1.55(m,3h),1.46(dt,j＝13.4,3.1hz,1h),1.26(d,j＝8.2hz,2h),1.10(d,j＝5.8hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.80,164.69,154.22,150.01,147.26,124.73,121.88,120.16,115.03,111.18,96.19,74.24,73.38,69.19,63.48,62.05,59.75,56.15,54.66,41.46,38.65,33.73,32.56,30.49,29.98,29.68,28.68,21.65,19.85.hresimsm/z621.1694[m+h]+。
实施例5：
将实施例4化合物(100mg,0.16mmol)加入到圆底烧瓶中，加入3ml哌啶，室温搅拌反应过夜，tlc检测反应完全。减压蒸馏将反应液基本蒸干，硅胶柱层析分离得到黄色固体。
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-((2-哌啶)-乙氧基)-4-甲氧基苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.54(dd,j＝8.5,1.7hz,1h),7.47(d,j＝1.7hz,1h),6.82(d,j＝8.6hz,1h),6.17(d,j＝10.5hz,1h),6.13(s,1h),5.97(s,1h),5.48(s,1h),4.49–4.37(m,3h),4.30(d,j＝10.4hz,1h),4.03(d,j＝10.4hz,1h),3.85(s,3h),3.73(dd,j＝10.5,6.7hz,1h),3.49(dd,j＝11.3,5.5hz,1h),3.28(dd,j＝22.1,8.2hz,4h),3.14(s,4h),2.61(dt,j＝13.9,9.2hz,1h),2.36–2.23(m,1h),2.02–1.90(m,5h),1.82–1.74(m,1h),1.72–1.51(m,7h),1.40(d,j＝13.6hz,1h),1.05(d,j＝6.1hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.90,164.51,153.98,149.95,146.60,125.03,122.12,120.10,115.72,110.99,96.19,76.61,74.21,73.04,64.75,63.47,62.04,59.72,56.18,55.98,54.53,54.01,41.36,41.20,38.57,33.60,32.49,30.43,29.81,24.45,23.26,22.09,21.55,19.78.hresimsm/z626.3324[m+h]+。
实施例6：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3,4,5-三甲氧基苯乙酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1的合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.39(s,2h),6.10(d,j＝10.4hz,1h),6.05(s,1h),5.82(s,1h),5.36(s,1h),4.28(d,j＝10.4hz,1h),4.09(s,1h),4.05(d,j＝10.5hz,1h),3.80(d,j＝4.2hz,9h),3.73(dd,j＝10.4,6.7hz,1h),3.51–3.43(m,3h),3.09(d,j＝9.9hz,1h),2.60–2.50(m,1h),2.28–2.17(m,1h),1.95(dd,j＝12.9,5.8hz,1h),1.87(s,1h),1.77–1.69(m,1h),1.64(ddd,j＝13.6,8.8,4.7hz,1h),1.58(d,j＝14.1hz,1h),1.55–1.48(m,2h),1.48–1.41(m,1h),1.10(s,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.33,169.85,153.25,149.72,137.21,128.39,119.90,106.30,96.15,74.00,73.31,63.41,61.87,60.81,59.66,56.10,54.49,41.97,41.27,41.06,38.60,33.70,32.52,30.41,29.95,21.62,19.74.hresimsm/z590.2960[m+h]+。
实施例7：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(三氟甲氧基苯甲酰氨基)-4-氟苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.87(dd,j＝7.5,2.0hz,1h),8.08(d,j＝2.4hz,1h),7.80(d,j＝7.8hz,1h),7.77(s,1h),7.72(ddd,j＝8.5,4.9,2.2hz,1h),7.55(t,j＝8.0hz,1h),7.45–7.41(m,1h),7.15(dd,j＝10.1,8.7hz,1h),6.20(s,1h),6.16(d,j＝10.9hz,1h),6.08(d,j＝0.7hz,1h),5.53(s,1h),4.35(d,j＝10.4hz,1h),4.08(d,j＝10.4,1.3hz,1h),4.05(s,1h),3.73(dd,j＝10.9,6.9hz,1h),3.51(dd,j＝5.8,3.5hz,1h),3.31(d,j＝9.9hz,1h),2.74–2.62(m,1h),2.40–2.25(m,1h),2.00(dd,j＝12.8,5.5hz,1h),1.83–1.78(m,1h),1.77(s,1h),1.70–1.58(m,3h),1.47(dt,j＝13.5,3.2hz,1h),1.42(s,1h),1.32–1.26(m,2h),1.10(d,j＝7.5hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.77,164.15,163.91,157.24,149.95,149.59,136.14,130.42,126.73,125.20,124.70,124.54,120.41,120.34,115.46,115.29,96.08,76.67,74.57,73.44,63.44,62.17,59.54,54.76,41.49,41.37,38.65,33.71,32.58,30.52,29.98,21.69,19.92.hresimsm/z690.2321[m+h]+。
实施例8：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(3-苄氧基-4-甲氧基苯甲酰氨基)-4-氟苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.82(dd,j＝7.5,2.0hz,1h),8.09(d,j＝2.5hz,1h),7.64(ddd,j＝8.4,4.8,2.1hz,1h),7.51(d,j＝2.0hz,1h),7.45(dd,j＝7.7,3.0hz,3h),7.36(t,j＝7.4hz,2h),7.30(t,j＝7.3hz,1h),7.10(dd,j＝9.9,8.9hz,1h),6.91(d,j＝8.5hz,1h),6.24(d,j＝10.7hz,1h),6.15(s,1h),6.04(s,1h),5.49(s,1h),5.17(s,1h),4.32(d,j＝10.4hz,1h),4.24(s,1h),4.04(d,j＝10.2hz,1h),3.91(s,3h),3.71(dd,j＝10.7,6.8hz,1h),3.46(dd,j＝11.2,5.6hz,1h),3.26(d,j＝9.8hz,1h),2.61(dt,j＝13.7,9.2hz,1h),2.32–2.22(m,1h),2.04(d,j＝18.2hz,1h),1.95(dd,j＝13.0,5.7hz,1h),1.79–1.72(m,1h),1.68–1.55(m,2h),1.44–1.38(m,2h),1.27–1.21(m,2h),1.05(d,j＝8.8hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.94,165.05,164.28,δ156.28(d,j＝252.5hz).,153.09,149.99,148.19,136.46,128.61,128.08,127.60,126.71,126.63,126.54,126.29,124.64,120.68,120.33,115.37,115.20,113.12,110.96,96.11,77.28,76.76,74.49,73.21,71.08,63.50,62.18,59.61,56.09,54.73,41.50,41.31,38.66,33.67,32.58,30.52,26.90,21.64,19.85.hresimsm/z742.3022[m+h]+。
实施例9：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(2-(3,4-二甲氧基苯基)乙酰氨基)-4-氟苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.75(d,j＝6.3hz,1h),7.64–7.55(m,1h),7.54(d,j＝2.1hz,1h),7.04–6.95(m,1h),6.86(s,2h),6.83(s,1h),6.18(d,j＝10.8hz,1h),6.16(s,1h),6.03(s,1h),5.49(s,1h),4.31(d,j＝10.4hz,1h),4.10(s,1h),4.04(d,j＝10.2hz,1h),3.87(s,6h),3.74–3.65(m,3h),3.46(dd,j＝11.1,5.4hz,1h),3.24(d,j＝9.8hz,1h),2.61(dt,j＝13.9,9.1hz,1h),2.36–2.22(m,2h),2.16(s,1h),1.96(dd,j＝13.0,5.7hz,1h),1.91(s,1h),1.80–1.71(m,1h),1.69–1.52(m,3h),1.42(dd,j＝10.6,3.0hz,1h),1.23(s,1h),1.06(d,j＝9.6hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.81,169.52,164.20,155.76(d,j＝252.4hz).13cnmr(126mhz,cdcl3)149.96,149.47,148.62,126.70,126.47,126.27,124.25,121.74,120.32,115.21,115.05,112.39,111.70,96.07,76.70,74.49,73.25,63.48,62.15,59.57,55.94,55.92,54.74,44.13,41.48,41.32,38.66,33.67,32.60,30.51,29.83,21.66,19.85.hresimsm/z680.2866[m+h]+。
