新颖细胞毒性剂和其缀合物的制作方法

本发明涉及新颖细胞毒性剂、新颖缀合物，尤其抗体-药物缀合物，和用于制成缀合物的中间体，包括新颖缀合试剂。其还涉及用于制成细胞毒性剂的新颖方法。
背景技术：
：近年来，许多研究致力于将作为有效负载的治疗剂与肽和蛋白质的缀合用于广泛范围的应用。蛋白质或肽本身可以具有治疗特性，且/或它可以是结合蛋白。此外，已经使用与聚合物的缀合来改进某些治疗剂的特性。举例来说，水溶性合成聚合物，尤其聚亚烷基二醇，广泛用于缀合治疗活性肽或蛋白质。已展示这些治疗性缀合物通过延长循环时间和降低清除率、降低全身毒性以及在一些情况下显示出临床功效提高而有利地改变药代动力学。将聚乙二醇peg与蛋白质和其它有效负载共价缀合的方法通常被称为“peg化”。结合蛋白(即，能够结合靶标上的结合配偶体的蛋白质或肽)，尤其抗体或抗体片段，频繁用于缀合物中。举例来说，其可以与细胞毒性剂和化疗药物缀合以产生抗体-药物缀合物(adc)，从而允许将这类药剂靶向递送到特定组织或结构，例如特定细胞类型或生长因子，使对正常健康组织的影响降到最低，并且显著减少与化疗治疗相关的副作用。这类缀合物在几个疾病领域中，尤其在癌症中具有广泛的潜在治疗应用。kupchan等人，《美国化学会志(j.am.chem.soc.)》,94,1354(1972)首先从非洲灌木卵叶美登木(maytenusovatus)的树皮中分离美登素，其中美登素因其抗白血病特性而被注意到。发现类美登素，如美登醇和美登醇的c-3酯由微生物(us4,151,042)、藓类植物(sakai等人,《天然产物杂志(j.nat.prod.)》,51(5),845-850,1988)制成，并且也可以通过合成途径产生(kupchan等人,《药物化学杂志(j.med.chem.)》,21,31-37,1978,higashideetal.,《自然(nature)》270,721-722,1977)。美登素和美登醇具有以下结构：us4,190,580描述了合成类美登素的方法，而us4,260,608鉴别了数种具有强效抗微生物和抗肿瘤活性的美登素衍生化合物，这是由于其对细胞具有抗有丝分裂效果。us4,260,608公开了在r3位置具有任选被取代的烷基的美登素衍生物。此后，已经进行了大量结构-活性关系研究以确定其它强效的类美登素的结构。kawai等人,《化学与药学通报(chem.pharm.bull.)》32(9),3441-3451(1984)公开了数个在c3位置被修饰的美登醇的结构，其在体内显示出强效抗肿瘤效果。ep0004466、us4,137,230和wo2012/061590都描述了新颖类美登素。类美登素的各种修饰描述于us2009/258870、taft等人,《欧洲化学期刊(chem.eur.j.)》2012,18,880-886，和harmrolfs等人,《贝尔斯坦有机化学杂志(beilsteinj.orgchem.)》2014,10,535-543中。众所周知的类美登素包括us5,208,020和wo2004/103272中所描述的被称为dm1和dm4的类美登素。其具有以下结构：安丝菌素是类美登素的子组，其合成由taft等人,《化学生物化学(chembiochem)》2008,9,1057-1060描述。着名的安丝菌素是ap-3，其具有以下结构：类美登素和类美登素酯随后在ep0425235中的adc背景下用作细胞毒性有效负载，并且此后已广泛使用，参见例如liu等人,《美国国家科学院院刊(proc.natl.acad.sci.usa)》,93,8618-8623(1996)；和kieda等人,《临床癌症研究(clin.cancerres.)》,15(12),2009。widdison等人,《药物化学杂志》49,4392-4408(2006)描述了硫醇键联的dm1和dm4类美登素有效负载。这些有效负载通过两步法缀合，其中首先使异双官能含硫醇的键联基与抗体内的赖氨酸残基反应，随后通过二硫键交换将含硫醇的有效负载与键联基缀合。通过这种两步法生产adc的替代方法是使用丁二酰亚胺基反-4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸酯(smcc)异双官能键联基，其在一端具有丁二酰亚胺基从而与抗体内部的赖氨酸残基反应，并且在另一端具有马来酰亚胺基从而与类美登素的硫醇基反应。市售的医药是使用smcc键联基以及美登木素dm1有效负载产生的adc的实例。是目前临床上领先的adc之一，并且用于治疗her2阳性乳癌。wo2014/064424描述了基于美登素的adc，其使用不同的特定技术将药物与抗体结合。示例是衍生自可从联宁(levena)(康诺泰(concortis))商购的试剂ahx-dm1的缀合物，并且其具有以下结构：仍然需要可以在adc背景下使用的新颖强效细胞毒性分子。需要使用使得产生更稳定的adc的缀合技术将这些有效负载与抗体有效缀合。还需要在癌症的相关细胞或动物模型中展示更大功效或效力的adc，或替代地，在细胞或测试个体中展示相似水平的功效/效力但非特异性毒性的量减少的adc。我们现已发现，某些新颖类美登素化合物具有提高的细胞毒活性，并且尤其适合于包含在与结合蛋白的缀合物中。与比较物化合物相比，类美登素另外具有提高的稳定性。我们还发现了一种新颖合成方法，其使得能够高效地制备这些新颖化合物，以及一种新颖并且改进的合成其它类美登素的方法。技术实现要素：本发明提供一种通式(i)化合物或其盐：其中r表示基团-y-oh、-y-o-rx、-y-sh、-y-s-rx、-y-s(o)2nh-rx、-y-nhs(o)2-rx、-y-c(o)h、-y-co2h、-y-c(o)-rx、-y-c(o)nh-rx、-y-nhc(o)-rx、-y-nhry、-y-nrxry、-y-nry-nhrz、-y-cry＝noh、-y-c(nh2)＝noh、-y-c(o)nh2、-y-c(o)nh-nh2或-y-s(o)2nh2，其中y不存在或y表示可以被氧原子中断且/或可以任选被-oh或-oc1-4烷基取代的c1-6亚烷基、c2-6亚烯基、c2-6亚炔基或c1-6亚烷氧基，或y表示亚苯基或c5-10亚杂芳基；rx表示被-oh、-sh、-nhry或-co2h取代的c1-6烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、苯基、c5-10杂芳基或苄基；ry和rz中的每一个独立地表示氢原子、c1-4烷基、苯基、c5-10杂芳基或苄基；x表示oh、oc1-4烷基、sh、s1-4烷基或cn；ra表示氢原子或c1-4烷基；rb表示氢、oh、c1-4烷氧基或c1-4烷基c(o)o-；rc表示氢、oh、c1-4烷氧基或c1-4烷基c(o)o-；rd表示氢原子或c1-4烷基；各re独立地表示卤素原子，各自可以任选被氧原子中断的任选被取代的c1-6烷基、c2-6烯基、c2-6炔基或c1-6烷氧基，任选被取代的苯基或c5-10杂芳基、-oh、-co2rv、-c(o)nrvrw、-nrvc(o)rw、nrvrw、_-srv、-s(o)-rv、s(o)2-rv、-s(o)2nrvrw、-cn基团或-no2基团；rv和rw各自独立地选自由以下组成的组：氢、苯基、苄基和各自可以任选被氧原子中断的任选被取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；并且n为0、1、2、3或4；rf表示氢原子或c1-4烷基；并且rg表示氢原子或任选被取代的烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基或杂芳基。本发明还提供通式(i')化合物或其盐：其中r表示基团-y-oh、-y-o-rx、-y-sh、-y-s-rx、-y-co2h、-y-co-rx、-y-nhry、-y-nry-nhrz或-y-cry＝noh，其中y不存在或y表示c1-6亚烷基或c1-6亚烷氧基，所述c1-6亚烷基或c1-6亚烷氧基中的任一个可以被氧原子中断，rx表示被-oh、-sh、-nhry或-co2h取代的c1-4烷基，并且ry和rz中的每一个独立地表示氢原子或c1-4烷基；x表示oh、oc1-4烷基、sh、s1-4烷基或cn；ra表示氢原子或c1-4烷基；rb表示氢、oh、c1-4烷氧基或c1-4烷基c(o)o-；rc表示氢、oh、c1-4烷氧基或c1-4烷基c(o)o-；；rd表示氢原子或c1-4烷基；各re独立地表示卤素原子、cf3基团或c1-4烷基或c1-4烷氧基，并且n为0、1、2、3或4；rf表示氢原子或c1-4烷基；并且rg表示氢原子或任选被取代的烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基或杂芳基。本发明还提供包含通过键联基与结合蛋白键联的通式(i)或(i')化合物或其盐的缀合物，所述键联基通过通式(i)或(i')的基团r与所述化合物连接。本发明进一步提供缀合试剂，所述缀合试剂包含通式(i')或(i')化合物或其盐，其通过键联基与至少一个能够与结合蛋白反应的官能团连接，所述键联基通过通式(i)或(i')的基团r与所述化合物连接。本发明进一步提供医药组合物，其包含根据本发明的化合物或缀合物，以及医药学上可接受的载剂，任选地以及另外的治疗剂。还提供治疗需要治疗增殖性、自身免疫性或感染性疾病或病症的患者的方法，其包含向患者施用医药学上有效量的根据本发明的化合物、缀合物或组合物。还提供根据本发明的化合物、缀合物或组合物，其用于治疗，尤其用于治疗增殖性、自身免疫性或感染性疾病或病症。此外，根据本发明的化合物或缀合物可以用于制造用于治疗增殖性、自身免疫性或感染性疾病或病症的药剂。本发明还提供用于制备根据本发明的化合物的方法，和适用于制备根据本发明的化合物的新颖中间体。附图说明图1和2展示实例2的结果，展示针对cd30阳性人类t细胞淋巴瘤细胞系karpas-299和her2阳性肿瘤细胞系sk-br-3的体外测定中细胞存活率％与化合物3和dm1的化合物浓度的曲线。图3展示实例16中所描述的小鼠异种移植研究的结果，展示在向小鼠施用媒剂、本发明的缀合物29或kadcyla之后随时间推移的平均肿瘤体积±标准误差的曲线。图4展示实例38的小鼠血清研究的结果，展示化合物26和78的随时间推移的药物相关离子曲线图，并且表明在7天后在37°℃下，在小鼠血清中发生化合物78的大量降解，而对于化合物26没有观察到相当的降解产物。具体实施方式化合物本发明的化合物具有通式(i)。本发明的化合物是一类具有出人意料的生物活性的新型含联苯化合物。本发明的化合物还可用于产生新的抗体-药物缀合物和缀合试剂。在一些实施例中，化合物具有式(i')。在本发明的化合物中，优选r中存在的任何基团ry或rz为甲基，或尤其氢原子。在一个优选实施例中，y不存在。如果y存在，则其优选为c1-4亚烷基或c1-4亚烷氧基，所述基团可以被氧原子中断，例如在-ch2-o-ch2-中。亚烷基可以是例如亚甲基、亚乙基或正亚丙基，而亚烷氧基可以是例如亚甲基氧基、亚乙基氧基或正亚丙基氧基。在一些实施例中，r为-y-oh、-y-sh、-y-s(o)2nh-rx、-y-nhs(o)2-rx、-y-co2h、-y-c(o)nh-rx、-y-nhc(o)-rx、-y-nhry或-y-s(o)2nh2，其中y不存在或y表示c1-6亚烷基，并且其中rx表示被-oh、-sh、-nh2或co2h取代的c1-6烷基。在一些优选实施例中，r为y-nhc(o)-rx，更优选r为y-nhc(o)-rx，其中y不存在，更优选r为y-nhc(o)-rx，其中y不存在并且rx表示被-sh取代的c1-6烷基。在一些优选实施例中，r为-oh、-nh2、-sh、-conh2、-so2nh2、-co2h、ch2oh或nhc(o)-c1-6亚烷基-sh，尤其-nh2或-nh-c(o)-c1-6亚烷基-sh，并且尤其-nh-c(o)-c1-6亚烷基-sh。当r是-nh-c(o)-c1-6烷基时，其中所述烷基被-sh取代(即-nh(c(o)-c1-6亚烷基-sh)，c1-6烷基部分可以是直链或分支链的，并且例如r可以包括以下：在一些实施例中，r为-oh、-nh2、-conh2或-co2h基团，或c1-4亚烷基，尤其被-oh、-nh2、-conh2或-co2h基团取代的亚甲基、亚乙基或正亚丙基。r基团可以位于苯环的任何位置。基团r优选在苯环的3-或4-位(即相对于苯环的位置与苯环形成键，苯环形成类美登素核心结构的一部分)。当存在时，各re独立地表示卤素原子，各自可以任选被氧原子中断的任选被取代的c1-6烷基、c2-6烯基、c2-6炔基或c1-6烷氧基，任选被取代的苯基或c5-10杂芳基、-oh、-co2rv、-c(o)nrvrw、-nrvc(o)rw、nrvrw、_-srv、-s(o)-rv、s(o)2-rv、-s(o)2nrvrw、-cn基团或-no2基团。在一些实施例中，re不存在，或当存在时，各re独立地表示卤素原子、cf3基团、c1-4烷基、c1-4烷氧基、-cn基团或-no2基团。在一些实施例中，存在的任何re基团独立地选自由以下组成的组：卤素原子、甲氧基、-cn基团或-no2基团。在一些优选实施例中，存在的任何re基团选自由以下组成的组：氯、氟、甲氧基、-cn基团和-no2基团。在一些优选实施例中，存在的任何re基团优选为卤素原子，例如氯、溴或氟原子，或甲基或甲氧基。优选n为0、1或2，尤其0或1，尤其0。当存在时，所述或每个re基团可以位于除苯环被r基团取代的位置外的苯基的任何位置。优选x表示oh。优选ra表示c1-4烷基，尤其甲基。优选rb表示氢。优选rc表示氢或甲氧基，更优选氢。优选rd表示c1-4烷基，尤其甲基。优选re表示氯或氢，尤其氯。优选rf表示c1-4烷基，尤其甲基。不认为取代基rg的性质对于本发明至关重要，在文献中已报道了美登素核心中这一位置的极宽范围的取代基。任何烷基、烯基或炔基优选具有至多10个，例如至多6个碳原子。环烷基优选具有5、6或7个环碳原子，并且可以例如被一个或多个c1-4烷基取代。芳基优选为苯基。杂芳基可以例如具有5、6或7个环原子，包括至少一个o、s和/或n原子。其可以是例如噻吩、吡咯、吡咯烷酮、恶唑、噻唑、咪唑、吡唑、吡唑啉、异恶唑、三唑、吡喃、吡啶、哌啶、二恶烷、吗啉、哒嗪、嘧啶、吡嗪或哌嗪基。可以存在于芳基或杂芳基rg上的任选取代基包括卤素原子和烷基、卤代烷基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基和烷氧基，其中任何烷基部分具有1到4个碳原子。烷基rg可以例如被一个或多个卤素原子和/或羟基、烷氧基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基取代，其中任何烷基部分具有1到4个碳原子。烷基rg也可以被一个或多个氨基酸，例如n-甲基丙氨酸或n-甲基半胱氨酸取代。在rg为被取代的烷基的一些实施例中，基团-c(o)-rg可以是氨基酸衍生的。举例来说，烷基rg可以被基团n(ri)(rii)取代，其中ri表示氢或c1-4烷基，并且其中rii表示c1-4烷基、-c(o)-c1-6烷基、-c(o)-c2-6烯基或-c(o)-c3-6环烷基，其中所述c3-6环烷基可以未被取代或被至多2个甲基取代。在一些优选实施例中，rg表示未被取代或被n(ri)(rii)取代的c1-4烷基；ri表示c1-4烷基；并且rii表示-c(o)-c1-6烷基。这类rg基团的实例包括在rg为被取代的烷基的一些实施例中，除了被如上文所论述的基团n(ri)(rii)取代之外，烷基可以任选被选自由以下组成的组的取代基取代：-oh、-sh、-sme、任选被羟基取代的c6-10芳香族碳环，和c5-10芳香族杂环。如上文所论述，基团-c(o)-rg可以是氨基酸衍生的。举例来说，基团-c(o)-rg可以包含氨基酸残基，例如l-丙氨酸或l-甲硫氨酸。在一些优选实施例中，rg表示被取代的或尤其未被取代的c1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基或任选被取代的苯基。最优选rg表示c1-4烷基，尤其异丙基。在一些优选实施例中，ra表示c1-4烷基；rb表示氢；rc表示氢或甲氧基；rd表示c1-4烷基；re不存在，或当存在时，表示氟、氯、甲氧基、-cn或-no2；n＝0或1；rf表示c1-4烷基；并且rg表示c1-4烷基。在一些优选实施例中，ra表示c1-4烷基；rb表示氢；rc表示氢或甲氧基；rd表示c1-4烷基；re不存在或存在表示氯；rf表示c1-4烷基；并且rg表示c1-4烷基。优选地，化合物是式(i')化合物或其盐：其中r表示基团-y-oh、-y-o-rx、-y-sh、-y-s-rx、-y-co2h、-y-c(o)-rx、-y-nhry、-y-nry-nhrz或-y-cry＝noh，其中y不存在或y表示c1-6亚烷基或c1-6亚烷氧基，其中任一个可以被氧原子中断，rx表示被-oh、-sh、-nhry或-co2h取代的c1-4烷基，ry和rz中的每一个独立地表示氢原子或c1-4烷基；x表示oh、oc1-4烷基、sh、s1-4烷基或cn；ra表示氢原子或c1-4烷基；rb表示氢、oh、c1-4烷氧基或c1-4烷基c(o)o-；rc表示氢、oh、c1-4烷氧基或c1-4烷基c(o)o-；rd表示氢原子或c1-4烷基；各re独立地表示卤素原子、cf3基团或c1-4烷基或c1-4烷氧基，并且n为0、1、2、3或4；rf表示氢原子或c1-4烷基；并且rg表示氢原子或任选被取代的烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基或杂芳基。优选地，本发明的化合物是通式(ia)化合物或其盐：其中r、x、n和ra-rg具有上文例如针对式(i)或式(i')化合物陈述的含义和优选含义。式(ia)化合物也可以表示如下：更优选地，本发明的化合物是通式(ib)化合物或其盐：其中r、re和n具有上文例如针对式(i)或式(i')化合物陈述的含义和优选含义。在一些实施例中，化合物是式(ib)化合物，其中n为0或1；当存在时，re为氯、氟、甲氧基、-cn或-no2；并且r为-nh2或-nh-c(o)-c1-6亚烷基-sh；或其盐。在一些实施例中，化合物是式(ic)化合物其中rg为n为0或1；当存在时，re为氯、氟、甲氧基、-cn或-no2；并且r为-nh2或-nh-c(o)-c1-6亚烷基-sh；或其盐。式(i)(和(i')、(ia)、(ib)和(ic))化合物可以形成盐。根据本发明的适合的盐包括由有机酸或无机酸形成的盐。具体来说，由酸形成的适合的盐包括由矿物酸、强有机羧酸(如未被取代或被例如卤素取代的1到4个碳原子的烷羧酸，如饱和或不饱和二甲酸，如羟基羧酸，如氨基酸)或由有机磺酸(如未被取代或被例如卤素取代的(c1-c4)烷基磺酸或芳基磺酸)形成的盐。医药学上可接受的酸加成盐包括由以下形成的盐：氢氯酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、三氟乙酸、丁二酸、高氯酸、富马酸、马来酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羟乙基磺酸、抗坏血酸、苹果酸、邻苯二甲酸、天冬氨酸和谷氨酸、赖氨酸和精胺酸。式(i)(和(i')、(ia)、(ib)和(ic))化合物和其盐也可以以溶剂合物，例如水合物的形式存在。本发明的化合物含有手性(不对称中心)。各个立体异构体(对映异构体和非对映异构体)在本发明的范围内。本发明的化合物也可以以阻转异构体形式存在，其是由于围绕单键(例如联芳基键)的旋转受阻而产生的立体异构体。在一些情况下，阻转异构体之间的相互转化的能垒可能足够高，使得各个阻转异构体是稳定的并且可以是可分离的。因此，各个阻转异构体也在本发明的范围内。在一些情况下，化合物可以以互变异构形式存在，并且这类化合物的互变异构形式也涵盖在本发明中。本发明的有效负载可以形成为缀合物，并且因此，其可以被视为适用于制备缀合物的中间体。其结构允许在c-19位置(对于命名法，参见higashide等人1977，见上文)与键联基连接。已知通过c-3位置的酯键与键联基连接的类美登素有效负载由酯酶裂解/水解或进行β消除。已知酯酶存在于血液内，并且这两种水解机制都可能导致类美登素有效负载在进入细胞之前过早释放，这可能导致非特异性毒性和/或抗肿瘤药物的效力降低。然而，诸位发明人理解，类美登素中存在c-3酯取代基与效力提高相关联。尽管当通过c-19位置进行缀合时，仍然可能进行β消除和/或由酯酶水解，但有效负载以及因此adc仍将保持活性，并且与在c-3处缀合的有效负载不同，在这些反应之后不会经历过早释放。此外，诸位发明人进行了比较体外血清稳定性实验，其出人意料地表明，适于通过c-3酯取代基缀合的比较物化合物的稳定性低于适于通过c-19位置缀合但仍含有c-3酯取代基的化合物。因此，本发明的化合物以及并入这些化合物的缀合物被视为具有良好稳定性。本发明的方法方面本发明的化合物的关键特征是存在于美登素核心结构中的苯基带有被基团r取代的另一苯基，并且这一基团r可以用于将化合物与结合蛋白缀合。美登素的核心结构含有带有氯原子的苯基。诸位发明人发现了一种新颖方法，所述方法取代这一氯原子以产生本发明的含苯基化合物。因此，本发明还提供一种用于制备本发明的化合物的方法，所述方法包含使以下物质反应：以下通式的化合物：其中x、ra-rd、rf和rg具有上文针对式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)化合物给出的含义和优选含义，和芳基-有机金属试剂，其中芳基部分是被(re)n和r或受保护形式的r取代的苯基，并且其中r和(re)n具有针对通式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)给出的含义，反应在过渡金属催化剂存在下进行。芳基-有机金属试剂可以是例如芳基锌、芳基锡、芳基镁或芳基硅试剂。更优选地，芳基-有机金属试剂是芳基硼试剂；尤其以下通式的芳基硼酸其中r和(re)n具有针对通式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)给出的含义，并且其中r可以以受保护形式存在。过渡金属催化剂可以例如衍生自铜、镍或尤其钯，并且金属一般处于氧化态i或ii。金属与二齿或尤其单齿配体一起存在。这一配体可以例如基于氮或尤其磷。尤其优选的催化剂是甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基联苯基)[(2-(2'-氨基-1,1'-联苯基)钯(ii)，可从西格玛奥德里奇(sigmaaldrich)以sphospdg3商购。反应一般将在溶剂，例如醚溶剂(如thf、2-甲基-thf、1,4-二恶烷、甲基叔丁基醚或二甲氧基乙烷)、烃(如甲苯)或醇(如正丁醇)存在下进行。优选使用thf。碱性条件通常是适合的。反应一般在室温或高温下进行。反应温度可以是例如20到120℃，例如30到100℃，尤其40-60℃。优选地，式(ii)化合物具有下式：其中ra、rb、rc、rd、rf、rg和x如上文所定义，例如针对式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)化合物所定义。应理解，在芳基-有机金属试剂，尤其式(iii)(和下文论述的(iiia)、(iiib)、(iiic)和(iiid))试剂中，基团r可以以受保护形式存在。用于保护羧基的适合基团包括甲基、乙基、叔丁基、苄基、对甲氧基苄基、9-芴基甲基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基和二苯甲基。用于保护氨基的适合基团包括叔丁氧基羰基(boc)、三苯甲基、苄氧羰基、9-芴基甲氧羰基、甲酰基、三甲基硅烷基和叔丁基二甲基硅烷基(tbdms)、邻苯二甲酰亚胺和丁二酰亚胺，并且类似基团可以用于保护肼或羟胺基。适用于保护羟基的基团包括硅烷基，包括三c1-6烷基硅烷基，如三甲基硅烷基、三乙基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基和叔丁基二甲基硅烷基；酰基，包括c1-6烷酰基，如甲酰基、乙酰基和特戊酰基，和芳香族酰基，如苯甲酰基；芳基甲基，如苄基、对甲氧基苄基、9-芴基甲基和二苯甲基；缩醛基，如四氢吡喃(thp)；醚，如烯丙基醚和叔丁基醚；甲氧基甲基醚(mom)和2-甲氧基乙氧基甲基醚(mem)。合适的保护基的大量实例可以在例如“greene有机合成中的保护基(greene'sprotectivegroupsinorganicsynthesis)”,wiley-blackwell,2014中找到。当芳基-有机金属试剂含有呈受保护形式的基团r时，本发明方法的直接产物将是式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)化合物或其盐，其中基团r也以所述受保护形式存在，因此：通过去除保护基将这些受保护化合物转化为相应的通式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)化合物或其盐，并且因此，受保护化合物适用作制备通式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)化合物或其盐的中间体。这些预期本身具有生物活性的受保护化合物是新颖的，并且形成本发明的另一方面。保护基是上文所提及的保护基之一的化合物尤其优选。在一些优选实施例中，方法包括在钯催化剂存在下使式(ii)化合物与芳基硼试剂反应，其中芳基部分是被(re)n和r或受保护形式的r取代的苯基，其中r和(re)n具有针对通式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)给出的含义。芳基卤化物与芳基硼试剂之间的钯催化反应在本领域中通常称为铃木(suzuki)反应、铃木偶联、铃木-宫浦(suzuki-miyaura)反应或铃木-宫浦偶联。在方法包含铃木反应的情况下，在一些实施例中，芳基硼试剂是芳基-硼酸、芳基-硼酸酯或芳基三氟硼酸盐。优选芳基硼试剂是例如式(iii)的芳基-硼酸或芳基硼酸酯，例如式(iiia)的频哪醇酯、式(iiib)的1,3-丙二醇酯、式(iiic)的新戊二醇酯或式(iiid)的n-甲基亚氨基二乙酸酯)：其中r和(re)n具有针对通式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)给出的含义，并且其中r可以以受保护形式存在；尤其以下通式的芳基硼酸其中r和(re)n具有针对通式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)给出的含义，并且其中r可以以受保护形式存在。当存在于芳基硼试剂中的r和/或re基团可能形成盐时(例如在含有-nh2作为r基团的芳基硼试剂的情况下)，可以使用适合的盐形式的试剂(如在r为-nh2的情况下，氢氯酸盐)。当方法包含进行铃木反应(即涉及芳基硼试剂并且使用钯催化剂的偶联)时，反应通常在适合的碱，如无机钾碱，例如磷酸钾、碳酸钾、氢氧化钾或氟化钾存在下进行。