本发明属于高分子多糖领域，特别涉及一种茯苓酸性多糖的制备方法及应用。
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：茯苓为多孔菌科茯苓poriacocos(schw.)wolf的干燥菌核，始载于《神农本草经》，被列为上品，为常用的传统药食两用中药。中医认为，茯苓性平，味甘、淡，归心、肺、脾、肾经，具有利水渗湿，健脾，宁心功效，主治水肿尿少，脾虚食少，便溏泄泻，心神不宁等。茯苓的主要成分为茯苓多糖和三萜，现代药理学研究表明具有调节免疫功能、抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳等生物活性，且效果显著。茯苓多糖类化学成分含量约占茯苓干燥菌核的93％，其免疫增强作用是通过细胞免疫和体液免疫两种途径来实现的。在体液免疫中，茯苓多糖能使免疫球蛋白igg含量上升；在细胞免疫方面，茯苓多糖主要是通过激活增强吞噬细胞的吞噬功能，刺激t细胞的转化.并诱导白介素(il-l、il-2)等细胞因子的生成。其中茯苓酸性多糖含量达到80％，为水不溶性成分。传统工艺是用浓碱在4℃以下浸渍提取，该方法所得提取液粘稠度高、过滤困难、后续处理麻烦、生产周期长，不利于转化大生产；有报道有人利用超临界萃取的方法提取茯苓酸性多糖，该方法不仅使用了复杂的助溶剂，还因超临界设备昂贵、高压操作、安全要求高、连续化生产较困难、生产成本高，不易于实现工业化大生产。因此，对茯苓酸性多糖进行工艺化制备提取，并结合药理学研究成果，把茯苓酸性多糖开发成新药，将对提高传统中药茯苓的利用率有现实意义。技术实现要素：本发明的目的是制备茯苓酸性多糖及其在免疫调节药物中的应用，并且制备工艺操作简单、成本低廉、工艺环保。为了实现该目的，本发明主要考虑了碱液的浓度、提取溶媒体积、提取温度及提取时间，以保证茯苓酸性多糖的提取率，达到最佳的提取效果。具体操作步骤如下：(1)茯苓药材经脱脂后，粉碎过筛，得茯苓粉；(2)取茯苓粉，在快速搅拌下加入碱溶液，于规定温度下提取，过滤或离心，得碱提液；(3)碱提液用酸溶液调ph至5～7，离心分离出沉淀，依次用水、乙醇洗涤沉淀，干燥至完全，粉碎，即得茯苓酸性多糖粉。所述步骤(1)脱脂，其操作方法为：向茯苓药材中，加入其重量的6～12倍量的体积分数为80％～95％的乙醇，回流提取1～3次，每次提取时间为1～4小时；所述(1)步中粉碎过筛，是其粉末能完全通过80～200目筛。所述(2)步中碱溶液，其所用碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钙、氧化钙中的一种或几种混合。所述(2)步中碱溶液的浓度为0.1mol/l～1.0mol/l，体积为茯苓粉的10～50倍，所述规定温度为20～50℃，提取所用时间为2～12小时。所述(3)步中用酸溶液调碱提液的ph，其酸为盐酸、硫酸、磷酸、醋酸或硝酸的一种或几种混合。所述茯苓酸性多糖粉中茯苓酸性多糖的含量以葡萄糖计不少于60％。所述茯苓酸性多糖可应用在制备具有免疫调节作用的药物中。所述茯苓酸性多糖可作为饲料添加剂在饲料中应用。本发明的有益效果是：本发明制备茯苓酸性多糖的方法其设备简单，无特殊要求，方便实现工业化大生产，具有操作简便、成本经济、工艺环保等特点。本发明制备茯苓酸性多糖的方法是在一定温度下搅拌提取，相比传统碱提取工艺，其大大降低了碱的用量和提取时间，节约了时间，提高了利用率。本发明提高了茯苓药材的利用率，大大节约了药材，避免了浪费。本发明制备所得的茯苓酸性多糖不仅单独使用具有免疫调节作用，还可以与其他药物配合使用。具体实施方式实施例1茯苓酸性多糖的制备(1)100kg茯苓药材，置提取罐中，加入95％乙醇720l，回流提取3次，每次3小时，药渣烘干，粉碎，过80目筛，得茯苓粉；(2)取茯苓粉，在快速搅拌下加入0.25mol/l氢氧化钠溶液1500l，于20℃下碱化4小时，过滤，得碱提液；(3)碱提液用2mol/l的盐酸调ph至5～7，离心分离出沉淀，依次用水、乙醇洗涤沉淀，干燥至完全，粉碎，即得茯苓酸性多糖粉70.2kg。