本发明涉及乳腺癌病的生物防治技术领域，具体为一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽。
背景技术：
目前，乳腺癌的治疗包括五大块：分别是手术治疗、化疗、内分泌治疗、放疗和分子靶向治疗。分子生物学的发展和对发病机制从细胞、分子水平的深入认识，使得肿瘤治疗进入了一个新的分子靶向治疗的时代。与化疗、放疗相比，分子靶向治疗高效、选择性地杀伤肿瘤细胞，使得治疗更有针对性且副作用小。
目前，靶向递送siRNA到特定的细胞在药物研发领域有很大的潜力，siRNA不仅可以作为一个研究工具来抑制靶基因的表达，同时也可作为一种治疗方法治疗各种疾病。然而将siRNA靶向递送至乳腺癌细胞非常麻烦，现有的物质在靶向递送siRNA时，往往容易对正常细胞造成破坏，影响该技术的实用性，为此，我们设计了一种靶向肽。
技术实现要素：
（一）解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽，解决了现有的靶向递送siRNA不方便和容易对正常细胞造成破坏的问题。
（二）技术方案
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽，包括多肽1，所述多肽1的序列为：
H-Ile-Phe-D-Trp-Leu-Leu-Trp-Gln-Gly-Arg-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-OH。
一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽检测方法，包括以下步骤：
1）乳腺癌细胞培养：选取乳腺癌细胞MDA-MB-231，并将乳腺癌细胞MDA-MB-231采用DMEM培养基培养，培上述养基中依次添加10%胎牛血清、100单位/毫升青霉素和100g/mL的链霉素，制备乳腺癌细胞培养溶液，控制温度为37℃，将上述溶液放置在浓度为5%的二氧化碳培养箱中培养24-72小时。
2）多肽1/siRNA结合能力测试：用不同浓度比的多肽1分别与siRNA进行凝胶阻滞分析测试，制备复合物，并且用肝素（去聚阴离子复合物稳定剂）作用于上述复合物，观察结果，并进行记录。
3）多肽1/siRNA复合物稳定性试验：取步骤2）中制备的多肽1/siRNA复合物，将上述复合物内添加RNA核酸酶，并将上述复合物与RNA核酸酶形成的混合物放置在小鼠血清孵育环境下，对多肽1/siRNA复合物在RNA核酸酶和小鼠血清孵育环境下的稳定性进行检测，同时用肝素释放siRNA后用凝胶阻滞分析测试siRNA的稳定性，对测试结果进行记录。
4）乳腺癌细胞凋亡实验研究：通过Westernblo检测用多肽1/siRNA复合物转染后凋亡指标bax的条带变化，并与对照组进行比较，观察多肽1/siRNA复合物的优劣势，进行记录。
5）乳腺癌细胞特异性基因体外沉默实验：通过Westernblot检测用多肽1/siRNA复合物转染后TRPC1的条带变化，并与对照组进行比较，观察多肽1/siRNA复合物的优劣势，进行记录。
6）统计学处理：将上述步骤2）、3）、4）和5）中记录的数据均以平均值±标准误差表示并运用SigmaPlot12.5软件进行非配对t检验，P<0.05时认为两组之间的差异具有统计学意义。
（三）有益效果
与现有技术相比，本发明提供了一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽，具备的有益效果：该靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽，利用多肽1包裹siRNA形成纳米粒子来靶向递送siRNA到乳腺癌细胞，纳米粒子不仅能够通过乳腺癌细胞表面受体靶向递送siRNA，并且对正常细胞损坏小，提高了多肽1的实用性，同时利用多肽1靶向递送TRPC1 siRNA引起乳腺癌细胞的凋亡，从而达到治疗乳腺癌的效果。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供如下技术方案：一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽，包括多肽1，所述多肽1的序列为：
H-Ile-Phe-D-Trp-Leu-Leu-Trp-Gln-Gly-Arg-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-OH。
一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽检测方法，包括以下步骤：
1）乳腺癌细胞培养：选取乳腺癌细胞MDA-MB-231，并将乳腺癌细胞MDA-MB-231采用DMEM培养基培养，培上述养基中依次添加10%胎牛血清、100单位/毫升青霉素和100g/mL的链霉素，制备乳腺癌细胞培养溶液，控制温度为37℃，将上述溶液放置在浓度为5%的二氧化碳培养箱中培养24-72小时。
2）多肽1/siRNA结合能力测试：用不同浓度比的多肽1分别与siRNA进行凝胶阻滞分析测试，制备复合物，并且用肝素（去聚阴离子复合物稳定剂）作用于上述复合物，观察结果，并进行记录，当多肽1与siRNA比例大于100:1时，多肽1和siRNA结合能力逐渐增强。
3）多肽1/siRNA复合物稳定性试验：取步骤2）中制备的多肽1/siRNA复合物，将上述复合物内添加RNA核酸酶，并将上述复合物与RNA核酸酶形成的混合物放置在小鼠血清孵育环境下，对多肽1/siRNA复合物在RNA核酸酶和小鼠血清孵育环境下的稳定性进行检测，同时用肝素释放siRNA后用凝胶阻滞分析测试siRNA的稳定性，对测试结果进行记录，在含有核酸酶的溶液中多肽1/siRNA复合物较裸露siRNA的稳定性明显提高，在小鼠血清中多肽1/siRNA复合物较裸露siRNA的稳定性明显提高。
4）乳腺癌细胞凋亡实验研究：通过Westernblo检测用多肽1/siRNA复合物转染后凋亡指标bax的条带变化，并与对照组进行比较，观察多肽1/siRNA复合物的优劣势，进行记录。
5）乳腺癌细胞特异性基因体外沉默实验：通过Westernblot检测用多肽1/siRNA复合物转染后TRPC1的条带变化，并与对照组进行比较，观察多肽1/siRNA复合物的优劣势，进行记录，多肽1/TRPC1 siRNA复合物较正常组有促凋亡的趋势，多肽1/TRPC1 siRNA复合物较正常组有促进TRPC1下调的趋势。
6）统计学处理：将上述步骤2）、3）、4）和5）中记录的数据均以平均值±标准误差表示并运用SigmaPlot12.5软件进行非配对t检验，P<0.05时认为两组之间的差异具有统计学意义，同时上述结果验验证了多肽1导入TRPC1 siRNA的可行性，为siRNA治疗乳腺癌提供潜在新的理论依据和方法。
本发明的有益效果是：利用多肽1包裹siRNA形成纳米粒子来靶向递送siRNA到乳腺癌细胞，纳米粒子不仅能够通过乳腺癌细胞表面受体靶向递送siRNA，并且对正常细胞损坏小，提高了多肽1的实用性，同时利用多肽1靶向递送TRPC1 siRNA引起乳腺癌细胞的凋亡，从而达到治疗乳腺癌的效果，解决了现有的靶向递送siRNA不方便和容易对正常细胞造成破坏的问题。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。