优选地，反应在磷酸钾存在下进行。适用于涉及式(iii)化合物和适当的芳基硼试剂的铃木反应的钯催化剂包括基于含有环己基的空间位阻膦配体的钯催化剂，如如上文所提及的甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基联苯基)[(2-(2'-氨基-1,1'-联苯基)钯(ii)，其可从西格玛奥德里奇以sphospdg3商购，和甲磺酸(2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯基][(2-(2'-氨基-1,1'-联苯基)]钯(ii)，其可从西格玛奥德里奇以xphospdg3商购，或两者的混合物。其它实例包括由西格玛奥德里奇以商品名sphospdg4和xphospdg4销售的催化剂。下文提供这些催化剂的结构：适合的催化剂的另一实例是与xphos配体(2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联苯)组合的乙酸钯(ii)，其同样可从西格玛奥德里奇购得。当方法包含进行铃木反应(即涉及芳基硼试剂和使用钯催化剂的偶联)时，所述反应可以例如在高温下(在例如30到100℃，或40到60℃范围内的温度下)，或更优选地，在环境温度下(例如取决于当地的环境条件，在15到40℃的温度范围内)进行。当方法包含进行铃木反应(即涉及芳基硼试剂和使用钯催化剂的偶联)时，所述反应通常在水存在下进行。已发现添加水促进反应并且加速反应。因此，在优选实施例中，方法包含在钯催化剂存在下，并且在水存在下，例如使用水性溶剂系统，使式(ii)化合物与芳基硼试剂反应，其中芳基部分是被(re)n和r或受保护形式的r取代的苯基，其中r和(re)n具有针对通式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)给出的含义。适合的水性溶剂体系的实例包括醚:水溶剂系统，如thf:水、2-甲基thf:水、乙醚:水、二异丙醚:水、甲基叔丁基醚:水、二甲氧基乙烷:水和1,4-二恶烷:水。其它实例包括醇:水溶剂系统，如正丁醇:水和甲苯:水系统。在一些优选实施例中，溶剂系统是thf:水，例如体积比为5:1到20:1，尤其约10:1。还发现在不存在或基本不存在氧气的情况下，芳基硼试剂与式(ii)化合物之间的钯催化反应进行得特别好。通常，在从系统中吹扫空气之后，在如氩气或氮气的惰性气氛下进行反应。可以进行多次吹扫-再填充循环以使系统中剩余的氧气水平最小化。因此，在一些优选实施例中，铃木反应在不存在或基本不存在氧气的情况下进行。已发现铃木反应在存在水和基本上不存在氧气的情况下作用得特别好。因此，在一些优选实施例中，芳基-有机金属试剂是芳基-硼酸或芳基-硼酸酯，并且反应在存在钯催化剂、存在水并且不存在或基本上不存在氧气的情况下进行。本发明的方法出乎意料地提供了包含各种官能团的广泛范围的联芳基基序的获取，并且以高产率还提供了对某些式(i)、(i')、(ia)、(ib)和(ic)化合物的直接获取。鉴于在式(ii)化合物中空间位阻富电子芳基氯部分的感知反应性，并且鉴于类美登素化合物复杂并且敏感的化学结构，在本发明的化合物的制备中成功使用温和条件是特别出人意料的。本发明方法的有效性是出人意料的，特别是因为预期使用钯催化剂可能导致类美登素核心结构的二烯和/或环氧化物部分的降解。事实上这并未发生。应了解，在联芳基偶联步骤之后，可以对所得化合物进行进一步的化学转化。举例来说，如上所述，当芳基-有机金属试剂含有受保护形式的基团r时，方法的直接产物也将呈受保护形式，并且可以进行脱保护步骤，在脱保护步骤中保护基被去除。作为另一实例，其中联芳基偶联步骤的产物是式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)化合物，其可以通过随后的化学转化转化为另一式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)化合物(例如r为-nh2的化合物可以转化为r为-nh-c(o)-c1-6烷基-sh的化合物，或r为-ch2oh的化合物可以通过氧化转化为r为-co2h的化合物)。作为另一实例，式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)化合物适用于产生缀合剂和缀合物，并且方法还可以包含一个或多个其它步骤，其中式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)化合物转化为本发明的缀合试剂，或转化为本发明的缀合物。缀合物和缀合试剂本发明的缀合物和试剂含有键联基，其通过式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)的基团r将在本文中被称作有效负载或药物d的式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)化合物或其盐连接到本发明的缀合物中的结合蛋白或本发明的缀合试剂中的官能团。缀合物和试剂可以分别由以下示意性地表示：d～键联基～f'或d～键联基～f其中d为药物，f为试剂的官能团，其与结合蛋白反应产生包括缀合物中存在的结合蛋白的基团f'。虽然在一些实施例中，例如在包含含有可以充当核心类美登素结构与结合蛋白之间的间隔基的侧接r基团的式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)化合物的缀合物的情况下，键联基可以是键，在其它优选实施例中，所述键联基不是键，例如键联基包含充当药物与结合蛋白之间，或药物与与结合蛋白反应的试剂的官能团之间的间隔基的基团。在一些优选实施例中，缀合物包含式(i')化合物。通过使用所属领域中已知的键联化学物质，通过基团r将化合物与适合的结合蛋白(例如抗体、抗体片段等)键联，可以将本发明的化合物制成缀合物，尤其抗体药物缀合物(adc)。示例性的键联化学物质包括分别在wo2004/060965和wo2013/090590中公开的基于马来酰亚胺或n-羟基丁二酰亚胺的连接化学物质，和在wo2014/064424a1中公开的连接化学物质。如本文所用，术语“结合蛋白”意欲包括结合蛋白和肽，并且除非上下文特别要求，否则应理解为包括肽以及蛋白质。可以用于本发明缀合物的结合蛋白包括可以充当靶标上的结合配偶体的结合剂的任何蛋白质、多肽或肽。靶标可以是例如微生物、病毒或细胞，例如癌细胞或免疫细胞。因此，结合蛋白用于将本发明的化合物(根据本发明的缀合物中的有效负载)靶向特定靶标。这类结合蛋白的实例包括通过合理或组合蛋白质工程技术获得的全长抗体、抗体片段、免疫球蛋白(ig)和非ig蛋白支架/抗体模拟物，以及凝集素。蛋白质-药物缀合物中最常使用的结合蛋白是抗体，并且除非上下文特别要求，否则对结合蛋白的任何参考应理解为包括对抗体的具体参考。如本文所用，“抗体”是指一种免疫球蛋白分子，其通过免疫球蛋白分子的可变区内的至少一个抗原识别位点识别并且特异性结合靶抗原，如蛋白质、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质或其组合。术语“抗体”包括多克隆抗体、单克隆抗体、如双特异性抗体的多特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包含抗体的抗原决定部分的融合蛋白，以及包含抗原识别位点的任何其它修饰的免疫球蛋白分子，只要抗体表现出所需的生物活性即可。基于抗体分别被称作α、δ、ε、γ和μ的重链恒定结构域的标识，抗体可以包括五种主要类别的免疫球蛋白中的任一种：iga、igd、ige、igg和igm，或其亚类(同种型)(例如iggl、igg2、igg3、igg4、igal和iga2)。不同类别的免疫球蛋白具有不同并且众所周知的亚基结构和三维构型。在一个实施例中，抗体是iggl或igg4。此外，除非上下文另有要求，否则术语“抗体”应理解为涵盖全长抗体和包含全长抗体的抗原结合区的抗体片段。抗体片段可以是例如fab、fab'、f(ab')2、scfv、fv、双抗体、微型抗体或由抗体片段形成的多特异性抗体，所述抗体片段例如由scfv片段或双抗体，和任选的fc片段或ch结构域的不同排列构成的微型抗体，如scfv-fc、scfv-fc-scfv、fab-scfv、(fab'scfv)2、sc双抗体、sc双抗体-fc、sc双抗体-ch3、scfv-ch3和scfv-ch2-ch3融合蛋白。抗体片段可以通过酶促裂解、合成或重组技术产生。结合蛋白可以作为靶标，例如与增殖性、自身免疫性或感染性疾病相关的细胞或病毒表面上的受体、抗原或其它部分的结合剂。举例来说，结合蛋白可以是与癌细胞的细胞表面抗原特异性结合的抗体。鉴别和验证用于癌细胞的抗体靶向的细胞表面抗原的方法例如在carterp等人,《内分泌相关癌症(endocr.relat.cancer.)》2004年12月；ll(4):659-87中已知，并且数种用于治疗癌症的抗体-药物缀合物目前正在临床开发中。可用于治疗癌症的抗体和特定癌症的肿瘤标记物的实例也是所属领域中熟知的并且可以使用。或者，靶标可以是免疫细胞，例如负责产生自身免疫抗体的细胞，或与自身免疫疾病相关联的活化淋巴细胞。在其它实施例中，靶标可以是与微生物或病毒感染或疾病相关联的微生物或病毒。适用于本发明的缀合物的抗体的实例是抗cd30抗体，例如嵌合单克隆抗体cac10，例如贝伦妥单抗(brentuximab)。适用于本发明的缀合物的抗体的另一实例是抗her2抗体，例如曲妥珠单抗(trastuzumab)。根据本发明的缀合试剂包含通过基团r经由键联基连接到能够与结合蛋白反应的官能团f的根据本发明的化合物。如上文所提及，任何类型的已知缀合反应可以用于形成本发明的缀合物。举例来说，可以使用硫醇键合、胺缀合或点击化学的已知方法进行反应。举例来说，试剂可以含有马来酰亚胺基、n-羟基丁二酰亚胺基、点击化学基团，例如叠氮基或炔基、胺基、羧基或活性酯基。其它可能的方法包括使用已经用专门用于缀合的氨基酸(如工程化半胱氨酸或非天然氨基酸)重组工程化的结合蛋白，以及通过(如与转谷氨酰胺酶的)特定酶促反应进行的酶促缀合。酶促缀合也可以使用分选酶实现，所述分选酶可以例如将键联基-药物部分缀合到已经工程化到结合蛋白中的序列lpxtg。结合蛋白上的反应位点本质上可以是亲核的或亲电子的。常见的缀合位点位于赖氨酸或半胱氨酸氨基酸残基或碳水化合物部分。或者，缀合可以在已经连接到结合蛋白的多组氨酸标记上发生。优选地，缀合试剂包含能够与结合蛋白中存在的至少一种亲电子试剂，或尤其亲核试剂反应，并且因此与其化学键合的官能团。因此，缀合试剂通常包括至少一个在与亲核试剂反应时损失的离去基。缀合试剂可以例如包括两个或更多个离去基，并且优选地，根据本发明的缀合试剂能够与两种亲核试剂反应。如果存在两个或更多个离去基，则其可以相同或不同。或者，缀合试剂可以含有单个基团，其在化学上等效于两个离去基，并且所述单个基团能够与两种亲核试剂反应。亲核基团包括硫原子和胺基，并且结合蛋白质中的亲核基团例如由半胱氨酸、赖氨酸或组氨酸残基提供。在本发明的一个优选实施例中，亲核基团是存在于结合蛋白中的半胱氨酸残基中存在的硫原子。这种结构可以通过还原结合蛋白中存在的二硫键来获得。在另一实施例中，亲核基团可以是存在于与结合蛋白连接的多组氨酸标记中存在的组氨酸残基中的咪唑基团。一组试剂基于双-卤基-马来酰亚胺或双-硫基-马来酰亚胺和其衍生物，如smith等人《美国化学会志》2010,132,1960-1965，和schumacher等人,《生物缀合物化学(bioconj.chem.)》,2011,22,132-136中所描述。这些试剂含有官能团：其中每个l是离去基。马来酰亚胺环的氮原子与键联基团连接。类似地，可以使用含有单个离去基l的马来酰亚胺：同样，马来酰亚胺环的氮原子与键联基团连接。此外，可以使用不具有离去基的马来酰亚胺：同样，马来酰亚胺环的氮原子与键联基团连接。举例来说，例如在结合蛋白中可能存在的二硫键还原之后，基于马来酰亚胺的试剂可以与结合蛋白中存在的硫醇部分反应。另一组试剂是wo2011/73391中所描述的试剂。这些试剂的实例包括官能团：其中每个l是离去基。另一组缀合试剂是基于活化酰基的缀合试剂，如n-羟基丁二酰亚胺酯，即其含有具有下式的官能团：或其盐。这种类型的官能团可以用于通过例如与结合蛋白中存在的亲核胺基的酰胺化反应与结合蛋白缀合。缀合试剂的另一实例是含有吡啶基二硫化物基团的试剂其中r'不存在或表示吸电子基团，如-no2基团。这种类型的官能团可以用于通过例如与结合蛋白中存在的硫醇部分反应(例如由结合蛋白中的二硫桥键还原产生)与结合蛋白缀合，产生自身含有二硫键的缀合物。在本发明尤其优选的实施例中，缀合试剂含有官能团f：其中w表示吸电子基团，例如酮基、酯基-o-co-或砜基-so2-；a和b中的每一个独立地表示c1-5亚烷基或亚烯基链；并且各l独立地表示离去基，或者两个l一起表示离去基。当含有这类基团的试剂与蛋白质反应时，失去第一离去基l以原位形成含有下式官能团的缀合试剂：其中m为0到4，其与第一亲核试剂反应。然后失去第二离去基l，并且发生与第二亲核试剂的反应。作为使用含有官能团(v)的试剂作为起始物质的替代方案，可以使用含有官能团(vi)的试剂，因为官能团(v)和(vi)是彼此的化学等效物。本发明的这些缀合试剂是wo2005/007197和wo2010/100430中公开的一般类型。这些试剂可以例如用于靶向通过还原二硫键获得的两个硫原子，或存在于多组氨酸标记中的组氨酸残基中存在的咪唑基。离去基l可以是例如-sp、-op、-so2p、-oso2p、-n+pr13r14、卤素或-其中p表示氢原子或烷基(优选c1-6烷基)、芳基(优选苯基)或烷基-芳基(优选c1-6烷基-苯基)，或是包含-(ch2ch2o)q-部分的基团，其中q为六或更大的数目，并且r13和r14中的每一个独立地表示氢原子、c1-4烷基或基团p，并且表示被取代的芳基，尤其苯基，含有至少一个取代基，例如-cn、-cf3、-no2、-co2raa、-coh、-ch2oh、-coraa、-oraa、-ocoraa、-oco2raa、-sraa、-soraa、-so2raa、-nhcoraa、-nraa2、coraa、-nhco2raa、-npco2raa、-no、-nhoh、-nraaoh、-ch＝n-nhcoraa、-ch＝n-nraacoraa、-n+raa3、-n+hraa2、-n+h2raa、卤素(尤其氯，或尤其氟)、-c≡craa、-ch＝craa2和-ch＝chraa，其中每个raa表示氢原子或烷基(优选c1-6烷基)、芳基(优选苯基)或烷基-芳基(优选c1-6烷基-苯基)。优选存在吸电子取代基。在wo2016/059377中描述了缀合试剂，其中p表示包括-(ch2ch2o)q部分的基团，其中q为六或更大的数目，并且包括这类离去基的试剂形成本发明的一个优选实施例。这类试剂可以例如包括-(ch2ch2o)q-r1，其中r1是封端基团。r1可以是例如氢原子、烷基，尤其c1-4烷基，尤其甲基，或任选被取代的芳基，例如任选被取代的苯基，例如甲苯基。或者，封端基团可以包括官能团，如羧基或胺基。这类封端基团可以例如具有式ch2ch2co2h或-ch2ch2nh2，并且可以通过官能化-(ch2ch2o)q-链的末端单元来制备。或者，在缀合试剂中，-(ch2ch2o)q-基团可以具有两个连接点，而不是由封端基团封端，使得化学上存在两个离去基的等效物，其能够与两种亲核试剂反应。离去基的-(ch2ch2o)q-部分基于peg，聚乙二醇。peg可以是直链或分支链的，并且可以以任何方式衍生或官能化。q为6或更大的数目，例如6、7、8、9或10或更大。举例来说，q可以是6到9。q没有特定上限。q可以例如是150或更小，例如120或更小，例如100或更小。举例来说，q可以是6或7到150，例如6或7到120。存在于根据本发明的新颖缀合试剂中的尤其优选的离去基l为-sp或-so2p，尤其-so2p。在这一基团中，一个优选实施例是其中p表示苯基，或尤其甲苯基。另一优选实施例是其中p表示包括-(ch2ch2o)q部分的基团，尤其其中q具有上文所提及的值之一，尤其7的基团。尤其优选的离去基l为-so2-(ch2ch2o)q-和-so2-(ch2ch2o)q-me，尤其-so2-(ch2ch2o)7-h和-so2-(ch2ch2o)7-me。贯穿本说明书，对离去基l的任何参考应理解为包括对这些优选基团的具体参考，尤其-so2-(ch2ch2o)q-h和-so2-(ch2ch2o)q-me，并且尤其-so2-(ch2ch2o)7-h和-so2-(ch2ch2o)7-me。优选地，w表示酮基。优选地，a和b中的每一个表示-ch2-，并且m为0。以上式v和vi的试剂形成包括基团f'的缀合物：其中w'表示吸电子基团或通过还原吸电子基团得到的基团，并且pr表示通过亲核试剂nu与a和b键合的结合蛋白。缀合过程的直接产物(如下文更详细地描述)是含有吸电子基团w的缀合物。然而，缀合过程在适合的条件下是可逆的。对于一些应用，例如需要快速释放结合蛋白的应用来说这可能是合乎需要的，但对于其它应用，结合蛋白的快速释放可能是不合需要的。因此，可能需要通过还原吸电子部分，得到防止结合蛋白释放的部分来使缀合物稳定。因此，缀合过程可以包含减少缀合物中吸电子基团的另外任选步骤。尤其优选使用硼氢化物，例如硼氢化钠、氰基硼氢化钠、硼氢化钾或三乙酰氧基硼氢化钠作为还原剂。可以使用的其它还原剂包括例如氯化锡(ii)、如烷醇铝的醇盐和氢化铝锂。因此，例如，含有酮基的部分w可以还原成含有ch(oh)基团的部分；醚基ch.oraa可以通过羟基与醚化剂反应获得；酯基ch.o.c(o)raa可以通过羟基与酰化剂的反应获得；胺基ch.nh2、ch.nhraa或ch.nraa2可以通过还原胺化由酮制备；或酰胺ch.nhc(o)raa或ch.n(c(o)raa)2可通过胺的酰化形成。砜可以还原成亚砜、硫化物或硫醇醚。优选地，基团f'和f具有下式：尤其在上式中，优选的离去基如上所述。优选地，每个nu是硫原子。另一组优选的缀合试剂含有官能团：～w-cr15r15'-cr15.l.l'(viii)其中w具有上文给出的含义和优选含义，并且：各r15表示氢原子或c1-4烷基，r15'表示氢原子，并且l和l'各自独立地表示离去基，或l和l'一起表示离去基；或各r15表示氢原子或c1-4烷基，l表示离去基，并且r15'和l'一起表示键。另一组缀合试剂包括官能团f：～w-(ch＝ch)p-(ch2)2-l(ix)或～w-(ch＝ch)p-ch＝ch2(x)其中w具有上文给出的含义和优选含义，p表示0或1到4的整数，优选0。尤其优选的这种类型的试剂包括官能团：～nh-co-ar'-co-(ch2)2-l(ixa)或～nh-co-ar'-co-ch＝ch2(xa)其中ar'表示任选被取代的芳基，尤其苯基。在所有情况下，离去基l和l'的优选含义如上文所提及。根据本发明的缀合试剂可以含有多于一个用于与结合蛋白反应的官能团。举例来说，试剂可以含有位于分子的一端的官能团，优选式(v)或(vi)的官能团，和分子中其它部分的一个或多个另外的官能团。这类结构描述于例如belcheva等人,《生物材料科学，聚合物版(j.biomater.scipolymeredn.)》9(3),207-226，并且适用于合成含有多种结合蛋白和/或多种有效负载的缀合物。可以通过类似于已知方法的方法制备本发明的新颖缀合试剂。式(i)中所有可能的基团r的共同特征是其可以容易地与键联基上的互补基团反应。因此，例如，羟基或硫醇基可以与键联基上的酸基反应形成酯键；氨基可以与酸基(包括活化的酸基，如dcc)反应形成酰胺键；如果需要，可以通过首先活化羧基，使羧基与胺基反应形成酰胺键；如果需要，可以通过首先活化羧基，使肼与醛或酮反应形成腙或与羧酸反应形成酰肼；氧胺基团可以与醛或酮反应形成肟。根据本发明的缀合试剂可以与结合蛋白反应以形成根据本发明的缀合物，并且这种反应形成本发明的另一方面。因此，包括适合的官能团，尤其官能团v或vi的缀合试剂与结合蛋白，尤其与抗体或抗体片段反应，以形成缀合物，尤其包括基团(vii)的缀合物。使用式(v)或(vi)的缀合试剂的关键特征是α-亚甲基离去基和双键与充当迈克尔(michael)活化部分的吸电子官能团交叉缀合。如果离去基倾向于在交叉官能试剂中消除而不是直接置换并且吸电子基团是适用于迈克尔反应的活化部分，那么依序分子内双烷基化可能通过连续迈克尔和逆迈克尔反应发生。在含有官能团(v)的试剂中，离去基用于掩蔽直到第一次烷基化发生后才暴露的潜在共轭双键，得到包括官能团(vi)的试剂和依序和交互的迈克尔和逆迈克尔反应的双烷基化结果。交叉官能烷基化剂可以含有与双键共轭或在离去基与吸电子基团之间的多个键。当通过蛋白质中的二硫键衍生的两个硫原子与结合蛋白结合时，方法可以通过还原二硫键，其后还原产物与本发明的试剂反应来进行。优选地，在引入缀合试剂之前，还原二硫键并且例如通过缓冲液交换去除任何过量还原剂。举例来说，可以使用常规方法用二硫苏糖醇、巯基乙醇或三羧基乙基膦还原二硫键。举例来说，在包含式(v)或(vi)的基团的缀合剂的情况下，缀合反应可以在与已知的缀合方法的条件，包括wo2005/007197、wo2009/047500、wo2014/064423和wo2014/064424中公开的条件类似的条件下进行。当使用具有n-羟基丁二酰亚胺酯的缀合试剂进行缀合时，例如通过与结合蛋白中存在的亲核胺基团的酰胺化反应，缀合反应也可以在与已知的缀合方法的条件，包括例如在widdison等人,《药物化学杂志》,2006,49(14),第4392-4408页，wo2004/103272、wo2012/061590或wo2013/090590中公开的条件类似的条件下进行。类似地，对于马来酰亚胺键联化学物质，可以使用如wo2004/010957或wo2004/060965中公开的条件。方法可以例如在溶剂或溶剂混合物中进行，其中所有反应物都是可溶的。举例来说，可以使结合蛋白在水性反应介质中与聚合物缀合试剂直接反应。取决于亲核试剂的ph要求，反应介质也可以经缓冲。反应的最佳ph一般是至少4.5，通常在约5.0与约8.5之间，优选约6.0到7.5。最佳反应条件当然将取决于所用的具体反应物。当使用水性反应介质时，3-40℃的反应温度一般是适合的。在有机介质(例如thf、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、dmf、dma)中进行的反应通常在高达环境温度的温度下进行。在一个优选实施例中，反应在水性缓冲液中进行，所述水性缓冲液可以含有一定比例的有机溶剂，例如至多50体积％的有机溶剂，通常5到20体积％的有机溶剂。可以使用化学计量当量或略微过量的缀合试剂有效缀合结合蛋白。然而，也可能用过量化学计量的缀合试剂进行缀合反应，并且对于某些蛋白质来说，或如果需要含有较高平均药物与抗体比例(较高dar)的缀合物，这是合乎需要的。在随后的缀合物纯化期间，例如通过离子交换色谱或hplc可以容易地去除过量试剂。当然，可以将多于一种缀合试剂与结合蛋白缀合，其中蛋白质含有足够的适合连接点。举例来说，在含有两种不同二硫键的结合蛋白中，或在含有一个二硫键并且还带有多组氨酸标记的结合蛋白中，有可能使用式(v)或(vi)的缀合试剂将每分子结合蛋白与两分子试剂缀合，并且这类缀合物形成本发明的一部分。键联基通过通式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)的基团r将有效负载连接到根据本发明的缀合物中的结合蛋白或能够与根据本发明的缀合试剂中的结合蛋白反应的官能团的键联基可以含有任何所需基团，例如本领域中常见的任何常规基团。键联基分段(i)。在一个实施例中，有效负载与式f'/f的基团之间的键联基，并且尤其在式(v)、(vi)、(vii)、(viii)、(ix)和(x)的缀合物或试剂中紧邻式f'/f的基团的键联基部分可以包括亚烷基(优选c1-10亚烷基)，或任选被取代的芳基或杂芳基，其中任何一个都可以被以下封端或中断：一个或多个氧原子、硫原子、-nraa基团(其中raa表示氢原子或烷基(优选c1-6烷基)、芳基(优选苯基)或烷基-芳基(优选c1-6烷基-苯基)基团)、酮基、-o-co-基团、-co-o-基团、-o-co-o、-o-co-nraa-、-nr-co-o-、-co-nraa-和/或-nraa.co-基团。适合的芳基包括苯基和萘基，而适合的杂芳基包括吡啶、吡咯、呋喃、吡喃、咪唑、吡唑、恶唑、哒嗪、嘧啶和嘌呤。尤其优选作为紧邻f/f'基团的键联基部分是芳基，尤其苯基。另外尤其优选作为紧邻f/f'基团的键联基部分是杂芳基，例如上文所提及的杂芳基之一。芳基或杂芳基可以邻近键联基团的另一部分，所述键联基团是或含有-nraa.co-或-co.nraa-基团，例如或-nh.co-或-co.nh-基团。在整个本说明书的此处和别处，当基团raa存在时，其优选为c1-4烷基，尤其甲基，或尤其氢原子。可存在于任选被取代的芳基，尤其苯基或杂芳基上的取代基包括例如选自以下的一个或多个相同或不同的取代基：烷基(优选c1-4烷基，尤其甲基，任选被oh或co2h取代)、-cf3、-nraa2、-cn、-no2、-co2raa、-coh、-ch2oh、-coraa、-oraa、-ocoraa、-oco2raa、-sraa、-soraa、-so2raa、-nhcoraa、-nraacoraa、-nhco2raa、-nraa.co2raa、-no、-nhoh、-nraa.oh、-ch＝n-nhcoraa、-ch＝n-nraa.coraa、-n+raa3、-n+h3、-n+hraa2、-n+h2raa、卤素(例如氟或氯)、-c≡craa-、ch＝craa2和-ch＝chraa，其中各raa独立地表示氢原子或烷基(优选c1-6烷基)、芳基(优选苯基)或烷基-芳基(优选c1-6烷基-苯基)。尤其优选存在吸电子取代基。优选的取代基包括例如cn、no2、-oraa、-ocoraa、-sraa、-nhcoraa、-nhoh和-nraa.coraa。优选地，键联基包括与基团f'/f相邻的上述基团之一。尤其优选的是缀合物和缀合试剂，其包括以下基团：或，尤其：同样适合的是下式的缀合物和缀合试剂：-co-nh-het-f'、-co-nh-het-f、-nh-co-het-f'和-nh-co-het-f，其中het表示杂芳基，例如上文所提及的杂芳基之一。上述结构中的任一个可以与下面的分段(ii)和(iii)中提及的任一结构相邻。在所有上式中，尤其式(xi)、(xii)、(xiii)和(xiv)中，优选f'具有式(vii)，例如上述(viia)、(viib)或(viic)，并且优选f具有式(v)或(vi)，例如上述(va)、(vb)、(via)或(vib)。键联基分段(ii)。在一个实施例中，键联基可以含有可降解的基团，即其可以含有在生理条件下断裂的基团，将有效负载与其所或将要结合的蛋白质分离。或者，它可以是在生理条件下不可裂解的键联基。当键联基在生理条件下断裂时，其优选在细胞内条件下可裂解。