本发明涉及提高glp-1肽的溶解度的方法。
背景技术：
：glp-1肽以具有生理活性并易于在ph7.4的水中溶解的第一物理构象以及具有极低或没有glp-1受体激动剂活性并基本不溶于ph7.4的水中的第二物理构象存在。不受任何理论约束，可以用glp-1肽中的α-螺旋二级结构转化为β-折叠二级结构来解释这种物理构象变化(例如，kim等人,journalofpharmaceuticalsciences,1994,83(8),1175-80)。当搅动包含水的glp-1溶液、使其暴露于疏水性表面或具有较大的空气/水界面时，可形成不溶解的和/或不溶性glp-1肽。已知glp-1肽由于处理的简单结果(例如在纯化过程中)而容易变为不溶解的和/或不溶性的(例如，senderoff等人,journalofpharmaceuticalsciences,1998,87(2),183-189)。另外，glp-1肽在其制备过程中可能会变成其不溶解的和/或不溶性形式。例如，混合操作或通过泵的连续移动是大规模制备过程中的常见操作，并且这些操作导致搅动、空气/水界面和/或与疏水性表面接触，从而产生glp-1肽的不溶解的和/或不溶性形式。glp-1肽的不溶解的和/或不溶性形式的存在极大地影响了活性glp-1肽的大规模生产。在大规模生产中，即使少量的不溶解的和/或不溶性glp-1肽也会降低生产的成本效率。据称，wo01/55213描述了在水溶液中使用碱性极强的ph以溶解不溶性glp-1肽。据称，wo2006/051110描述了在水溶液中使用碱性ph结合某些加热条件和孵育时间，以改善glp-1肽的物理稳定性等。仍然需要用于在溶液中提供glp-1肽的改进方法，例如，以便提供用于制备活性的可溶性glp-1肽及其稳定的药物产品的高产率方法，或者允许更简单的生产方法。这类改进的方法涉及将不溶解的和/或不溶性glp-1肽转化为活性的可溶性glp-1肽。技术实现要素：在一些实施方案中，本发明的方法包括在某些条件下，在包含水和一种或多种有机溶剂的溶液或悬浮液中将不溶解的和/或不溶性glp-1肽溶解为活性的可溶性glp-1肽。在一些实施方案中，本发明涉及包括以下步骤的方法：(a)获得包含不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽和有机溶剂乙腈或dmf的第一组合物，其中所述第一组合物为溶液或悬浮液的形式；以及(b)在2-85℃范围内的温度下孵育所述第一组合物，并且当所述有机溶剂为dmf时，所述孵育在以下条件下进行至少20分钟的时段：(i)ph小于5.0且所述dmf的浓度在5-28％(w/w)的范围内，或者(ii)ph在5.0-5.5的范围内且所述dmf的浓度在0-35％(w/w)的范围内；或者当所述有机溶剂为乙腈时，所述孵育在以下条件下进行至少2分钟的时段：(i)ph小于6.0且所述乙腈的浓度为至少30％(w/w)，(ii)ph小于3.5且所述乙腈的浓度为至少14％(w/w)，或者(iii)如果所述温度为至少50℃，则(1)ph在5.5-6.0的范围内且所述乙腈的浓度小于10％(w/w)，或(2)ph小于3.5。描述本发明人惊奇地发现，在某些条件下，可以在包含水和一种或多种有机溶剂的溶液中将不溶解的和/或不溶性glp-1肽溶解为活性的可溶性glp-1肽。在一些实施方案中，不溶解的和/或不溶性glp-1肽基本上是无活性的，例如，对人glp-1受体的ec50大于100nm，如大于500nm或大于1000nm。在一些实施方案中，本发明的方法包括以下步骤：(a)获得包含glp-1肽和一种或多种有机溶剂的组合物；以及(b)将所述溶液孵育某一时段，如至少5分钟的时段；其中所述组合物为溶液或悬浮液的形式。在一些实施方案中，本发明的方法包括以下步骤：(a)获得包含glp-1肽和一种或多种有机溶剂的组合物；以及(b)将所述溶液孵育如本文定义的时段；其中所述组合物为溶液或悬浮液的形式。一方面，本发明提供了(x)溶解的和/或可溶性glp-1肽的量增加，(y)glp-1肽在溶液中的储存稳定性改善，或(z)提供增加量的溶解glp-1肽的更简单方法。另一方面，本发明提供了(x)-(y)中的一项或多项的组合。“溶解的glp-1肽的量增加”可以被观察为不溶性glp-1肽的量减少以及基本上相等的可溶性glp-1肽的量增加。根据本发明的方法减少或去除不溶性glp-1肽可以在包含不溶性glp-1肽的溶液中进行，该溶液包括同时包含可溶性和不溶性glp-1肽的溶液。本发明还可以解决从示例性实施方案的公开内容中将会明显看出的其他问题。在一些实施方案中，本发明的方法增加了在包含水的溶液中溶解的和/或可溶性glp-1肽的量。在一些实施方案中，本发明的方法提供了在包含水，如至少60％(w/w)水的溶液中增加的溶解glp-1肽的量。在一些实施方案中，本发明的方法提供了glp-1肽在溶液中改善的储存稳定性，例如在5℃下储存1或2年之后或者在室温下储存两个月之后。在一些实施方案中，如本文所用的glp-1肽的储存稳定性是指glp-1肽作为中间产物一部分的储存稳定性。作为中间产物一部分的glp-1肽可以存在于制备药物产物的过程中，例如在纯化步骤之后。在一些实施方案中，如本文所用的glp-1肽的溶解性是指glp-1肽作为中间产物一部分的储存稳定性。中间产物一般可以在2个月内，如2周内或1周内使用。在一些实施方案中，室温为21-25℃，如23℃。在一些实施方案中，任选地如本文试验(i)所述，在3小时的孵育时段后，本发明的方法使溶液中增加至少0.5mg/ml的glp-1肽。在一些实施方案中，任选地如本文试验(i)所述，在3小时的孵育时段后，本发明的方法使溶解的glp-1肽的量增加至少0.5mg/ml。在一些实施方案中，如本文与包含有机溶剂的组合物(如溶液或悬浮液)关联使用的术语“ph”是指在没有有机溶剂的所述组合物溶液中，例如在添加有机溶剂之前测定的ph。在一些实施方案中，本发明的方法包括以下步骤：(a)获得包含glp-1肽和一种或多种有机溶剂的组合物；以及(b)将所述溶液孵育至少5分钟的时段；其中所述组合物为溶液或悬浮液的形式。在一些实施方案中，本发明的方法包括以下附加步骤：(c)降低从步骤(b)获得的组合物中所述有机溶剂的浓度，并任选地分离glp-1肽。在一些实施方案中，本发明方法的步骤(b)中的孵育在ph1-13范围内的ph下进行。在一些实施方案中，本发明方法的步骤(b)中的孵育在包含所述一种或多种有机溶剂的溶液的凝固点与沸点之间的温度下进行。在一些实施方案中，步骤(b)中所述孵育的温度高于经历所述孵育的溶液的凝固点且低于50℃。在一些实施方案中，步骤(b)中所述孵育的温度在50-85℃的范围内。在一些实施方案中，本发明方法的步骤(b)中的孵育进行5分钟至48小时的时段。在一些实施方案中，术语“*”是指乘号。在一些实施方案中，术语“一”表示“一个(种)或多个(种)”。在一些实施方案中，术语“约”是指所提及的值±10％。除非在本说明书中另有说明，否则以单数形式呈现的术语也包括复数情况。当在本文中与glp-1肽关联使用时，例如“不溶性glp-1肽”，术语“不溶性”或“基本上不可溶的”是指无活性并且在ph7.4的水中的溶解度小于0.5mg/ml，如小于0.1或0.01mg/ml的glp-1肽。类似地，当在本文中与glp-1肽关联使用时，例如“不溶解的glp-1肽”，术语“不溶解的”是指溶解度小于0.5mg/ml，如小于0.1或0.01mg/ml的glp-1肽；其中所述溶解度可以在任何ph，例如ph3-11范围内的ph的包含水和/或有机溶剂的溶液中。在一些实施方案中，当在本文中与glp-1肽关联使用时，例如“不溶解的glp-1肽”，术语“不溶解的”是指在ph7.4的水中的溶解度小于0.5mg/ml，如小于0.1或0.01mg/ml的glp-1肽。当在本文中与glp-1肽关联使用时，例如“溶解的glp-1肽”，术语“溶解的”是指在ph7.4的水中的溶解度至少为0.5mg/ml，如至少为0.7或1mg/ml的glp-1肽；其中所述溶解度可以在任何ph，例如ph3-11范围内的ph的包含水和/或有机溶剂的溶液中。在一些实施方案中，当在本文中与glp-1肽关联使用时，例如“溶解的glp-1肽”，术语“溶解的”是指在ph7.4的水中的溶解度至少为0.5mg/ml，如至少为0.7或1mg/ml的glp-1肽。类似地，当与glp-1肽关联使用时，例如“可溶性glp-1肽”，如本文所用的术语“可溶性”是指具有活性并且在ph7.4的水中的溶解度至少为0.5mg/ml，如至少为0.7或1.0mg/ml的glp-1肽。glp-1肽的溶解度可以使用本文所述的试验(ii)的方法来测定。当与glp-1肽关联使用时，例如“活性glp-1肽”，如本文所用的术语“活性的”是指具有以ec50低于10nm，如低于5nm、低于1nm或低于0.5nm表示的glp-1受体激动剂活性的glp-1肽。当与glp-1肽关联使用时，例如“无活性glp-1肽”，如本文所用的术语“无活性”是指具有以ec50高于20nm，如高于0.1μm、高于0.5μm或高于1μm表示的glp-1受体激动剂活性的glp-1肽。在一些实施方案中，glp-1肽的ec50使用本文所述的试验(ii)的方法来测定。术语“ec50”是指参照剂量响应曲线，诱导基线与最大值之间的一半的响应的浓度。换言之，可以将ec50视为代表观察到其最大作用的50％时的浓度。ec50值越低，glp-1肽的活性(也称为效力)越好。在一些实施方案中，glp-1肽的活性是指人glp-1受体的活化。可以在含有表达人glp-1受体的膜的培养基中，和/或在使用表达人glp-1受体的全细胞的试验中确定glp-1肽的活性。例如，可以用glp-1肽刺激来自表达人glp-1受体的稳定转染的细胞系的纯化质膜，并测量camp产生的效力，例如，基于内源形成的camp与外源添加的生物素标记的camp之间的竞争，其可以使用特异性抗体来捕获。