实施例2茯苓酸性多糖的制备(1)100kg茯苓药材，置提取罐中，加入85％乙醇1000l，回流提取4次，每次2小时，药渣烘干，粉碎，过100目筛，得茯苓粉；(2)取茯苓粉，在快速搅拌下加入0.95mol/l氢氧化钾溶液4500l，于50℃下碱化8小时，过滤，得碱提液；(3)碱提液用2mol/l的盐酸调ph至5～7，离心分离出沉淀，依次用水、乙醇洗涤沉淀，干燥至完全，粉碎，即得茯苓酸性多糖粉62.6kg。实施例3茯苓酸性多糖的制备(1)100kg茯苓药材，置提取罐中，加入80％乙醇1200l，回流提取2次，每次4小时，药渣烘干，粉碎，过140目筛，得茯苓粉；(2)取茯苓粉，在快速搅拌下加入0.65mol/l碳酸钠溶液2000l，于40℃下碱化12小时，过滤，得碱提液；(3)碱提液用2mol/l的盐酸调ph至5～7，离心分离出沉淀，依次用水、乙醇洗涤沉淀，干燥至完全，粉碎，即得茯苓酸性多糖粉55.1kg。实施例4茯苓酸性多糖的制备(1)100kg茯苓药材，置提取罐中，加入90％乙醇800l，回流提取3次，每次1小时，药渣烘干，粉碎，过200目筛，得茯苓粉；(2)取茯苓粉，在快速搅拌下加入0.15mol/l碳酸氢钠溶液2500l，于30℃下碱化2小时，过滤，得碱提液；(3)碱提液用2mol/l的盐酸调ph至5～7，离心分离出沉淀，依次用水、乙醇洗涤沉淀，干燥至完全，粉碎，即得茯苓酸性多糖粉60.8kg。实施例5免疫调节试验昆明小鼠，雌雄各半，体质量18～22g，随机分为4组。灌胃给药14天，前4天空白组和模型组给予生理盐水10ml/kg/d，其余两组给予本发明实施例1茯苓酸性多糖(分为低、高两个剂量组，用量分别为125mg/kg/d和250mg/kg/d)，从第5天到第10天，除空白组外，其余各组每天按剂量70mg/kg腹腔注射环磷酰胺，后4天停止造模，空白组和模型组给予生理盐水10ml/kg/d，其余两组给予茯苓酸性多糖(用量仍分别为125mg/kg/d和250mg/kg/d)，末次给药次日摘眼球取血，分离血清，按试剂盒说明书方法测定il-2、ifn-γ和igg的含量结果见表1；取胸腺、脾脏测定脏器指数，结果见表2。表1il-2ifn-γigg空白组23.08±5.428.05±1.7428.42±8.74模型组19.85±6.576.97±2.3524.11±9.35低剂量组41.33±6.79**9.56±2.18*32.45±8.34*高剂量组35.62±7.36**11.42±2.41**34.47±7.92*注：与模型组比较，p<0.05*；p<0.01**。表2体重脾脏指数胸腺指数空白组25.62±3.714.56±0.851.78±0.55模型组23.84±3.892.49±0.931.12±0.67低剂量组25.97±3.545.63±0.74*2.42±0.41*高剂量组24.63±3.266.84±0.88**2.65±0.44*注：与模型组比较，p<0.05*；p<0.01**。以上实验数据说明，与模型组比较，茯苓酸性多糖能明显提高由环磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫功能，能明显提高小鼠的脾脏指数与胸腺指数；并能明显促进il-2、ifn-γ和igg的合成，从而提高免疫力。虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但熟悉本
技术领域：
的技术人员应当理解，我们所描述的具体的实施例只是说明性的，而不是用于对本发明的范围的限定，熟悉本
技术领域：
的技术人员在依照本发明的精神所做的等效修饰以及变化，都应当涵盖在本发明的权利要求所保护的范围内。当前第1页12