一种新型人源诱导型神经干细胞的制备方法及其应用与流程

技术特征：

1.一种新型人源诱导型神经干细胞的制备方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：

S1、人多能干细胞传代培养；

S2、移出S1的培养基并更换为无血清神经诱导培养基，然后在无血清神经诱导培养基中利用人多能干细胞定向诱导培养神经干细胞；

S3、在神经干细胞扩增培养基中扩增培养S2中获得的神经干细胞。

2.根据权利要求1所述的一种新型人源诱导型神经干细胞的制备方法，其特征在于，S1的具体方法为：

(1)使用1μg/mL的层粘蛋白Laminin包被T25培养瓶，铺板后置于37℃恒温箱中孵育至少1小时；

(2)人诱导多能干细胞在TeSRTM-e8培养基中培养，使用0.05％trypsin/EDTA，在37度孵育5分钟进行消化；

(3)将步骤(2)中消化完成后的人诱导多能干细胞重悬于TeSRTM-e8培养基中，按照2x10⁶每板的细胞数量接种于事前备好的LamininT25培养瓶中培养12小时。

3.根据权利要求1所述的一种新型人源诱导型神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述S2中神经诱导培养基培养液成分包括N2B27基础培养基和神经诱导化合物，所述神经诱导化合物包括PD98059和JW55，PD98059在神经诱导培养基培养液中的终浓度为8μM，JW55在神经诱导培养基培养液中的终浓度为5μM。

4.根据权利要求1所述的一种新型人源诱导型神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述S2中神经干细胞诱导培养条件为37℃，5％二氧化碳。

5.根据权利要求1所述的一种新型人源诱导型神经干细胞的制备方法，其特征在于，S2中神经干细胞定向诱导培养时每两天更换新的无血清神经诱导培养基，培养18-21天。

6.根据权利要求1所述的一种新型人源诱导型神经干细胞的制备方法，其特征在于，S2中人多能干细胞定向诱导培养成神经干细胞完成后，将神经干细胞移出并用DPBS进行洗涤，然后用0.05％trypsin/EDTA在37℃处理5分钟，使用DMEM终止细胞消化，最后细胞洗涤离心后按照1:6的比例重新接种于T25培养瓶中待扩增培养。

7.根据权利要求1所述的一种新型人源诱导型神经干细胞的制备方法，其特征在于，S3中神经干细胞扩增培养基培养液成分包括N2B27基础培养基和生长因子，所述生长因子为植物源重组人碱性生长因子OsrbFGF，所述植物源重组人碱性生长因子OsrbFGF在培养液中的终浓度为10-25ng/ml。

8.根据权利要求1所述的一种新型人源诱导型神经干细胞的制备方法，其特征在于，所述S3中神经干细胞扩增培养条件为37℃，5％二氧化碳。

9.如权利要求1-8中任一项所述的制备方法制备的新型人源诱导型神经干细胞。

10.如权利要求9中所述的一种新型人源诱导型神经干细胞的应用，其特征在于，所述新型人源诱导型神经干细胞应用于制备治疗神经退行性疾病的药物。