实施例10：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(4-甲氧基苯基)丙酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.04(d,j＝8.6hz,2h),6.78(d,j＝8.6hz,2h),6.29(d,j＝10.4hz,1h),6.08(s,1h),5.82(s,1h),5.40(s,1h),4.34(s,1h),4.29(d,j＝10.4hz,1h),4.05(d,j＝10.3hz,1h),3.80–3.71(m,4h),3.46(dd,j＝11.3,5.6hz,1h),3.05(d,j＝9.9hz,1h),2.89–2.80(m,2h),2.62–2.50(m,3h),2.32–2.20(m,1h),1.93(dd,j＝12.9,5.8hz,1h),1.76–1.47(m,5h),1.44(dt,j＝13.5,2.9hz,1h),1.23(d,j＝6.7hz,1h),1.08(d,j＝4.1hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.71,171.42,158.08,149.72,131.87,129.20,129.16,120.13,113.90,96.12,76.50,73.94,73.22,63.46,61.85,59.70,55.24,54.57,41.27,41.24,38.63,36.28,33.71,32.53,30.48,29.86,29.72,21.60,19.71.hresimsm/z527.2639[m+h]+。
实施例11：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(3,4-二甲氧基苯基)丙酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.76(d,j＝7.9hz,1h),6.67(d,j＝8.9hz,2h),6.13–6.07(m,2h),5.83(s,1h),5.39(s,1h),4.30(d,j＝10.4hz,1h),4.20(s,1h),4.07(d,j＝10.4hz,1h),3.84(d,j＝2.2hz,6h),3.75(dd,j＝10.5,6.7hz,1h),3.48(dd,j＝11.0,5.4hz,1h),3.07(d,j＝9.8hz,1h),2.90–2.79(m,2h),2.65–2.52(m,3h),2.32–2.21(m,1h),1.96(dd,j＝13.0,5.9hz,1h),1.80–1.50(m,6h),1.46(d,j＝13.6hz,1h),1.37(s,1h),1.11(s,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.48,171.27,149.64,148.87,147.54,132.32,120.12,120.01,111.54,111.30,96.19,76.70,73.97,73.38,63.40,61.80,59.74,55.91,55.83,54.55,41.31,41.18,38.62,36.23,33.73,32.53,30.48,30.23,30.01,21.62,19.72.hresimsm/z557.2745[m+h]+。
实施例12：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(3,4,5-三甲氧基苯基)丙酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.34(s,2h),6.11(d,j＝10.5hz,1h),6.07(s,1h),5.83(s,1h),5.39(s,1h),4.28(d,j＝10.4hz,1h),4.17(s,1h),4.05(d,j＝10.4hz,1h),3.80(d,j＝9.4hz,9h),3.72(dd,j＝10.5,6.7hz,1h),3.47(dd,j＝11.2,5.6hz,1h),3.05(d,j＝9.8hz,1h),2.83(t,j＝7.5hz,2h),2.66–2.51(m,3h),2.31–2.19(m,1h),1.94(dd,j＝12.9,5.8hz,1h),1.77–1.68(m,1h),1.68–1.48(m,4h),1.48–1.41(m,1h),1.28–1.17(m,1h),1.09(s,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.49,171.20,153.16,149.62,136.40,135.50,120.17,105.09,96.16,76.66,74.01,73.27,63.44,61.82,60.79,59.70,56.06,54.56,41.29,41.23,38.61,36.08,33.70,32.53,30.96,30.49,29.93,21.61,19.71.hresimsm/z587.2851[m+h]+。
实施例13：
将冬凌草甲素(100mg,0.27mmol)、4-氯甲基苯甲酰氯(62mg,0.33mmol)和tea(0.12ml,0.81mmol)加入到茄型瓶中后加入干燥的二氯甲烷(10ml)在氮气保护条件下先冰浴反应1h，然后室温反应过夜，tlc检测反应完全。将反应液移至分液漏斗中，用饱和nahco3溶液洗涤三次，取有机相用无水硫酸镁干燥，过滤得到澄清溶液蒸干硅胶柱层析分离得到白色固体。
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(4-氯甲基苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.92(d,j＝8.3hz,2h),7.43(d,j＝8.2hz,2h),6.20(s,1h),6.14–6.07(m,2h),5.51(s,1h),4.58(s,2h),4.37(d,j＝10.4hz,1h),4.10(d,j＝10.3hz,1h),3.97(s,1h),3.77(dd,j＝10.8,6.9hz,1h),3.57–3.50(m,1h),3.30(d,j＝9.9hz,1h),2.74–2.64(m,1h),2.41–2.28(m,1h),2.03(dd,j＝13.1,5.7hz,1h),1.86–1.76(m,1h),1.73–1.59(m,4h),1.49(dt,j＝13.6,3.2hz,1h),1.13(d,j＝8.8hz,6h),1.10(d,j＝3.9hz,1h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.56,164.66,149.95,142.84,130.10,129.48,128.66,120.27,96.15,74.37,73.54,63.41,62.08,59.64,54.73,45.20,41.48,41.39,38.66,33.75,32.61,30.53,30.09,21.71,19.93.hresimsm/z517.1988[m+h]+。
实施例14：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(5-(1,2-二硫-3-环戊基)戊酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.16(s,1h),6.08(dd,j＝10.5,2.0hz,1h),5.85(s,1h),5.51(s,1h),4.31(dd,j＝7.6,4.0hz,1h),4.23(d,j＝2.1hz,1h),4.08(dd,j＝10.4,1.5hz,1h),3.78(dd,j＝10.5,6.7hz,1h),3.57–3.48(m,2h),3.22–3.14(m,2h),3.11(dt,j＝11.0,6.9hz,1h),2.66–2.59(m,1h),2.45(td,j＝12.5,6.1hz,1h),2.36–2.23(m,3h),1.99(dd,j＝12.8,5.7hz,1h),1.90(dtd,j＝13.9,7.0,1.2hz,1h),1.78–1.54(m,9h),1.51–1.35(m,3h),1.31(dd,j＝12.5,9.0hz,1h),1.30–1.27(m,1h),1.14(d,j＝7.7hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.46,171.68(d,j＝3.0hz),149.81,120.14(d,j＝5.8hz),96.24,73.91,73.47,63.38,61.78,59.79,56.22(d,j＝3.6hz),54.54,41.33,41.21,40.20,38.55(d,j＝20.2hz),34.46(d,j＝3.6hz),34.34(d,j＝4.8hz),33.75,32.53,30.47,30.09,29.69,28.53(d,j＝6.6hz),24.37(d,j＝7.5hz),21.64,19.75.hresimsm/z553.2277[m+h]+。
实施例15：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-((4s,5r)-3-(叔丁氧羰基)-2-(4-甲氧基苯基)-4-苯基-1,3-噁唑烷-5-甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.38–7.27(m,7h),6.88(d,j＝8.4hz,2h),6.32(s,1h),6.07(s,1h),5.96(d,j＝10.6hz,1h),5.86(s,1h),5.37(d,j＝34.4hz,2h),4.50(d,j＝3.3hz,1h),4.27(d,j＝10.4hz,1h),4.04(d,j＝10.4hz,1h),3.84(s,3h),3.67(dd,j＝10.3,7.2hz,1h),3.48–3.41(m,1h),2.48(s,1h),2.20(d,j＝13.0hz,1h),1.88(d,j＝11.7hz,1h),1.75–1.67(m,1h),1.64(s,3h),1.59–1.41(m,4h),1.25–1.16(m,4h),1.07(d,j＝10.9hz,15h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ205.91,160.10,149.53,128.72,128.39,127.91,126.33,120.19,113.65,95.83,92.02,80.69,74.40,73.45,63.30,62.84,61.98,59.25,55.32,54.61,41.27,40.95,38.62,33.66,32.55,30.49,30.00,29.69,27.84,21.70,19.81,1.01.hresimsm/z746.3551[m+h]+。