另外，或备选地，可以在报告基因试验中，例如在稳定转染的bhk细胞系中测量人glp-1受体对glp-1肽的响应，该细胞系表达人glp-1受体并且含有与启动子偶联的camp响应元件(cre)dna以及萤火虫萤光素酶(cre萤光素酶)基因；当camp由于glp-1受体的激活而产生时，这进而导致萤光素酶得到表达；可通过添加萤光素来测定萤光素酶，该萤光素被该酶转化成氧化萤光素并产生生物发光，对该生物发光进行测量并将其作为体外效力的量度；这样的试验的一个非限制性实例在本文的试验(ii)中描述。有机溶剂在本发明的方法中使用的有机溶剂选自乙腈、dmf及其混合物。在一些实施方案中，该有机溶剂为乙腈。在一些实施方案中，该有机溶剂为dmf。如本文所用的，术语“dmf”可指二甲基甲酰胺。在一些实施方案中，有机溶剂的浓度在0.01％至80％(w/w)的范围内。在一些实施方案中，有机溶剂的浓度小于在室温下3小时内溶液中不超过0.5mg/ml的glp-1肽发生沉淀时的浓度。在一些实施方案中，该有机溶剂是浓度为至少1％(w/w)的苯酚。在一些实施方案中，术语“有机溶剂的浓度”是指在存在超过一种有机溶剂的情况下有机溶剂的总浓度。在一些实施方案中，术语“有机溶剂的浓度”是指在本发明的第一次孵育之前，例如在步骤(a)之后且步骤(b)之前测定的有机溶剂的浓度。终产物在一些实施方案中，从步骤(b)获得的组合物为溶液的形式。在一些实施方案中，从步骤(b)获得的组合物为悬浮液的形式。在一些实施方案中，例如通过过滤，将从本发明方法的步骤(b)获得的组合物中不溶解的glp-1肽从所述组合物中去除。在一些实施方案中，例如通过稀释、色谱法或uf/df过滤，降低从步骤(b)获得的组合物中有机溶剂的浓度。起始材料包含glp-1肽的组合物包含水，并且可以是溶液或悬浮液的形式。在一些实施方案中，包含glp-1肽的溶液或悬浮液可以由固体形式如沉淀物或粉末形式的glp-1肽制备，例如通过本文所述的试验(i)的方法2来制备。粉末可以通过从溶液或悬浮液中蒸发溶剂而形成，例如通过本文所述的试验(i)的方法1来制备。该悬浮液可包含固体形式的glp-1肽。在一些实施方案中，该悬浮液包含不溶性glp-1肽。包含glp-1肽的溶液或悬浮液可以通过向glp-1肽组合物添加溶剂如水和/或有机溶剂来制备。包含glp-1肽的溶液或悬浮液可以如本文实施例所述制备。具体方法步骤利拉鲁肽在一些实施方案中，本发明的方法包括根据方程式(eq.)1-92中的任一项，采用表1a、表1b和表2中定义的溶解度标准来孵育包含利拉鲁肽的组合物。这些方程式在本文中也可以简称为“如表1a、表1b和表2中定义的方程式”，或者参考具体的方程式，例如“方程式1”则参考这些表格中的eq.1。表1a.以下方程式的参数：y＝p1*x6+p2*x5+p3*x4+p4*x3+p5*x2+p6*x+p7，定义表2中所示的每种条件的可溶区域。e：乘以10的幂，例如“e-03”表示“*10-3”。表1b.以下方程式的参数：y＝p1*x6+p2*x5+p3*x4+p4*x3+p5*x2+p6*x+p7，定义表2中所示的每种条件的可溶区域。e：乘以10的幂，例如“e-03”表示“*10-3”。表2.处理条件以及表1a和表1b中的方程式所定义的可溶区域。pr：通过沉淀准备的板。ev：通过蒸发准备的板。rt：室温。改性剂：有机溶剂。org.：有机溶剂的浓度(％w/w)。isop：异丙醇。例如，“y<计算值”是指ph应小于根据表1a、表1b和表2中定义的方程式计算出的ph。在一些实施方案中，ph和有机溶剂的浓度如本文定义的方程式32、33、34所定义。在一些实施方案中，ph和有机溶剂的浓度如本文定义的方程式35、36、37所定义。在一些实施方案中，ph和有机溶剂的浓度如本文定义的方程式65、66、67所定义。在一些实施方案中，ph和有机溶剂的浓度如本文定义的方程式68、69或70所定义。在一些实施方案中，ph和有机溶剂的浓度如本文定义的方程式71、72或73所定义。在一些实施方案中，ph和有机溶剂的浓度如本文定义的方程式74、75或76所定义。在一些实施方案中，ph和有机溶剂的浓度如本文定义的方程式77、78或79所定义。在一些实施方案中，ph和有机溶剂的浓度如本文定义的方程式81、82或83所定义。在一些实施方案中，ph和有机溶剂的浓度如本文定义的方程式84、85、86或87所定义。在一些实施方案中，当所述有机溶剂为乙腈时，孵育步骤(b)在以下条件下进行：(i)ph小于6.0且所述乙腈的浓度为至少30％(w/w)；(ii)ph小于3.5且所述乙腈的浓度为至少14％(w/w)；或者(iii)如果所述温度为至少40℃，则(1)ph在5.5-6.0的范围内且所述乙腈的浓度小于10％(w/w)，或(2)ph小于3.5。在一些实施方案中，本发明涉及包括以下步骤的方法：(a)获得包含不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽和有机溶剂乙腈的第一组合物，其中所述第一组合物为溶液或悬浮液的形式；以及(b)将所述第一组合物在2-85℃范围内的温度下孵育至少2分钟的时段；并且所述孵育在以下条件下进行：(i)ph小于6.0且所述乙腈的浓度为至少30％(w/w)；(ii)ph小于3.5且所述乙腈的浓度为至少14％(w/w)；或者(iii)如果所述温度为至少40℃，则(1)ph在5.5-6.0的范围内且所述乙腈的浓度小于10％(w/w)，或(2)ph小于3.5。在步骤(b)(i)中，所述ph可以是至少3.5。在步骤(b)(i)中，所述乙腈的浓度可以在30-100％(w/w)的范围内或至少为40％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度可以是至少18％(w/w)或至少20％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度可以是至少30％(w/w)，如至少33％(w/w)或至少35％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度可以是至少44％(w/w)，如至少45％(w/w)或至少46％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度可以是至少55％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度可以是至多98％(w/w)，如至多95％(w/w)或至多90％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度可以是至多80％(w/w)，如至多70％(w/w)或至多60％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度可以是至多60％(w/w)，如至多40％(w/w)或至多22％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度可以是30-100％(w/w)或至少40％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，所述ph可以小于3.4、小于3.3或小于3.2。在步骤(b)(ii)中，所述ph可以是至少1.0、至少1.5或至少2.0。在步骤(b)(ii)中，所述ph可以是至少2.5或至少3.0。步骤(b)(i)中的所述孵育的温度可以选自2-40℃、40-85℃或10-50℃。在步骤(b)(i)中，所述温度可以在5-50℃的范围内或10-40℃的范围内。在步骤(b)(i)中，所述温度可以在15-30℃的范围内或21-25℃的范围内。在步骤(b)(i)中，所述时段可以在5分钟至2小时的范围内，如5-30分钟的范围内，或2-6小时的范围内。在步骤(b)(i)中，所述时段可以在1-48小时的范围内或8-40小时的范围内。在步骤(b)(i)中，所述时段可以在12-36小时的范围内或18-32小时的范围内。在步骤(b)(iii)(2)中，所述乙腈的浓度可以是0-20％(w/w)或至少28％(w/w)，如30-100％(w/w)。在步骤(b)(iii)(2)中，所述乙腈的浓度可以是至少40％(w/w)或至少42％(w/w)。在步骤(b)(iii)(2)中，所述乙腈的浓度可以是至少45％(w/w)或至少50％(w/w)。在步骤(b)(iii)(2)中，所述乙腈的浓度可以是1-18％(w/w)或2-16％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，所述温度可以在2-40℃的范围内，如至少5-30℃。在步骤(b)(ii)中，乙腈的所述浓度可以在15-100％(w/w)的范围内。在步骤(b)(ii)中，乙腈的所述浓度可以是至少15％(w/w)，如至少18％(w/w)或至少20％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，乙腈的所述浓度可以不高于99％(w/w)，如不高于98％(w/w)或不高于95％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，乙腈的所述浓度可以不高于55％(w/w)，如不高于40％(w/w)或不高于22％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，所述ph可以在1-3.5的范围内。在步骤(b)(ii)或步骤(b)(iii)(2)中，所述ph可以小于3.4或小于3.3。在步骤(b)(ii)或步骤(b)(iii)(2)中，所述ph可以小于3.2，如小于3.1或小于3.0。在步骤(b)(i)或步骤(b)(iii)，如步骤(b)(iii)(1)或步骤(b)(iii)(2)中，所述温度可以是至少40℃，如至少50℃或至少60℃。