一种具有抑制脲酶活性的萘普生铜配合物及其制备方法与流程

本发明涉及一种具有抑制脲酶活性的萘普生铜配合物及其制备方法和用途，属于配合物合成及药物化学技术领域。

背景技术：

萘普生是一类非甾体抗炎药，可通过抑制前列腺素的合成而发挥抗炎、解热、镇痛作用，副作用表现在胃肠不良反应，如胃溃疡、结肠病变等。

幽门螺旋杆菌是一种革兰氏阴性杆菌，它能在胃的强酸性环境下生存，除了利用它的螺旋状结构，钻透胃黏膜表面的黏液，寄生在黏液中靠近胃黏膜上皮的相对中性的环境中之外，还得益于它本身含有的高活性脲酶。脲酶是水解尿素的一种酶，它可以分解食物中的尿素产生氨，在菌体周围形成保护层与胃酸隔绝，同时中和胃酸，形成碱性微环境。

综上原因，从而为胃炎、胃溃疡、胃癌等疾病埋下了隐患。因此，对传统的非甾体抗炎药进行改造，开发高效、副作用低且能够抑制脲酶的抗炎类药物具有非常重要的现实意义。

脲酶对金属离子非常敏感，同时，很多金属配合物具有很好的抗菌、抗肿瘤、抗炎、抗氧化等活性。因此，以具有生物活性的小分子与金属离子反应合成非甾体抗炎药的配合物，是降低药物副作用、提高药物活性的有效手段。

技术实现要素：

本发明目的在于提供一种具有抑制脲酶活性的萘普生铜配合物及其制备方法和用途。

本发明以非甾体抗炎药萘普生为配体，以含n小分子1，3-丙二胺为第二配体，与铜离子反应制备配合物并培养其单晶。通过x射线衍射仪对单晶结构进行表征，并测试了萘普生及其配合物的抑制脲酶活性。萘普生没有抑制脲酶活性，本发明的配合物表现出很好的抑制脲酶活性，是一种抑制脲酶效果好的抗炎类药物，也可以作为脲酶抑制剂使用。

本发明技术方案如下：

步骤1.分别用乙醇乙腈混合溶液配置0.1mmol/ml的萘普生溶液和硝酸铜溶液，称量0.5mmol的1，3-丙二胺液体。

步骤2.准确称量一定体积的萘普生溶液和一定体积的硝酸铜溶液，在烧杯中室温混合搅拌30分钟，之后，往烧杯中缓慢滴加一定体积的1，3-丙二胺液体，于室温混合搅拌3小时。

步骤3.过滤反应液至5ml小瓶。瓶口覆盖封口膜，封口膜用针扎孔，室温静置缓慢挥发，数天后有晶体析出。

步骤4.将小瓶溶液过滤，得蓝色块状晶体，用母液冲洗，至真空干燥箱干燥。

步骤5.所得晶体用单晶x衍射仪进行结构测试，用脲酶酚红法测试其抑制脲酶活性。

附图说明

【图1】是本发明实施所述配合物的x-衍射单晶结构图。

具体实施方式

通过以下实施案例详细说明本发明，但本发明的范围并不受这些实施例的任何限制。

实施例：

萘普生溶液(0.1mmol/ml)的配置：准确称量萘普生0.23g(1mmol)溶于10ml乙醇乙腈混合溶液(乙醇∶乙腈＝1∶1)。

硝酸铜溶液(0.1mmol/ml)的配置：准确称量硝酸铜[cu(no3)2·6h2o]0.1208g(0.5mmol)溶于5ml乙醇乙腈混合溶液(乙醇∶乙腈＝3∶2)。

1，3-丙二胺的称量：准确称量1，3-丙二胺41.67μl(0.5mmol)。

准确称量萘普生溶液(0.1mmol/ml)10ml和硝酸铜溶液(0.1mmol/ml)5ml于烧杯中，室温混合搅拌30分钟，再滴加1，3-丙二胺液体(0.5mmol)41.67μl，室温混合搅拌3小时。过滤反应液，用封口膜封口，用针扎孔，待室温静置缓慢挥发，数天后有蓝色块状晶体析出，溶液过滤，所得晶体用母液冲洗，置真空干燥箱干燥得到配合物单晶。经x-射线衍射进行结构测试，晶体结构图如附图1所示，晶体数据见表1，分子式为c31h38cun2o7。

经测试，配合物是一个单核结构，每个配合物分子含有2个萘普生分子、1个铜离子、一个1，3-丙二胺分子和一个水分子。

表1本发明所述配合物主要晶体结构数据

实施例：萘普生铜配合物抑制脲酶活性测试

(1)药品溶液的配制：称量一定量的本发明配合物，用10ml二甲基亚砜溶解，配置200μmol/l的药液。将配好的药液(200μmol/l)倍比稀释得到200、100、50、25、12.5、6.25μmol/l浓度的药液。

阳性对照药采用乙酰氧肟酸(n-羟基乙酰胺，cas：546-88-3)，配置方法同上，配置浓度梯度为：200、100、50、25、12.5、6.25μmol/l浓度的药液。

(2)缓冲溶液的配制：ph6.8的磷酸缓冲液100ml：0.2mol/l磷酸二氢钠51ml，0.2mol/l磷酸氢二钠49ml，500mmol/l尿素，0.002g/100ml酚红。

ph7.7的磷酸缓冲液100ml：0.2mol/l磷酸二氢钠10.5ml，0.2mol/l磷酸氢二钠89.5ml，0.002g/100ml酚红，0.45μm的滤膜过滤。

(3)配浓度为(40ku/l)的脲酶溶液：根据脲酶活力单位数，称取一定量的脲酶，溶解于去离子水中，得到40ku/l的脲酶溶液。

(4)ph7.7的缓冲液od值测定：96孔板中加ph7.7的磷酸缓冲液200μl，设3个重复，测od值，平均值记为od7.7。

(5)空白对照测试：96孔板中加入25μl脲酶溶液(40ku/l)、25μl配制上述(1)药液所用溶剂，每种药物浓度设3组重复，放入37℃恒温培养箱中培养一个小时。一小时后取出，再加入ph6.8的磷酸缓冲液200μl，开始计时，并每隔1分钟测试其od值，随着时间的延长，缓冲液中尿素被脲酶分解产氨，体系ph值升高，在酚红指示剂的作用下，od值上升。记录od值达到上述(4)od7.7所用的时间，记为t空白。

(6)样品测试：96孔板中加入25μl脲酶溶液(40ku/l)、25μl各种浓度药液，每种药物浓度设3个重复，放入37℃恒温培养箱中培养一个小时。一小时后取出，再加入ph6.8的磷酸缓冲液200μl，开始计时，并每隔1分钟测试其od值，记录od值达到od7.7所用的时间，记为t样品。

(7)数据计算：抑制率＝(t样品-t空白)/t样品，用origin或spss软件计算ic50。实验时抑制率应超过50％，保证量-效曲线跨越足够的范围，不可外推计算ic50值。

本发明所述配合物抑制脲酶的ic50值为1.69μmol/l，即当萘普生cu配合物浓度为1.69μmol/l时对脲酶活性的抑制率达到50％。阳性对照药乙酰氧肟酸的ic50值为6.26μmol/l。由此说明，本发明所述配合物的抑制脲酶效果比阳性对照药乙酰氧肟酸要好，是一种具有抑制脲酶活性的抗炎类药物，也可以作为脲酶抑制剂开发使用。