实施例16：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3-(2-(1-苯并三氮唑肟基)乙氧基)-4-甲氧基苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.00–7.96(m,1h),7.72–7.68(m,1h),7.54(dd,j＝8.5,2.0hz,1h),7.45(ddd,j＝8.2,5.2,1.2hz,2h),7.36(ddd,j＝9.5,5.2,1.8hz,1h),6.83(dd,j＝8.5,4.2hz,1h),6.21(d,j＝10.6hz,1h),6.14(s,1h),6.02(d,j＝5.6hz,1h),5.47(s,1h),4.95–4.91(m,2h),4.38–4.34(m,2h),4.27(d,j＝5.0hz,1h),4.09–4.05(m,1h),3.86(d,j＝3.2hz,3h),3.75(dd,j＝10.6,6.7hz,1h),3.50(dd,j＝11.3,5.6hz,1h),3.28(d,j＝10.0hz,1h),2.68–2.60(m,1h),2.34(ddd,j＝27.6,13.2,8.3hz,1h),2.03–1.97(m,1h),1.93(s,1h),1.82–1.74(m,2h),1.68(ddd,j＝12.5,8.9,3.4hz,1h),1.63–1.55(m,2h),1.44(dt,j＝13.4,3.1hz,1h),1.27(s,1h),1.24(s,1h),1.09(d,j＝4.8hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.92,164.69,154.03,149.98,147.28,143.34,128.06,127.61,124.75(d,j＝7.5hz),121.88,120.18,119.96,114.40,110.97,109.10,96.19,78.47,74.23,73.30,66.06,63.51,62.06,59.76,55.98,54.63,41.37(d,j＝11.4hz),38.62,33.72,32.55,30.49,29.94,21.62,19.83.hresimsm/z676.2862[m+h]+。
实施例17：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3,4,5-三甲氧基肉桂酰基)-4-甲氧基苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.53(d,j＝15.9hz,1h),6.70(s,2h),6.25(d,j＝15.9hz,1h),6.19–6.11(m,1h),5.94(s,1h),5.51(s,1h),4.39–4.30(m,1h),4.09(d,j＝10.6hz,1h),3.87(s,6h),3.79(dd,j＝10.3,6.8hz,1h),3.55–3.47(m,1h),3.28(d,j＝9.8hz,1h),2.66(dt,j＝13.9,9.1hz,1h),2.33(dd,j＝13.5,8.0hz,1h),2.02(dd,j＝12.8,5.6hz,1h),1.80–1.72(m,1h),1.65–1.56(m,2h),1.47(d,j＝13.6hz,1h),1.33–1.22(m,2h),1.12(s,4h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.67,165.10,153.41,149.83,146.43,140.53,129.23,120.32,115.94,105.43,96.34,77.22,73.94,73.45,63.43,61.88,60.96,59.87,56.20,54.60,41.32,38.64,33.76,32.55,30.52,30.07,21.64,19.79.hresimsm/z585.2699[m+h]+。
实施例18：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-缬氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.13(s,1h),6.07(t,j＝10.0hz,1h),5.88(s,1h),5.48(s,1h),5.03(d,j＝8.2hz,1h),4.29(d,j＝10.4hz,1h),4.21(s,1h),4.08(t,j＝11.7hz,2h),3.75(dd,j＝10.5,7.0hz,1h),3.52–3.45(m,1h),3.15(d,j＝9.8hz,1h),2.60(dt,j＝13.9,9.1hz,1h),2.24(dt,j＝21.5,13.4hz,1h),2.06(dd,j＝12.2,6.3hz,1h),1.95(dd,j＝12.8,5.2hz,1h),1.84(s,1h),1.81–1.72(m,1h),1.70–1.63(m,1h),1.62–1.54(m,2h),1.50(s,1h),1.45(t,j＝10.3hz,1h),1.41(d,j＝9.2hz,9h),1.27(d,j＝10.0hz,1h),1.11(s,6h),0.90(t,j＝8.5hz,3h),0.84(t,j＝8.7hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.21,171.12,155.58,149.87,120.08,96.00,79.94,74.37,73.45,63.36,61.99,59.51,59.01,54.71,41.33,38.70,33.71,32.62,30.90,30.44,29.95,29.68,28.25,21.76,19.85,18.91,17.66.hresimsm/z564.3152[m+h]+。
实施例19：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-异亮氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.15(d,j＝11.3hz,1h),6.05(d,j＝10.7hz,1h),5.87(d,j＝10.5hz,1h),5.47(s,1h),5.01(d,j＝8.0hz,1h),4.29(d,j＝10.4hz,1h),4.15(d,j＝10.6hz,2h),4.07(d,j＝10.4hz,1h),3.75(dt,j＝22.3,11.2hz,1h),3.53–3.45(m,1h),3.16(d,j＝9.9hz,1h),2.61(dt,j＝13.9,9.1hz,1h),2.25(dt,j＝21.4,13.3hz,1h),1.96(dd,j＝12.8,5.2hz,1h),1.77(dd,j＝14.1,7.2hz,2h),1.73(s,2h),1.67(dd,j＝8.1,4.2hz,1h),1.63–1.55(m,2h),1.47(d,j＝13.7hz,1h),1.42(d,j＝9.8hz,9h),1.31(d,j＝3.8hz,2h),1.27(s,1h),1.12(s,6h),0.91–0.83(m,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.16,171.07,155.45,149.89,120.06,96.00,79.96,74.34,73.49,63.32,61.98,59.52,58.33,54.68,41.32,38.68,37.54,33.72,32.61,30.44,30.01,29.69,28.27,25.01,21.77,19.85,15.38,11.56.hresimsm/z600.3134[m+na]+。
实施例20：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(fmoc-l-天冬氨酸-1-叔丁酯)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.77(d,j＝7.5hz,2h),7.66–7.61(m,2h),7.41(t,j＝7.4hz,2h),7.33(t,j＝7.3hz,2h),6.12(s,1h),6.09(d,j＝8.1hz,1h),6.05(d,j＝10.9hz,1h),5.93(s,1h),5.44(s,1h),4.48(dd,j＝8.2,4.3hz,1h),4.41(dd,j＝10.0,7.5hz,1h),4.30(t,j＝12.2hz,2h),4.24(t,j＝7.2hz,1h),4.07(d,j＝10.4hz,1h),4.03(s,1h),3.74(dd,j＝10.7,7.2hz,1h),3.52–3.45(m,1h),3.14(d,j＝9.7hz,1h),2.90(ddd,j＝42.1,16.9,4.6hz,2h),2.64–2.55(m,1h),2.24(ddd,j＝27.1,13.4,8.4hz,1h),1.94(dd,j＝13.0,5.5hz,1h),1.79–1.72(m,1h),1.68(s,1h),1.64(dd,j＝11.5,3.7hz,1h),1.62–1.53(m,2h),1.47(d,j＝11.5hz,10h),1.24(d,j＝3.9hz,1h),1.21(d,j＝3.9hz,1h),1.12(d,j＝6.2hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.30,169.37,156.02,149.67,143.89,141.25,127.68,127.09,125.29,120.63,119.94,95.92,82.84,76.34,74.54,73.47,67.20,63.32,62.00,59.31,54.84,50.73,47.12,41.36,38.63,37.24,33.71,32.61,30.55,30.02,29.69,27.86,21.77,19.87.hresimsm/z758.3542[m+h]+。
实施例21：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l脯氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.19–6.12(m,1h),6.11–5.99(m,1h),5.80(d,j＝15.9hz,1h),5.49(s,1h),4.48(s,1h),4.28(d,j＝10.3hz,1h),4.18(d,j＝6.6hz,1h),4.06(d,j＝9.8hz,1h),3.77(dd,j＝10.3,6.7hz,1h),3.53–3.31(m,3h),3.21(dd,j＝48.5,9.7hz,1h),2.65–2.55(m,1h),2.33–2.22(m,1h),2.17(dd,j＝20.5,7.7hz,1h),1.98(dd,j＝12.6,5.5hz,1h),1.93–1.80(m,2h),1.78–1.62(m,5h),1.57(dd,j＝26.4,16.5hz,2h),1.46(d,j＝13.5hz,1h),1.40(d,j＝5.0hz,8h),1.26(dt,j＝21.9,9.2hz,4h),1.10(d,j＝13.8hz,5h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ171.47,120.25,96.18,77.73,73.91,73.46,63.34,61.83,59.88,59.35,54.55,46.69,41.25,40.84,38.64,33.74,32.51,30.52,30.03(d,j＝7.1hz),28.31(d,j＝18.3hz),24.60,21.70,19.70.hresimsm/z562.2997[m+h]+。