dmf在一些实施方案中，当所述有机溶剂为dmf时，孵育步骤(b)在以下条件下进行至少20分钟的时段：(i)ph小于5.0且所述dmf的浓度在5-28％(w/w)的范围内；或者(ii)ph在5.0-5.5的范围内且所述dmf的浓度在0-35％(w/w)的范围内。在一些实施方案中，本发明涉及包括以下步骤的方法：(a)获得包含不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽和有机溶剂dmf的第一组合物，其中所述第一组合物为溶液或悬浮液的形式；以及(b)将所述第一组合物在2-85℃范围内的温度下孵育至少20分钟的时段；并且所述孵育在以下条件下进行：(i)ph小于5.0且所述dmf的浓度在5-28％(w/w)的范围内；或者(ii)ph在5.0-5.5的范围内且所述dmf的浓度在0-35％(w/w)的范围内。在步骤(b)(i)中，所述ph可以小于4且任选地至少为1。在步骤(b)(i)中，所述ph可以小于3.8，如小于3.7或小于3.6。在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度可以在7-23％(w/w)的范围内或8-26％(w/w)的范围内。在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度可以在9-25％(w/w)的范围内或10-23％(w/w)的范围内。在步骤(b)(i)中，所述温度可以在5-50℃的范围内或10-40℃的范围内。在步骤(b)(i)中，所述温度可以在15-30℃的范围内或21-25℃的范围内。在步骤(b)(i)中，所述时段可以在1-48小时的范围内或8-40小时的范围内。在步骤(b)(i)中，所述时段可以在12-36小时的范围内或18-32小时的范围内。根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述有机溶剂可以是dmf，并且在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度可以在7-23％(w/w)的范围内。根据前述实施方案的方法，其中所述时段可以是至少1小时。根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述有机溶剂可以是dmf，并且在步骤(b)(i)中，a.所述ph可以小于3.8，b.所述dmf的浓度可以在9-25％(w/w)的范围内，并且c.所述时段可以是至少8小时。在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度可以是至少8％(w/w)或至少10％(w/w)。在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度可以是至多22％(w/w)、至多21％(w/w)或至多20％(w/w)。在步骤(b)(i)中，ph可以在1.0至小于5.0的范围内。在步骤(b)(ii)中，ph可以是至少2.0、至少2.5或至少3.0。在步骤(b)(ii)中，ph可以小于4.8或小于4.9。在步骤(b)(ii)中，ph可以在4.8-6.0的范围内。在步骤(b)(ii)中，ph可以是至少4.8或至少4.9。在步骤(b)(ii)中，ph可以是至多5.8、至多5.7或至多5.6。在步骤(b)(ii)中，ph可以是至多6.0或至多5.9。在步骤(b)(ii)中，所述dmf的浓度可以是至少1％(w/w)、至少2％(w/w)或至少3％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，所述dmf的浓度可以是至少1％(w/w)、至少4％(w/w)或至少5％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，所述dmf的浓度可以是至多37％(w/w)、至多32％(w/w)或至多30％(w/w)。在步骤(b)中，孵育时间可以短于8小时。在步骤(b)中，孵育时间可以短于6小时。在步骤(b)中，孵育时间可以短于5小时。在步骤(b)中，孵育时间可以在30min至短于8小时的范围内。在步骤(b)中，孵育时间可以是至少1小时。在步骤(b)中，孵育时间可以是至少1.5小时。在步骤(b)中，如果孵育时间可以是至少8小时，则孵育可以在以下条件下进行：(i)ph小于5.0且所述dmf的浓度在2-40％(w/w)的范围内；或者(ii)ph在5.0-6.0的范围内且所述dmf的浓度在0-40％(w/w)的范围内。在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度可以是至少3％(w/w)、至少4％(w/w)或至少5％(w/w)。在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度可以是至多35％(w/w)、至多30％(w/w)或至多28％(w/w)。在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度可以是至多27％(w/w)、至多26％(w/w)或至多25％(w/w)。在步骤(b)(i)中，所述ph可以小于4.5、小于4.4或小于4.3。在步骤(b)(i)中，所述ph可以小于4.2、小于4.1或小于4.0。在步骤(b)(i)中，所述ph可以小于3.9、小于3.8或小于3.7。在步骤(b)(i)中，所述ph可以是至少1.0、至少1.5或至少2.0。在步骤(b)(i)中，所述ph可以是至少2.5或至少3.0。在步骤(b)(ii)中，如果ph可以小于5.5，则所述dmf的浓度可以在0-20％(w/w)的范围内。在步骤(b)(ii)中，如果ph可以小于5.4或小于5.3，则所述dmf的浓度可以在0-20％(w/w)的范围内。在步骤(b)(ii)中，所述dmf的浓度可以是至多20％(w/w)或至多19％(w/w)。在步骤(b)(ii)中，所述dmf的浓度可以是至多18％(w/w)或至多17％(w/w)。在一些实施方案中，所述方法包括获得基本上不包含乙腈或dmf的组合物。glp-1肽如本文所用的术语“glp-1肽”是指包含肽的化合物，该化合物在有活性时会完全或部分激活人glp-1受体。在一些实施方案中，该glp-1肽是glp-1类似物，其任选地包含一个取代基。如本文关于glp-1肽(以下称为“肽”)使用的术语“类似物”是指这样的肽，其中该肽的至少一个氨基酸残基已经被另一个氨基酸残基置换，并且/或者其中至少一个氨基酸残基已从该肽中缺失，并且/或者其中至少一个氨基酸残基已被添加到该肽中，并且/或者其中该肽的至少一个氨基酸残基已被修饰。氨基酸残基的这种添加或缺失可以发生在该肽的n-端和/或该肽的c-端。在一些实施方案中，使用简单的命名法描述glp-1肽，例如，[aib8]glp-1(7-37)表示glp-1(7-37)的类似物，其中位置8的天然存在的ala已被aib置换。在一些实施方案中，与例如glp-1(7-37)相比，glp-1肽有最多十二个，如最多10个、8个或6个氨基酸已经例如通过置换、缺失、插入和/或修饰而改变。在一些实施方案中，与例如glp-1(7-37)相比，该类似物包含至多10个置换、缺失、添加和/或插入，如至多9个置换、缺失、添加和/或插入，至多8个置换、缺失、添加和/或插入，至多7个置换、缺失、添加和/或插入，至多6个置换、缺失、添加和/或插入，至多5个置换、缺失、添加和/或插入，至多4个置换、缺失、添加和/或插入，或至多3个置换、缺失、添加和/或插入。除非另有说明，否则所述glp-1仅包含l-氨基酸。在一些实施方案中，如本文所用的术语“glp-1类似物”或“glp-1的类似物”是指肽或化合物，其为人胰高血糖素样肽-1(glp-1(7-37))的变体。glp-1(7-37)具有序列haegtftsdvssylegqaakefiawlvkgrg(seqidno:1)。在一些实施方案中，术语“变体”是指包含一个或多个氨基酸置换、缺失、添加和/或插入的化合物。在一些实施方案中，所述glp-1肽在glp-1(7-37)的整个长度上表现出至少60％、65％、70％、80％或90％的与glp-1(7-37)的序列同一性。作为确定两种类似物之间序列同一性的方法的一个实例，比对[aib8]glp-1(7-37)和glp-1(7-37)这两种肽。[aib8]glp-1(7-37)相对于glp-1(7-37)的序列同一性通过将比对的同等残基数目减去不同残基的数目再除以glp-1(7-37)中的残基总数而得出。因此，在所述实例中，序列同一性为(31-1)/31。glp-1肽的浓度可采用任何合适的方法来确定。例如，可使用lc-ms(液相色谱质谱法)，或免疫测定如ria(放射免疫测定)、elisa(酶联免疫吸附测定)以及loci(发光氧通道免疫测定(luminescenceoxygenchannelingimmunoasssay))。用于合适的ria和elisa测定的一般方案可见于例如wo2009/030738的第116-118页。在一些实施方案中，所述glp-1肽是利拉鲁肽。利拉鲁肽是arg34,lys26-(n-ε-(γ-l-谷氨酰基(n-α-十六碳酰基)))-glp-1(7-37)，也称为n26-(十六碳酰基-γ-谷氨酰基)-[34-精氨酸]glp-1-(7-37)-肽(whodruginformationvol.17,no.2,2003)。利拉鲁肽可以如wo98/08871的实施例37所述制备。glp-1肽的生产过程是本领域公知的。