当靶标在细胞内时，优选键联基对胞外条件基本上不敏感(即不禁止向胞内靶标递送足够剂量的治疗剂)。当键联基含有可降解基团时，这一般对水解条件敏感，例如其可以是在某些ph值(例如酸性条件)下降解的基团。可以例如在内体或溶酶体中发现水解/酸性条件。在酸性条件下易于水解的基团的实例包括腙、缩氨基脲、缩氨基硫脲、顺式乌头酰胺、原酸酯和缩酮。对水解条件敏感的基团的实例包括：在优选实施例中，键联基包括举例来说，其可以包括：键联基也可能在还原条件下易于降解。举例来说，其可以含有在暴露于如硫醇的生物还原剂时可裂解的二硫化物基团。二硫化物基团的实例包括：其中r、r′、r″和r″′各自独立地为氢或c1-4烷基。在优选实施例中键联基包括举例来说，其可以包括键联基还可以含有易于酶促降解的基团，例如其可能易于由蛋白酶(例如溶酶体或内体蛋白酶)或肽酶裂解。在本发明尤其优选的实施例中，键联基的一部分含有肽基，所述肽基包含至少一个，例如至少两个、至少三个、至少四个或至少五个氨基酸残基，具体来说天然存在的α氨基酸。举例来说，键联基的那部分可以含有序列phe-leu、gly-phe-leu-gly、val-ala、val-cit、phe-lys或glu-glu-glu，并且优选存在val-cit肽基。如下文所论述，含有序列val-cit-pab的键联基是尤其优选的。易于酶促降解的基团的尤其优选的实例是：其中aa表示蛋白酶特异性氨基酸序列，如上文所提及的序列之一，尤其val-cit。换句话说，在优选实施例中键联基包括：举例来说，其可以包括在一些优选实施例中，键联基的pab部分(即苄氧羰基部分)可以直接键联到药物部分的r基团(例如在式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)化合物中的r为-nh2的情况下，连接到-nh2基团的残基，从而形成氨基甲酸酯部分，并且val基团的氮可以与键联基的其余部分连接。如上文所论述，在一些实施例中，式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)化合物可以含有式-nh-c(o)-c1-6亚烷基-sh的r基团。当并入本发明的缀合物或缀合试剂中时，这可以通过使用二硫键实现，例如：在这类情况下，可以认为缀合物或缀合试剂的键联基部分含有-sc1-6亚烷基，其可以通过还原二硫键裂解以释放含有式-nh-c(o)-c1-6亚烷基-sh的r基团的式(i)化合物。举例来说，在一些实施例中，键联基包含选自以下的-sc1-6亚烷基：这种类型的缀合物可以例如通过与适合的羧酸或羧酸衍生物的酰胺化反应，例如由式(i)、(i')、(ia)、(ib)或(ic)化合物合成，其中r基团为-nh2基团。因此，键联基团可以实际上被视为含有以下基团：例如如上所述的含有二硫化物基团的键联基团，其在暴露于生物还原剂时是可裂解的。本发明的缀合物包含通过r基团的残基与药物d缀合的结合蛋白(例如在式(i)化合物的情况下通过-nh-基团，其中r为-nh2，或在式(i)化合物的情况下通过基团-nhc(o)c1-6亚烷基-s-，其中r为-nhc(o)c1-6亚烷基-sh)。键联基可以携带单个有效负载d，或多于一个基团d。可以通过使用支化键联基并入多个基团d，所述支化键联基可以例如并入天冬氨酸或谷氨酸或类似残基。这引入了下式的支化元素：其中b为1、2、3或4，b＝1为天冬氨酸，并且b＝2为谷氨酸，并且b＝3表示一个优选实施例。上式中的每个酰基部分可以与基团d偶联。上述支化基团可以并入-co.ch2-基团，因此：如果需要，天冬氨酸或谷氨酸或类似残基可以与其它天冬氨酸和/或谷氨酸和/或类似残基偶联，例如：等等。以类似的方式，可以引入氨基酸赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、精氨酸或酪氨酸或类似的残基(例如赖氨酸或丝氨酸)以形成支化基团，因此：其中对于赖氨酸b为4，并且其中对于丝氨酸b为1。键联基分段(iii)。如果需要，本发明的试剂和缀合物的键联基可以含有寡聚物或聚合物(为方便起见，在本文中统称为“聚合物”)。聚合物可以例如是聚亚烷基二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯(例如聚丙烯酰吗啉)、聚甲基丙烯酸酯、聚恶唑啉、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺或聚甲基丙烯酰胺(例如聚羧甲基丙烯酰胺)，或hpma共聚物。另外，聚合物可以是易于酶促或水解降解的聚合物。这类聚合物例如包括聚酯、聚缩醛、聚(原酸酯)、聚碳酸酯、聚(亚氨基碳酸酯)和聚酰胺，如聚(氨基酸)。聚合物可以是均聚物、无规共聚物或结构上限定的共聚物，如嵌段共聚物，例如其可以是衍生自两种或更多种环氧烷，或衍生自聚(环氧烷)和聚酯、聚缩醛、聚(原酸酯)或聚(氨基酸)的嵌段共聚物。可以使用的多官能聚合物包括二乙烯醚-马来酸酐和苯乙烯-马来酸酐的共聚物。也可以使用天然存在的聚合物，例如多糖，如几丁质、葡聚糖、糊精、壳聚糖、淀粉、纤维素、糖原、聚(唾液酸)、透明质酸和其衍生物。也可以使用如聚谷氨酸的聚合物，也可以使用衍生自天然单体(如糖类或氨基酸)和合成单体(如环氧乙烷或甲基丙烯酸)的杂化聚合物。聚合物优选是水溶性合成聚合物，尤其聚亚烷基二醇。如果聚合物是聚亚烷基二醇，则这是优选含有c2和/或c3单元的聚亚烷基二醇，并且尤其聚乙二醇。聚合物，尤其聚亚烷基二醇可以含有单一的直链，或其可以具有由许多小链或大链构成的支化形态。可以使用被取代或封端的聚亚烷基二醇，例如甲氧基聚乙二醇。聚合物可以任选地以任何所需方式衍生或官能化。反应性基团可以在聚合物端或端基处键联，或通过侧接键联基沿聚合物链键联。如果peg存在于键联基中，则本发明的缀合物和试剂的键联基中存在的～(ch2-ch2-o-)～单元的最佳数目当然将取决于预期应用。对于一些应用，可以使用高分子量peg，例如数均分子量可以高达约75,000，例如高达50,000、40,000或30,000克/摩尔。举例来说，数均分子量可以在500到约75,000克/摩尔的范围内。然而，对于一些应用，较小的peg部分可能是优选的。举例来说，键联基的peg部分可以具有至多3,000克/摩尔的分子量。然而，含有少至2个重复单元，例如2到50个重复单元的peg基团适用于一些应用。含有2、3、4、5、6、7、8、9或10个重复单元，或12、20、24、36、40或48个重复单元的含peg部分可以例如存在于键联基中。wo2016/063006描述具有特定结构的含peg键联基的试剂和缀合物，并且包括这类键联基的试剂和缀合物形成本发明的一个优选实施例。在这类试剂和缀合物中，存在peg部分，其是或包括peg侧链，所述侧链具有式-ch2ch2orr的末端基团，其中rr表示氢原子、烷基，例如c1-4烷基，尤其甲基，或任选被取代的芳基，尤其苯基，尤其未被取代的苯基。这种类型的缀合物可以由下式示意性地表示：其中d表示本发明的新颖有效负载，f'表示结合蛋白，并且peg表示具有式-ch2ch2orr末端基团的聚乙二醇侧链。这种类型的试剂可以由下式示意性地表示：其中d表示本发明的有效负载，f表示能够与结合蛋白反应的官能团，并且peg表示具有式-ch2ch2or的末端基团的聚乙二醇侧链。官能团f优选能够与如上文所解释的蛋白质或肽中存在的两种亲核试剂反应，并且优选具有式(v)、(vi)或(viii)，尤其(v)或(vi)。在一个优选实施例中，键联基的peg部分中的所有peg都存在于peg侧链中。在另一实施例中，peg也可以存在于缀合物或试剂的主链中。与整个peg部分一样，peg侧链的大小将取决于预期应用。举例来说，所述peg侧链可以具有至多3,000克/摩尔的分子量。然而，由例如具有少至2个重复单元，例如2到50个重复单元的离散peg链组成的极小的寡聚物适用于某些应用，并且作为所述peg链存在于本发明的一个优选实施例中。peg侧链可以是直链或分支链的。可以使用peg链，例如具有12、20、24、36、40或48个重复单元的直链或分支链。还设想了键联基在环内包括至少两个～(ch2-ch2-o-)～单元的缀合物和试剂。举例来说，环可以通过环内的单个束缚原子连接到键联基的其余部分，或环可以通过环内的两个或多个束缚原子在单个点连接到键联基的其余部分。这种类型的缀合物可以由下式示意性地表示：其中d表示本发明的有效负载，f'表示通过键联基的蛋白质或肽结合部分与缀合物的其余部分结合的蛋白质或肽，并且表示包括至少两个乙二醇～(ch2-ch2-o-)～单元的环。这种类型的试剂可以由下式示意性地表示：其中d表示本发明的有效负载，f表示能够与蛋白质或肽结合的官能团，并且表示包括至少两个乙二醇～(ch2-ch2-o-)～单元的环。官能团f能够与蛋白质或肽反应，如下文更详细地解释。束缚原子可以是例如氮、碳、磷或硅原子，尤其氮和/或碳原子，并且在与键联基的其余部分连接的点处存在的原子可以是例如氮或碳原子。以下是本发明的缀合物或试剂中环与键联基的其余部分连接的可能形式的示意图，t表示环中的束缚原子，并且peg表示至少两个～(ch2-ch2-o-)～单元：适合的环的具体实例包括以下，其中符号～表示环并入到键联基中的点：优选地，环在单个点连接到键联基的其余部分，并且最优选地，环通过环中的单个束缚原子在单个点处连接到键联基的其余部分。环可以例如由～(ch2-ch2-o-)x～单元组成，其中x为至少2，优选2到20。或者，环可含有～(ch2-ch2-o-)x～单元，其中x为至少2，优选2到50，尤其2到20，但也可以包含一个或多个如上文所提及的另外的原子，或可以以某一其它方式衍生。可以例如使用具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个重复单元，或24、36、40或48个重复单元的含peg的环。可以由冠醚容易地合成缀合物和试剂。冠醚是乙二醇的环状寡聚物，并且已知许多不同的冠醚，其中一些完全由乙二醇单元组成，并且其中一些在环内含有额外的原子。举例来说，氮杂冠醚含有氮原子，而二氮杂冠醚含有两个氮原子。许多冠醚是可商购的，并且这些冠醚为合成根据本发明的缀合物和试剂提供了方便的起点。带有可以与其它化合物反应的官能团的冠醚是已知的，例如带有羧基、羟基、氨基或醛基的冠醚是已知的，与任选带有如羧基、羟基、氨基、异氰酸酯、硝基或醛基的官能团的苯环稠合的冠醚同样已知。可以并入根据本发明的缀合物和试剂中的典型冠醚包括下文所示的结构。这些可以通过存在于环内的原子，尤其氮原子，或通过存在于侧链上的基团，例如羟基、氨基、羧基、醛基、异氰酸酯基或硝基与本发明的缀合物和试剂的键联基的主链连接。典型键联如下所示：还设想了缀合物和试剂，其中键联基包括环糊精。举例来说，环糊精可以是α-环糊精、β-环糊精或γ-环糊精。在包含环糊精的缀合物中，环糊精可以例如通过3-或6-位，例如通过氨基官能化环糊精与键联基的其余部分键合。在这种类型的缀合物和试剂的一些实施例中，环糊精可以是单环。在这种类型的缀合物和试剂的一些实施例中，环糊精可以作为束缚于键联基主链的侧基存在。在一些实施例中，缀合试剂可以由下式示意性地表示且/或缀合物可以由下式示意性地表示其中d表示本发明的有效负载，例如下式的基团：其中rg为-c(ch3)2或n为0或1；re不存在，或当存在时，为氯、氟、甲氧基、-cn或-no2；表示包括当存在于本发明的缀合物中时促进缀合物在生理条件下降解的部分的基团，如在d通过-nh-基团缀合的情况下，-ala-val-或-pab-cit-val-基团，或在d通过-nh-c(o)-c1-6亚烷基-s-基团缀合的情况下，与缀合物中存在的另一个硫原子共价结合的含硫基团(即产生存在于缀合物中的二硫基-s-s-部分)，如含有-s-c1-6亚烷基部分的基团；f表示能够与结合蛋白反应的官能团，如其中r'不存在或表示吸电子基团，如-no2基团，或f表示并且f'表示通过官能团的残基与缀合物的其余部分键合的蛋白质或肽。举例来说，这种类型的缀合试剂可以具有以下结构：其中rg为-c(ch3)2或n为0或1；re不存在，或当存在时，为氯、氟、甲氧基、-cn或-no2；并且r'不存在或表示吸电子基团，如-no2基团；并且缀合物可以具有由键联基的蛋白质或肽结合部分与蛋白质或肽反应产生的相应结构。在一些实施例中，缀合试剂可以由下式示意性地表示且/或缀合物可以由下式示意性地表示其中d表示本发明的有效负载，例如下式的基团：其中rg为-c(ch3)2或n为0或1；re不存在，或当存在时，为氯、氟、甲氧基、-cn或-no2；表示包括当存在于本发明的缀合物中时促进缀合物在生理条件下降解的部分的基团，如在d通过-nh-基团缀合的情况下，-ala-val-或-pab-cit-val-基团，或在d通过-nh-c(o)-c1-6亚烷基-s-基团缀合的情况下，与缀合物中存在的另一个硫原子共价结合的含硫基团(即产生存在于缀合物中的二硫基-s-s-部分)，如含有-s-c1-6亚烷基部分的基团；peg表示含聚乙二醇的基团；并且f表示能够与结合蛋白反应的官能团，如其中r'不存在或表示吸电子基团，如-no2基团，或f表示并且f'表示通过官能团的残基与缀合物的其余部分键合的蛋白质或肽。举例来说，这种类型的缀合试剂可以具有以下结构：其中rg为-c(ch3)2或n为0或1；re不存在，或当存在时，为氯、氟、甲氧基、-cn或-no2；并且缀合物可以具有由键联基的蛋白质或肽结合部分与蛋白质或肽反应产生的相应结构。在一些实施例中，缀合试剂可以由下式示意性地表示：且/或缀合物可以由下式示意性地表示其中d表示本发明的有效负载，例如下式的基团：其中rg为-c(ch3)2或n为0或1；re不存在，或当存在时，为氯、氟、甲氧基、-cn或-no2；表示包括当存在于本发明的缀合物中时促进缀合物在生理条件下降解的部分的基团，如在d通过-nh-基团缀合的情况下，-ala-val-或-pab-cit-val-基团，或在d通过-nh-c(o)-c1-6亚烷基-s-基团缀合的情况下，与缀合物中存在的另一个硫原子共价结合的含硫基团(即产生存在于缀合物中的二硫基-s-s-部分)，如含有-s-c1-6亚烷基部分的基团；表示含有分支部分的基团，如glu、asp、lys、ser、thr、cys、arg、tyr或类似的残基；peg表示具有式-ch2ch2orr的末端基团的聚乙二醇侧链，其中rr表示氢原子、烷基，例如c1-4烷基，尤其甲基，或任选被取代的芳基，尤其苯基，尤其未被取代的苯基；f表示能够与结合蛋白反应的官能团，如其中r'不存在或表示吸电子基团，如-no2基团，或f表示并且f'表示通过官能团的残基与缀合物的其余部分键合的蛋白质或肽。举例来说，这种类型的缀合试剂可以具有以下结构：其中rg为-c(ch3)2或n为0或1；re不存在，或当存在时，为氯、氟、甲氧基、-cn或-no2；并且缀合物可以具有由键联基的蛋白质或肽结合部分与蛋白质或肽反应产生的相应结构。在一些实施例中，缀合试剂可以由下式示意性地表示且/或缀合物可以由下式示意性地表示其中d表示本发明的有效负载，例如下式的基团：其中rg为-c(ch3)2或n为0或1；当存在时，re为氯、氟、甲氧基、-cn或-no2；表示包括当存在于本发明的缀合物中时促进缀合物在生理条件下降解的部分的基团，如在d通过-nh-基团缀合的情况下，-ala-val-或-pab-cit-val-基团，或在d通过-nh-c(o)-c1-6亚烷基-s-基团缀合的情况下，与缀合物中存在的另一个硫原子共价结合的含硫基团(即产生存在于缀合物中的二硫基-s-s-部分)，如含有-s-c1-6亚烷基部分的基团；表示含有分支部分的基团，如glu、asp、lys、ser、thr、cys、arg、tyr或类似的残基；表示环，其包括至少两个乙二醇～(ch2-ch2-o-)～单元；f表示能够与结合蛋白反应的官能团，如其中r'不存在或表示吸电子基团，如-no2基团，或f表示并且f'表示通过官能团的残基与缀合物的其余部分键合的蛋白质或肽。举例来说，这种类型的缀合试剂可以具有以下结构：其中rg为-c(ch3)2或n为0或1；re不存在，或当存在时，为氯、氟、甲氧基、-cn或-no2；并且缀合物可以具有由键联基的蛋白质或肽结合部分与蛋白质或肽反应产生的相应结构。本发明的化合物还包括以下物质，其可以通过与上述方法类似的方法制备，例如通过使用适当的芳基氯类美登素化合物和芳基硼试剂的铃木偶联，并且任选地通过随后的反应(例如通过脱保护和/或酰胺化)产生式(i)化合物：其中子基团为当例如因在子基团的苯环上存在某些邻位取代基而导致的围绕联芳基的受阻旋转产生可分离的阻转异构体时，本发明还包括那些单独的阻转异构体。举例来说，当子基团是时，本发明的化合物可以是：本发明的化合物还包括下述实例化合物。本发明的缀合物还包括并入以上式(i)化合物的缀合物。医药组合物和医学效用根据本发明的化合物和缀合物可以与医药学上可接受的载剂一起，任选地与另外的治疗剂一起配制成医药组合物，其用于治疗，具体地说，用作治疗增殖性、自身免疫性或感染性疾病的药物。治疗患者的方法包含向有需要的患者施用医药学上有效量的这种化合物、缀合物或组合物。患者可以是动物，尤其哺乳动物，并且更尤其人类。本发明针对包括例如以下的示例性病状具有效用：癌症，例如白血病，包括非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin’slymphoma)、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、淋巴细胞性白血病和慢性骨髓性白血病；胃癌；乳癌；卵巢癌；肝癌；肠癌；结肠癌；肾癌，例如肾细胞癌；肺癌，例如小细胞肺癌；黑色素瘤；膀胱癌；和肉瘤。示例性医药组合物包括用于肠胃外给药的呈无菌水性或油性悬浮液形式的医药组合物。肠胃外给药包括皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内和鞘内注射，以及输注技术。适于肠胃外给药(例如，通过注射)的制剂包括水性或非水性、等渗、无热原的无菌液体(例如，溶液、悬浮液)。这类液体可以另外含有其它医药学上可接受的成分，如抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、抑菌剂、悬浮剂、增稠剂和使配制物与既定接收者的血液(或其它相关体液)等渗的溶质。用于液体配制物的示例性载剂包括盐水、缓冲盐水、右旋糖、水、甘油、乙醇或其组合。配制物可以任选地进一步包含医药学上可接受的辅助物质，如ph调节剂和缓冲剂、张力调节剂、稳定剂、润湿剂等，或其组合。如果需要，本发明的化合物、缀合物和组合物可以与另外的治疗剂组合使用，例如另外的抗癌剂，例如烷化剂、烷基磺酸盐、氮丙啶、乙烯亚胺和甲基三聚氰胺、乙酰精宁、奥瑞他汀(auristatin)、喜树碱、苔藓虫素、卡利他汀(callystatin)、cc-1065、念珠藻环肽、海兔毒素、多卡霉素(duocarmycin)、艾榴塞洛素(eleutherobin)、盘克斯塔叮(pancratistatin)、沙考的汀(sarcodictyin)、海绵毒素、氮芥、抗生素、烯二炔抗生素、达米辛(dynemicin)、双膦酸盐、埃斯培拉霉素(esperamicin)、色蛋白烯二炔抗生素发色团、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放射菌素、氨茴霉素、氮杂丝氨酸、博来霉素(bleomycin)、放线菌素c、卡柔比星、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、放线菌素d、道诺霉素、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-l-正亮氨酸、小红莓、表阿霉素、依索比星、艾达霉素、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素、霉酚酸、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素、培洛霉素(peplomycin)、泼非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、奎那霉素(quelamycin)、罗多比星、链黑霉素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、左柔比星(zorubicin)；抗代谢物，厄洛替尼(erlotinib)、维罗非尼(vemurafenib)、克唑替尼(crizotinib)、索拉非尼(sorafenib)、依鲁替尼(ibrutinib)、恩杂鲁胺(enzalutamide)、叶酸类似物、嘌呤类似物、雄激素、抗肾上腺素、叶酸补充剂(如亚叶酸)、醋葡醛内酯、醛磷酰胺糖苷、氨基乙酰丙酸、恩尿嘧啶、安吖啶、贝他布昔(bestrabucil)、比山群(bisantrene)、艾达曲克(edatraxate)、得弗伐胺(defofamine)、秋水仙碱、地吖醌、依氟鸟氨酸、依利醋铵(elliptiniumacetate)、埃坡霉素(epothilone)、依托格鲁(etoglucid)、硝酸镓、羟基脲、香菇多糖、罗尼达宁(lonidainine)、类美登素、丙脒腙、米托蒽醌、莫哌达醇(mopidanmol)、硝拉维林(nitraerine)、喷司他汀(pentostatin)、凡那明(phenamet)、吡柔比星(pirarubicin)、洛索蒽醌(losoxantrone)、鬼臼酸2-乙酰肼、丙卡巴肼、多糖复合物(俄勒冈州尤金(eugene,or)jhsnaturalproducts)、雷佐生(razoxane)；根霉素；西佐糖；螺旋锗；细交链孢菌酮酸(tenuazonicacid)；三亚胺醌；2,2',2"-三氯三乙基胺；单端孢霉烯(尤其t-2毒素、黏液霉素a、杆孢菌素a和蛇形菌素)；乌拉坦(urethan)；长春地辛；达卡巴嗪；甘露氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；甲托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(“ara-c”)；环磷酰胺；噻替派；类紫杉醇、苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物、长春碱；铂；依托泊苷(vp-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷；依达曲沙；柔毛霉素；氨基喋呤；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；伊立替康(camptosar,cpt-11)，拓扑异构酶抑制剂rfs2000；二氟甲基鸟氨酸；类视黄素；卡培他滨(capecitabine)；考布他丁(combretastatin)；甲酰四氢叶酸；奥沙利铂；减少细胞增殖的pkc-α、raf、h-ras、egfr和vegf-a抑制剂；以及其医药学上可接受的盐、酸或衍生物；或其组合。本发明的化合物，缀合物和组合物还可以与另外的抗体组合使用，例如阿巴伏单抗(abagovomab)、阿达木单抗(adecatumumab)、阿托珠单抗(afutuzumab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、阿妥莫单抗(altumomab)、阿玛西单抗(amatuximab)、麻安莫单抗(anatumomab)、阿西莫单抗(arcitumomab)、巴维昔单抗(bavituximab)、贝妥莫单抗(bectumomab)、贝伐单抗(bevacizumab)、比伐珠单抗(bivatuzumab)、布林莫单抗(blinatumomab)、贝伦妥单抗、坎妥珠单抗(cantuzumab)、卡妥索单抗(catumaxomab)、西妥昔单抗(cetuximab)、西他土珠单抗(citatuzumab)、西妥木单抗(cixutumumab)、昔瓦土单抗(clivatuzumab)、康纳木单抗(conatumumab)、达土木单抗(daratumumab)、德罗兹妥单抗(drozitumab)、杜丽戈图单抗(duligotumab)、杜氏图单抗(dusigitumab)、地莫单抗(detumomab)、达西珠单抗(dacetuzumab)、达洛珠单抗(dalotuzumab)、依美昔单抗(ecromeximab)、埃罗妥珠单抗(elotuzumab)、恩土昔单抗(ensituximab)、厄马索单抗(ertumaxomab)、埃达珠单抗(etaracizumab)、伐吐珠单抗(farletuzumab)、费拉妥珠单抗(ficlatuzumab)、芬妥木单抗(figitumumab)、芬沃珠单抗(flanvotumab)、弗妥昔单抗(futuximab)、加尼图单抗(ganitumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、吉瑞昔单抗(girentuximab)、格雷巴土木单抗(glembatumumab)、替伊莫单抗(ibritumomab)、伊戈伏单抗(igovomab)、伊姆加土珠单抗(imgatuzumab)、茚达昔单抗(indatuximab)、伊珠单抗(inotuzumab)、英妥木单抗(intetumumab)、伊匹单抗(ipilimumab)、伊妥木单抗(iratumumab)、拉贝珠单抗(labetuzumab)、来沙木单抗(lexatumumab)、林妥珠单抗(lintuzumab)、洛沃珠单抗(lorvotuzumab)、鲁卡木单抗(lucatumumab)、马帕木单抗(mapatumumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、米拉珠单抗(milatuzumab)、明瑞莫单抗(minretumomab)、米妥莫单抗(mitumomab)、莫昔土莫单抗(moxetumomab)、那珠单抗(narnatumab)、他那莫单抗(naptumomab)、耐昔妥珠单抗(necitumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、诺非单抗(nofetumomabn)、奥卡拉珠单抗(ocaratuzumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、奥拉单抗(olaratumab)、奥那组单抗(onartuzumab)、奥普珠单抗(oportuzumab)、奥戈伏单抗(oregovomab)、帕尼单抗(panitumumab)、帕萨妥珠单抗(parsatuzumab)、帕蒂珠单抗(patritumab)、派图单抗(pemtumomab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、平妥莫单抗(pintumomab)、普托木单抗(pritumumab)、拉妥莫单抗(racotumomab)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、拉德珠单抗(radretumab)、利妥木单抗(rilotumumab)、利妥昔单抗(rituximab)、罗妥木单抗(robatumumab)、沙妥莫单抗(satumomab)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、思图昔单抗(siltuximab)、西妥珠单抗(simtuzumab)、索利托单抗(solitomab)、他珠单抗(tacatuzumab)、他普莫单抗(taplitumomab)、替妥莫单抗(tenatumomab)、替普罗木单抗(teprotumumab)、替加珠单抗(tigatuzumab)、托西莫单抗(tositumomab)、曲妥珠单抗、土库珠单抗(tucotuzumab)、乌布里图昔单抗(ublituximab)、维托珠单抗(veltuzumab)、沃尔希珠单抗(vorsetuzumab)、伏妥莫单抗(votumumab)、扎芦木单抗(zalutumumab)、cc49、3f8或其组合。