实施例22：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(对氰基苯甲酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,dmso)δ7.99–7.92(m,4h),6.06(d,j＝17.3hz,3h),5.88(d,j＝10.2hz,1h),5.63(s,1h),4.42(s,1h),4.12(d,j＝10.2hz,1h),3.84(d,j＝10.2hz,1h),3.54–3.47(m,1h),3.35(s,1h),3.14(d,j＝9.8hz,1h),2.54(dt,j＝13.7,9.2hz,1h),2.19–2.08(m,1h),1.91(dd,j＝12.8,5.5hz,1h),1.78–1.70(m,1h),1.55–1.39(m,3h),1.30(d,j＝13.6hz,1h),1.24–1.19(m,1h),1.14(d,j＝6.8hz,1h),0.99(d,j＝15.8hz,6h).13cnmr(126mhz,dmso)δ207.49,163.84,151.04,134.78,133.03,130.39,120.09,115.57,96.28,75.37,74.44,72.00,63.05,62.53,59.62,54.31,41.77,40.92,38.78,33.79,33.15,30.74,29.78,22.08,20.20hresimsm/z494.2162[m+h]+。
实施例23：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(2-氯-3-吡啶甲酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,dmso)δ8.53(dd,j＝4.8,2.0hz,1h),8.13(dd,j＝7.7,1.9hz,1h),7.52(dd,j＝7.7,4.8hz,1h),6.26(s,1h),6.11(s,1h),6.01(s,1h),5.85(d,j＝10.4hz,1h),5.63(s,1h),4.43(d,j＝5.0hz,1h),4.13(d,j＝10.2hz,1h),3.86(d,j＝10.2hz,1h),3.53(dd,j＝10.4,7.1hz,1h),3.36(dd,j＝10.0,4.3hz,1h),3.13(d,j＝9.7hz,1h),2.55(dt,j＝13.6,9.1hz,1h),2.18–2.06(m,1h),1.90(dd,j＝12.9,5.4hz,1h),1.80–1.70(m,1h),1.55–1.38(m,3h),1.30(d,j＝13.3hz,1h),1.21(d,j＝10.9hz,1h),1.13(t,j＝8.2hz,1h),0.99(d,j＝6.0hz,6h).13cnmr(126mhz,dmso)δ207.22,162.54,152.61,150.99,148.77,141.11,127.24,123.50,120.29,96.25,75.43,74.47,72.00,63.05,62.51,59.45,54.40,41.81,40.95,38.78,33.78,33.21,30.79,29.77,22.15,20.24.hresimsm/z504.1774[m+h]+。
实施例24：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(2,5-二氟苯甲酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,dmso)δ7.56–7.46(m,2h),7.36(td,j＝9.5,4.2hz,1h),6.22(s,1h),6.05(d,j＝9.6hz,2h),5.89(d,j＝8.5hz,1h),5.63(s,1h),4.43(s,1h),4.13(d,j＝10.2hz,1h),3.86(d,j＝10.2hz,1h),3.54(s,1h),3.14(d,j＝9.7hz,1h),2.54(dt,j＝13.7,9.1hz,1h),2.13(dt,j＝21.3,13.4hz,1h),1.90(dd,j＝12.8,5.3hz,1h),1.80–1.71(m,1h),1.48(ddd,j＝35.9,19.1,9.5hz,3h),1.31(d,j＝13.3hz,1h),1.18(dt,j＝20.7,12.6hz,3h),0.98(t,j＝13.3hz,6h).13cnmr(126mhz,dmso)δ207.37,160.97,158.70(d,j＝11.9hz),156.74,151.01,121.98(dd,j＝24.3,9.3hz),120.50(dd,j＝11.5,7.8hz),120.11,119.19(dd,j＝24.6,8.4hz),118.32,118.12,96.27,75.21,74.44,72.02,63.07,62.47,59.56,54.34,41.78,40.95,38.79,33.78,33.18,30.75,29.78,22.10,20.20.hresimsm/z505.2018[m+h]+。
实施例25：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(2-氟-4-苄氧基苯甲酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,dmso)δ7.74(t,j＝8.8hz,1h),7.44(d,j＝7.4hz,2h),7.39(t,j＝7.4hz,2h),7.34(t,j＝7.1hz,1h),6.93(dd,j＝27.8,11.0hz,2h),6.01(s,2h),5.95(s,1h),5.89(d,j＝10.2hz,1h),5.61(s,1h),5.18(d,j＝10.2hz,2h),4.41(d,j＝4.0hz,1h),4.12(d,j＝10.1hz,1h),3.85(d,j＝10.2hz,1h),3.51(dd,j＝9.8,7.1hz,1h),3.36(d,j＝10.7hz,1h),3.10(d,j＝9.7hz,1h),2.58–2.50(m,1h),2.13(dt,j＝21.4,13.5hz,1h),1.89(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),1.79–1.69(m,1h),1.57–1.39(m,3h),1.31(d,j＝13.6hz,1h),1.22(dd,j＝22.8,12.2hz,2h),1.15(d,j＝6.8hz,1h),0.97(dd,j＝19.9,7.0hz,6h).13cnmr(126mhz,dmso)δ207.56,163.62(d,j＝11.6hz),151.25,133.78,128.96,128.60,128.37,119.82,111.65,96.29,74.43(d,j＝6.4hz),72.03,70.45,63.03,59.61,54.31,41.91,40.95,38.80,33.79,33.17,30.73,29.80,22.09,20.21.hresimsm/z593.2539[m+h]+。
实施例26：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(2,3,4-三氟苯甲酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,dmso)δ7.64(dd,j＝14.2,6.8hz,1h),7.41(dd,j＝16.9,8.9hz,1h),6.10(s,1h),6.04(s,1h),5.86(s,1h),5.63(s,1h),4.42(s,1h),4.13(d,j＝10.2hz,1h),3.85(d,j＝10.2hz,1h),3.52(s,1h),3.14(d,j＝9.7hz,1h),2.54(dt,j＝13.6,9.1hz,1h),2.18–2.05(m,1h),1.89(dd,j＝12.9,5.4hz,1h),1.80–1.72(m,1h),1.56–1.39(m,3h),1.31(d,j＝13.3hz,1h),1.19(dd,j＝23.6,10.5hz,1h),1.13(t,j＝8.2hz,1h),1.05(t,j＝7.0hz,2h),0.97(dd,j＝18.2,6.3hz,6h).13cnmr(126mhz,dmso)δ207.24,160.64,151.07,138.89,127.17(d,j＝4.9hz),120.03,117.30,113.40–112.93(m),96.26,75.18,74.45,72.03,63.02,62.50,59.52,56.48,54.37,41.82,40.94,38.80,33.78,33.18,30.76,29.78,22.11,20.23,18.98.hresimsm/z523.1929[m+h]+。
实施例27:
将冬凌草甲素(500mg，0.73mmol)用丙酮溶解，缓慢滴加1.2ml琼斯试剂，反应20min，tlc检测反应完全，用水洗涤三次，取有机相用无水硫酸镁干燥，过滤得到澄清溶液蒸干用丙酮和正己烷重结晶得1-氧代冬凌草甲素。以1-氧代冬凌草甲素为原料，参照实施例1合成方法。
ent-1–氧代-6β,7β-二羟基-[14β-o-((4s,5r)-3-(叔丁氧羰基)-2-(4-甲氧基苯基)-4-苯基-1,3-噁唑烷-5-甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.36–7.25(m,7h),6.88(d,j＝8.5hz,2h),6.35(s,2h),6.14(s,1h),5.88(s,1h),5.45(d,j＝31.4hz,2h),5.32(d,j＝11.8hz,1h),4.46(d,j＝2.9hz,1h),4.26(d,j＝10.6hz,1h),3.99(d,j＝10.6hz,1h),3.82(s,3h),3.68(dd,j＝11.3,9.3hz,1h),2.36(dddd,j＝20.3,15.3,9.9,5.5hz,4h),2.15–2.09(m,1h),1.94–1.82(m,4h),1.73–1.65(m,1h),1.51(dd,j＝19.5,12.3hz,1h),1.14(s,3h),1.07(s,9h),0.96(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ211.52,204.46,168.75,160.06,149.17,128.54,127.80,126.32,122.00,113.56,96.69,91.84,80.67,73.38,64.81,62.47,61.36,59.39,55.32,50.62,48.48,41.03,38.28,35.66,32.77,30.39,29.88,29.67,27.85,23.06,19.10.hresimsm/z744.3380[m+h]+。
实施例28：