例如，可以通过经典的肽合成，例如使用t-boc或fmoc化学法的固相肽合成或其他完善的技术，来生产glp-1肽(或其片段)的氨基酸序列，例如无分支的氨基酸序列，如arg34-glp-1(7-37)，参见，例如，greene和wuts,“protectivegroupsinorganicsynthesis”,johnwiley&sons,1999，florenciozaragoza“organicsynthesisonsolidphase”,wiley-vchverlaggmbh,2000，以及由w.c.chan和p.d.white编著的“fmocsolidphasepeptidesynthesis”,oxforduniversitypress,2000。另外，或备选地，其可以通过重组方法来生产，即通过培养含有编码无分支的氨基酸序列(肽)的dna序列并能够在允许该肽表达的条件下在合适的营养培养基中表达该肽的宿主细胞。适合表达这些肽的宿主细胞的非限制性实例是：大肠杆菌(escherichiacoli)、酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)以及哺乳动物bhk或cho细胞系。所述glp-1肽可以是药学上可接受的盐、酰胺或酯的形式。例如，通过碱与酸之间的化学反应来形成盐，例如：2nh3+h2so4→(nh4)2so4。该盐可以是碱式盐、酸式盐，或其可以两者都不是(即，中性盐)。在水中，碱式盐产生氢氧根离子而酸式盐产生水合氢离子。可通过分别在阴离子或阳离子基团之间添加阳离子或阴离子而形成glp-1肽的盐。这些基团可以位于肽部分中，和/或glp-1肽的侧链中。arg34-glp-1(7-37)可以被视为glp-1肽的肽部分。γ-l-谷氨酰基(n-α-十六碳酰基)可以被视为glp-1肽的侧链。glp-1肽的阴离子基团的非限制性实例包括在侧链中以及在肽部分中的游离羧基。glp-1肽的肽部分包括在c-端的游离羧酸基团，并且其还可包含在内部酸性氨基酸残基如asp和glu处的游离羧基。肽部分中的阳离子基团的非限制性实例包括在n-端的游离氨基，以及内部碱性氨基酸残基如his、arg和lys的任何游离氨基。glp-1肽的酯可通过游离羧酸基团与醇或酚的反应而形成，该反应导致至少一个羟基被烷氧基或芳氧基替代。酯形成可涉及在肽的c-端的游离羧基，和/或在侧链中的任何游离羧基。glp-1肽的酰胺可通过游离羧酸基团与胺或取代胺的反应，或通过游离或取代的氨基与羧酸的反应而形成。酰胺形成可涉及在肽的c-端的游离羧基、在侧链中的任何游离羧基、在肽的n-端的游离氨基，以及/或者在肽和/或侧链中的肽的任何游离或取代的氨基。在一些实施方案中，glp-1肽为药学上可接受的盐的形式。在一些实施方案中，glp-1肽为药学上可接受的酰胺的形式，优选地在该肽的c-端具有酰胺基团。在一些实施方案中，glp-1肽为药学上可接受的酯的形式。药物组合物从本发明的方法获得的产物可以是药物组合物或在药物组合物的制备中使用的中间组合物。该药物组合物可包含一种或多种药学上可接受的辅料。术语“辅料”宽泛地指除活性治疗成分外的任何组分。辅料可以是惰性物质、无活性物质和/或非医药活性物质。辅料可用于各种目的，例如作为载体、媒介物、稀释剂、片剂助剂和/或用来改善活性物质的给药和/或吸收。药学活性成分与各种辅料的配制是本领域已知的，参见例如remington:thescienceandpracticeofpharmacy(例如第19版(1995)和任何后续版本)。辅料的非限制性实例是：溶剂、稀释剂、缓冲液、防腐剂、张度调节剂、螯合剂和稳定剂。该药物组合物可具有在7.0-10.0，如7.4-9.0或7.8-8.4范围内的ph。在一些实施方案中，所述药物组合物的ph在8.0-8.3的范围内，例如8.15。在一些实施方案中，所述辅料是选自等渗剂(例如，丙二醇)、缓冲液(例如，磷酸盐缓冲液，如磷酸氢二钠二水合物)和防腐剂(例如，苯酚)的一种或多种。在一些实施方案中，本发明的方法提供稳定的药物组合物。当在本文中使用时，术语“稳定的药物组合物”是指包含glp-1肽的组合物，例如溶液或悬浮液，该组合物在储存后有至少90％(w/w)的所述glp-1肽保持溶解在所述组合物中。该稳定的药物组合物的储存条件可以是在5℃下1年或2年。或者，该储存的条件可以是在5℃下24小时或1周。在又一个替代方案中，该储存的条件可以是在室温下两个月。在所述稳定的药物组合物中保持溶解的glp-1肽的比例可以是至少95％(w/w)，如至少97％(w/w)或至少99％(w/w)。适应症通过本发明方法获得的药物组合物可以用于医学。本发明的药物组合物可以用于治疗和/或预防2型糖尿病或肥胖症。在一些实施方案中，本发明的药物组合物用于预防和/或治疗糖尿病并发症，如血管病；神经病，包括周围神经病；肾病；和/或视网膜病变。在一些实施方案中，本发明的药物组合物用于预防和/或治疗一种或多种心血管疾病。在一些实施方案中，本发明的药物组合物用于预防和/或治疗睡眠呼吸暂停。本发明的非限制性特定实施方案1.方法，其包括以下步骤：(a)获得包含不溶解的和/或不溶性glp-1肽和选自乙腈和dmf的一种或多种有机溶剂的第一组合物，其中所述第一组合物为溶液或悬浮液的形式；以及(b)将所述第一组合物(例如溶液)在2-85℃范围内的温度下孵育至少2分钟的时段；条件是如果glp-1肽为利拉鲁肽并且有机溶剂为苯酚，则所述有机溶剂的浓度为至少1％(w/w)；其中所述方法增加了溶解的和/或不溶性glp-1肽的量。2.方法，其包括以下步骤：(a)获得包含不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽和有机溶剂乙腈或dmf的第一组合物，其中所述第一组合物为溶液或悬浮液的形式；以及(b)在2-85℃范围内的温度下孵育所述第一组合物，并且当所述有机溶剂为dmf时，所述孵育在以下条件下进行至少20分钟的时段：(i)ph小于5.0且所述dmf的浓度在7-23％(w/w)的范围内，或者(ii)ph在5.0-5.5的范围内且所述dmf的浓度在0-35％(w/w)的范围内；或者当所述有机溶剂为乙腈时，所述孵育在以下条件下进行至少2分钟的时段：(i)ph小于6.0且所述乙腈的浓度为至少30％(w/w)，(ii)ph小于3.5且所述乙腈的浓度为至少14％(w/w)，或者(iii)如果所述温度为至少50℃，则(1)ph在5.5-6.0的范围内且所述乙腈的浓度小于10％(w/w)，或(2)ph小于3.5。3.方法，其包括以下步骤：(a)获得包含不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽和有机溶剂乙腈或dmf的第一组合物，其中所述第一组合物为溶液或悬浮液的形式；以及(b)在2-85℃范围内的温度下孵育所述第一组合物，并且当所述有机溶剂为dmf时，所述孵育在以下条件下进行至少20分钟的时段：(i)ph小于5.0且所述dmf的浓度在7-23％(w/w)的范围内，或者(ii)ph在5.0-5.5的范围内且所述dmf的浓度在0-35％(w/w)的范围内；或者当所述有机溶剂为乙腈时，所述孵育在以下条件下进行至少2分钟的时段：(i)ph小于6.0且所述乙腈的浓度为至少30％(w/w)，(ii)ph小于3.5且所述乙腈的浓度为至少14％(w/w)，或者(iii)如果所述温度为至少50℃，则(1)ph在5.5-6.0的范围内且所述乙腈的浓度小于10％(w/w)，或(2)ph小于3.5。4.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述有机溶剂为乙腈；并且所述孵育步骤(b)在以下条件下进行(i)ph小于6.0且所述乙腈的浓度为至少30％(w/w)；(ii)ph小于3.5且所述乙腈的浓度为至少14％(w/w)；或者(iii)如果所述温度为至少40℃，则(1)ph在5.5-6.0的范围内且所述乙腈的浓度小于10％(w/w)，或(2)ph小于3.5。5.方法，其包括以下步骤：(a)获得包含不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽和有机溶剂乙腈的第一组合物，其中所述第一组合物为溶液或悬浮液的形式；以及(b)将所述第一组合物在2-85℃范围内的温度下孵育至少2分钟的时段；并且所述孵育在以下条件下进行(i)ph小于6.0且所述乙腈的浓度为至少30％(w/w)；(ii)ph小于3.5且所述乙腈的浓度为至少14％(w/w)；或者(iii)如果所述温度为至少40℃，则(1)ph在5.5-6.0的范围内且所述乙腈的浓度小于10％(w/w)，或(2)ph小于3.5。6.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述ph为至少3.5。7.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述乙腈的浓度在30-100％(w/w)的范围内或至少为40％(w/w)。8.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度为至少18％(w/w)或至少20％(w/w)。9.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度为至少30％(w/w)，如至少33％(w/w)或至少35％(w/w)。10.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度为至少44％(w/w)，如至少45％(w/w)或至少46％(w/w)。11.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度为至少55％(w/w)。12.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度为至多98％(w/w)，如至多95％(w/w)或至多90％(w/w)。13.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度为至多80％(w/w)，如至多70％(w/w)或至多60％(w/w)。