本发明的化合物、缀合物和组合物可以与放射疗法组合用于治疗。在一些优选实施例中，化合物、缀合物、缀合试剂、组合物、治疗方法、过程或中间体如以下编号的条款中所定义：1.一种通式(i)化合物或其盐：其中r表示基团-y-oh、-y-o-rx、-y-sh、-y-s-rx、-y-co2h、-y-co-rx、-y-nhry、-y-nry-nhrz或-y-cry＝noh，其中y不存在或y表示c1-6亚烷基或c1-6亚烷氧基，所述c1-6亚烷基或c1-6亚烷氧基中的任一个可以被氧原子中断，rx表示被-oh、-sh、-nhry或-co2h取代的c1-4烷基，并且ry和rz中的每一个独立地表示氢原子或c1-4烷基；x表示oh、oc1-4烷基、sh、s1-4烷基或cn；ra表示氢原子或c1-4烷基；rb表示氢、oh、c1-4烷氧基或c1-4烷基c(o)o-；rc表示氢、oh、c1-4烷氧基或c1-4烷基c(o)o-；；rd表示氢原子或c1-4烷基；各re独立地表示卤素原子、cf3基团或c1-4烷基或c1-4烷氧基，并且n为0、1、2、3或4；rf表示氢原子或c1-4烷基；并且rg表示氢原子或任选被取代的烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基或杂芳基。2.如条款1中所定义的化合物，其中y不存在，或其中y表示可以被氧原子中断的c1-4亚烷基或c1-4亚烷氧基。3.如条款1或条款2中任一项所定义的化合物，其中r为-oh、-nh2、-conh2或-co2h基团，或被-oh、-nh2、-conh2或-co2h基团取代的c1-4亚烷基。4.如前述条款中任一项所定义的化合物，其中r位于所述苯环的3-或4-位。5.如前述条款中任一项所定义的化合物，其中存在的任何re基团是卤素原子或甲基或甲氧基。6.如前述条款中任一项所定义的化合物，其中n为0、1或2。7.如前述条款中任一项所定义的化合物，其中x表示oh。8.如前述条款中任一项所定义的化合物，其中ra表示c1-4烷基；rb表示氢；rc表示氢或甲氧基；rd表示c1-4烷基；re表示氯或氢；；rf表示c1-4烷基；并且rg表示c1-4烷基。9.如前述条款中任一项所定义的化合物，其为通式(ia)化合物或其盐：10.如条款9中所定义的化合物，其为通式(ib)化合物或其盐：11.一种缀合物，其包含通过键联基与结合蛋白键联的如前述条款中任一项所定义的化合物，所述键联基通过通式i的基团r与所述化合物连接。12.如条款11所定义的缀合物，其中结合蛋白是全长抗体，或包含全长抗体的抗原结合区的抗体片段。13.如条款11中所定义的缀合物，其中结合蛋白是iggl或igg4，或iggl或igg4的片段。14.如条款11到13中任一项所定义的缀合物，其包括以下部分：其中w'表示吸电子基团或通过还原吸电子基团获得的基团，a和b中的每一个独立地表示c1-5亚烷基或亚烯基链，并且pr表示通过亲核试剂nu与a和b键合的所述结合蛋白；或包括以下部分：～w'-(ch＝ch)p-(ch2)2-nu-pr其中w'表示吸电子基团或通过还原吸电子基团获得的基团，p为0或1到4的整数，并且pr表示通过亲核试剂nu与分子的其余部分键合的所述结合蛋白。15.如条款14所定义的缀合物，其包括以下部分：或其包括以下部分：～nh-co-ar'-co-(ch2)2-nu-pr其中ar'表示任选被取代的芳基。16.如条款11到15中任一项所定义的缀合物，其中各nu表示结合蛋白pr中的半胱氨酸残基中存在的硫原子；或其中各nu表示与结合蛋白连接的多组氨酸标记中存在的咪唑基。17.如条款11到16中任一项所定义的缀合物，其中键联基包括具有式-ch2ch2orr的末端基团的聚乙二醇侧链，其中rr表示氢原子、烷基或任选被取代的芳基。18.如条款11到17中任一项所定义的缀合物，其中键联基包括包含至少两种天然存在的α氨基酸的肽基。19.如条款18中所定义的缀合物，其中键联基包括序列val-cit-pab。20.一种缀合试剂，其包含如条款1到10中任一项所定义的化合物，所述化合物通过键联基与至少一个能够与结合蛋白反应的官能团连接，所述键联基通过通式i的基团r与所述化合物连接。21.如条款20中所定义的缀合试剂，其中所述官能团具有下式：其中w表示吸电子基团；a和b中的每一个独立地表示c1-5亚烷基或亚烯基链；并且各l独立地表示离去基，或两个l一起表示离去基；或其中w和a具有以上给出的含义，l表示离去基，并且m表示0到4；或～w-(ch＝ch)p-(ch2)2-l或～w-(ch＝ch)p-ch＝ch2其中w表示吸电子基团，p表示0或1到4的整数，并且l表示离去基。22.如条款21所定义的缀合试剂，其中所述官能团具有下式：或～nh-co-ar'-co-(ch2)2-l或～nh-co-ar'-co-ch＝ch2其中ar'表示任选被取代的芳基。23.如条款20到22中任一项所定义的缀合试剂，其中所述或每个离去基包括-(ch2ch2o)q-部分，其中q为六或更大的数目。24.如条款20到23中任一项所定义的缀合试剂，其中键联基包括如条款17到19中任一项所定义的特征。25.一种医药组合物，其包含如条款1到10中任一项所定义的化合物，或如条款11到19中任一项所定义的缀合物，以及医药学上可接受的载剂，任选地以及另外的治疗剂。26.一种治疗需要治疗增殖性、自身免疫性或感染性疾病或病症的患者的方法，其包含向患者施用医药学上有效量的如条款1到10中任一项所定义的化合物、如条款11到19中任一项所定义的缀合物或如条款25所定义的医药组合物。27.如条款1到10中任一项所定义的化合物或如条款11到19中任一项所定义的缀合物，其用于治疗。28.一种用于制备如条款1到10中任一项所定义的通式i化合物或其盐的方法，其包含使以下物质反应：以下通式的化合物：其中x、ra-rd、rf和rg具有针对所述通式i给出的含义，和芳基-有机金属试剂，其中所述芳基部分是被(re)n和r或受保护形式的r取代的苯基，其中r和(re)n具有针对所述通式i给出的含义，所述反应在过渡金属催化剂存在下进行。29.如条款28中所定义的方法，其中芳基-有机金属试剂是以下通式的硼酸或其受保护形式，并且所述反应在钯催化剂存在下进行。30.一种适用于制备如条款1到10中任一项所定义的通式i化合物或其盐的中间体，其具有通式其中x、n和ra-rg具有针对所述通式i给出的含义，并且rprot是带有保护基的所述通式i的基团r；或其盐。31.如条款30中所定义的中间体，其中r包括-oh或-sh基团，并且保护基是硅烷基、酰基或芳基甲基；r包括-co2h基团，并且保护基是甲基、乙基、叔丁基、苄基、对甲氧基苄基、9-芴基甲基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基或二苯甲基；或r包括-nhr'、-nhr”或-nhr”'基团，并且保护基是叔丁氧基羰基、三苯甲基、苄氧羰基、9-芴基甲氧羰基、甲酰基、三甲基硅烷基或叔丁基二甲基硅烷基。实例以下实例说明本发明。一般方法：使用适当nmr仪器(例如varianinova500mhznmr仪器)记录1hnmr光谱。使用lc/ms(例如在安捷伦(agilent)1200系列lc/ms系统上)测定色谱纯度。实例1：4-(n-boc氨基)苯基ap3，3-的制备将化合物14-(n-boc氨基)苯基硼酸(18.7mg)与磷酸三钾(32.7mg)和可从西格玛奥德里奇商购的钯催化剂sphospdg3(1mg)添加到固体ap32(32.6mg)中。用ar3×吹扫固体，并且向混合物中添加无水thf(150μl)。然后将ar鼓泡通过反应混合物60秒，将反应容器密封并且在40℃下加热2h，此时通过lc/ms确定反应完成。然后将反应混合物通过短的sio2垫过滤，用et2o洗涤并且浓缩。然后将混合物通过制备型hplc(gemini150×30mm柱)(在h2o中5→95％acn，各自含有0.05％acoh)纯化，并且将所需级分冻干，得到呈白色结晶固体状的3(14.3mg，35％产率)。1hnmr(500mhz，氯仿-d)δ＝7.41(d,j＝7.3hz,2h),7.06(d,j＝8.8hz,2h),6.88(dd,j＝1.5,10.7hz,2h),6.58-6.46(m,2h),6.27-6.18(m,2h),5.49(dd,j＝9.0,15.4hz,1h),4.85(dd,j＝2.9,12.2hz,1h),4.36-4.28(m,1h),3.83(s,3h),3.61-3.52(m,2h),3.39(s,3h),3.28(d,j＝13.2hz,1h),3.09-2.95(m,3h),2.70-2.68(m,3h),2.65(五重峰，j＝7.0hz,1h),2.25(dd,j＝2.9,13.7hz,1h),1.77(s,3h),1.70(d,j＝13.2hz,1h),1.55(s,9h),1.33(d,j＝6.3hz,3h),1.28(d,j＝7.3hz,3h),1.22(d,j＝6.8hz,3h),0.96(s,3h)；lc/ms：保留时间3.49min(默克(merck)chromolithrp-18e分析型hplc柱(单块，50×2mm)；分析型hplc方法：注射体积5μl；流动速率1ml/min；历时5分钟，水中的乙腈5→95％；在λ＝254或220nm处的安捷伦二极管阵列检测器；室温)，c43h58n3o11的(es+)计算值：[m+h]+792；实验值792。可以从化合物3中去除boc保护基，以产生含有游离胺基的相应化合物。然后，这种化合物可以继而使用已知方法通过胺基缀合，以产生缀合物，具体地说，和抗体-药物缀合物。实例2：化合物3在karpas-299和sk-br-3细胞系中的体外效力测定在体外用细胞毒性药物或adc治疗后肿瘤细胞存活率的损失可以通过在增加浓度的药物或adc存在下培养细胞系，并且使用发光试剂(普洛麦格(promega))对增殖或代谢活性的丧失定量来测量。方案描述了细胞接种、药物处理和基于atp合成参照未经处理的细胞的细胞存活率的测定，其与孔中存在的细胞数量直接相关。cd30阳性人类t细胞淋巴瘤细胞系karpas-299获自剑桥大学(universityofcambridge)的abrahamkarpas博士。细胞在补充有10％胎牛血清、100μg/ml青霉素和100μg/ml链霉素的rpmi培养基中生长。将karpas299细胞以每孔2,500个细胞(50微升/孔)接种到透明底部白壁96孔板中，并且在37℃和5％co2下培育24小时。her2阳性肿瘤细胞系sk-br-3(atcc-htb-30)在补充有10％胎牛血清、100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素的mccoy's5a培养基中生长。分离sk-br-3细胞，以每孔5,000个细胞(100微升/孔)接种到聚-d-赖氨酸包被的透明底白壁96孔板中，并且在37℃和5％co2下培育24小时。使用相关细胞培养基作为稀释剂，一式三份制备系列稀释的化合物。用2×测定浓度的50μl化合物处理cd30阳性karpas-299细胞。去除来自sk-br-3测定板的培养基，并且用1×测定浓度的100μl系列稀释的化合物替换。表1中指定测定浓度。然后将细胞与化合物(总体积100微升/孔)在37℃和5％co2下一起培育另外96小时。表1如制造商的说明书所描述，在培育结束时，使用发光试剂测量细胞存活率。随后使用四参数非线性回归模型分析数据。存活率表示为未经处理的细胞的％，并使用下式计算：将存活率％(y轴)相对于以nm为单位的药物浓度的对数(x-轴)作图，以外推所有化合物的ic50值。结果在表2和图1和图2中展示。在两种细胞系中，化合物3都具有比对照dm1高的效力。表2化合物编号/名称ic50(nm)skbr3细胞系ic50(nm)karpas-299细胞系340.7dm1109实例3：类美登素化合物4的制备。将芳基硼试剂、4-氨基苯基硼酸(215mg)、磷酸三钾(668mg)、催化剂sphospdg3(15.4mg)和ap3(500mg)依次添加到氩气吹扫的反应容器中。然后将容器密封并且用氩气吹扫固体(4×抽空/吹扫循环)。然后添加通过用氩气吹扫进行严格脱氧的thf(6ml)和水(0.6ml)，并且将反应混合物在室温下搅拌18小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯(60ml)稀释并且用盐水(20ml)洗涤。分离各层，并且减压浓缩有机层。然后通过反相c-18柱色谱法纯化残余物，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱，并且将所需级分冻干，得到呈白色固体状的化合物4(449mg)。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ6.90(d,j＝8.1hz,2h),6.84(d,j＝10.1hz,2h),6.69(d,j＝8.6hz,2h),6.48(dd,j＝15.4,11.0hz,1h),6.24(s,1h),6.18(d,j＝11.0hz,1h),5.49—5.44(m,1h),4.84(dd,j＝11.9,2.8hz,1h),4.32—4.27(m,1h),3.82(s,3h),3.55(d,j＝13.0hz,1h),3.52(d,j＝9.0hz,1h),3.37(s,3h),3.25(d,j＝13.0hz,1h),3.06(s,1h),3.00(d,j＝9.9hz,1h),2.97—2.94(m,1h),2.68(s,3h),2.64—2.61(m,1h),2.23(dd,j＝13.8,2.7hz,1h),1.74(s,3h),1.68(d,j＝13.6hz,1h),1.52—1.47(m,1h),1.30(d,j＝6.5hz,3h),1.26(d,j＝7.2hz,3h),1.25—1.23(m,1h),1.20(d,j＝6.5hz,3h),0.93(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(692,100％)。实例4：类美登素化合物5的制备。以与实例3的化合物4类似的方式合成化合物5。简单地说，将4-氨基-3-氯苯基硼酸频哪醇酯(100mg)、磷酸三钾(674mg)、sphospdg3(15.2mg)和ap3(500mg)依次添加到氩气吹扫的反应容器中。然后将容器密封并且用氩气吹扫固体(4×抽空/吹扫循环)。然后添加通过用氩气吹扫进行严格脱氧的thf(6ml)和水(0.6ml)，并且将反应混合物在室温下搅拌5小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯(60ml)稀释并且用盐水(20ml)洗涤。分离各层，并且减压浓缩有机层。然后通过反相c-18柱色谱法纯化残余物，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱，并且将所需级分冻干，得到呈白色固体状的化合物5(80mg)。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.05(s,1h),6.85(d,j＝11.4hz,2h),6.77(s,2h),6.48(dd,j＝15.4,11.2hz,1h),6.24(s,1h),6.18(d,j＝11.2hz,1h),5.46(dd,j＝15.4,9.0hz,1h),4.84(dd,j＝11.8,2.8hz,1h),4.32—4.27(m,1h),4.11(d,j＝0.6hz,2h),3.83(s,3h),3.55(d,j＝13.0hz,1h),3.52(d,j＝9.0hz,1h),3.37(s,3h),3.25(d,j＝13.0hz,1h),3.02—2.99(m,j＝7.8hz,2h),2.93(dd,j＝13.7,12.2hz,1h),2.72(s,3h),2.65—2.60(m,1h),2.24—2.21(m,1h),1.74(s,3h),1.68(d,j＝13.3hz,1h),1.53—1.47(m,1h),1.30(d,j＝6.4hz,3h),1.30—1.27(m,1h),1.26(d,j＝7.2hz,3h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.93(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(726,100％)。实例5：类美登素化合物6的制备。步骤1：化合物7的合成。向2,2'-二硫代双(5-硝基吡啶)(930mg)和4-巯基-戊酸(197mg)的thf:dmf(8ml，1:1v/v)溶液中添加吡啶(150μl)，并且将溶液在室温下搅拌15小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯(50ml)稀释并且用盐水(20ml)洗涤。将有机层分离，用硫酸钠干燥，过滤并且真空浓缩。然后通过正相色谱法纯化残余物，用己烷:乙酸乙酯(100:0v/v到60:40v/v)洗脱。真空去除溶剂，得到呈浅黄色固体状的化合物7(194mg)。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ9.26(d,j＝2.1hz,1h),8.39(dd,j＝8.8,2.1hz,1h),7.89(d,j＝8.8hz,1h),3.13—3.06(m,1h),2.64—2.53(m,2h),2.04—1.89(m,2h),1.37(d,j＝6.8hz,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(289,100％)。步骤2：化合物8的合成。在0℃下，向搅拌的化合物4(237mg)、化合物7(102mg)和hatu(405mg)的dmf(8ml)溶液中缓慢添加n,n-二异丙基乙胺(dipea，240μl)。使反应混合物升温到室温并且搅拌16小时。将溶液用水(20ml)和盐水(20ml)稀释，并且用乙酸乙酯(50ml)萃取所得混合物。分离有机层并且真空浓缩。将残余物溶于dmf(8ml)中，并且通过反相c-18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。将所需级分冻干，得到呈浅黄色固体状的化合物8(253mg)。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ9.27(d,j＝2.2hz,1h),8.40(dt,j＝8.8,2.9hz,1h),7.95—7.93(m,1h),7.56—7.54(m,2h),7.47—7.45(m,1h),7.10(dd,j＝7.6,0.4hz,2h),6.89(d,j＝7.7hz,2h),6.54—6.48(m,1h),6.24(d,j＝0.4hz,1h),6.21(d,j＝11.1hz,1h),5.49(dd,j＝15.2,9.1hz,1h),4.85(dd,j＝12.0,2.8hz,1h),4.34—4.29(m,1h),3.84(s,3h),3.59(d,j＝13.0hz,1h),3.54(d,j＝9.0hz,1h),3.39(s,3h),3.29(d,j＝12.9hz,1h),3.22—3.17(m,1h),3.04—2.97(m,3h),2.69(d,j＝2.8hz,3h),2.67—2.56(m,3h),2.27—2.24(m,1h),2.12—2.07(m,2h),1.77(s,3h),1.70(d,j＝13.0hz,1h),1.55—1.48(m,1h),1.42—1.41(m,3h),1.32(d,j＝6.4hz,3h),1.27—1.26(m,1h),1.28(d,j＝7.2hz,3h),1.22(d,j＝6.7hz,3h),0.96(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(962,100％)。步骤3：化合物6的合成。向化合物8(22mg)和三(2-羧乙基)膦盐酸盐(tcep.hcl，67mg)的乙腈:水(1.8ml，5:4v/v)溶液中缓慢添加饱和碳酸氢钠溶液(1.2ml)直到实现ph为7-8。然后将反应混合物在室温下搅拌2小时，随后将溶液真空浓缩，并且将残余物溶于乙腈(50ml)中。然后用盐水(20ml)洗涤乙腈溶液，分离各层，并且将有机层真空浓缩。然后通过反相c-18柱色谱法纯化残余物，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱并且将所需级分冻干，得到呈白色固体状的化合物6(14mg)。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.58—7.57(m,1h),7.51—7.47(m,1h),7.09(d,j＝8.2hz,2h),6.89(d,j＝9.0hz,2h),6.51(dd,j＝15.4,11.1hz,1h),6.24(s,1h),6.22—6.20(m,1h),5.49(dd,j＝15.3,9.0hz,1h),4.85(dd,j＝12.0,2.8hz,1h),4.34—4.29(m,1h),3.83(s,3h),3.58(d,j＝12.9hz,1h),3.54(d,j＝8.9hz,1h),3.39(s,3h),3.28(d,j＝12.8hz,1h),3.07—2.96(m,4h),2.69(s,3h),2.66—2.62(m,1h),2.61—2.53(m,2h),2.27—2.24(m,1h),2.19—2.13(m,1h),1.86—1.80(m,1h),1.77(s,3h),1.70(d,j＝13.5hz,1h),1.54—1.48(m,2h),1.43(d,j＝6.7hz,3h),1.32(d,j＝6.3hz,3h),1.28(d,j＝7.2hz,3h),1.27—1.26(m,1h),1.22(d,j＝6.7hz,3h),0.96(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(808,100％)。实例6：类美登素化合物9的制备。步骤1：化合物10的合成。使用4-巯基-4-甲基-戊酸代替4-巯基-戊酸，以与实例5的化合物7类似的方式合成化合物10。分离呈浅黄色固体状的化合物10。lc/ms:(es+)[m+h]+(303,100％)。步骤2：化合物11的合成。使用化合物10代替化合物7，以与实例5的化合物8类似的方式合成化合物11。分离呈浅黄色固体状的化合物11。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ9.35—9.24(m,1h),8.44—8.36(m,1h),7.88(dd,j＝46.8,8.7hz,1h),7.54—7.44(m,2h),7.35—7.34(m,1h),7.09—7.07(m,1h),6.87—6.86(m,2h),6.51—6.46(m,1h),6.26(s,1h),6.20—6.17(m,1h),5.47(dd,j＝15.6,9.1hz,1h),4.85—4.82(m,1h),4.32—4.27(m,1h),3.82(s,3h),3.58—3.55(m,1h),3.52(d,j＝8.9hz,1h),3.37(s,3h),3.28—3.25(m,1h),3.16—3.12(m,1h),3.03—2.94(m,3h),2.67(s,3h),2.66—2.60(m,1h),2.56—2.53(m,2h),2.25—2.22(m,1h),2.15—2.07(m,2h),1.75(s,3h),1.69—1.66(m,1h),1.52—1.48(m,1h),1.37(s,6h),1.30(d,j＝6.3hz,3h),1.26(d,j＝7.1hz,3h),1.25—1.24(m,1h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(976,100％)。步骤3：化合物9的合成。使用化合物11代替化合物8，以与实例5的化合物6类似的方式合成化合物9。分离呈白色固体状的化合物9。1hnmr(500mhz；cdcl3)1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.56—7.54(m,2h),7.34(s,1h),7.08—7.07(m,2h),6.86(d,j＝9.8hz,2h),6.51—6.46(m,1h),6.21—6.18(m,2h),5.49—5.44(m,1h),4.85—4.82(m,1h),4.32—4.27(m,1h),3.81(s,3h),3.56(d,j＝12.7hz,1h),3.52(d,j＝9.0hz,1h),3.37(s,3h),3.26(d,j＝13.6hz,1h),3.01—2.94(m,3h),2.67(s,3h),2.64—2.61(m,1h),2.59—2.56(m,2h),2.25—2.22(m,1h),2.04—2.01(m,2h),1.75(s,3h),1.69—1.67(m,1h),1.52—1.48(m,1h),1.43(s,6h),1.30(d,j＝6.3hz,3h),1.26(d,j＝7.1hz,3h),1.25—1.23(m,1h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(822,100％)。实例7：类美登素化合物12制备。步骤1：化合物13的合成。向搅拌的2,2'-二硫代双(5-硝基吡啶)(682mg)和4-甲基吗啉(nmm，600μl)的thf(10ml)溶液中缓慢添加4-巯基丁酸(222mg)的乙酸乙酯(2ml)溶液，并且将合并的溶液在室温下搅拌1小时。然后将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(10ml)、水(10ml)和乙酸乙酯(30ml)稀释。分离有机层并且用饱和碳酸氢钠溶液(20ml)洗涤。