ent-1-氧代-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-亮氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例26合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.24(s,1h),5.90(s,1h),5.60(s,1h),5.38(d,j＝11.6hz,1h),4.84(d,j＝7.3hz,1h),4.29(dd,j＝10.7,0.7hz,1h),4.23(s,1h),4.20–4.14(m,1h),4.03(dd,j＝10.7,1.4hz,1h),4.01–3.99(m,1h),3.78(dd,j＝11.6,8.9hz,1h),3.10(d,j＝9.3hz,1h),2.55(dt,j＝13.9,8.7hz,1h),2.46(ddd,j＝15.6,10.9,6.5hz,1h),2.33(ddd,j＝15.4,8.9,4.6hz,1h),2.22(dd,j＝13.7,4.3hz,1h),2.02–1.87(m,3h),1.77–1.66(m,3h),1.66–1.53(m,3h),1.45–1.38(m,9h),1.35–1.27(m,2h),1.20(s,3h),1.00(s,3h),0.88(t,j＝6.5hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ211.67,204.53,171.90,155.33,149.42,121.87,96.83,79.98,74.99,73.40,64.86,61.33,59.80,52.53,50.72,48.52,41.42,40.88,38.41,35.74,32.85,30.51,29.98,29.68,28.25,24.81,23.19,22.62,22.07,19.15.hresimsm/z576.3158[m+h]+。
实施例29：
ent-1-氧代-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-脯氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例26合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.22(d,j＝22.1hz,1h),5.80(d,j＝17.4hz,1h),5.59(s,1h),5.45–5.31(m,1h),4.58(s,1h),4.23(ddd,j＝26.9,19.5,8.4hz,2h),4.02(dd,j＝10.7,1.3hz,1h),3.80(dt,j＝14.8,7.5hz,1h),3.46–3.30(m,2h),3.13(dd,j＝39.1,9.4hz,1h),2.56(dt,j＝13.9,8.8hz,1h),2.48–2.40(m,1h),2.36–2.28(m,1h),2.23(dd,j＝13.5,4.8hz,1h),2.12(dq,j＝12.9,8.2hz,1h),1.95(dd,j＝17.3,9.0hz,2h),1.91–1.86(m,1h),1.82(dd,j＝13.1,6.1hz,1h),1.78–1.68(m,2h),1.65–1.55(m,1h),1.40(s,8h),1.34–1.26(m,2h),1.24(s,1h),1.19(s,3h),0.99(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ211.85,204.71,171.55,149.19,121.97,96.88,80.14,75.94,73.15(d,j＝15.5hz),64.83,61.20,60.26,59.99,59.23,50.76,48.51,46.61,46.30,41.35,41.11,38.48(d,j＝15.2hz),35.82,32.86,30.51,30.01,29.71(d,j＝9.1hz),28.34(d,j＝13.9hz),24.51,23.36(d,j＝14.1hz),19.05.hresimsm/z560.2854[m+h]+。
实施例30：
ent-1-氧代-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-缬氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例26合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.22(s,1h),5.86(d,j＝13.6hz,1h),5.58(s,1h),5.35(d,j＝11.7hz,1h),4.98(d,j＝8.1hz,1h),4.27(d,j＝10.7hz,1h),4.22(s,1h),4.08–3.99(m,2h),3.77(dd,j＝11.6,9.0hz,1h),3.10(d,j＝9.3hz,1h),2.55(dt,j＝14.0,8.8hz,1h),2.48–2.38(m,1h),2.36–2.28(m,1h),2.21(dd,j＝13.6,4.4hz,1h),2.03(dt,j＝18.1,5.9hz,1h),1.95(dt,j＝17.5,7.1hz,2h),1.88(dd,j＝10.9,4.3hz,1h),1.71(ddd,j＝18.1,12.4,8.1hz,1h),1.61(td,j＝13.1,7.4hz,1h),1.41(d,j＝9.9hz,9h),1.33–1.26(m,1h),1.18(s,3h),0.97(d,j＝12.7hz,3h),0.88(dd,j＝13.8,5.8hz,3h),0.83(d,j＝6.7hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ211.67,204.52,171.19,149.36,121.94,96.79,79.92,75.15,73.36,64.86,61.31,59.79,59.05,50.68,48.48,41.44,38.38,35.73,32.84,30.76,30.49,29.92,28.24,23.18,19.12,18.85,17.75.hresimsm/z562.2998[m+h]+。
实施例31：
ent-1-氧代-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-异亮氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例26合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.23(s,1h),5.87(s,1h),5.58(s,1h),5.35(d,j＝11.6hz,1h),4.99(d,j＝7.8hz,1h),4.27(d,j＝10.7hz,1h),4.23(s,1h),4.13–4.08(m,1h),4.02(d,j＝10.6hz,1h),3.78(dd,j＝11.5,9.0hz,1h),3.10(d,j＝9.3hz,1h),2.55(dt,j＝14.0,8.7hz,1h),2.48–2.40(m,1h),2.35–2.28(m,1h),2.21(dd,j＝13.6,4.5hz,1h),1.96–1.91(m,2h),1.88(dd,j＝10.9,4.3hz,1h),1.75–1.67(m,1h),1.61(td,j＝13.0,7.3hz,1h),1.40(d,j＝9.8hz,8h),1.29(dd,j＝13.4,6.9hz,2h),1.18(s,3h),1.14–1.04(m,1h),0.98(s,3h),0.90–0.80(m,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ211.69,204.48,149.40,121.88,96.78,75.21,73.33,64.84,61.30,59.78,58.21,50.66,48.49,41.44,38.39,37.39,35.73,32.84,30.49,29.91,28.25,25.08,23.18,19.11,15.34,11.45.hresimsm/z576.3157[m+h]+。
实施例32：
将冬凌草甲素(1g，2.75mmol)、tsoh(100mg，0.58mmol)和10ml2,2-二甲氧基丙烷溶解在100ml丙酮中，56℃回流15分钟。tlc检测反应完全，用水洗涤三次，取有机相用无水硫酸镁干燥，过滤得到澄清溶液蒸干硅胶柱层析分离得到白色固体。将丙酮叉保护的冬凌草甲素(1g，2.5mmol)、醋酐(1.26g，12.5mmol)、2.2ml三乙胺和dmap(1.51g，12.5mmol)加入到50ml茄型瓶中，在氮气保护条件下加入干燥过的二氯甲烷10ml，冰浴反应1h后室温条件下搅拌反应过夜，tlc检测反应完全。将反应液转移至分液漏斗中，用1m的稀盐酸洗涤两次，取有机相，无水硫酸镁干燥，硅胶柱层析得到白色固体。将白色固体溶解在10％hcl/thf(v/v＝1:1),室温条件下反应1h，tlc检测反应完全。将反应液转移至分液漏斗中，用nacl水溶液洗涤三次，取有机相，无水硫酸镁干燥，硅胶柱层析得到白色固体。
ent-1α-乙酰氧基-6β-乙酰氧基-7β,14β-二羟基-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ5.99(s,1h),5.33(s,1h),5.00(d,j＝6.1hz,1h),4.78(d,j＝0.9hz,1h),4.66(dd,j＝11.4,5.6hz,1h),4.28(d,j＝10.1hz,1h),4.18(dd,j＝10.5,1.2hz,1h),2.99(d,j＝9.8hz,1h),2.41(dt,j＝13.7,9.0hz,1h),2.28(s,3h),1.99(s,3h),1.91(dt,j＝12.6,4.3hz,1h),1.84–1.76(m,1h),1.62(d,j＝6.0hz,1h),1.53(ddd,j＝16.4,13.9,8.9hz,2h),1.45(dt,j＝13.6,3.2hz,1h),1.32(td,j＝14.1,2.8hz,1h),1.27–1.18(m,2h),1.16(s,3h),0.89(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ201.19,175.38,169.77,151.56,117.33,98.01,75.72,75.08,72.99,63.33,60.31,55.45,50.63,41.82,40.16,37.48,33.54,31.63,29.82,25.12,21.51.17.59.hresimsm/z449.2168[m+h]+。
实施例33：
将冬凌草甲素(1g，2.75mmol)、tsoh(100mg，0.58mmol)和10ml2,2-二甲氧基丙烷溶解在100ml丙酮中，56℃回流15分钟。tlc检测反应完全，用水洗涤三次，取有机相用无水硫酸镁干燥，过滤得到澄清溶液蒸干硅胶柱层析分离得到白色固体。将丙酮叉保护的冬凌草甲素(1g，2.5mmol)、醋酐(255mg，2.5mmol)、2.2ml三乙胺和dmap(1.5g，12.5mmol)加入到50ml茄型瓶中，在氮气保护条件下加入干燥过的二氯甲烷10ml，冰浴反应1h后室温条件下搅拌反应过夜，tlc检测反应完全。将反应液转移至分液漏斗中，用1m的稀盐酸洗涤两次，取有机相，无水硫酸镁干燥，硅胶柱层析得到白色固体，将白色固体(100mg，0.2mmol)和3,4-二甲氧基肉桂酸(42mg，0.2mmol)加入到50ml茄型瓶中，在氮气保护条件下于-78℃下加入干燥过的二氯甲烷10ml，，缓慢加入0.2mldast试剂反应10min，室温条件下过夜反应。tlc检测反应完全，用水洗涤三次，取有机相用无水硫酸镁干燥，过滤得到澄清溶液蒸干硅胶柱层析分离得到白色固体。