14.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度为至多60％(w/w)，如至多40％(w/w)或至多22％(w/w)。15.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述乙腈的浓度为30-100％(w/w)或至少40％(w/w)。16.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述ph小于3.4、小于3.3或小于3.2。17.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述ph为至少1.0、至少1.5或至少2.0。18.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述ph为至少2.5或至少3.0。19.根据前述实施方案中任一项的方法，其中步骤(b)(i)中的所述孵育的温度选自2-40℃、40-85℃或10-50℃。20.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述温度在5-50℃的范围内或在10-40℃的范围内。21.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述温度在15-30℃的范围内或在21-25℃的范围内。22.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述时段在5分钟至2小时的范围内，如在5-30分钟的范围内，或在2-6小时的范围内。23.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述时段在1-48小时的范围内或在8-40小时的范围内。24.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述时段在12-36小时的范围内或在18-32小时的范围内。25.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(iii)(2)中，所述乙腈的浓度为0-20％(w/w)或至少28％(w/w)，如30-100％(w/w)。26.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(iii)(2)中，所述乙腈的浓度为至少40％(w/w)或至少42％(w/w)。27.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(iii)(2)中，所述乙腈的浓度为至少45％(w/w)或至少50％(w/w)。28.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(iii)(2)中，所述乙腈的浓度为1-18％(w/w)或2-16％(w/w)。29.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述温度在2-40℃的范围内，如至少5-30℃。30.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，乙腈的所述浓度在15-100％(w/w)的范围内。31.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，乙腈的所述浓度为至少15％(w/w)，如至少18％(w/w)或至少20％(w/w)。32.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，乙腈的所述浓度不高于99％(w/w)，如不高于98％(w/w)或不高于95％(w/w)。33.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，乙腈的所述浓度不高于55％(w/w)，如不高于40％(w/w)或不高于22％(w/w)。34.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述ph在1-3.5的范围内。35.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)或步骤(b)(iii)(2)中，所述ph小于3.4或小于3.3。36.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)或步骤(b)(iii)(2)中，所述ph小于3.2，如小于3.1或小于3.0。37.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)或步骤(b)(iii)，如步骤(b)(iii)(1)或步骤(b)(iii)(2)中，所述温度为至少40℃，如至少50℃或至少60℃。38.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述ph和所述有机溶剂的浓度如本文所定义的方程式32、33、34所定义。39.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述ph和所述有机溶剂的浓度如本文所定义的方程式35、36、37所定义。40.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述ph和所述有机溶剂的浓度如本文所定义的方程式65、66、67所定义。41.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述ph和所述有机溶剂的浓度如本文所定义的方程式68、69或70所定义。42.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述ph和所述有机溶剂的浓度如本文所定义的方程式71、72或73所定义。43.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述ph和所述有机溶剂的浓度如本文所定义的方程式74、75或76所定义。44.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述ph和所述有机溶剂的浓度如本文所定义的方程式77、78或79所定义。45.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述ph和所述有机溶剂的浓度如本文所定义的方程式80、81、82或83所定义。46.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述有机溶剂为dmf；并且所述孵育步骤(b)在以下条件下进行至少20分钟的时段(i)ph小于5.0且所述dmf的浓度在5-28％(w/w)的范围内；或者(ii)ph在5.0-5.5的范围内且所述dmf的浓度在0-35％(w/w)的范围内。47.方法，其包括以下步骤：(a)获得包含不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽和有机溶剂dmf的第一组合物，其中所述第一组合物为溶液或悬浮液的形式；以及(b)将所述第一组合物在2-85℃范围内的温度下孵育至少20分钟的时段；并且所述孵育在以下条件下进行(i)ph小于5.0且所述dmf的浓度在5-28％(w/w)的范围内；或者(ii)ph在5.0-5.5的范围内且所述dmf的浓度在0-35％(w/w)的范围内。48.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述ph小于4且任选地至少为1。49.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述ph小于3.8，如小于3.7或小于3.6。50.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度在7-23％(w/w)的范围内或8-26％(w/w)的范围内。51.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度在9-25％(w/w)的范围内或10-23％(w/w)的范围内。52.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述温度在5-50℃的范围内或在10-40℃的范围内。53.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述温度在15-30℃的范围内或在21-25℃的范围内。54.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述时段在1-48小时的范围内或在8-40小时的范围内。55.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述时段在12-36小时的范围内或在18-32小时的范围内。56.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述有机溶剂为dmf，并且在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度在7-23％(w/w)的范围内。57.根据前述实施方案的方法，其中所述时段为至少1小时。58.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述有机溶剂为dmf，并且在步骤(b)(i)中，a.