一种基于人纤维连接蛋白Ⅲ型结构域展示双抗原表位制备抗原替代物的方法与流程

文档序号:14726234发布日期:2018-06-19 08:27阅读:来源:国知局
技术特征:

1.一种基于人纤维连接蛋白Ⅲ型结构域展示双抗原表位制备抗原替代物的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)通过基因重组,构建能在大肠杆菌中表达人纤维连接蛋白Ⅲ型结构域展示双抗原表位的重组蛋白表达载体;

(2)将步骤(1)中构建的重组蛋白表达载体转化大肠杆菌工程菌株,筛选出阳性转化子;

(3)将步骤(2)筛选出的阳性转化子进行诱导表达和纯化,获得所需重组蛋白。

2.如权利要求1所述一种基于人纤维连接蛋白Ⅲ型结构域展示双抗原表位制备抗原替代物的方法,其特征在于,所述方法还包括对步骤(3)获得的重组蛋白进行双抗体夹心ELISA法检测。

3.如权利要求1所述一种基于人纤维连接蛋白Ⅲ型结构域展示双抗原表位制备抗原替代物的方法,其特征在于,步骤(1)具体过程为:将编码抗原表位的碱基序列替换人纤维连接蛋白Ⅲ型结构域编码FG loop区的碱基序列(编码Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ser-Lys的碱基序列),并将编码另一个抗原表位碱基序列通过编码SSNNNNNNNNNN短肽重组在以上基因的3′端(S代表丝氨酸残基,N代表天冬酰胺残基);在以上融合基因的5′端重组编码6个组氨酸标签,用于重组蛋白鉴定及分离纯化;将以上融合基因克隆到大肠杆菌胞内表达载体上,即得到重组蛋白表达载体。

4.如权利要求1所述一种基于人纤维连接蛋白Ⅲ型结构域展示双抗原表位制备抗原替代物的方法,其特征在于,步骤(2)中得到的重组蛋白表达载体转化大肠杆菌工程菌株,应用含抗生素的LB固体培养基平板筛选出阳性转化子。

5.如权利要求1所述一种基于人纤维连接蛋白Ⅲ型结构域展示双抗原表位制备抗原替代物的方法,其特征在于,步骤(3)具体过程为:将步骤(2)筛选出的阳性转化子,在LB液体培养基中培养至OD600nm=0.4~0.6时,加入诱导剂异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达4小时,获得大肠杆菌胞内表达重组蛋白;将上述获得的大肠杆菌胞内表达重组蛋白经常规镍柱纯化,获得所需重组蛋白。

6.权利要求1所述方法制备的抗原替代物作为ELISA检测试剂盒中的标准抗原替代物。

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