ent-1α-乙酰氧基-[6β-o-(3,4-二甲氧基肉桂酰基)]-7β-羟基-[14β-o-(3,4-二甲氧基肉桂酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.88(d,j＝15.9hz,1h),7.59(d,j＝15.9hz,1h),7.18(d,j＝8.3hz,1h),7.15(s,1h),7.04(d,j＝8.3hz,1h),6.99(s,1h),6.88(d,j＝8.2hz,1h),6.81(t,j＝9.1hz,1h),6.56(d,j＝15.9hz,1h),6.20(dd,j＝15.8,6.4hz,1h),6.01(d,j＝13.7hz,2h),5.36–5.31(m,2h),5.02(s,1h),4.73(dd,j＝11.2,5.5hz,1h),4.41(d,j＝10.6hz,1h),4.28(t,j＝8.9hz,1h),3.93(d,j＝6.4hz,6h),3.89(d,j＝5.4hz,6h),3.17(d,j＝9.9hz,1h),2.61–2.53(m,1h),2.36–2.31(m,1h),2.04(d,j＝7.4hz,3h),1.90–1.78(m,2h),1.71(d,j＝6.1hz,1h),1.56(d,j＝12.9hz,1h),1.46(t,j＝12.7hz,1h),1.40–1.30(m,3h),1.21(d,j＝8.9hz,3h),0.90(d,j＝8.9hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ200.70,169.93,168.85,165.90,151.25(d,j＝12.6hz),150.25,149.16,146.21,146.05,127.58,127.10,123.20,117.17,115.70,114.89,110.90(d,j＝9.0hz),109.77,109.31,96.81,75.94,75.16,74.05,63.40,60.14,56.04,52.18,41.97,40.46,40.23,37.70,33.68,31.65,30.37,29.68,27.00,25.17,21.58,21.38,17.82.hresimsm/z787.3342[m+h]+。
实施例34：
将冬凌草甲素(1g，2.75mmol)、tsoh(100mg，0.58mmol)和10ml2,2-二甲氧基丙烷溶解在100ml丙酮中，56℃回流15分钟。tlc检测反应完全，用水洗涤三次，取有机相用无水硫酸镁干燥，过滤得到澄清溶液蒸干硅胶柱层析分离得到白色固体。将丙酮叉保护的冬凌草甲素(1g，2.5mmol)、醋酐(255mg，2.5mmol)、2.2ml三乙胺和dmap(1.5g，12.5mmol)加入到50ml茄型瓶中，在氮气保护条件下加入干燥过的二氯甲烷10ml，冰浴反应1h后室温条件下搅拌反应过夜，tlc检测反应完全。将反应液转移至分液漏斗中，用1m的稀盐酸洗涤两次，取有机相，无水硫酸镁干燥，硅胶柱层析得到白色固体，将白色固体(100mg，0.2mmol)在-78℃下，用二氯甲烷溶解，缓慢加入0.2mldast试剂反应10min，室温条件下过夜反应。tlc检测反应完全，用水洗涤三次，取有机相用无水硫酸镁干燥，过滤得到澄清溶液蒸干硅胶柱层析分离得到白色固体。
ent-1α-乙酰氧基-6β-氢-14β-羟基-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.13(s,1h),5.53(s,1h),4.88(dd,j＝10.9,6.0hz,1h),4.88(dd,j＝10.9,6.0hz,1h),4.74(s,2h),4.58(s,1h),4.17(s,1h),4.12(d,j＝10.0hz,1h),4.10(q,j＝10.0hz,2h),4.09(d,j＝10.0hz,1h),3.83(dd,j＝43.1,15.7hz,1h),3.11(d,j＝8.7hz,1h),3.11(d,j＝8.7hz,1h),2.44–2.35(m,1h),2.45–2.33(m,1h),2.19(dd,j＝12.2,6.1hz,1h),2.19(dd,j＝12.2,6.1hz,1h),1.99(s,3h),1.89(s,1h),1.64–1.57(m,2h),1.49(s,1h),1.41(d,j＝8.7hz,1h),1.04(s,3h),1.01(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ205.36,203.22,169.94,149.04,120.20,82.53,76.74,73.59,68.21,64.94,55.04,52.97,51.04,43.79,36.97,32.26,30.83,29.68,29.37,24.60,22.45,21.40,18.95.esi-msm/z389.1959[m+h]+。
实施例35：
将1-乙酰氧基冬凌草甲素(200mg，0.52mmol)、3,4-二甲氧基肉桂酸(92mg，0.52mmol)、edci(497mg,2.6mmol)和dmap(317mg,2.6mmol)加入到50ml茄型瓶中，在氮气保护条件下加入干燥过的二氯甲烷10ml，冰浴反应1h后室温条件下搅拌反应过夜，tlc检测反应完全。将反应液转移至分液漏斗中，用1m的稀盐酸洗涤两次，取有机相，无水硫酸镁干燥，硅胶柱层析得到白色固体。将白色固体(60mg，0.11mmol)加入到50ml茄型瓶中，在氮气保护条件下于-78℃下加入干燥过的二氯甲烷10ml，，缓慢加入0.2mldast试剂反应10min，室温条件下过夜反应。tlc检测反应完全，用水洗涤三次，取有机相用无水硫酸镁干燥，过滤得到澄清溶液蒸干硅胶柱层析分离得到白色固体。
ent-1α-乙酰氧基-6β-氢-[14β-o-(3,4-二甲氧基肉桂酰基)]-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.55(d,j＝15.9hz,1h),7.04(dd,j＝8.3,1.7hz,1h),7.00(d,j＝1.6hz,1h),6.81(d,j＝8.3hz,1h),6.18(d,j＝15.9hz,1h),6.11(s,1h),5.74(s,1h),5.42(s,1h),4.88(dd,j＝10.9,6.1hz,1h),4.34(d,j＝10.1hz,1h),4.19(d,j＝7.1hz,2h),3.88(d,j＝7.2hz,6h),3.27(d,j＝6.7hz,1h),2.49–2.38(m,1h),2.22(t,j＝7.8hz,1h),2.00(s,3h),1.99–1.92(m,1h),1.92–1.86(m,1h),1.71(s,1h),1.70–1.63(m,1h),1.58(d,j＝13.7hz,1h),1.46(qd,j＝12.8,4.2hz,2h),1.38–1.30(m,1h),1.02(s,3h),0.95(d,j＝10.0hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ202.84,199.89,169.92,165.84,151.23,149.12,147.32,145.93,127.18,123.11,118.48,114.84,110.87,109.47,83.77,75.76,69.16,65.22,58.36,55.91,54.18,51.90,42.34,41.94,36.89,32.29,31.23,29.97,26.98,24.50,21.96,21.36,18.57.hresimsm/z579.2596[m+h]+。
实施例36：
ent-1-氧代-6β-氢-[14β-o-(3,4-二甲氧基肉桂酰基)]-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例34合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.61–7.56(m,1h),7.07(dd,j＝8.3,1.8hz,1h),7.03(d,j＝1.8hz,1h),6.85–6.82(m,1h),6.22(d,j＝15.9hz,1h),6.18(s,1h),5.74(s,1h),5.51(s,1h),4.38(t,j＝7.7hz,1h),4.30(dd,j＝14.7,4.9hz,2h),3.91(d,j＝4.0hz,6h),3.25(d,j＝7.9hz,1h),2.75(ddd,j＝14.6,11.7,6.3hz,1h),2.57–2.52(m,1h),2.49(ddd,j＝16.3,8.1,4.2hz,1h),2.36(dt,j＝14.6,4.6hz,1h),2.19–2.11(m,2h),1.98–1.83(m,4h),1.79–1.71(m,1h),1.62(s,2h),1.21(d,j＝6.5hz,3h),1.06(d,j＝9.5hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ209.83,202.53,199.76,165.95,151.23,149.11,147.63,145.99,127.20,123.14,119.28,114.84,110.84,109.47,83.31,75.67,70.12,64.26,61.63,61.34,55.92,47.17,42.06,41.19,36.36,31.97,31.34,30.17,23.22,19.16.hresimsm/z535.2327[m+h]+。
实施例37：
ent-1-氧代-6β-氢-[14β-o-(4-二甲氧基肉桂酰基)]-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例34合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.58(d,j＝15.9hz,1h),7.44(d,j＝8.7hz,2h),6.86(d,j＝8.7hz,2h),6.20(d,j＝15.9hz,1h),6.16(s,1h),5.72(s,1h),5.50(s,1h),4.38(d,j＝9.7hz,1h),4.31–4.26(m,2h),3.82(s,3h),3.23(d,j＝7.9hz,1h),2.74(ddd,j＝14.6,11.7,6.3hz,1h),2.56–2.45(m,2h),2.35(dt,j＝14.6,4.6hz,1h),2.18–2.10(m,2h),1.96–1.81(m,3h),1.77–1.69(m,1h),1.66(s,1h),1.19(d,j＝15.1hz,3h),1.05(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ209.87,202.56,199.65,166.04,161.48,147.69,145.74,129.98,126.97,119.22,114.68,114.21,83.31,77.27,77.01,76.76,75.61,70.10,64.24,61.58,61.31,55.34,47.17,42.05,41.18,36.37,31.96,31.33,30.17,29.68,23.23,19.17.hresimsm/z505.2218[m+h]+。