所述ph小于3.8，b.所述dmf的浓度在9-25％(w/w)的范围内，并且c.所述时段为至少8小时。59.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度为至少8％(w/w)或至少10％(w/w)。60.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度为至多22％(w/w)、至多21％(w/w)或至多20％(w/w)。61.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述ph在1.0至小于5.0的范围内。62.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述ph为至少2.0、至少2.5或至少3.0。63.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述ph小于4.8或小于4.9。64.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述ph在4.8-6.0的范围内。65.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述ph为至少4.8或至少4.9。66.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述ph为至多5.8、至多5.7或至多5.6。67.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述ph为至多6.0或至多5.9。68.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述dmf的浓度为至少1％(w/w)、至少2％(w/w)或至少3％(w/w)。69.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述dmf的浓度为至少1％(w/w)、至少4％(w/w)或至少5％(w/w)。70.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述dmf的浓度为至多37％(w/w)、至多32％(w/w)或至多30％(w/w)。71.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述ph和所述有机溶剂的浓度如本文所定义的方程式84、85、86或87所定义。72.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述孵育时间短于8小时。73.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述孵育时间短于6小时。74.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述孵育时间短于5小时。75.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述孵育时间在30分钟至短于8小时的范围内。76.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述孵育时间为至少1小时。77.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述孵育时间为至少1.5小时。78.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中，如果所述孵育时间为至少8小时，则所述孵育在以下条件下进行(i)ph小于5.0且所述dmf的浓度在2-40％(w/w)的范围内；或者(ii)ph在5.0-6.0的范围内且所述dmf的浓度在0-40％(w/w)的范围内。79.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度为至少3％(w/w)、至少4％(w/w)或至少5％(w/w)。80.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度为至多35％(w/w)、至多30％(w/w)或至多28％(w/w)。81.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述dmf的浓度为至多27％(w/w)、至多26％(w/w)或至多25％(w/w)。82.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述ph小于4.5、小于4.4或小于4.3。83.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述ph小于4.2、小于4.1或小于4.0。84.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述ph小于3.9、小于3.8或小于3.7。85.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述ph为至少1.0、至少1.5或至少2.0。86.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)中，所述ph为至少2.5或至少3.0。87.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，如果ph小于5.5，则所述dmf的浓度在0-20％(w/w)的范围内。88.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，如果ph小于5.4或小于5.3，则所述dmf的浓度在0-20％(w/w)的范围内。89.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述dmf的浓度为至多20％(w/w)或至多19％(w/w)。90.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(ii)中，所述dmf的浓度为至多18％(w/w)或至多17％(w/w)。91.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述孵育时间为至少12小时、至少16小时或至少20小时。92.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述孵育时间在8至48小时的范围内。93.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述孵育时间短于36小时或短于28小时。94.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述ph小于5.0。95.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述ph小于4.5或小于4.0。96.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述ph小于3.5或小于3.0。97.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述ph为至少1.0。98.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述温度为10-50℃。99.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述温度为15-40℃。100.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述温度为20-30℃或21-25℃。101.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述温度为10-50℃。102.方法，其包括以下步骤：(a)获得包含不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽和dmf的第一组合物，其中所述第一组合物为溶液或悬浮液的形式；以及(b)在低于50℃的温度下将所述溶液孵育至少5分钟的时段；并且(i)如果孵育温度为至少15℃，则所述孵育在(1)ph6.5以上进行，或者(2)如果孵育进行超过4小时，则其中与所述溶液的ph(ph)有关的所述有机溶剂的浓度在c(有机溶剂)至80％(w/w)的范围内，其中c(有机溶剂)≥-13.3*ph+123；或者(ii)如果孵育温度低于15℃，则所述孵育在ph7.0以上进行，条件是如果孵育时间短于30分钟，则所述有机溶剂的浓度小于25％(w/w)；前提是如果所述有机溶剂为苯酚，则所述有机溶剂的浓度为至少1％(w/w)；其中所述方法提高溶解的利拉鲁肽的量。103.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)(i)(2)中，与所述溶液的ph(ph)有关的所述有机溶剂的浓度在c(有机溶剂)至80％(w/w)的范围内，其中c(有机溶剂)≥-40*ph+310。104.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(i)(2)中，与所述溶液的ph(ph)有关的所述有机溶剂的浓度在c(有机溶剂)至80％(w/w)的范围内，其中c(有机溶剂)≥-40*ph+310。105.