合并水层，并且用1mhcl(70ml)酸化，随后用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。然后将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并且真空浓缩。通过正相色谱法纯化残余物，用己烷(0.5％乙酸):乙酸乙酯(100:0v/v到60:40v/v)洗脱。真空去除溶剂，得到呈浅黄色固体状的化合物13(82mg)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.28(s,1h),8.40(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),7.87(d,j＝8.8hz,1h),2.91(t,j＝7.1hz,2h),2.54(t,j＝7.1hz,2h),2.05(五重峰，j＝7.1hz,2h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(275,100％)。步骤2：化合物14的合成。使用化合物13代替化合物7，以与实例5的化合物8类似的方式合成化合物14。分离呈浅黄色固体状的化合物14。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ9.30(d,j＝2.2hz,1h),8.43(dd,j＝8.8,2.5hz,1h),7.92(d,j＝9.0hz,1h),7.57—7.54(m,1h),7.44—7.41(m,1h),7.11—7.08(m,2h),6.90—6.88(m,2h),6.53—6.48(m,1h),6.23—6.19(m,2h),5.52—5.47(m,1h),4.86—4.83(m,1h),4.34—4.29(m,1h),3.84(s,3h),3.59(d,j＝13.1hz,1h),3.54(d,j＝9.0hz,1h),3.39(s,3h),3.29(d,j＝12.7hz,1h),3.04—2.97(m,5h),2.69(s,3h),2.67—2.62(m,1h),2.58—2.55(m,2h),2.27—2.24(m,1h),2.21—2.15(m,2h),1.77(s,3h),1.70(ddd,j＝13.0,1.4,0.6hz,1h),1.54—1.50(m,1h),1.32(d,j＝6.4hz,3h),1.28(d,j＝11.2hz,4h),1.27—1.26(m,1h),1.22(d,j＝6.7hz,3h),0.96(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(948,100％)。步骤3：化合物12的合成。使用化合物14代替化合物8，以与实例5的化合物6类似的方式合成化合物12。分离呈白色固体状的化合物12。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.56—7.54(m,1h),7.49(d,j＝3.9hz,1h),7.08—7.07(m,2h),6.86(d,j＝8.8hz,2h),6.49(dd,j＝15.3,11.0hz,1h),6.21—6.18(m,2h),5.47(dd,j＝15.3,9.0hz,1h),4.84—4.81(m,1h),4.32—4.27(m,1h),3.81(s,3h),3.56(d,j＝13.0hz,1h),3.52(d,j＝9.0hz,1h),3.37(s,3h),3.28—3.25(m,1h),3.04—2.95(m,3h),2.67(s,3h),2.65—2.61(m,2h),2.53(t,j＝7.2hz,2h),2.26—2.22(m,1h),2.07—2.02(m,2h),1.75(s,3h),1.69(d,j＝0.4hz,1h),1.54—1.48(m,1h),1.38(t,j＝8.0hz,1h),1.30(d,j＝6.3hz,3h),1.26(d,j＝7.2hz,3h),1.25—1.24(m,1h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(794,100％)。实例8：类美登素化合物15的制备。步骤1：化合物16的合成。在0℃下向搅拌的3-巯基-丙酸(0.41ml)的水(15ml)溶液中添加甲硫醇磺酸s-甲酯(0.49ml)的乙醇(7.5ml)溶液。使反应混合物升温到室温并且搅拌18小时，随后真空浓缩。将饱和碳酸氢钠溶液(8ml)添加到残余物中直到实现ph为7-8，然后用二氯甲烷(2×10ml)萃取所得混合物。分离各层，并且将水层用0.1mhcl溶液(12ml)酸化，并且然后用1mhcl溶液(6ml)酸化，以实现溶液ph为2-3。然后用乙酸乙酯(2×40ml)萃取水层。将有机层分离并且合并，用硫酸钠干燥，过滤并且真空浓缩，得到呈白色固体状的化合物16(0.71g)。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ2.94(t,j＝6.8hz,2h),2.83(d,j＝6.8hz,2h),2.42(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(152,100％)。步骤2：化合物17的合成。使用化合物16代替化合物7，以与实例5的化合物8类似的方式合成化合物17。分离呈白色固体状的化合物17。lc/ms:(es+)[m+h]+(826,100％)。步骤3：化合物15的合成。使用化合物17代替化合物8，以与实例5的化合物6类似的方式合成化合物15。分离呈白色固体状的化合物15。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.63(s,1h),7.57—7.55(m,1h),7.09—7.07(m,2h),6.87(d,j＝8.2hz,2h),6.49(dd,j＝15.3,11.1hz,1h),6.22—6.18(m,2h),5.47(dd,j＝15.3,9.1hz,1h),4.85—4.82(m,1h),4.32—4.27(m,1h),3.82(s,3h),3.57(d,j＝13.0hz,1h),3.52(d,j＝8.9hz,1h),3.37(s,3h),3.26(d,j＝12.7hz,1h),3.04—2.95(m,3h),2.90(q,j＝7.4hz,2h),2.70(dd,j＝8.7,4.5hz,2h),2.67(s,3h),2.64—2.60(m,1h),2.24(dd,j＝13.9,2.6hz,1h),1.75(s,3h),1.72(d,j＝8.5hz,1h),1.70—1.66(m,1h),1.54—1.48(m,1h),1.30(d,j＝6.4hz,3h),1.26(d,j＝7.2hz,3h),1.24—1.23(m,1h),1.20(d,j＝6.8hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(780,100％)。实例9：类美登素化合物18的制备。步骤1：化合物19的合成。向4-巯基-戊酸(0.97g)的乙醇:水(10ml，1:1v/v)溶液中添加甲基硫代磺酸s-甲酯(0.72ml)，并且在在室温下在氩气氛下将反应混合物搅拌22小时。减压去除乙醇，随后将反应溶液用盐水(10ml)稀释，并且用乙酸乙酯(3×15ml)萃取。然后将合并的有机层用盐水(15ml)洗涤，将有机层分离，用硫酸钠干燥，过滤并且真空浓缩，得到呈黄色油状的化合物19(0.9g)。1hnmr(300mhz；cdcl3):δ9.09(s,1h),2.89(m,1h),2.52(t,j＝7.6hz,2h),2.41(s,3h),2.03-1.85(m,2h),1.35(d,j＝6.8hz,3h)。步骤2：化合物20的合成。在0℃下，在氩气氛下，向化合物19(33mg)的无水thf(2ml)溶液中添加氯甲酸异丁酯(25μl)和nmm(50μl)。在0℃下搅拌20分钟后，将化合物5(42mg)的无水thf(4ml)溶液缓慢添加到反应混合物中，使其升温到室温并且再搅拌16小时。然后将在室温下在氩气氛下搅拌1小时的化合物19(33mg)和氯甲酸异丁酯(25μl)的无水thf(1ml)溶液添加到反应混合物中。然后将反应溶液搅拌24小时，随后真空去除溶剂，并且通过反相c-18柱色谱法纯化残余物，用缓冲液a(v/v)：水:0.05％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.05％乙酸(80:20v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分并且冻干，得到呈白色固体状的化合物20(20mg)。1hnmr(500mhz；cdcl3):δ8.42(s,1h),7.70(s,1h),7.12(s,1h),7.04(d,j＝7.0hz,1h),6.88(s,1h),6.85(s,1h),6.48(dd,j＝15.4,11.1hz,1h),6.21-6.17(m,2h),5.47(dd,j＝15.5,8.9hz,1h),4.83(dd,j＝11.9,2.3hz,1h),4.30(t,j＝10.8hz,1h),3.82(s,3h),3.56(d,j＝13.0hz,1h),3.52(d,j＝9.0hz,1h),3.37(s,3h),3.27(d,j＝12.4hz,2h),3.00(d,j＝9.5hz,2h),2.94-2.89(m,3h),2.73(s,3h),2.64(dq,j＝21.7,7.3hz,3h),2.43(d,j＝3.6hz,1h),2.23-2.21(m,1h),2.17-2.15(m,1h),2.06(dd,j＝13.1,7.4hz,1h),1.75(s,3h),1.67(d,j＝13.7hz,1h),1.50(d,j＝6.6hz,3h),1.40(d,j＝6.7hz,1h),1.31(d,j＝6.2hz,3h),1.26(q,j＝8.2hz,5h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(888,100％)。步骤3：化合物18的合成。使用化合物20代替化合物8，以与实例5的化合物6类似的方式合成化合物18。1hnmr(500mhz；cdcl3):δ8.41(s,1h),7.70(s,1h),7.12(s,1h),7.04(d,j＝6.8hz,1h),6.88(s,1h),6.85(s,1h),6.48(dd,j＝15.2,11.2hz,1h),6.21-6.17(m,2h),5.47(dd,j＝15.4,9.0hz,1h),4.84-4.80(m,1h),4.30(t,j＝11.0hz,1h),3.82(s,3h),3.56(d,j＝12.8hz,1h),3.52(d,j＝8.9hz,1h),3.37(s,3h),3.27(d,j＝12.7hz,1h),2.99(t,j＝8.4hz,1h),2.92(t,j＝12.8hz,1h),2.73(s,3h),2.67-2.59(m,2h),2.22(d,j＝13.9hz,1h),2.08-2.04(m,1h),1.75(s,3h),1.67(d,j＝14.3hz,2h),1.50(d,j＝6.6hz,3h),1.36(d,j＝6.8hz,2h),1.30(t,j＝6.6hz,6h),1.20(d,j＝6.6hz,3h),0.94(s,3h),0.88(dd,j＝11.6,5.5hz,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(842,100％)。实例10：类美登素化合物21的制备。步骤1：化合物22的合成。使用化合物5代替化合物4，并且使用化合物10代替化合物7，以与实例5的化合物8类似的方式合成化合物22。分离呈白色固体状的化合物22。lc/ms:(es+)[m+h]+(1010,100％)。步骤2：化合物21的合成。使用化合物22代替化合物8，以与实例5的化合物6类似的方式合成化合物21。分离呈白色固体状的化合物21。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ8.44—8.42(m,1h),7.69(d,j＝0.3hz,1h),7.12(d,j＝0.6hz,1h),7.06—7.04(m,1h),6.86(d,j＝11.8hz,2h),6.51—6.45(m,1h),6.22—6.17(m,2h),5.47(dd,j＝15.4,9.0hz,1h),4.84—4.82(m,1h),4.84—4.82(m,1h),4.32—4.27(m,1h),3.82(s,3h),3.56(d,j＝13.0hz,1h),3.52(d,j＝9.0hz,1h),3.37(s,3h),3.27(d,j＝12.7hz,1h),3.00(d,j＝9.5hz,2h),2.92(t,j＝12.9hz,1h),2.72(s,3h),2.66—2.60(m,3h),2.24—2.21(m,1h),2.04(dd,j＝9.2,6.8hz,2h),1.75(s,3h),1.67(d,j＝11.3hz,1h),1.54—1.48(m,1h),1.44(s,6h),1.31(d,j＝6.3hz,3h),1.25(s,3h),1.25—1.23(m,1h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(856,100％)。实例11：类美登素化合物23的制备。步骤1：化合物24的合成。在0℃下，向搅拌的化合物5(50mg)、化合物16(29mg)和hatu(79mg)的dmf(1.5ml)溶液中缓慢添加dipea(50μl)。使反应混合物升温到室温并且搅拌14小时。添加额外量的化合物16(47mg)的dmf(500μl)溶液、hatu(129mg)和dipea(100μl)，并且将反应混合物在室温下再搅拌6小时。然后通过反相c-18柱色谱法直接纯化反应混合物，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分并且冻干，得到呈白色固体状的化合物24(15mg)。lc/ms:(es+)[m+h]+(860,100％)。步骤2：化合物23的合成。使用化合物24代替化合物8，以与实例5的化合物6类似的方式合成化合物23。分离呈白色固体状的化合物23。1hnmr(500mhz；cdcl3)1hnmr(500mhz；cdcl3)δ8.45—8.43(m,1h),7.75(s,1h),7.13(s,1h),7.06(d,j＝8.2hz,1h),6.88—6.85(m,2h),6.48(dd,j＝15.4,11.0hz,1h),6.21—6.17(m,2h),5.47(dd,j＝15.5,9.0hz,1h),4.83(dd,j＝11.8,2.9hz,1h),4.32—4.27(m,1h),3.82(s,3h),3.56(d,j＝12.9hz,1h),3.52(d,j＝8.9hz,1h),3.37(s,3h),3.27(d,j＝12.8hz,1h),3.02—2.99(m,2h),2.94—2.90(m,3h),2.78(t,j＝6.5hz,2h),2.73(s,3h),2.65—2.60(m,1h),2.23(dd,j＝13.7,2.8hz,1h),1.74(s,3h),1.67(d,j＝13.1hz,1h),1.53—1.47(m,1h),1.31(d,j＝6.3hz,3h),1.26(d,j＝7.2hz,3h),1.25—1.23(m,1h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(814,100％)。实例12：包含类美登素细胞毒性有效负载的缀合试剂25的制备。步骤1：化合物26的合成。将化合物8(17mg)和4-巯基-戊酸(10mg)在dmf(2ml)中的混合物在室温下搅拌16小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯(20ml)稀释并且用盐水(10ml)洗涤。分离有机层并且真空浓缩，随后将残余物溶于dmf(6ml)中，并且通过反相c-18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分并且冻干，得到呈灰白色固体状的化合物26(23mg)。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ8.17(s,1h),7.59—7.58(m,2h),7.06—7.05(m,2h),6.86(s,2h),6.48(dd,j＝15.3,11.1hz,1h),6.41(s,1h),6.18(d,j＝10.9hz,1h),5.47(dd,j＝15.4,8.9hz,1h),4.79(d,j＝12.0hz,1h),4.29(t,j＝11.3hz,1h),3.81(s,3h),3.56(d,j＝13.0hz,1h),3.52(d,j＝8.9hz,1h),3.37(s,3h),3.26(d,j＝12.9hz,1h),2.96(d,j＝9.2hz,2h),2.90—2.84(m,2h),2.66(d,j＝3.7hz,3h),2.62(dd,j＝14.0,7.0hz,2h),2.55—2.40(m,4h),2.32—2.25(m,1h),2.07—1.95(m,3h),1.79(t,j＝6.9hz,1h),1.74(s,3h),1.68—1.65(m,1h),1.53—1.46(m,1h),1.34(d,j＝6.4hz,3h),1.27(d,j＝6.6hz,6h),1.24(d,j＝7.2hz,3h),1.24—1.23(m,1h),1.19(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(940,100％)。步骤2：试剂25的合成。将化合物26(23mg)，n-(3-二甲氨基丙基)-n′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(edc.hcl，12mg)和n-羟基羟基丁二酰亚胺(5mg)在无水二氯甲烷(2ml)中的混合物在室温下搅拌4小时。然后将反应混合物真空浓缩，并且将残余物溶于dmso(5ml)中，随后通过反相c-18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分并且冻干，得到呈白色固体状的试剂25(25mg)。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.75—7.69(m,1h),7.58—7.54(m,2h),7.08—7.06(m,2h),6.87—6.85(m,2h),6.48(dd,j＝15.4,11.0hz,1h),5.47(dd,j＝15.4,9.0hz,1h),4.84—4.81(m,1h),4.32—4.27(m,1h),3.81(s,3h),3.56(d,j＝13.0hz,1h),3.52(d,j＝8.9hz,1h),3.37(s,3h),3.26(d,j＝13.0hz,1h),3.01—2.84(m,6h),2.82(d,j＝1.0hz,3h),2.80—2.73(m,2h),2.67(s,3h),2.64—2.60(m,1h),2.53—2.50(m,2h),2.25—2.21(m,1h),2.15—2.11(m,1h),2.06—1.96(m,3h),1.75(s,3h),1.68(d,j＝13.5hz,1h),1.53—1.47(m,1h),1.37(d,j＝6.8hz,3h),1.34—1.30(m,6h),1.26(d,j＝7.2hz,3h),1.24—1.23(m,1h),1.20(d,j＝6.8hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(1037,100％)。实例13：包含类美登素细胞毒性有效负载的缀合试剂27的制备。步骤1：化合物28的合成。使用4-巯基-4-甲基-戊酸代替4-巯基-戊酸，以与实例12的化合物26类似的方式合成化合物28。分离呈白色固体状的化合物28。1hnmr(500mhz；cd3od)δ7.63—7.62(m,2h),6.96(s,1h),6.71—6.66(m,1h),6.29—6.27(m,1h),5.58—5.53(m,1h),4.76—4.73(m,1h),4.26—4.22(m,1h),3.83(s,3h),3.63—3.60(m,2h),3.39(s,3h),3.36(m,1h),3.07—3.02(m,1h),2.99—2.94(m,1h),2.89—2.87(m,1h),2.79—2.74(m,1h),2.70(s,3h),2.63—2.54(m,2h),2.40—2.37(m,2h),2.27—2.24(m,1h),2.06—1.90(m,5h),1.80(s,3h),1.65—1.54(m,3h),1.36(d,j＝6.8hz,3h),1.29—1.27(d,13h),1.22(d,j＝6.7hz,3h),1.02(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(954,100％)。步骤2：试剂27的合成。使用化合物28代替化合物26，以与实例12的试剂25类似的方式合成试剂27。分离呈白色固体状的试剂27。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.89(d,j＝4.9hz,1h),7.58—7.56(m,2h),7.07(d,j＝8.1hz,2h),6.86(d,j＝6.4hz,2h),6.48(dd,j＝15.3,11.1hz,1h),6.23(s,1h),6.18(d,j＝10.9hz,1h),5.47(dd,j＝15.4,9.0hz,1h),4.84—4.81(m,1h),4.32—4.27(m,1h),3.81(s,3h),3.56(d,j＝12.9hz,1h),3.52(d,j＝9.0hz,1h),3.37(s,3h),3.26(d,j＝12.8hz,1h),3.06(s,1h),3.00—2.94(m,2h),2.87—2.83(m,6h),2.77—2.71(m,2h),2.66(s,3h),2.64—2.60(m,1h),2.55—2.48(m,2h),2.24(d,j＝13.4hz,1h),2.09—1.96(m,4h),1.75(s,3h),1.68(d,j＝13.5hz,1h),1.54—1.46(m,1h),1.34(d,j＝6.7hz,3h),1.30—1.28(m,9h),1.25—1.24(m,1h),1.26(d,j＝7.2hz,3h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(1051,100％)。实例14：试剂25和27与曲妥珠单抗缀合以分别产生抗体药物缀合物(adc)29和30。将缀合试剂25和27与曲妥珠单抗缀合，分别产生adc29和30。简单地说，将试剂溶解在dmso中，得到10mm储备溶液。向的曲妥珠单抗在ph8.0的100mm磷酸钠缓冲液、100mm氯化钠的溶液中添加丙二醇(40％v/v)，并且轻轻混合溶液，得到4.8mg/ml的最终抗体浓度。然后将缀合试剂(每单抗13当量)添加到抗体溶液中，并且轻轻混合反应混合物并且在24℃下培育3小时。然后将活性炭粉末(单抗的70％w/w)添加到反应溶液中，在室温下轻轻搅拌反应溶液30分钟以去除未反应药物相关物质。然后过滤反应混合物(0.22μmpes膜)并且使用pd-10脱盐柱将纯化的样品缓冲液交换到ph5.5的10mm丁二酸、6％w/v海藻糖、0.01％v/vtween20中。在使用png酶f对样品进行去糖基化后，通过质谱法测定缀合物的dar。根据各个dar物质的相对峰强度计算缀合物的平均dar。分别针对抗体药物缀合物29和30测定3.3和2.8的dar分配。实例15：化合物在sk-br-3细胞系中的体外效力测定。如实例2中所述，通过在增加浓度的本发明的化合物存在下培养sk-br-3细胞系，并且对增殖或代谢活性的丧失定量来测试在用本发明的化合物处理后肿瘤细胞存活率的损失。表3中展示本发明的化合物的平均ic50值，并且表4中指定测定浓度。还提供了比较物化合物31的ic50值：来自《欧洲化学期刊》2012,18,880-886。表3化合物编号平均ic50(nm)sk-br-3细胞系41.2(n＝4)51.2(n＝2)62.7(n＝3)180.9(n＝2)31(比较物)33.4(n＝3)表4与含烯丙胺的比较化合物相比，含有联苯部分的本发明的化合物在抑制sk-br-3细胞增殖方面出乎意料地具有较低的ic50值。实例16：将曲妥珠单抗-药物缀合物29与(比较)进行比较的jimt-1小鼠异种移植研究。如实例14中所述制备缀合物29。将到达6周龄的健康雌性nmri裸鼠(rjorl:nmri-foxn1nu/foxn1nu)用于细胞接种。通过200μlpbs中的细胞悬浮液中将5×106jimt-1细胞(乳癌)皮下注射到右侧腹诱导肿瘤。添加基质胶(每200μl细胞悬浮液40μl基质胶)，之后不久接种肿瘤细胞。每周用卡尺测量肿瘤两次，并且使用下式估算体积：当肿瘤体积达到约134mm3的平均肿瘤体积时，将动物随机分成每组八只小鼠的组并且开始治疗(第0天)。通过尾静脉注射(静脉内推注)所有测试物质。以10ml/kg给予30mg/kg单剂量的adc，并且将pbs用于媒剂组。每天记录小鼠的存活率和行为。每周测量两次体重。当达到人道终点时(例如计算出的肿瘤重量>10％体重和/或肿瘤体积>2000mm3，与分配组时体重相比，动物体重下降>20％，肿瘤溃疡，缺乏活动能力，疼痛的一般迹象)，或在预先确定的研究结束日期对动物实施安乐死。治疗后第0天和第14天的平均肿瘤体积±标准误差示于图3中。结果显示，对于经媒剂治疗的动物，肿瘤体积在第0天和第14天之间大约加倍(135与268mm3)。对于用缀合物29(30mg/kg剂量)治疗的动物，截至第14天肿瘤体积减少到第0天时记录的值的几乎一半(134与73mm3)，而临床产品显示在同一时段内肿瘤体积增加(134与165mm3)。所有化合物均耐受良好。实例17：类美登素化合物32的制备。以与实例3的化合物4类似的方式合成化合物32。简单地说，将4-氨基苯基硼酸频哪醇酯(16mg)、磷酸三钾(33mg)、sphospdg3(6mg)和美登素(可从torontoresearchchemicals购得，25mg)依次添加到氩气吹扫的反应容器中。然后将容器密封并且用氩气吹扫固体(4×抽空/吹扫循环)。然后添加通过用氩气吹扫进行严格脱氧的thf(600μl)和水(60μl)，并且将反应混合物在室温下搅拌17小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯(20ml)稀释并且用盐水(10ml)洗涤。