实施例38：
ent-1-氧代-6β-氢-[14β-o-(boc-l-亮氨酸)]-7，15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例34合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.12(s,1h),5.62(s,1h),5.46(s,1h),4.84(d,j＝8.2hz,1h),4.31(d,j＝9.8hz,1h),4.27–4.17(m,3h),3.12(d,j＝8.1hz,1h),2.73(ddd,j＝14.6,11.9,6.2hz,1h),2.52–2.40(m,2h),2.33(dt,j＝14.6,4.6hz,1h),2.17–2.08(m,2h),1.92–1.79(m,3h),1.70(d,j＝16.9hz,2h),1.67–1.58(m,1h),1.59–1.50(m,1h),1.39(s,9h),1.22–1.18(m,3h),1.04(s,3h),0.88(d,j＝6.4hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ209.75,119.19,83.12,75.80,69.96,63.91,61.10,52.36,47.01,41.85,41.06,36.31,31.90,31.32,30.08,29.67,28.29,24.67,23.21,22.73,21.80,19.21.hresimsm/z558.3048[m+h]+。
实施例39：
ent-1-氧代-6β-氢-[14β-o-(boc-l-苯丙氨酸)]-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例34合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.28–7.16(m,3h),7.10(d,j＝7.1hz,2h),6.09(d,j＝16.6hz,1h),5.62(d,j＝24.5hz,1h),5.43(d,j＝13.8hz,1h),4.96(d,j＝7.7hz,1h),4.47(d,j＝6.5hz,1h),4.33–4.15(m,3h),3.12–2.98(m,2h),2.93(dd,j＝13.7,7.0hz,1h),2.72(ddd,j＝14.6,12.1,6.1hz,1h),2.51–2.36(m,2h),2.34–2.27(m,1h),2.16–2.05(m,2h),1.93–1.76(m,3h),1.67(dt,j＝26.0,8.5hz,1h),1.37(d,j＝17.9hz,9h),1.20(d,j＝10.6hz,3h),1.01(d,j＝17.3hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ209.71,201.84,199.43,170.59,154.99,147.46,136.37,129.30,128.38,126.74,119.44,83.05,79.60,76.26,69.92,63.84,61.06,54.69,46.99,41.75,41.10,37.86,36.30,31.88,31.32,30.12,29.65,28.25,23.20,19.19.hresimsm/z592.2900[m+h]+。
实施例40：
ent-1-氧代-6β-氢-[14β-o-(boc-l-脯氨酸)]-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯参照实施例34合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.04(d,j＝19.2hz,1h),5.52(d,j＝7.0hz,1h),5.40(d,j＝15.8hz,1h),4.26(dd,j＝9.7,2.5hz,1h),4.23–4.17(m,2h),4.12(ddd,j＝29.3,8.7,3.0hz,1h),3.39–3.19(m,2h),3.04(dd,j＝24.3,7.9hz,1h),2.73–2.63(m,1h),2.43(dd,j＝16.2,7.0hz,1h),2.39–2.32(m,1h),2.31–2.23(m,1h),2.10–1.99(m,3h),1.94–1.87(m,1h),1.86–1.77(m,3h),1.77–1.70(m,1h),1.70–1.57(m,1h),1.34(d,j＝7.7hz,9h),1.18(s,1h),1.15(s,3h),0.97(t,j＝8.8hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ209.68,201.68,199.19,171.65(d,j＝14.5hz),153.60,147.51(d,j＝39.1hz),119.15(d,j＝29.6hz),83.22,79.58(d,j＝54.9hz),75.82(d,j＝5.7hz),69.99(d,j＝5.7hz),63.81,61.43(d,j＝9.9hz),61.16(d,j＝3.5hz),59.21(d,j＝14.4hz),47.03,46.30(d,j＝31.9hz),41.95(d,j＝18.9hz),41.18,36.32,31.90,31.31(d,j＝3.1hz),30.36,30.04(d,j＝16.9hz),29.65,28.34,24.08,23.33,19.18(d,j＝5.6hz).hresimsm/z542.2742[m+h]+。
实施例41：
ent-1-氧代-6β-氢-[14β-o-(boc-l-缬氨酸)]-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯参照实施例34合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.12(s,1h),5.60(s,1h),5.45(s,1h),4.95(d,j＝8.8hz,1h),4.33–4.24(m,3h),4.18–4.12(m,1h),3.16(d,j＝7.6hz,1h),2.73(ddd,j＝14.6,11.8,6.3hz,1h),2.54–2.49(m,1h),2.48–2.40(m,1h),2.34(dt,j＝14.6,4.6hz,1h),2.16(d,j＝9.6hz,1h),2.13–2.05(m,2h),1.92–1.84(m,3h),1.75–1.67(m,1h),1.41(s,9h),1.21(s,3h),1.05(s,3h),0.88(d,j＝6.8hz,3h),0.80(d,j＝6.9hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ209.67,170.82,147.29,119.21,83.23,76.52,70.10,63.98,61.62,61.32,58.71,47.19,41.97,41.23,36.35,31.97,31.35,30.88,30.06,28.29,23.17,19.00(d,j＝17.5hz),17.42.hresimsm/z544.2910[m+h]+。
实施例42：
ent-1-氧代-6β-氢-[14β-o-(boc-l-异亮氨酸)]-7,15-二氧代-6,20-氧桥-16-贝壳杉烯参照实施例34合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.12(s,1h),5.58(s,1h),5.44(s,1h),4.96(d,j＝8.6hz,1h),4.32–4.25(m,3h),4.19(dd,j＝8.5,4.5hz,1h),3.16(d,j＝7.4hz,1h),2.73(ddd,j＝14.5,11.9,6.3hz,1h),2.55–2.48(m,1h),2.44(dtd,j＝12.5,8.0,4.3hz,1h),2.33(dt,j＝14.6,4.5hz,1h),2.17–2.07(m,2h),1.92–1.83(m,3h),1.83–1.75(m,1h),1.75–1.68(m,1h),1.41(s,9h),1.29(ddd,j＝10.8,8.0,4.4hz,1h),1.21(s,3h),1.09(dd,j＝15.2,6.6hz,1h),1.05(s,3h),0.84(dd,j＝9.0,7.1hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ209.67,170.78,147.28,119.18,83.24,76.59,70.10,63.95,61.69,61.35,57.99,47.19,41.98,41.25,37.61,36.35,31.97,31.35,30.05,28.30,24.89,23.16,19.05,15.32,11.52.hresimsm/z558.3051[m+h]+。
实施例43：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(对氟苯甲酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.95(dd,j＝8.5,5.6hz,2h),7.07(t,j＝8.6hz,2h),6.20(s,1h),6.13–6.08(m,2h),5.52(s,1h),4.37(d,j＝10.4hz,1h),4.10(d,j＝10.7hz,1h),3.94(s,1h),3.76(dd,j＝10.8,7.0hz,1h),3.57–3.49(m,1h),3.29(d,j＝9.8hz,1h),2.72–2.64(m,1h),2.39–2.30(m,1h),2.02(dd,j＝13.1,5.8hz,1h),1.84–1.77(m,1h),1.73–1.64(m,2h),1.53–1.46(m,1h),1.33–1.27(m,2h),1.13(d,j＝8.0hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.62,165.98(d,j＝254.8hz),164.29,149.98,132.34,132.26,125.89,120.30,115.82,115.64,96.11,76.52,74.46,73.52,63.43,62.10,59.59,54.74,41.51,41.39,38.65,33.74,32.61,30.54,30.06,21.71,19.94.hresimsm/z487.2127[m+h]+。