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(ii)中，所述有机溶剂的浓度小于23％(w/w)，如小于22％(w/w)或小于21％(w/w)。106.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(ii)中，所述有机溶剂的浓度小于20％(w/w)，如小于19％(w/w)或小于18％(w/w)。107.根据前述实施方案中任一项的方法，其中步骤(b)的所述ph在6.5-12.5或7.0-12.5的范围内。108.根据前述实施方案中任一项的方法，其中步骤(b)的所述ph为至少6.7，如至少6.8、至少6.9或至少7.0。109.根据前述实施方案中任一项的方法，其中步骤(b)的所述温度在2℃-50℃，如4℃-40℃或5℃-30℃的范围内。110.根据实施方案7的方法，其中步骤(b)的所述温度小于40℃，如小于40℃、小于30℃或小于25℃。111.根据前述实施方案中任一项的方法，其中步骤(b)的所述温度为至少4℃，如至少10℃、至少15℃或至少20℃。112.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法包括以下附加步骤：(c)降低经历步骤(b)的第一组合物中所述有机溶剂的浓度，并任选地分离利拉鲁肽。113.根据前述权利要求中任一项的方法，其中任选地如本文试验(i)所述，所述方法在3小时的孵育时段后导致溶解的glp-1肽如利拉鲁肽增加至少0.5mg/ml。114.根据前述权利要求中任一项的方法，其中步骤(a)的所述第一组合物由(i)沉淀粉末形式的利拉鲁肽或(ii)在悬浮液或溶液中不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽制备。115.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中步骤(a)的第一组合物的ph在ph1-13的范围内。116.根据前述权利要求中任一项的方法，其中步骤(b)中所述孵育的温度为(a)包含所述一种或多种有机溶剂的所述第一组合物的凝固点与沸点之间的温度，(b)高于经历所述孵育的溶液的凝固点且低于50℃，或(c)在50-85℃的范围内。117.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述有机溶剂选自乙醇、2-丙醇、乙腈、苯酚和dmso。118.根据前述权利要求中任一项的方法，其中步骤(a)的第一组合物中所述有机溶剂的浓度在0.01％至80％(w/w)的范围内。119.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述第一组合物为溶液或悬浮液的形式。120.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(a)之前，所述不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽存在于初始组合物中，并且所述初始组合物包含至少0.1％(w/w)的不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽。121.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(a)之前，所述不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽存在于初始组合物中，并且所述初始组合物包含至少1％(w/w)或至少5％(w/w)的不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽。122.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(a)之前，所述不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽存在于初始组合物中，并且所述初始组合物包含至少10％(w/w)或至少50％(w/w)的不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽。123.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述孵育如本文表1和表2的方程式所定义。124.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述方法在步骤(b)之后包括另一步骤(c)，所述步骤(c)以任意顺序包括选自下组的一项或多项：(1)降低所述有机溶剂的浓度，(2)中和ph，(3)降低温度，(4)降低所述有机溶剂的浓度，和(5)任选地分离利拉鲁肽。125.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)之后，所述方法以任意顺序包括使用从步骤(b)获得的组合物的一个或多个以下附加步骤：(c1)降低来自步骤(b)的所述组合物中所述有机溶剂的浓度，(c2)中和来自步骤(b)的所述组合物的ph，(c3)降低来自步骤(b)的所述组合物的温度，和(c4)分离利拉鲁肽。126.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)之后，所述方法包括以下附加步骤：(c)降低从步骤(b)获得的组合物中所述有机溶剂的浓度，并任选地分离利拉鲁肽。127.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述中和为中和至7.0-10.0范围内的ph。128.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述中和为中和至7.4-9.0或7.8-8.4范围内的ph。129.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述降低温度为降低至2-40℃，如4-35℃或5-30℃范围内的温度。130.根据前述实施方案中任一项的方法，其中从步骤(b)获得的组合物被称为第二组合物。131.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述方法增加溶解的glp-1肽如利拉鲁肽的量。132.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述方法导致溶解的glp-1肽增加至少10％(w/w)，如至少20％(w/w)或至少30％(w/w)。133.根据前述实施方案中任一项的方法，其中任选地如本文试验(i)所述测定的，所述方法在3小时的孵育时段后导致溶解的glp-1肽如利拉鲁肽增加至少0.2mg/ml。134.根据前述实施方案中任一项的方法，其中任选地如本文试验(i)所述测定的，所述方法在3小时的孵育时段后导致溶解的glp-1肽如利拉鲁肽增加0.2-1.0mg/ml。135.根据前述实施方案中任一项的方法，其中任选地如本文试验(i)所述测定的，所述方法在3小时的孵育时段后导致溶解的glp-1肽如利拉鲁肽增加至少0.3mg/ml。136.根据前述实施方案中任一项的方法，其中任选地如本文试验(i)所述测定的，所述方法在3小时的孵育时段后导致溶解的glp-1肽如利拉鲁肽增加至少0.4mg/ml。137.根据前述实施方案中任一项的方法，其中任选地如本文试验(i)所述测定的，所述方法在3小时的孵育时段后导致溶解的glp-1肽如利拉鲁肽增加至少0.5mg/ml。138.根据前述实施方案中任一项的方法，其中任选地如本文试验(i)所述测定的，所述方法在3小时的孵育时段后导致溶解的glp-1肽如利拉鲁肽增加至少0.6mg/ml。139.根据前述实施方案中任一项的方法，其中任选地如本文试验(i)所述测定的，所述方法在3小时的孵育时段后导致溶解的glp-1肽如利拉鲁肽增加至少0.7mg/ml。140.根据前述实施方案中任一项的方法，其中任选地如本文试验(i)所述测定的，所述方法在3小时的孵育时段后导致溶解的glp-1肽如利拉鲁肽增加至少0.8mg/ml。141.根据前述实施方案中任一项的方法，其中任选地如本文试验(i)所述，所述方法在3小时的孵育时段后导致溶解的glp-1肽如利拉鲁肽增加至少0.5mg/ml。142.根据前述实施方案中任一项的方法，其中溶解的glp-1肽的浓度如本文试验(i)所述测定，并且任选地在3小时的孵育时段之后测定。143.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述glp-1肽是利拉鲁肽。144.根据前述实施方案中任一项的方法，其中步骤(a)的所述组合物由(i)沉淀物形式、(ii)粉末形式或(iii)在悬浮液或溶液中不溶解的和/或不溶性形式的利拉鲁肽制备。145.根据前述实施方案中任一项的方法，其中步骤(a)的所述组合物由包含在悬浮液或溶液中不溶解的和/或不溶性利拉鲁肽的初始组合物制备。146.根据前述实施方案中任一项的方法，其中步骤(a)的所述组合物由包含在悬浮液或溶液中不溶解的利拉鲁肽的初始组合物制备。147.根据前述实施方案中任一项的方法，其中步骤(a)的所述组合物由包含在悬浮液或溶液中不溶性的利拉鲁肽的初始组合物制备。148.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述第一组合物为悬浮液的形式。149.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述第一组合物为溶液的形式。150.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中经历所述孵育的组合物的ph在ph1-13的范围内。151.