分离各层，并且减压浓缩有机层。然后通过反相c-18柱色谱法纯化残余物，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱并且将所需级分冻干，得到呈白色固体状的化合物32(17.3mg)。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ6.90(d,j＝7.9hz,2h),6.82(s,1h),6.72—6.66(m,3h),6.66(s,1h),6.46(dd,j＝15.4,11.2hz,1h),6.23(s,1h),5.70(dd,j＝15.3,9.0hz,1h),5.35—5.31(m,1h),4.82(dd,j＝12.0,2.7hz,1h),4.32—4.28(m,1h),3.81(s,3h),3.68(d,j＝12.8hz,1h),3.52(d,j＝9.0hz,1h),3.42—3.41(m,1h),3.37(s,3h),3.15(d,j＝12.7hz,1h),3.10—3.03(m,2h),2.81(s,3h),2.68(s,3h),2.26(dd,j＝14.3,2.6hz,1h),2.07(s,3h),1.68(s,3h),1.65(d,j＝13.7hz,1h),1.54—1.48(m,1h),1.32—1.30(m,6h),1.26(d,j＝13.0hz,1h),0.92(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(749,100％)。实例18：类美登素化合物33的制备。步骤1：化合物34的合成。使用化合物32代替化合物4，以与实例5的化合物8类似的方式合成化合物34。分离呈浅黄色固体状的化合物34。lc/ms:(es+)[m+h]+(1019,100％)。步骤2：化合物33的合成。使用化合物34代替化合物8，以与实例5的化合物6类似的方式合成化合物33。分离呈白色固体状的化合物33。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.56—7.53(m,2h),7.28(dq,j＝3.1,1.0hz,1h),7.07—7.05(m,2h),6.83(s,1h),6.72—6.69(m,1h),6.67(d,j＝0.3hz,1h),6.48—6.42(m,1h),6.21(s,1h),5.71—5.66(m,1h),5.35—5.31(m,1h),4.82—4.79(m,1h),4.31—4.27(m,1h),3.80(s,3h),3.69(d,j＝12.7hz,1h),3.51(d,j＝9.0hz,1h),3.40—3.39(m,1h),3.36(s,3h),3.17—3.14(m,1h),3.07(d,j＝9.8hz,1h),3.03—2.98(m,2h),2.80(s,3h),2.65(s,3h),2.57—2.52(m,2h),2.26—2.23(m,1h),2.17—2.11(m,1h),2.06(s,3h),1.82—1.75(m,1h),1.68(s,3h),1.64—1.61(m,1h),1.46—1.44(m,1h),1.41—1.40(m,3h),1.31—1.29(m,6h),1.26—1.23(m,1h),0.91(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(865,100％)。实例19：包含类美登素细胞毒性有效负载的缀合试剂35的制备。步骤1：化合物36的合成。在氮气氛下将4-[2,2-双[(对甲苯磺酰基)-甲基]乙酰基]苯甲酸(1.0g，《自然-实验手册(natureprotocols)》,2006,1(54),2241-2252)的溶液添加到无水thf(10ml)中的n-羟基苯并三唑水合物(306mg)中。将所得溶液冷却到0℃并且逐滴添加二异丙基碳二亚胺(310μl)。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，随后升温到室温。1小时后，将额外的thf(10ml)添加到反应混合物中。18小时后，将形成的沉淀过滤并且用冷thf(2×5ml)洗涤，随后真空干燥。在室温下将固体与甲醇(10ml)一起搅拌1小时，过滤收集并且依次用甲醇(2×5ml)和乙醚(5ml)洗涤。然后将固体真空干燥，得到呈白色固体状的化合物36(1.1g)。lc/ms:(es+)[m+h]+(618,100％)。步骤2：化合物37的合成。在氮气氛下向搅拌的l-谷氨酸5-叔丁酯(198mg)在无水dmf(20ml)中的悬浮液中添加nmm(107μl)。将反应混合物冷却到0℃，随后添加化合物36(603mg)。将所得悬浮液在0℃下搅拌1小时，其后使反应混合物升温到室温。19小时后，将所得溶液真空浓缩，并且通过反相c18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:5％乙腈:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。真空去除有机溶剂，并且通过冻干去除水性溶剂，得到呈白色固体状的化合物37(198mg)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.98(1h,d),7.86(2h),7.71-7.65(6h,m),7.36(4h,d),4.68(1h,ddd),4.34(1h,q),3.62(2h,ddd),3.50(2h,ddd),2.69(1hddd),2.55-2.45(1h,m),2.48(6h,s),2.34-2.16(2h,m),1.46(9h,s)。lc/ms:(es+)[2m+h]+(1371,70％),[2m+h-tbu]+(1315,70％),[m+h-tbu]+(630,100％)。步骤3：化合物38的合成。将化合物37(50mg)和六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三-(二甲基氨基)鏻(bop)(40mg)溶解在无水dmf(3ml)中，冷却到0℃并且添加到nh2-peg(24u)-ome(99mg)和nmm(10μl)的无水dmf(2ml)溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌，并且4小时后，将额外量的bop(10mg)和nmm(2.5μl)添加到反应混合物中，将反应混合物再搅拌15分钟，随后在-20℃下储存18小时。然后将反应混合物真空浓缩，并且通过反相c18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:5％乙腈:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。真空去除有机溶剂，并且通过冻干去除水性溶剂，得到呈无色油状的双-甲苯磺酰基-丙酰基-苯甲酰胺-l-glu-[otbu]-[peg(24u)-ome](128mg)。lc/ms:(es+)[m+h]+(1757da,100％),[m+2h]2+(879,100％)。将双-甲苯磺酰基-丙酰基-苯甲酰胺-l-glu-[otbu]-[peg(24u)-ome](126.5mg)溶解在甲酸(2.5ml)中并且在室温下在氮气氛下搅拌。20小时后，将反应混合物真空浓缩并且在高真空下干燥18小时，得到呈无色油状的化合物38(122mg，假定定量产率)。lc/ms:(es+)[m+h]+(1700,100％)。步骤4：化合物39的合成。向冷却到0℃的化合物4(50mg)、fmoc-val-cit-pab-pnp(联宁生物制药有限公司(levenabiopharma)，85mg)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)(11.5mg)的dmf(3ml)溶液中添加dipea(40μl)。使反应混合物升温到室温并且搅拌19小时。添加额外的hoat(14mg)，并且将混合物在室温下搅拌9小时，随后在-20℃下储存72小时。然后添加额外的hoat(18mg)，并且将混合物在室温下搅拌6小时。然后通过反相c18柱色谱法直接纯化反应混合物，用缓冲液a(v/v)：水:0.05％三氟乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.05％三氟乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。合并产物级分并且减压浓缩，并且用乙酸乙酯(100ml)萃取水溶液。分离各层，并且用盐水洗涤有机层。然后分离乙酸乙酯层，用硫酸钠干燥，过滤并且真空浓缩。通过正相色谱法进一步纯化产物，用二氯甲烷:甲醇(100:0v/v到85:15v/v)洗脱。真空去除溶剂，得到呈白色固体状的化合物39(44mg)。1hnmr(500mhz,cd3od)δppm0.83-1.03(m,14h),1.12-1.34(m,17h),1.46-1.67(m,7h),1.79(s,6h),1.92(br.s.,2h),2.03-2.14(m,2h),2.24(d,j＝14.17hz,2h),2.69(s,4h),2.76(dt,j＝13.92,6.72hz,2h),2.87(d,j＝9.77hz,2h),2.99-3.16(m,3h),3.16-3.24(m,2h),3.37(d,j＝6.35hz,8h),3.57-3.63(m,3h),3.82(s,4h),3.98(d,j＝7.33hz,1h),4.17-4.27(m,3h),4.34-4.46(m,3h),4.50-4.61(m,1h),4.74(d,j＝9.77hz,2h),5.15(s,3h),5.55(dd,j＝15.14,8.79hz,1h),6.27(d,j＝10.75hz,1h),6.67(dd,j＝15.63,11.23hz,1h),6.95(s,1h),7.04-7.15(m,4h),7.27-7.43(m,3h),7.49(d,j＝7.82hz,5h),7.61(d,j＝8.3,3h),7.67(t,j＝8.3,3h),7.80(d,j＝7.33hz,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(1320,100％)。步骤5：化合物40的合成。在氩气氛下，向化合物39(52mg)的无水甲醇(2ml)溶液中添加二乙胺(250μl)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。然后添加额外的二乙胺(250μl)并且将混合物在室温下再搅拌2小时。然后将反应混合物减压浓缩，并且通过反相c18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分并且冻干，得到呈白色固体状的化合物40(25mg)。1hnmr(500mhz；dmso-d6)δ10.23(s,1h),9.80(s,1h),8.69(d,j＝7.5hz,1h),8.10(s,3h),7.63(d,j＝8.5hz,2h),7.48(d,j＝8.2hz,2h),7.39(d,j＝8.5hz,2h),7.13(s,1h),7.08(d,j＝8.0hz,1h),6.87(s,1h),6.81(s,1h),6.62(dd,j＝15.2,11.3hz,1h),6.22(d,j＝11.0hz,1h),6.08(s,1h),5.89—5.86(m,1h),5.43(dd,j＝15.2,8.9hz,1h),5.11(s,2h),4.59—4.52(m,2h),4.11(t,j＝11.2hz,1h),3.76(s,3h),3.68—3.66(m,j＝5.3hz,1h),3.54—3.51(m,j＝7.7hz,2h),3.25(s,3h),3.06—3.05(m,1h),2.98—2.97(m,1h),2.85(t,j＝13.1hz,1h),2.70(d,j＝9.7hz,1h),2.66—2.63(m,1h),2.22(d,j＝12.4hz,1h),2.09(q,j＝6.7hz,1h),1.76—1.73(m,1h),1.69(s,3h),1.66—1.62(m,1h),1.51—1.38(m,4h),1.15—1.13(m,5h),1.10(d,j＝6.7hz,3h),0.97—0.94(m,9h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(1098,100％)。步骤6：试剂35的合成。向冷却到0℃的化合物38(25.3mg)的无水dmf(400μl)溶液中添加hatu(5.7mg)。搅拌25分钟后，添加nmm(1.5μl)并且将溶液搅拌15分钟，随后升温到室温并且再搅拌10分钟。向化合物40(15mg)在无水dmf(300μl)中的单独溶液中添加nmm(1.5μl)并且将溶液在室温下搅拌10分钟。然后合并溶液，并且将额外的hatu(5.7mg)和nmm(0.8μl)添加到反应混合物中。在室温下搅拌1小时后，将反应混合物真空浓缩，并且通过反相c18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.05％三氟乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.05％三氟乙酸(95:5v/v到0:100v/v)洗脱。真空去除有机溶剂，并且通过冻干去除水性溶剂，得到呈无色固体状的试剂35(27.2mg)。lc/ms:(es+)[m+2na]2+(1412da,40％),[m+h+na]2+(1401,50％),[m+2h+na]3+(935,80％),[m-h2o+3h]3+(921,100％)。实例20：包含类美登素细胞毒性有效负载的缀合试剂41的制备。步骤1：化合物42的合成。在室温下向搅拌的二乙醇胺(2.5g)和三乙胺(6.05g)的二氯甲烷(15ml)溶液中缓慢添加甲苯磺酰氯(3.8g)的二氯甲烷(15ml)溶液。2小时后，将水(25ml)添加到反应混合物中，并且用二氯甲烷(5×30ml)萃取产物。将合并的有机萃取液用硫酸镁干燥，然后过滤溶液，并且真空去除挥发物，得到呈白色固体状的化合物42(4.7g)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.68(d,j＝8.3hz,2h),7.30(d,j＝8.3hz,2h),3.84(t,j＝5.0hz,4h),3.56(s,2h),3.24(t,j＝5.0hz,4h),2.41(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+na]+(282,95％),[m+h]+(260,100％)。步骤2：化合物43的合成。在室温下，在1小时的时段内，将化合物42(176mg)的无水thf(2ml)溶液逐滴添加到氢化钠(80mg，矿物油中的60％分散体)的无水thf(8ml)溶液中。搅拌1小时后，在2小时的时段内添加二对甲苯磺酸六乙二醇酯(400mg)的无水thf(2ml)溶液，并且将反应混合物在室温下搅拌72小时。添加水(30ml)并且真空去除thf。用氯仿(4×25ml)萃取水溶液，合并有机相，并且用硫酸镁干燥，随后过滤溶液并且真空浓缩。然后通过反相c18柱色谱法纯化残余物，用缓冲液a(v/v)：水:5％乙腈:0.05％三氟乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.05％三氟乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。真空去除有机溶剂，并且通过冻干去除水性溶剂，得到呈无色油状的化合物43(78mg)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.68(d,j＝8.3hz,2h),7.26(d,j＝8.3hz,4h),3.67-3.58(m,24h),3.58-3.53(m,4h),3.38(t,j＝6.0hz,4h),2.40(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+na]+(528,80％),[m+h]+(506,50％)。步骤3：化合物44的合成。向化合物43(78mg)的无水thf(6ml)溶液中添加氢化铝锂(1.13ml，1mthf溶液)，并且将溶液在回流下加热16小时，随后将反应混合物冷却到0℃，并且通过逐滴添加水淬灭。过滤悬浮液，并且用氯仿:乙醇(9:1v/v，5×6ml)洗涤沉淀物。合并滤液和洗涤液，并且真空浓缩，得到呈无色油状的化合物44(50mg)。lc/ms:(es+)[m+na]+(374,70％),[m+h]+(352,100％)。步骤4：化合物45的合成。在0℃下，向fmoc-glu(otbu)-oh(78mg)的无水dmf(500μl)溶液中添加hatu(108mg)和nmm(34μl)，并且将混合物在0℃下搅拌10分钟。向此中添加化合物44(44mg)的无水dmf(500μl)溶液，并且将混合物在0℃下在氩气氛下搅拌15分钟。然后将反应混合物真空浓缩，并且将残余物溶于无水dmf(500μl)中。添加哌啶(70μl)并且将溶液在室温下搅拌90分钟。将反应溶液真空浓缩，并且通过反相c18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:5％乙腈:0.05％三氟乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.05％三氟乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。真空去除有机溶剂，并且通过冻干去除水性溶剂，得到呈橙色油状的化合物45(44mg)。lc/ms:(es+)[m+h]+(537,45％)。步骤5：化合物46的合成。在0℃下，向4-[2,2-双[(对甲苯磺酰基)-甲基]乙酰基]苯甲酸(37.5mg)的无水dmf(500μl)溶液中添加hatu(65mg)和nmm(20μl)，并且将混合物在0℃下搅拌10分钟。向此中添加化合物45(44.3mg)的无水dmf(500μl)溶液，并且将混合物在0℃下在氩气氛下搅拌1小时。然后将反应混合物真空浓缩，将残余物溶于dmf(1ml)中，并且通过反相c18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.05％三氟乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.05％三氟乙酸(60:40v/v到0:100v/v)洗脱。通过冻干去除溶剂，得到呈白色固体状的双-甲苯磺酰基-丙酰基-苯甲酰胺-l-glu-(otbu)-氮杂-24-冠-8(28.5mg)。lc/ms:(es+)[m+na]+(1041,20％),[m+h]+(1019,5％)。向双-甲苯磺酰基-丙酰基-苯甲酰胺-l-glu-(otbu)-氮杂-24-冠-8(26.5mg)的无水二氯甲烷(1ml)溶液中添加三氟乙酸(500μl)，并且将溶液在室温下在氩气氛下搅拌1小时。真空去除挥发物，得到呈白色固体状的化合物46(假定定量产率)。lc/ms:(es+)[m+na]+(985,35％),[m+h]+(963,30％)。步骤6：试剂41的合成。向冷却到0℃的化合物46(10.5mg)的dmf(300μl)溶液中添加hatu(4mg)。搅拌20分钟后，添加nmm(1μl)并且将反应溶液在0℃下再搅拌30分钟。向冷却到0℃的化合物40(10mg)在dmf(200μl)中的单独溶液中添加nmm(1μl)并且将溶液搅拌40分钟。然后将溶液合并，随后添加额外量的hatu(4mg)和nmm(1μl)，并且使反应混合物升温到室温并且搅拌3.25小时。然后将反应溶液真空浓缩，并且通过反相c18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.05％三氟乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.05％三氟乙酸(70:30v/v到0:100v/v)洗脱。真空去除有机溶剂，并且通过冻干去除水性溶剂，得到呈白色固体状的试剂41(8.2mg)。lc/ms:(es+)[m+2na]2+(1043,30％),[m+na+h]2+(1033,60％),[m+2h]2+(1021,100％),[m+3h]3+(682,30％)。实例21：包含类美登素细胞毒性有效负载的缀合试剂47的制备。步骤1：化合物48的合成。在0℃下向搅拌的化合物4(50mg)、fmoc-val-ala-oh(creagen，67mg)和hatu(85mg)的无水dmf(2ml)溶液中添加dipea(50μl)。使溶液升温到室温并且搅拌16小时。然后通过反相c18柱色谱法直接纯化反应混合物，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱，并且将所需级分冻干，得到呈白色固体状的化合物48(57mg)。lc/ms:(es+)[m+h]+(1084,100％)。步骤2：化合物49的合成。向搅拌的化合物48(30mg)的二氯甲烷(2ml)溶液中添加二乙胺(140μl)，并且将反应混合物在室温下搅拌16小时，随后将溶液真空浓缩。将残余物溶于dmf(5ml)中，并且通过反相c18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分并且冻干，得到呈白色固体状的化合物49(20mg)。lc/ms:(es+)[m+h]+(862,100％)。步骤3：试剂47的合成。在0℃下，向化合物38(15.6mg)、化合物49(8mg)和hatu(6.6mg)的dmf(2ml)溶液中添加nmm(30μl)，并且将混合物在0℃下搅拌90分钟。然后通过反相c18柱色谱法直接纯化反应混合物，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分并且冻干，得到呈白色固体状的试剂47(15mg)。1hnmr(500mhz；dmso-d6)δ9.99(s,0.5h),9.92(s,0.5h),8.73(dd,j＝7.2,5.1hz,1h),8.40—8.39(m,0.5h),8.25(d,j＝6.5hz,0.5h),8.05—8.01(m,1h),7.97—7.87(m,2h),7.67—7.51(m,6h),7.46—7.44(m,3h),7.13—7.09(m,2h),6.86(s,1h),6.81(s,1h),6.65—6.60(m,1h),6.52(s,1h),6.23—6.21(m,1h),5.87(s,1h),5.42(dd,j＝15.2,8.9hz,1h),4.59—4.57(m,1h),4.46—4.39(m,2h),4.27—4.17(m,1h),4.13—4.09(m,1h),4.01—3.98(m,1h),3.84—3.80(m,2h),3.75—3.71(m,6h),3.51(s,96h),3.44—3.42(m,5h),3.38—3.36(m,1h),3.25(d,j＝4.0hz,6h),2.89—2.83(m,1h),2.70(d,j＝9.4hz,1h),2.46(s,6h),2.40—2.22(m,4h),2.08—1.90(m,3h),1.69(s,3h),1.51—1.45(m,2h),1.40—1.38(m,1h),1.33—1.31(m,4h),1.14(d,j＝7.1hz,6h),1.10(d,j＝6.6hz,4h),0.93(s,3h),0.90—0.84(m,6h)。lc/ms:(es+)[m+2h]2+(1272,30％),[m+3h]3+(848,100％)。实例22：包含类美登素细胞毒性有效负载的缀合试剂50的制备。步骤1：化合物51的合成。向搅拌的氨基-peg(2u)-酸(50mg)和6-马来酰亚胺基己酸n-羟基丁二酰亚胺酯(60mg)在无水dmf(2ml)中的悬浮液中添加dipea(80μl)，并且将反应混合物在室温下搅拌2小时。然后将混合物通过反相c-18柱色谱法直接纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分并且冻干，得到呈白色固体状的化合物51(43mg)。1hnmr(500mhz；dmso-d6)δ7.83—7.80(m,1h),7.02(s,2h),3.61(t,j＝6.4hz,3h),3.41—3.36(m,6h),3.34—3.33(m,1h),3.18(q,j＝5.8hz,3h),2.45(t,j＝6.3hz,2h),2.05(t,j＝7.4hz,2h),1.48(dt,j＝14.9,7.4hz,4h),1.23—1.13(m,2h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(371,100％)。步骤2：试剂50的合成。向冷却到0℃的化合物40(12mg)、化合物51(5.6mg)和hatu(8.2mg)的dmf(1.5ml)溶液中添加nmm(20μl)，并且将混合物在0℃下搅拌2.5小时。然后直接通过反相c-18柱色谱法纯化反应混合物，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分并且冻干，得到呈白色固体状的试剂50(12mg)。1hnmr(500mhz；dmso-d6)δ10.06(s,1h),9.79—9.78(m,1h),8.18(d,j＝7.3hz,1h),7.91(d,j＝8.8hz,1h),7.82—7.80(m,1h),7.63(d,j＝8.5hz,2h),7.47(d,j＝8.5hz,2h),7.37(d,j＝8.5hz,2h),7.13(s,1h),7.08(d,j＝8.0hz,2h),7.00(s,2h),6.86(s,1h),6.80(s,1h),6.62(dd,j＝15.3,11.2hz,1h),6.21(d,j＝11.1hz,1h),6.04—6.01(m,1h),5.87(s,1h),5.45—5.40(m,,3h),5.10(s,2h),4.59—4.56(m,1h),4.41—4.37(m,1h),4.25—4.22(m,1h),4.13—4.09(m,1h),3.76(s,3h),3.63—3.59(m,2h),3.54—3.50(m,2h),3.48—3.46(m,4h),3.38—3.36(m,4h),3.25(s,3h),3.17(q,j＝5.8hz,2h),3.04—2.92(m,2h),2.88—2.83(m,1h),2.70(d,j＝9.7hz,1h),2.67—2.61(m,1h),2.47—2.45(m,1h),2.41—2.36(m,1h),2.23(dd,j＝13.0,0.8hz,1h),2.04(t,j＝7.4hz,2h),2.01—1.94(m,1h),1.73—1.65(m,5h),1.63—1.58(m,1h),1.51—1.42(m,7h),1.40—1.35(m,2h),1.20—1.12(m,8h),1.10(d,j＝6.6hz,3h),0.94(s,3h),0.87(d,j＝6.7hz,3h),0.83(d,j＝6.8hz,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(1449,100％)。