实施例44：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(4-甲氧基肉桂酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.59(d,j＝15.9hz,1h),7.43(d,j＝8.7hz,2h),6.88(d,j＝8.7hz,2h),6.20(d,j＝15.9hz,1h),6.16(s,1h),5.92(s,1h),5.49(s,1h),4.74(s,1h),4.33(d,j＝10.4hz,1h),4.08(d,j＝10.4hz,1h),3.82(s,3h),3.79(d,j＝6.6hz,1h),3.50(dd,j＝11.2,5.7hz,1h),3.27(d,j＝9.8hz,1h),2.65(dt,j＝14.1,9.1hz,1h),2.33(ddd,j＝27.5,13.2,8.3hz,1h),2.01(dd,j＝12.8,5.8hz,1h),1.79–1.71(m,1h),1.71–1.64(m,1h),1.64–1.55(m,2h),1.50–1.44(m,1h),1.33–1.22(m,3h),1.12(s,6h),0.87(dd,j＝13.3,6.5hz,1h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.71,165.45,161.84,149.84,146.35,130.08,126.51,120.20,114.40,113.97,96.22,73.64,73.31,63.39,61.79,59.87,55.39,54.55,41.32,41.24,38.63,33.75,32.51,30.48,29.97,21.59,19.73.hresimsm/z525.2483[m+h]+。
实施例45：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(3,4-二甲氧基肉桂酰基)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.59(d,j＝15.9hz,1h),7.08(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),7.00(d,j＝1.9hz,1h),6.85(d,j＝8.3hz,1h),6.22(d,j＝15.9hz,1h),6.18(s,1h),6.15(d,j＝10.5hz,1h),5.95(s,1h),5.51(s,1h),4.43(s,1h),4.35(d,j＝10.4hz,1h),4.10(dd,j＝10.4,1.4hz,1h),3.91(d,j＝2.4hz,6h),3.82(dd,j＝10.5,6.6hz,1h),3.56–3.50(m,1h),3.30(d,j＝10.0hz,1h),2.72–2.63(m,1h),2.41–2.28(m,1h),2.04(dd,j＝13.0,5.1hz,1h),1.81–1.73(m,1h),1.73–1.62(m,3h),1.49(dt,j＝13.5,3.3hz,1h),1.34–1.28(m,3h),1.14(d,j＝2.4hz,6h),1.11(d,j＝4.0hz,1h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.69,165.32,151.60,149.86,149.26,146.53,126.77,123.23,120.25,114.22,110.97,109.50,96.37,73.86,73.52,63.38,61.84,59.94,55.97,55.95,54.55,41.37,41.24,38.65,33.77,32.54,30.50,30.12,21.63,19.78.hresimsm/z555.2589[m+h]+。
实施例46：
ent-1α-羟基-6β,7β-二羟基-[14β-o-(boc-l-苯丙氨酸)]-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照实施例1合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.28–7.18(m,3h),7.10(d,j＝6.8hz,2h),6.20(d,j＝10.7hz,1h),6.09(s,1h),5.91(s,1h),5.41(s,1h),5.10(d,j＝7.2hz,1h),4.49(s,1h),4.41(dd,j＝13.2,6.4hz,1h),4.25(d,j＝10.4hz,1h),4.02(d,j＝10.3hz,1h),3.70(dd,j＝10.1,7.5hz,1h),3.46–3.38(m,1h),3.07(dd,j＝13.9,6.3hz,1h),2.97–2.87(m,2h),2.53(dt,j＝13.7,9.1hz,1h),2.25–2.11(m,2h),2.03(d,j＝4.1hz,1h),1.88(dd,j＝12.9,5.3hz,1h),1.80–1.71(m,1h),1.71–1.47(m,4h),1.42(d,j＝13.6hz,1h),1.36(s,9h),1.07(d,j＝6.6hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ206.31,170.64,155.00,149.91,136.08,129.33,128.43,126.90,120.09,95.94,80.03,75.95,74.53,73.35,63.37,62.13,59.40,54.93,54.75,41.42,41.27,38.76,37.76,33.66,32.68,30.55,29.75,28.26,21.67,19.85.hresimsm/z612.3167[m+h]+。
实施例47：
ent-1α-乙酰氧基-6β,7β,14β-三羟基-15-氧代-7,20-氧桥-16-贝壳杉烯。参照cn102002051a合成方法。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.17(s,1h),5.55(s,1h),4.84(s,1h),4.59(dd,j＝11.2,5.5hz,1h),4.25(d,j＝10.4hz,1h),4.17(d,j＝10.3hz,1h),3.79(d,j＝7.4hz,1h),3.05(d,j＝9.6hz,1h),2.47–2.38(m,1h),1.97(s,3h),1.89–1.82(m,2h),1.78–1.71(m,1h),1.61–1.52(m,1h),1.45(dd,j＝15.6,8.1hz,2h),1.36–1.28(m,2h),1.20(t,j＝7.6hz,1h),1.13(d,j＝5.9hz,6h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ207.31,169.87,150.93,121.03,96.98,75.59,74.10,72.37,63.57,61.76,59.28,53.08,42.55,39.79,38.15,33.46,32.65,29.83,29.66,25.06,21.94,21.48,18.17.hresimsm/z407.2058[m+h]+。
实施例48:
在氮气保护条件下，将冬凌草甲素(100mg,0.27mmol)加入到醋酸酐(10ml)中，然后滴加2滴hclo4(约0.1eq)，搅拌反应过夜，tlc检测反应完全。将反应液移至分液漏斗中，用饱和nahco3溶液洗涤三次，取有机相用无水硫酸镁干燥，过滤并蒸干溶剂得到黄色油状液体，最后硅胶柱层析得到白色固体。
ent-1α,20α-二乙酰氧基-6β,14β-二乙酰氧基-7,15-二氧代-16-贝壳杉烯。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.18(s,1h),6.04(d,j＝12.9hz,1h),5.93(s,1h),5.43(s,1h),4.83(d,j＝13.5hz,1h),4.70(dd,j＝8.8,5.0hz,1h),4.56(d,j＝13.5hz,1h),3.12(s,1h),2.38(d,j＝6.1hz,1h),2.21(s,3h),2.14(s,3h),2.02(s,3h),1.96(s,3h),1.92(d,j＝12.9hz,1h),1.82–1.75(m,2h),1.73–1.68(m,1h),1.67–1.52(m,4h),1.50–1.41(m,1h),1.10(s,3h),0.95(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ199.61,197.65,170.55,170.42,169.56,169.35,145.65,119.43,81.78,75.36,73.81,66.03,63.26,54.17,53.17,45.90,42.73,38.91,34.42,33.88,30.94,26.03,21.94,21.52,21.19,21.02,20.83,18.75.hresimsm/z533.2377[m+h]+。
下面是本发明部分化合物的体外抗人类多种肿瘤增殖活性的药理实验及结果。
药理实验单位：南京欧际医药科技服务有限公司
实验设备与试剂
仪器超净工作台(chembasecbs-cj-1fd)
mco-15ac二氧化碳培养箱(日本三洋sanyo)
xd-202荧光倒置生物显微镜显微镜(南京江南永新光学有限公司)
thermomk3酶标仪(美国热电公司)
试剂与材料rpmi1640培养基(gibco公司)
dmem培养基购自(gibco公司)
胎牛血清购自(gibco公司)
dmso(sigma公司)
96孔细胞培养板(costar公司)
enogenecelltmcountingkit-8(cck-8)细胞活力检测试剂盒(e1ck-000208-10)(南京恩晶生物科技有限公司)
细胞株人肺癌细胞a549、人多发骨髓瘤细胞rpmi-8226细胞和人肝癌细胞hepg2细胞(南京恩晶生物科技有限公司)
实验方法：
cck-8染色法检测细胞活力：
1.细胞消化、计数、制成浓度为1×105个/ml的细胞悬液，96孔板中每孔加入100μl细胞悬液(每孔1×104个细胞)；
2.96孔板置于37℃，5％co2培养箱中培养24小时；
3.每孔加入100μl相应的含药物的培养基，同时设立阴性对照组，溶媒对照组，阳性对照组，每组5复孔；
4.96孔板置于37℃，5％co2培养箱中培养72小时；
5.每孔加入10μlcck-8溶液,将培养板在培养箱内孵育4小时，用酶标仪测定在450nm处的od值；
6.计算抑制率：
实验结果：
本发明部分化合物及已知的部分化合物对人肺癌细胞a549、人肝癌细胞hepg2、人多发骨髓瘤细胞rpmi-8226三个细胞具有不同程度的抑制细胞增殖的活性。本发明检测了新合成部分化合物及已知的部分化合物对3种人类癌细胞株抗增殖活性的ic50值。
表1部分实施例对3种人类癌细胞株抗增殖活性的ic50值(μm)
活性数据分析：
冬凌草甲素衍生物对三种癌细胞均有抑制作用，绝大多数衍生物表现出强于冬凌草甲素的抑制活性，且在三种癌细胞中对hepg2细胞表现出良好的选择性，其抑制程度相比较冬凌草甲素提升最大，其中最佳者达到了冬凌草甲素活性的11倍以上。此外，当在14位接入饱和疏水性烷基侧链，对其抗肿瘤活性提升不大，甚至会减小其抗肿瘤活性；而接入共轭结构侧链，尤其是连接苯环的侧链与苯环共轭时，对其活性提升较大；而例如氧、氮等杂原子的引入对其活性也有提升；氨基酸结构的引入对其抗肿瘤活性影响很大，且有利于提高水溶性。而亲水性的杂环侧链的引入可以极大的提高其水溶性。