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中经历所述孵育的溶液的ph在ph1-13的范围内。152.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在步骤(b)中经历所述孵育的组合物的ph在ph3-11的范围内。153.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述孵育在包含所述一种或多种有机溶剂的溶液的凝固点与沸点之间的温度下进行。154.根据前述实施方案中任一项的方法，其中步骤(b)中所述孵育的温度高于经历所述孵育的溶液的凝固点且低于50℃。155.根据前述实施方案中任一项的方法，其中步骤(b)中所述孵育的温度选自2-40℃、40-85℃或10-50℃。156.根据前述实施方案中任一项的方法，其中步骤(b)中所述孵育的温度在50-85℃的范围内。157.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述提高利拉鲁肽在溶液中的储存稳定性是指在5℃下储存1或2年后，至少90％(w/w)的所述利拉鲁肽保持溶解状态。158.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述提高利拉鲁肽在溶液中的储存稳定性是指在室温下储存两个月后，至少90％(w/w)的所述利拉鲁肽保持溶解状态。159.根据前述实施方案中任一项的方法，其中所述提高利拉鲁肽在溶液中的储存稳定性是指在5℃下储存24小时或1周后，至少90％(w/w)的所述利拉鲁肽保持溶解状态。160.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在储存后，至少95％(w/w)的所述利拉鲁肽保持溶解状态。161.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在储存后，至少97％(w/w)的所述利拉鲁肽保持溶解状态。162.根据前述实施方案中任一项的方法，其中在储存后，至少99％(w/w)的所述利拉鲁肽保持溶解状态。163.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法包括获得基本上不包含乙腈或dmf的组合物的步骤。164.稳定的药物组合物，其包含通过如前述实施方案中任一项所定义的方法获得的glp-1肽，并且所述药物组合物进一步包含一种或多种药学上可接受的辅料。实施例缩写列表caps：n-环己基-3-氨基丙磺酸dmso：二甲基亚砜etoh：乙醇hepes：2-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸mecn：乙腈mes：2-(n-吗啉代)乙磺酸isop：异丙醇通用方法试验(i)：溶解度的测定96孔板准备以两种方式之一准备含有固体形式的目标肽的96孔板：方法1(蒸发)：将浓度为4-6mg/ml的所述肽的100μl储备溶液添加到96孔半面积板(150μl孔大小)的每个孔中。随后通过施加真空蒸发溶剂，直到溶剂被完全除去。方法2(沉淀)：向96孔半面积板的每个孔中添加一定体积的所述肽的储备溶液，随后添加一定体积的浓磷酸以获得ph4.6，然后添加一定体积的乙醇，使最终乙醇浓度为20％v/v。随后，将板在4℃下保存1h，然后以4,000rpm离心20min。最后，除去上清液。选择储备溶液的浓度，以使去除上清液后肽的最终量>0.4mg/孔。在这两种情况下，通过将去离子水添加到一定量的所述肽的粉末，随后逐步添加少量浓氢氧化钠溶液直至所述肽完全溶解来制备所述储备溶液。溶解度测量为了确定目标肽在不同ph和有机溶剂浓度下的溶解度，在独立实验中使用两种不同的缓冲液体系，以覆盖ph3.0至ph11.0的全范围。缓冲液体系1覆盖ph3.0-7.5，而缓冲液体系2覆盖ph7.5-11.0。对于每种缓冲液体系，按以下方式预混合96种不同的溶剂组合物：1.将低ph缓冲液(调节至ph3.0或ph7.5)和高ph缓冲液(调节至ph7.5或ph11.0)以8种不同的比例混合，分别获得ph3.0至ph7.5或ph7.5至ph11.0的值。混合后的总体积为300μl。2.然后将12种不同量的有机溶剂加入到这些缓冲液中，以获得0至70％w/w的有机溶剂(例如乙醇)浓度。3.然后加水，以在每个孔中获得1.0g溶剂的总重量。在制备96种不同的溶剂体系后，将每种体系100μl转移至含有固体形式目标肽的96孔板(如“96孔板准备”一节中所述进行准备)。然后将该板在设定为400rpm的旋转摇床上在给定温度(5℃至70℃之间)下储存给定时间。以规律的时间间隔将板离心(4,000rpm，10min)，并从每个孔中取10μl样品。然后通过280nm处的uv吸收来分析样品，以进行肽定量。肽浓度结果以样品在280nm处的uv吸收减去包含10μl水的孔在280nm处的uv吸收而给出。使用的缓冲液如下：缓冲液体系1(对于ph3.0–7.5的ph范围)组分浓度[mm]甲酸91乙酸60mes88hepes94缓冲液体系2(对于ph7.5–11.0的ph范围)组分浓度[mm]hepes121组氨酸85caps128试验(ii)：glp-1肽的体外效力(cre萤光素酶；全细胞)本实施例的目的在于检测glp-1肽的体外活性，也称为效力。体外效力是在全细胞试验中人glp-1受体激活的量度。原理：通过在报告基因试验中测量人glp-1受体的应答来确定体外效力。在表达人glp-1受体并含有与启动子偶联的camp响应元件(cre)dna以及萤火虫萤光素酶(cre萤光素酶)基因的稳定转染的bhk细胞系中进行该试验。当人glp-1受体被激活时，其导致camp的产生，这进而导致萤光素酶蛋白质得到表达。当试验孵育完成时，添加萤光素酶底物(萤光素)，并且该酶将萤光素转化成氧化萤光素从而产生生物发光。测量该发光作为该试验的读出。细胞培养和制备：该试验中使用的细胞(例如，克隆fcw467-12a/kz10-1)是以bhkts13作为亲本细胞系的bhk细胞。该细胞来源于表达人glp-1受体的克隆(fcw467-12a)，并且是通过用cre萤光素酶进一步转染而建立的，从而获得本克隆。将细胞在细胞培养基中在5％co2下培养。将细胞等分并储存在液氮中。在每次测定前取出等份，并在pbs中洗涤两次，之后以所需浓度悬浮在试验特定的缓冲液中。对于96孔板，形成悬浮液以得到5x103个细胞/孔的终浓度。材料：在该试验中可以使用以下化学品：pluronicf-68(10％)(gibco2404)、卵白蛋白(sigmaa5503)、不含酚红的dmem(gibco11880-028)、1mhepes(gibco15630)、glutamax100x(gibco35050)和steadyliteplus(perkinelmer6016757)。缓冲液：细胞培养基由含有10％fbs(胎牛血清；invitrogen16140-071)、1mg/mlg418(invitrogen15140-122)、240nmmtx(氨甲蝶呤；sigmam9929)和1％pen/strep(青霉素/链霉素；invitrogen15140-122)的dmem培养基组成。测定介质由不含酚红的dmem、10mmhepes和1×glutamax组成。测定缓冲液由在测定介质中的2％卵白蛋白和0.2％pluronicf-68组成。程序：1)将细胞储备液在37℃水浴中融化。2)将细胞在pbs中洗涤三次。3)对细胞进行计数并在测定介质中调节至5x103个细胞/50μl(1x105个细胞/ml)；将50μl等份的细胞转移至测定板的每个孔中。4)将测试化合物(和参考化合物，如果有的话)的储备液在测定缓冲液中稀释至0.2μm的浓度；将化合物按10倍稀释以得到以下浓度：2x10-7m、2x10-8m、2x10-9m、2x10-10m、2x10-11m、2x10-12m、2x10-13m和2x10-14m。5)将50μl等份的化合物或空白从稀释板转移至测定板；在下列终浓度下检测化合物：1x10-7m、1x10-8m、1x10-9m、1x10-10m、1x10-11m、1x10-12m、1x10-13m和1x10-14m。6)将测定板在5％co2培养箱中于37℃孵育3h。7)将测定板从培养箱中取出并使其在室温下静置15min。8)向测定板的每个孔中添加100μl等份的steadyliteplus试剂(试剂对光敏感)。9)将每个测定板用铝箔覆盖以避光，并在室温下振摇30min。10)在读板仪器，例如packardtopcountnxt中读取每个测定板。计算与结果：将来自读板仪器的数据传输至软件(例如graphpadprism)，该软件执行非线性回归(log(激动剂)相对于响应)，并计算可以以pm为单位报告的ec50值。对每个样品最少测量两个重复品。所报告的值是重复测量的平均值。实施例1：利拉鲁肽的溶解度使用本文所述的试验(i)来测定利拉鲁肽的溶解度。如“96孔板准备”小节所述，使用方法1(蒸发)或方法2(沉淀)准备利拉鲁肽。结果以及所用的具体参数在表3a和表3b中示出。表3a.使用方法2(沉淀)的处理条件，以及在特定孵育时间的glp-1肽浓度形式的结果。conc.：浓度。temp.：温度。n.d.：未测定。表3b.使用方法1(蒸发)的处理条件，以及在特定孵育时间的glp-1肽浓度形式的结果。conc.：浓度。temp.：温度。n.d.：未测定。表3a和表3b中的结果表明，在某些条件下，有机溶剂的存在增加了溶解的glp-1肽的量。如本文所用的术语“有机溶剂”或“改性剂”是指有机溶剂。虽然本文已经阐述并描述了本发明的某些特征，但是本领域普通技术人员现在将会想到许多修改、替换、改变和等同方案。因此，应当理解，意欲以所附权利要求书涵盖所有这些落入本发明真正范围内的修改和改变。当前第1页12