实例23：一系列类美登素化合物的制备。通过用一系列芳基硼试剂代替4-氨基苯基硼酸，使用与实例3中所述程序类似的程序制备一系列通式(xv)的类美登素化合物，以产生化合物52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63和64。表5中展示化合物结构和对实例3中所述的合成方案的修改。表5*相对于1摩尔当量的ap3的摩尔当量。**3摩尔当量的磷酸三钾用于制备化合物52。4摩尔当量的磷酸三钾用于制备化合物53-64。***产物以阻转异构体的混合物的形式分离。化合物52的特征数据：1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.21—7.15(m,1h),6.85(d,j＝2.2hz,2h),6.68—6.65(m,1h),6.51—6.45(m,3h),6.22—6.17(m,2h),5.49—5.44(m,1h),4.84—4.81(m,1h),4.31—4.27(m,1h),3.82(s,3h),3.57—3.50(m,2h),3.37(s,3h),3.29—3.24(m,1h),3.02—2.90(m,3h),2.73(s,3h),2.69—2.61(m,1h),2.27—2.22(m,1h),1.75(s,3h),1.69—1.66(m,1h),1.50—1.48(m,1h),1.30(d,j＝6.3hz,3h),1.26(d,j＝7.1hz,3h),1.24—1.23(m,1h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.93(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(692,100％)。化合物53的特征数据：lc/ms:(es+)[m+h]+(722,100％)。化合物54的特征数据：1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.98(s,1h),7.08(dd,j＝8.5,1.5hz,1h),6.89(s,1h),6.86(s,1h),6.82(d,j＝8.6hz,1h),6.48(dd,j＝15.4,11.0hz,1h),6.21—6.16(m,4h),5.47(dd,j＝15.4,9.0hz,1h),4.84(dd,j＝11.9,2.8hz,1h),4.30(t,j＝10.6hz,1h),3.84(s,3h),3.57(d,j＝12.9hz,1h),3.52(d,j＝9.0hz,1h),3.37(s,3h),3.27(d,j＝13.0hz,1h),3.00(d,j＝9.7hz,1h),2.94(t,j＝12.9hz,1h),2.74(s,3h),2.63(dt,j＝13.9,6.9hz,1h),2.25(dd,j＝13.8,2.7hz,1h),1.75(s,3h),1.67(d,j＝13.5hz,1h),1.53—1.47(m,1h),1.30(d,j＝6.3hz,3h),1.26(d,j＝7.1hz,3h),1.25—1.24(m,1h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(737,100％)。化合物55的特征数据：1hnmr(300mhz；cdcl3)δ6.99(dd,j＝10.9,8.4hz,1h),6.85(d,j＝2.7hz,2h),6.54—6.47(m,2h),6.44—6.39(m,1h),6.21—6.16(m,2h),5.47(dd,j＝15.4,9.1hz,1h),4.83(dd,j＝11.9,2.9hz,1h),4.33—4.25(m,1h),3.82(s,3h),3.73(s,2h),3.58—3.50(m,2h),3.37(s,3h),3.25(d,j＝13.1hz,1h),3.02—2.86(m,2h),2.73(s,3h),2.67—2.58(m,1h),2.22(dd,j＝13.8,2.7hz,1h),1.74(s,3h),1.67(d,j＝13.7hz,1h),1.53—1.46(m,1h),1.30(d,j＝6.2hz,3h),1.26(d,j＝7.0hz,3h),1.25—1.23(m,1h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.93(s,3h)。lc/ms:(es+)[2m+h]+(1420,100％),[m+h]+(710,70％)。化合物56的特征数据：1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.83(d,j＝8.3hz,2h),7.23—7.21(m,2h),6.89(d,j＝10.0hz,2h),6.49(dd,j＝15.5,11.0hz,1h),6.21—6.19(m,2h),5.48(dd,j＝15.5,9.1hz,1h),4.84(dd,j＝11.9,2.9hz,1h),4.32—4.27(m,1h),3.82(s,3h),3.58(d,j＝12.7hz,1h),3.52(d,j＝9.0hz,1h),3.37(s,3h),3.30—3.27(m,1h),3.02—2.94(m,2h),2.66(s,3h),2.64—2.60(m,1h),2.25(dd,j＝13.6,2.8hz,1h),1.76(s,3h),1.69—1.67(m,1h),1.53—1.48(m,1h),1.31(d,j＝6.4hz,3h),1.26(d,j＝7.2hz,4h),1.25—1.24(m,1h),1.20(d,j＝6.8hz,3h),0.95(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(720,100％)。化合物57的特征数据：1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.94(d,j＝8.7hz,2h),6.89(d,j＝9.0hz,2h),6.48(dd,j＝15.3,11.0hz,1h),6.21—6.18(m,2h),5.47(dd,j＝15.3,9.0hz,1h),4.85(s,2h),4.82(dd,j＝11.9,2.9hz,1h),4.31—4.27(m,1h),3.81(s,3h),3.57(d,j＝12.8hz,1h),3.52(d,j＝8.9hz,1h),3.37(s,3h),3.28(d,j＝12.7hz,1h),3.01—2.91(m,2h),2.67(s,3h),2.65—2.59(m,1h),2.23(dd,j＝13.8,2.8hz,1h),1.75(s,3h),1.66(dd,j＝13.7,1.5hz,1h),1.52—1.47(m,1h),1.30(d,j＝6.3hz,3h),1.25(d,j＝7.2hz,3h),1.25—1.23(m,1h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(756,100％)。对于化合物58的特征数据：1hnmr(500mhz；cdcl3)δ6.96(d,j＝7.9hz,2h),6.86(d,j＝10.4hz,2h),6.81(d,j＝8.6hz,2h),6.49(dd,j＝15.4,11.1hz,1h),6.24(s,1h),6.19(d,j＝11.1hz,1h),5.47(dd,j＝15.5,9.0hz,1h),4.83(dd,j＝11.9,2.8hz,1h),4.32—4.28(m,1h),3.82(s,3h),3.56(d,j＝13.0hz,1h),3.52(d,j＝9.0hz,1h),3.37(s,3h),3.26(d,j＝12.8hz,1h),3.02—2.96(m,2h),2.67(s,3h),2.64—2.60(m,1h),2.27(dd,j＝13.6,2.3hz,1h),1.75(s,3h),1.68(d,j＝13.5hz,1h),1.53—1.48(m,1h),1.30(d,j＝6.3hz,3h),1.26(d,j＝7.2hz,3h),1.25—1.24(m,1h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(693,100％)。化合物59的特征数据：1hnmr(300mhz；cdcl3)δ7.22(d,j＝7.9hz,1h),6.86(s,2h),6.83—6.80(m,1h),6.70(d,j＝7.6hz,1h),6.62(s,1h),6.48(dd,j＝15.3,11.0hz,1h),6.39(s,1h),6.19(d,j＝10.7hz,1h),5.51(dd,j＝15.3,9.0hz,1h),4.86(dd,j＝11.9,2.5hz,1h),4.44—4.36(m,1h),3.82(s,3h),3.56(d,j＝13.0hz,1h),3.49(d,j＝9.0hz,1h),3.36(s,3h),3.24(d,j＝13.1hz,1h),3.00(d,j＝9.6hz,1h),2.91(t,j＝13.0hz,1h),2.65(s,2h),2.63—2.58(m,1h),2.41—2.35(m,1h),1.74(s,3h),1.71—1.65(m,1h),1.57—1.45(m,1h),1.31(d,j＝6.3hz,3h),1.28—1.27(m,1h),1.23(d,j＝7.1hz,3h),1.19(d,j＝6.7hz,3h),0.95(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(693,100％)。化合物60的特征数据：1hnmr(300mhz；cdcl3)δ7.39(d,j＝8.0hz,2h),7.11(d,j＝7.8hz,2h),6.88(d,j＝4.2hz,2h),6.49(dd,j＝15.4,10.9hz,1h),6.22—6.17(m,2h),5.47(dd,j＝15.3,9.2hz,1h),4.82(dd,j＝12.0,3.0hz,1h),4.73(s,2h),4.33—4.26(m,1h),3.82(s,3h),3.57(d,j＝12.9hz,1h),3.53—3.50(m,1h),3.37(s,3h),3.27(d,j＝13.3hz,1h),3.03—2.91(m,3h),2.67(s,3h),2.67—2.58(m,1h),2.23(dd,j＝13.8,3.0hz,1h),1.75(d,j＝5.5hz,3h),1.70—1.65(m,1h),1.55—1.46(m,1h),1.31(d,j＝6.3hz,3h),1.26—1.24(m,1h),1.26(d,j＝7.2hz,3h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(707,100％)。化合物61的特征数据：1hnmr(300mhz；cdcl3)δ7.40—7.30(m,2h),7.13(s,1h),7.07—7.04(m,1h),6.88(d,j＝6.2hz,2h),6.49(dd,j＝15.4,11.0hz,1h),6.21—6.17(m,2h),5.47(dd,j＝15.2,9.0hz,1h),4.84—4.80(m,1h),4.70(s,2h),4.33—4.25(m,1h),3.82(s,3h),3.57(d,j＝12.7hz,1h),3.52(d,j＝9.0hz,1h),3.37(s,3h),3.27(d,j＝12.6hz,1h),3.04—2.91(m,3h),2.66(s,3h),2.63—2.58(m,1h),2.28—2.22(m,1h),1.86—1.82(m,1h),1.75(s,3h),1.70—1.65(m,1h),1.52—1.47(m,1h),1.30(d,j＝6.2hz,3h),1.27—1.24(m,1h),1.26(d,j＝7.0hz,3h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.95(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(707,100％)。化合物62的特征数据：1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.11(s,1h),7.00(d,j＝8.4hz,1h),6.89—6.85(m,j＝10.7hz,3h),6.48(dd,j＝15.4,11.0hz,1h),6.23(s,1h),6.18(d,j＝11.0hz,1h),6.09(s,1h),5.47(dd,j＝15.4,9.0hz,1h),4.83(dd,j＝11.9,2.9hz,1h),4.32—4.27(m,1h),3.83(s,3h),3.56(d,j＝12.9hz,1h),3.52(d,j＝9.0hz,1h),3.37(s,3h),3.26(d,j＝12.9hz,1h),3.11(d,j＝2.0hz,1h),3.00(d,j＝9.7hz,1h),2.94(dd,j＝13.7,12.1hz,1h),2.71(s,3h),2.65—2.59(m,1h),2.24(dd,j＝13.8,2.7hz,1h),1.74(s,3h),1.67(d,j＝13.5hz,1h),1.52—1.46(m,1h),1.30(d,j＝6.4hz,3h),1.26(d,j＝7.2hz,3h),1.27—1.25(m,1h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(727,100％)。化合物63的特征数据：1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.05(d,j＝8.3hz,0.33h),6.98(d,0.66h,j＝2.4hz,0.66h),6.94—6.91(m,1h),6.89—6.85(m,2.33h),6.79(d,j＝8.3hz,0.66h),6.51—6.44(m,1h),6.23—6.15(m,2h),5.50—5.41(m,1h),4.84(dd,j＝11.9,3.0hz,0.66h),4.74(dd,j＝12.1,3.1hz,0.33h),4.32—4.23(m,1h),3.94—3.92(m,2h),3.88(s,2h),3.84(s,1h),3.59—3.50(m,2h),3.37(s,2h),3.36(s,1h),3.31—3.25(m,1h),3.02—2.78(m,4h),2.69(s,2h),2.65—2.60(m,1h),2.27—2.23(m,0.66h),2.14—2.11(m,0.33h),1.77(s,1h),1.74(s,2h),1.70—1.62(m,1h),1.52—1.46(m,1h),1.32—1.25(m,7h),1.21—1.19(m,3h),0.95(s,2h),0.90(s,1h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(717,100％)。化合物64的特征数据：1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.30(d,j＝2.4hz,0.2h),7.24(d,j＝2.4hz,0.8h),6.94(d,j＝8.1hz,0.2h),6.90(s,0.8h),6.83—6.79(m,2h),6.74(s,1h),6.71(d,j＝8.2hz,1h),6.51—6.46(m,1h),6.22—6.15(m,2h),5.49—5.41(m,1h),4.86(dd,j＝11.8,2.7hz,0.8h),4.68—4.65(m,0.2h),4.33—4.24(m,1h),3.85—3.81(m,2h),3.76—3.73(m,3h),3.68—3.66(m,3h),3.59—3.49(m,2h),3.37—3.36(m,3h),3.28—3.22(m,1h),3.11—3.02(m,2.4h),2.93(s,0.6h),2.91—2.85(m,0.6h),2.70(s,2.4h),2.67—2.60(m,1h),2.29—2.26(m,0.8h),1.80(s,0.6h),1.78—1.74(m,0.2h),1.73(s,2.4h),1.72—1.63(m,1h),1.54—1.46(m,1h),1.32—1.30(m,3h),1.28—1.24(m,4h),1.21—1.18(m,3h),0.97(s,2.4h),0.91(s,0.6h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(750,100％)。实例24：类美登素化合物65的制备。将化合物61(36mg)、九水合硝酸铁(iii)(13mg)、tempo(4.8mg)、氯化钾(6.2mg)和1,2-二氯乙烷(2ml)依次添加到反应容器中，并且将混合物在氧气氛下搅拌5天。然后将反应混合物真空浓缩，将残余物溶于dmf(10ml)中，并且然后通过反相c-18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分并且冻干，得到呈白色固体状的化合物65(4.5mg)。1hnmr(500mhz；cd3od)δ8.01(d,j＝7.4hz,1h),7.82—7.80(m,1h),7.53—7.50(m,1h),7.42—7.39(m,1h),7.17(s,1h),6.99(s,1h),6.72—6.67(m,1h),6.30(d,j＝11.0hz,1h),5.59—5.51(m,1h),4.75(d,j＝11.7hz,1h),4.27—4.22(m,1h),3.85(s,3h),3.65—3.61(m,3h),3.39(s,3h),3.11—3.06(m,1h),2.88(d,j＝9.4hz,1h),2.80—2.74(m,1h),2.67(s,3h),2.32—2.29(m,1h),1.81(s,3h),1.66—1.57(m,3h),1.31—1.27(m,7h),1.23(d,j＝6.5hz,3h),1.04(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(721,100％)。实例25：包含类美登素细胞毒性有效负载的缀合试剂66的制备。步骤1：化合物67的合成。在0℃下，向搅拌的化合物58(328mg)、boc-val-cit-pab(broadpharm，688mg)和三正丁基膦(700μl)的dmf(15ml)溶液中缓慢添加偶氮二羧酸二异丙酯(560μl)。使混合物逐渐升温到室温，并且搅拌2.5小时。然后通过反相c-18柱色谱法直接纯化反应混合物，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分并且冻干，得到呈浅黄色固体状的化合物67(92mg)。lc/ms:(es+)[m+h]+(1154,100％)。步骤2：化合物68的合成。将化合物67(92mg)的甲酸(2ml)溶液在室温下搅拌80分钟。然后将反应混合物真空浓缩，将残余物溶于dmf(5ml)中，并且然后通过反相c-18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分并且冻干，得到呈白色固体状的化合物68(47mg)。lc/ms:(es+)[m+h]+(1054,100％)。步骤3：试剂66的合成。使用化合物68代替化合物49，以与实例21的试剂47类似的方式(步骤3)合成试剂66。分离呈白色固体状的试剂66。1hnmr(500mhz；dmso-d6)δ10.02(s,1h),8.76(d,j＝7.8hz,0.5h),8.16—8.14(m,0.5h),8.05—8.02(m,1h),7.92—7.79(m,2h),7.69—7.61(m,2h),7.57—7.51(m,5h),7.47—7.43(m,4h),7.41—7.31(m,2h),7.12(d,j＝0.4hz,1h),7.09—7.08(m,2h),7.00(d,j＝8.8hz,2h),6.86(s,1h),6.81(s,1h),6.65—6.60(m,0.5h),6.53(s,0.5h),6.23—6.20(m,0.5h),5.99—5.97(m,0.5h),5.89—5.87(m,1h),5.45—5.40(m,3h),5.06—5.00(m,1h),4.59—4.53(m,0.5h),4.44—4.39(m,1h),4.27—4.24(m,0.5h),4.14—4.07(m,0.5h),4.02—3.97(m,0.5h),3.86—3.80(m,1h),3.76(s,3h),3.74—3.71(m,1.5h),3.68—3.63(m,0.5h),3.51(s,96h),3.46—3.42(m,5h),3.25(d,j＝4.4hz,7h),3.05—2.94(m,1.5h),2.90—2.85(m,0.5h),2.72—2.70(m,1h),2.66—2.63(m,2h),2.46(s,6h),2.40—2.37(m,2h),2.34—2.27(m,2h),2.20—2.17(m,1h),2.05—1.91(m,2h),1.72—1.68(m,4h),1.62—1.59(m,0.5h),1.52—1.35(m,4.5h),1.14(d,j＝6.9hz,6h),1.10(d,j＝6.6hz,3h),0.94(s,3h),0.88(d,j＝6.5hz,3h),0.84(d,j＝6.7hz,4h)。lc/ms:(es+)[m+2h]2+(1368,20％),[m+3h]3+(912,70％),[m+4h]4+(684,100％)。实例26：包含类美登素细胞毒性有效负载的缀合试剂69的制备。使用化合物62代替化合物58，以与实例25的试剂66类似的方式(步骤1)合成试剂69。分离呈白色固体状的试剂69。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ9.15(s,0.5h),7.96—7.88(m,2.5h),7.80—7.72(m,1h),7.75—7.66(m,8h),7.47—7.44(m,1h),7.37—7.32(m,7h),7.17(s,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.89(d,j＝8.1hz,1h),6.85(d,j＝4.7hz,2h),6.48(dd,j＝15.3,11.0hz,0.5h),6.25—6.17(m,1.5h),5.97—5.86(m,0.5h),5.50—5.45(m,0.5h),5.11—5.00(m,4h),4.81(dd,j＝11.6,1.9hz,1h),4.67—4.65(m,0.5h),4.56—4.55(m,0.5h),4.38—4.20(m,2h),3.81(s,3h),3.63(s,96h),3.57—3.52(m,12h),3.37(d,j＝5.5hz,6h),3.27—3.20(m,3h),2.94(dd,j＝27.1,11.3hz,2h),2.69(s,3h),2.65—2.61(m,1h),2.47(s,6h),2.41—2.34(m,1.5h),2.22—2.13(m,2.5h),1.98—1.95(m,1h),1.83—1.79(m,3h),1.74(s,3h),1.66(d,j＝13.5hz,1h),1.58—1.48(m,2h),1.29(d,j＝6.1hz,3h),1.25(d,j＝7.1hz,4h),1.19(d,j＝6.7hz,3h),1.00(t,j＝6.4hz,5h),0.93(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+2h]2+(1385,15％),[m+3h]3+(923,75％),[m+4h]4+(693,100％)。实例27：包含类美登素细胞毒性有效负载的缀合试剂70的制备。步骤1：化合物71的合成。将化合物18(18mg)和化合物7(19mg)的无水dmf(1ml)溶液在氩气氛下在室温下搅拌18小时。然后将反应溶液用水(1ml)稀释，并且通过反相c-18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.05％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.05％乙酸(70:30v/v到10:90v/v)洗脱。合并所需级分，真空浓缩并且冻干，得到呈白色固体状的化合物71(12mg)。1hnmr(500mhz；cdcl3):δ8.41(s,1h),7.70(s,1h),7.12(s,1h),7.04(d,j＝7.3hz,1h),6.87(dd,j＝10.8,5.9hz,2h),6.48(dd,j＝15.2,10.9hz,1h),6.31(s,1h),6.19(dd,j＝11.0,0.5hz,1h),5.47(dd,j＝15.4,8.8hz,1h),4.84-4.81(m,1h),4.32-4.28(m,1h),3.82(d,j＝5.0hz,3h),3.56(d,j＝12.7hz,1h),3.52(d,j＝9.0hz,1h),3.37(s,3h),3.28-3.21(m,2h),3.00(dd,j＝10.0,4.8hz,1h),2.91(t,j＝13.0hz,1h),2.73(d,j＝8.7hz,3h),2.67-2.56(m,4h),2.44(d,j＝8.5hz,1h),2.23(dd,j＝13.8,3.1hz,1h),2.16(dt,j＝12.7,6.6hz,1h),2.03(ddt,j＝25.3,12.2,6.5hz,4h),1.50(d,j＝6.7hz,3h),1.45(d,j＝6.7hz,3h),1.36(dt,j＝6.9,3.6hz,1h),1.31(q,j＝6.1hz,5h),1.25(dt,j＝7.5,4.1hz,4h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.93(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(974,100％),[m+na]+(996,45％)步骤2：试剂70的合成。将化合物71(11mg)、edc.hcl(15mg)和n-羟基丁二酰亚胺(10mg)在无水二氯甲烷(3ml)中的混合物在氩气氛下在室温下搅拌72小时。然后将反应混合物真空浓缩，并且将残余物溶于二氯甲烷:乙腈(2ml，1:1v/v)中，随后通过正相色谱法纯化，用二氯甲烷:乙腈(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分，并且真空去除溶剂，得到呈白色固体状的试剂70(12mg)。1hnmr(500mhz；cdcl3):δ8.41(d,j＝7.5hz,1h),7.79-7.70(m,1h),7.12(s,1h),7.06-7.04(m,1h),6.86(d,j＝11.8hz,2h),6.48(dd,j＝15.4,11.0hz,1h),6.19(d,j＝14.5hz,2h),5.49-5.45(m,1h),4.83(dd,j＝11.7,2.6hz,1h),4.30(t,j＝11.2hz,1h),3.81(s,3h),3.56(d,j＝12.8hz,1h),3.52(d,j＝8.8hz,1h),3.37(s,3h),3.27(d,j＝12.5hz,2h),3.00(d,j＝9.8hz,2h),2.93(dd,j＝13.0,4.8hz,2h),2.87-2.79(m,7h),2.72(d,j＝3.3hz,3h),2.62(tt,j＝13.4,6.5hz,3h),2.23(d,j＝14.2hz,1h),2.07(dddd,j＝31.6,23.4,16.2,7.7hz,4h),1.74(s,3h),1.67(d,j＝13.6hz,1h),1.50(d,j＝6.7hz,1h),1.47(d,j＝6.7hz,1h),1.37(dd,j＝6.8,1.7hz,2h),1.34(d,j＝6.9hz,2h),1.31(d,j＝6.3hz,3h),1.26(q,j＝8.3hz,5h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(1071,100％),[m+na]+(1093,80％)。实例28：包含类美登素细胞毒性有效负载的缀合试剂72的制备。步骤1：化合物73的合成。在0℃下，向fmoc-lys(boc)-oh(470mg)的无水dmf(5ml)溶液中添加hatu(1.4g)。在0℃下，向此中添加nh2-peg(24u)-ome(1g)和nmm(340μl)的无水dmf(5ml)溶液，随后使溶液升温到室温并且搅拌1小时然后将反应混合物真空浓缩，并且通过反相c18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.05％三氟乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.05％三氟乙酸(95:5v/v到0:100v/v)洗脱。真空去除有机溶剂，并且通过冻干去除水性溶剂，得到fmoc-lys(boc)-[peg(24u)-ome]。lc/ms:(es+)[m+na]+(1560,100％),[m+h]+(1539,80％)。向fmoc-lys(boc)-[peg(24u)-ome]的dmf(10ml)溶液中添加哌啶(0.9ml)，并且将溶液在室温下搅拌10分钟。将反应溶液真空浓缩，并且通过反相c18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.05％三氟乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.05％三氟乙酸(95:5v/v到0:100v/v)洗脱。真空去除有机溶剂，并且通过冻干去除水性溶剂，得到呈白色固体状的化合物73(1g)。lc/ms:(es+)[m+h]+(1316,10％),[m+2h-boc]2+(609,100％)。步骤2：化合物74的合成。向化合物36(420mg)的无水dmf(2ml)溶液中添加化合物73(1g)和nmm(92μl)的无水dmf(3ml)溶液。在室温下搅拌2.5小时后，将反应混合物真空浓缩，并且通过反相c18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.05％三氟乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.05％三氟乙酸(95:5v/v到0:100v/v)洗脱。真空去除有机溶剂，并且通过冻干去除水性溶剂，得到呈白色固体状的双-甲苯磺酰基-丙酰基-苯甲酰胺-l-lys-[boc]-[peg(24u)-ome](0.84g)。lc/ms:(es+)[m+2h-boc]2+(850,95％)。然后将双-甲苯磺酰基-丙酰基-苯甲酰胺-l-lys-[boc]-[peg(24u)-ome](0.84g)溶解在甲酸(3ml)中，并且将溶液在室温下搅拌3小时。真空去除挥发物，并且将残余物用甲苯(3×6ml)洗涤，随后将残余物真空干燥，并且通过反相c18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.05％三氟乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.05％三氟乙酸(95:5v/v到0:100v/v)洗脱。真空去除有机溶剂，并且通过冻干去除水性溶剂，得到呈白色固体状的化合物74(0.59g)。lc/ms:(es+)[m+h]+(1699,5％),[m+2h]2+(850,100％)。步骤3：试剂72的合成。向化合物74(52mg)的无水dmf(0.9ml)溶液中添加试剂25(21mg)，随后添加nmm(9μl)，并且在室温下搅拌混合物。在2小时和4小时后添加额外量的nmm(2×9μl)，并且然后在6小时后，将反应溶液在-20℃下再储存16小时。然后将反应溶液真空浓缩，将残余物溶于乙腈(400μl)中，并且然后通过反相c18柱色谱法纯化，用缓冲液a(v/v)：水:0.05％三氟乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.05％三氟乙酸(70:30v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分并且冻干，得到呈白色固体状的试剂72(17mg)。ms:(es+)[m+2na]2+(1333,10％),[m+3h]3+(874,100％),[m+4h]4+(656,30％)。实例29：包含类美登素细胞毒性有效负载的缀合试剂75的制备。步骤1：化合物76的合成。将化合物34(40mg)和4-巯基-戊酸(27mg)在dmf(5ml)中的混合物在室温下搅拌16小时。然后通过反相c-18柱色谱法直接纯化反应混合物，用缓冲液a(v/v)：水:0.1％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.1％乙酸(100:0v/v到0:100v/v)洗脱。合并所需级分并且冻干，得到呈白色固体状的化合物76(36mg)。lc/ms:(es+)[m+h]+(998,100％),[m+2h]2+(499,20％)。步骤2：试剂75的合成。使用化合物76代替化合物26，以与实例12的试剂25类似的方式合成试剂75。分离呈白色固体状的试剂75。1hnmr(500mhz；cdcl3)δ7.76—7.70(m,1h),7.58—7.56(m,2h),7.08—7.06(m,2h),6.84(d,j＝0.4hz,1h),6.72—6.68(m,2h),6.46(dd,j＝15.3,11.3hz,1h),6.25(s,1h),5.72—5.67(m,1h),5.36—5.32(m,1h),4.82—4.79(m,1h),4.30(td,j＝11.2,1.4hz,1h),3.81(s,3h),3.70(d,j＝12.9hz,1h),3.52(d,j＝9.1hz,1h),3.37(s,3h),3.18—3.15(m,1h),3.09—3.02(m,2h),2.96—2.73(m,6h),2.66(s,3h),2.54—2.51(m,2h),2.28—2.24(m,1h),2.15—1.95(m,6h),1.69(s,3h),1.66(d,j＝0.4hz,1h),1.53—1.47(m,1h),1.37(d,j＝6.7hz,3h),1.34—1.25(m,13h),0.92(s,3h)。lc/ms:(es+)[m+h]+(1094,100％)。实例30：包含类美登素细胞毒性有效负载的缀合试剂77(比较物)的制备。步骤1：化合物78的合成。使用n2′-脱乙酰基-n2′-(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(可从bocsciences购得)代替化合物18，以与实例27的化合物71类似的方式合成化合物78。分离呈白色固体状的化合物78。1hnmr(500mhz；cdcl3):δ6.83(s,1h),6.69-6.67(m,1h),6.42(ddd,j＝14.9,11.3,3.4hz,1h),6.32(d,j＝6.4hz,1h),5.69-5.62(m,1h),4.92-4.86(m,1h),4.32(五重峰，j＝9.8hz,1h),3.99(s,3h),3.62(ddd,j＝20.7,13.1,7.4hz,1h),3.48(td,j＝10.4,4.2hz,1h),3.35(d,j＝2.8hz,3h),3.21(s,3h),3.17-3.12(m,1h),3.01-2.95(m,2h),2.91(dd,j＝13.8,8.8hz,2h),2.84(td,j＝14.1,6.7hz,2h),2.67-2.60(m,2h),2.55-2.36(m,4h),2.20(dd,j＝14.4,2.6hz,1h),1.95(td,j＝13.2,6.9hz,2h),1.81(dt,j＝20.0,5.7hz,2h),1.73(dd,j＝19.2,14.2hz,1h),1.65(s,3h),1.48-1.45(m,2h),1.39(dd,j＝12.6,6.9hz,2h),1.34(dd,j＝9.0,7.0hz,2h),1.32-1.25(m,12h),0.82(dd,j＝11.9,5.7hz,3h)。lc/ms:(es+)[m-h2o+h]+(880,100％),[m+h]+(898,15％),[m+na]+(920,60％)。步骤2：试剂77的合成。使用化合物78代替化合物26，以与实例12的试剂25类似的方式合成试剂77。分离呈白色固体状的试剂77。1hnmr(500mhz；cdcl3):δ6.86-6.83(m,1h),6.75(t,j＝8.8hz,1h),6.64(d,j＝4.8hz,1h),6.43(dd,j＝15.3,11.2hz,1h),6.20(s,1h),5.67(ddd,j＝15.0,9.4,5.2hz,1h),5.42(q,j＝6.7hz,1h),4.78(dd,j＝12.0,2.7hz,1h),4.27(t,j＝11.3hz,1h),3.98(s,3h),3.65(d,j＝12.7hz,1h),3.50(d,j＝9.0hz,1h),3.35(s,3h),3.22(s,3h),3.13(t,j＝10.2hz,1h),3.04(d,j＝9.7hz,1h),2.85(d,j＝3.4hz,9h),2.72(t,j＝6.9hz,2h),2.61(t,j＝13.2hz,1h),2.55-2.49(m,1h),2.46-2.35(m,1h),2.17(dd,j＝14.3,2.4hz,1h),2.04-1.83(m,4h),1.64(s,3h),1.57(d,j＝13.6hz,1h),1.51(s,2h),1.48-1.44(m,1h),1.30-1.23(m,14h),0.80(s,3h)。lc/ms:(es+)[m-h2o+h]+(977,100％),[m+h]+(995,15％),[m+na]+(1017,55％)。实例31：类美登素化合物79的制备。以与实例3的化合物4类似的方式制备化合物79，其以阻转异构体的混合物的形式合成。简单地说，将4-氨基-2-氯苯基硼酸频哪醇酯(66mg)、磷酸三钾(148mg)、sphospdg3(13.6mg)和ap3(100mg)依次添加到氩气吹扫的反应容器中。然后将容器密封并且用氩气吹扫固体(4×抽空/吹扫循环)。然后添加通过用氩气吹扫进行严格脱氧的thf(1.2ml)和水(120μl)，并且将反应混合物在室温下搅拌12小时。通过lc/ms分析粗反应混合物，鉴别出具有化合物79的预期分子质量的两个峰。在2.81和3.00分钟时分辨的两个峰对应于两种阻转异构体物质。此后，在2.81和3.00分钟时洗脱的阻转异构体将分别被称为化合物80和81。通过反相制备型hplc实现阻转异构体的分离。首先，将粗反应混合物用乙酸乙酯(40ml)稀释，并且然后用盐水(20ml)洗涤。分离有机层并且真空浓缩，并且将残余物溶于dmf(4ml)中。使用lunac18(2)柱(250mml×50mmid，5μm)通过反相制备型hplc分离阻转异构体80和81，用缓冲液a(v/v)：水:0.05％乙酸和缓冲液b(v/v)：乙腈:0.05％乙酸(90:10v/v到10:90v/v，35分钟，室温)洗脱。分离并且冻干对应于两种阻转异构体(如通过lc/ms确认)的级分，得到呈白色固体状的化合物80和81。然后通过正相色谱法进一步纯化各化合物，用二氯甲烷:丙酮(100:0v/v到50:50v/v)洗脱，得到呈白色固体状的化合物80(15mg)和化合物81(10mg)。正相纯化后化合物80和81的hplc色谱图表明，通过峰面积测量，两种化合物均达到>96％的纯度。通过将化合物80和81的dmso溶液在50℃下加热1小时来研究阻转异构体的稳定性。加热1小时后，通过hplc分析化合物，并且未从预热样品的hplc色谱图中观察到变化，表明两种阻转异构体都是稳定的并且在指定高温下不相互转化。化合物80的特征数据：1hnmr(500mhz；cdcl3)δ6.92(d,j＝8.2hz,1h),6.84(s,2h),6.73(d,j＝2.1hz,1h),6.57(dd,j＝8.2,2.2hz,1h),6.51—6.45(m,1h),6.21(s,1h),6.18—6.16(m,1h),5.47—5.42(m,1h),4.76—4.74(m,1h),4.30—4.25(m,1h),3.81(s,3h),3.55(d,j＝12.6hz,1h),3.51(d,j＝8.8hz,1h),3.36(s,3h),3.28(d,j＝12.6hz,1h),3.01(s,1h),2.94(s,3h),2.87(t,j＝13.3hz,1h),2.64—2.59(m,1h),2.19—2.15(m,1h),1.77(s,3h),1.66—1.63(m,1h),1.50—1.45(m,1h),1.29—1.24(m,6h),1.19(d,j＝6.7hz,3h),0.87(s,3h)。lc/ms：保留时间2.81分钟(acquityuplcbehc181.7μm，2.1×50mm柱，用水(0.05％乙酸):乙腈(0.05％乙酸)(95:5v/v到5:95v/v)洗脱，5分钟梯度，0.6ml/min，室温)，(es+)[m+h]+(726,100％)。化合物81的特征数据：1hnmr(500mhz；cdcl3)δ6.89(s,1h),6.84(s,1h),6.77(d,j＝2.1hz,1h),6.67(d,j＝8.2hz,1h),6.57(dd,j＝8.2,2.1hz,1h),6.51—6.46(m,1h),6.27(s,1h),6.19(d,j＝11.1hz,1h),5.47(dd,j＝15.3,9.0hz,1h),4.84—4.82(m,1h),4.32—4.27(m,1h),3.84(s,3h),3.58(d,j＝13.1hz,1h),3.52(d,j＝8.9hz,1h),3.37(s,3h),3.26(d,j＝13.1hz,1h),3.02—2.91(m,2h),2.72(s,3h),2.67—2.58(m,1h),2.23—2.21(m,1h),1.74(s,3h),1.68(d,j＝13.2hz,1h),1.53—1.47(m,2h),1.30(d,j＝6.3hz,3h),1.28—1.24(m,4h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),0.94(s,3h)。lc/ms：保留时间3.00分钟，(es+)[m+h]+(726,100％)。本发明包括式79化合物的各个阻转异构体。举例来说，其包括在以上实例31中所指示的条件下通过lc/ms分析时具有2.81分钟保留时间的阻转异构体，并且还包括当在以上实例31中所指示的条件下通过lc/ms分析时具有3.00分钟保留时间的阻转异构体。使用2dnmr(roesy)波谱学和分子模拟研究的组合，提出化合物80和81具有以下结构：实例32：化合物在sk-br-3细胞系中的体外效力测定。如实例2中所述，通过在增加浓度的本发明的化合物存在下培养sk-br-3细胞系，并且对增殖或代谢活性的丧失定量来测试在用本发明的化合物处理后肿瘤细胞存活率的损失。表6中展示本发明的化合物的平均ic50值，并且表7中指定测定浓度。表6化合物平均ic50(nm)sk-br-3细胞系97.4(n＝2)124.2(n＝2)155.4(n＝2)211.7(n＝2)234.2(n＝2)325.5(n＝2)5311.2(n＝2)542.9(n＝3)550.9(n＝3)5617.0(n＝2)573.6(n＝2)580.5(n＝3)593.9(n＝2)601.3(n＝3)616.0(n＝2)621.4(n＝3)632.8(n＝2)644.9(n＝3)803.6(n＝3)810.9(n＝3)31(比较物)33.4(n＝3)表7这些数据表明，含有联苯部分的本发明的化合物出乎意料地具有比含烯丙胺的比较物低的ic50值。实例33：试剂35、47、69和72与曲妥珠单抗缀合，以分别产生dar为4的抗体药物缀合物(adc)82、83、84和85。使用类似于在wo2014064423和wo2014064424中所描述方法的方法，将缀合试剂35、47、69和72与曲妥珠单抗缀合，产生adc82、83、84和85。简单地说，将曲妥珠单抗(5-7.4mg/ml，在ph7.5的20mm磷酸钠、150mmnacl、20mmedta中)在加热块中加热到40℃，持续15分钟。将5mmtcep溶液(每单抗6当量)添加到单抗溶液中，轻轻混合，并且在40℃下培育1小时，随后使其冷却到22℃。对于使用试剂35、47和69的缀合，然后用ph7.5的20mm磷酸钠、150mmnacl、20mmedta将还原单抗溶液稀释到4.4mg/ml。将缀合试剂35、47和69溶于dmf，得到1.5mm溶液。将缀合试剂(每单抗5.6当量)添加到单抗溶液中，得到4.0mg/ml的最终抗体浓度。对于使用试剂72的缀合，将试剂溶解在丙二醇:dmf(3:1v/v)中，得到0.75mm溶液。然后将试剂72(每单抗5.6当量)添加到还原单抗溶液中，得到4.0mg/ml的最终抗体浓度。然后将每种缀合反应溶液温和混合，并且在22℃下培育18-21小时。然后将粗反应溶液与等体积的ph7的50mm磷酸钠、4mnacl混合，并且将所得溶液上样到用ph7的50mm磷酸钠、2mnacl平衡的toyopearlierphenyl-650shic柱上。用ph7的50mm磷酸钠(20％异丙醇)的梯度从柱上洗脱每个adc。合并含有dar4adc的级分并且浓缩。将浓缩的样品缓冲液交换到ph7.1-7.5的pbs中，并且无菌过滤(0.22μmpvdf膜)。dar分配基于a248/a280吸收率。根据在280nm下的hic分析之后各个dar物质的相对峰面积来计算adc82、83、84和85的平均dar。实例34：将试剂41与贝伦妥单抗缀合以产生dar为4的抗体药物缀合物(adc)86。使用与实例33中所述方法类似的方法将缀合试剂41与贝伦妥单抗缀合，产生adc86。简单地说，将贝伦妥单抗(8.5mg/ml，在ph7.5的20mm磷酸钠、150mmnacl、20mmedta中)在加热块中加热15分钟到40℃。将tcep(每单抗6当量)添加到单抗溶液中，轻轻混合，并且在40℃下培育1小时，随后使其冷却到22℃。。将缀合试剂41溶解在dmf中，得到1.6mm溶液。用ph7.5的20mm磷酸钠、150mmnacl、20mmedta将还原单抗溶液稀释到6.7mg/ml，随后添加丙二醇，使得最终还原单抗溶液浓度为4.4mg/ml。将缀合试剂(每单抗6当量)添加单抗溶液中，得到4mg/ml的最终抗体浓度。轻轻混合反应溶液，并且在22℃下培育24小时。此后，在22℃下将反应溶液用50mmn-乙酰基-l-半胱氨酸(超过试剂20当量)处理30分钟。然后将粗反应溶液与等体积的ph7的50mm磷酸钠、4mnacl混合，并且将所得溶液上样到用ph7的50mm磷酸钠、2mnacl平衡的toyopearlierphenyl-650shic柱上。用ph7的50mm磷酸钠(20％异丙醇)的梯度从柱上洗脱adc。合并含有dar4adc的级分并且浓缩(vivaspin20，10kdapes膜)。将浓缩样品缓冲液交换到ph7.1-7.5的dpbs中，并且无菌过滤(0.22μmpvdf膜)。使用用ph6.7的10mm磷酸钠平衡的hydroxyapatiteforesightcht柱进一步纯化adc。用ph6.7的10mm磷酸钠、2mnacl的梯度从柱上洗脱adc。合并含有adc的级分并且浓缩(vivaspin20，30kdapes膜)，并且将浓缩样品缓冲液交换到ph7.1-7.5的dpbs中并且无菌过滤(0.22μmpvdf膜)。使用实例33中所描述的方法测定缀合物的dar。实例35：将试剂50与曲妥珠单抗缀合以产生抗体药物缀合物(adc)87。将缀合试剂50与曲妥珠单抗缀合，产生adc87。简单地说，将试剂50溶解在dmso中，得到10mm储备溶液。将ph7.0的100mmhepes缓冲液、1mmedta(5mg/ml单抗浓度)中的曲妥珠单抗用tcep(每单抗2.2当量)在37℃下还原2小时。使还原单抗溶液冷却到25℃，并且然后用dmso(10％v/v)稀释。然后将缀合试剂50(每单抗10当量)添加到还原单抗溶液中，并且轻轻混合反应混合物并且在25℃下培育30分钟。通过将反应溶液与n-乙酰基半胱氨酸(每单抗10当量)在25℃下一起培育30分钟来淬灭过量试剂50。然后将活性炭粉末(单抗的70％w/w)添加到反应溶液中，在室温下轻轻搅拌反应溶液30分钟以去除未反应药物相关物质。然后过滤反应混合物(0.22μmpes膜)，并且使用pd-10脱盐柱将纯化的样品缓冲液交换到ph5.5的10mm丁二酸、6％w/v海藻糖、0.01％v/vtween20中。使用实例33中所描述的方法将平均为4的dar分配给缀合物87。实例36：将试剂70、75和77(比较物)与曲妥珠单抗缀合以分别产生抗体药物缀合物(adc)88、89和90(比较物)。使用以下一般缀合方案，将缀合试剂70、75和77(比较物)缀合到曲妥珠单抗分别产生的adc88、89和90(比较物)。简单地说，将试剂溶解在dmf中，得到1.8-4.0mm储备溶液。向曲妥珠单抗在ph7.5的20mm磷酸钠、150mmnacl、20mmedta的溶液中添加试剂储备溶液(每单抗5-20当量，在整个培育期中作为单次添加或多个等分试样)，得到3.0-4.0mg/ml的最终抗体浓度(含有dmf10％v/v)。将反应溶液在22℃下培育1-4小时。通过使用hiload16/600superdex200pg柱进行制备型sec色谱法，并且使用pbs(15％异丙醇)作为洗脱剂进行等度洗脱来纯化adc88和89。使用用ph6.7的10mm磷酸钠平衡的foresightcht羟基磷灰石柱纯化adc90(比较物)，并且用ph6.7的10mm磷酸钠、2m氯化钠的梯度从柱上洗脱adc。在柱色谱法之后，合并所需含有adc的级分并且浓缩。将浓缩样品缓冲液交换到pbs中，并且无菌过滤。根据在质谱后各个dar物质的相对峰强度计算dar分配。计算出adc88、89和90(比较物)的平均dar分别为2.0、3.2和3.1。实例37：通过体外细胞存活率测定分析adc。如实例2中所述，通过在增加浓度的adc存在下培养细胞系，并且对增殖或代谢活性的丧失定量来测试在用并入本发明的类美登素的adc处理后肿瘤细胞存活率的损失。表8中展示并入本发明的类美登素的adc的平均ic50值，并且表9中指定测定浓度。表8化合物平均ic50(nm)290.05(n＝4)300.08(n＝2)820.18(n＝2)830.18(n＝3)840.14(n＝2)850.26(n＝2)860.11(n＝2)870.17(n＝2)880.08(n＝2)890.10(n＝2)表9获得的ic50值表明并入本发明的新颖类美登素的adc在体外具有强效细胞杀灭特性。实例38：化合物26和78(比较物)在小鼠血清中的稳定性。将化合物26和78(比较物)在50/50v/vdmf:缓冲溶液(ph7.5的20mm磷酸钠、150mm氯化钠、20mmedta)的混合物中的溶液(0.5mg/ml)在小鼠血清中稀释到0.05mg/ml(90％(v/v)血清含量)。紧接着将对应于'0'时间点的每个样品的等分试样在-80℃下冷冻，同时将其余样品在37℃下培育7天。在第4天和第7天后取出另外的等分试样并且在-80℃下冷冻。在分析之前，从冷冻器中取出样品，并且通过蛋白质沉淀从血清中提取类美登素相关物质。通过向每个时间点等分试样中添加乙腈(75％v/v)，并且在温和混合后，使混合物在4℃下静置2小时进行蛋白质沉淀。然后通过离心(1400×g，30分钟，4℃)分离沉淀的蛋白质，并且通过lc-轨道阱-ms分析含有提取的类美登素相关物质的上清液。反相轨道阱-ms分析。将样品进一步用水稀释，得到15％v/v乙腈溶液。然后将每种溶液的等分试样(2.5μl)注射到纳米液相色谱ms系统上，所述系统由在线偶联到使用锁定质量在75k分辨率下以es阳性模式操作的轨道阱-ms仪器的装有pepmapc18柱(0.075×150mm)的戴安(dionex)ultimate3000uplc组成。缓冲液a由100％水组成，并且缓冲液b由100％乙腈组成，其均含有0.1％甲酸，并且在60分钟内以0.3μl/min的流动速率进行15-80％b的梯度。通过使用thermoxcaliburqualbrowser软件工具分析潜在的降解产物，手动进行数据分析。图4a展示在37℃下在4天和7天后在小鼠血清中，化合物78(比较物)发生显著降解，其中峰对应于通过反相轨道阱-ms分析可检测的降解产物a和b。特别地，从第4天到第7天，降解产物b的量增加。相反，在图4b中，在培育7天后，没有观察到化合物26等效于a和b的降解产物(下文标为c和d)。这些数据与化合物26一致，其相对于化合物78(比较物)具有改进的稳定性。化合物78和片段a和b的结构如下所示。化合物26和片段c和d的结构如下所示。当前第1页12