技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种双苯并咪唑类化合物的化学合成方法。
背景技术：
银屑病（Psoriasis）是一类伴有角化细胞异常增殖等特征的鳞屑丘疹性皮肤病，是一种慢性、易复发的自身免疫性疾病，其确切病因和发病机制尚不清楚。该病在寒冷地区患病率较热带地区高，北欧白种人比亚洲黄种人患病率高。挪威的患病率为1. 4%，男女患病率接近。丹麦的患病率高达2. 9%，西班牙为1.17～1. 43%。英国为1. 5%～2. 8%。中国、日本等亚洲国家银屑病的患病率相对较低。我国于1984 年的流行病学调查显示患病率为0. 123%。北方城市患病率为，南方城市为0. 153%，北方农村0. 176%，南方农村0. 078%（张建中.银屑病的流行病学与危险因素.实用医院临床杂志，2013,10（1）:4-6）。
研究认为，银屑病是在多基因遗传下，固有免疫系统和适应性免疫系统相互作用的结果。银屑病发病涉及Ｔ细胞、树突状细胞、角质形成细胞、肥大细胞及巨噬细胞功能的改变。这些细胞及相关细胞因子、趋化因子相互作用介导了银屑病相关的表皮增殖、角化不全、棘层肥厚等外在症状。。近年来，银屑病新药研发的主要靶点是维生素D 受体激动剂、细胞色素P26 酶抑制剂、p38α 促细胞分裂原活化蛋白激酶抑制剂、蛋白激酶C抑制剂、肿瘤坏死因子α抑制剂、磷酸二酯酶4抑制剂、Janus激酶抑制剂、白介素及其受体抑制剂、角质形成细胞抑制剂、鞘氨醇-1-磷酸受体拮抗剂等（陈明，钟杰敏，刘冠萍，等.中国医院药学杂志，2015,35（9）：846-849.）。
苯并咪唑是在多数药物中均存在一类化学结构，是一种重要的药物中间体。抗菌剂如多菌灵和菌灵；抗寄生虫药如阿苯达唑；抑制胃酸分泌药物如奥美拉唑；抗动脉粥样硬化药物如BMS-212122；抗癌药物如PPTMB（何迎盈.苯并咪唑类药物抗肿瘤研究进展.重庆医学 , 2011 , 40 (27) :2796-2798）等均含有苯并咪唑结构，但其作用靶点和构效关系存在显著差异。
在银屑病小分子治疗药物方面，利阿唑具有苯并咪唑结构，另外具有一个单独的苯环和咪唑环，他拉罗唑和R116010具有苯并噻唑结构，其抗银屑病效果优于利阿唑。利阿唑、他拉罗唑、R116010的结构式如下：
由上述结构可见，利阿唑、他拉罗唑、R11601均具有一个苯并氮唑结构，在苯并氮唑结构的一端连接有一个苯环和一个五元杂环，其中且苯环和五元杂环本身即呈分支状排列，或苯环和五元杂虽为线型排列但中间加入了较大的烷基取代基；利阿唑、他拉罗唑、R11601均非线型结构，而是呈较大的分支结构。这些相似的结构特征往往是基于构效关系设计的结果。如根据小分子与靶点酶受体结合口袋的结构分析等。其中他拉罗唑、R11601对银屑病的治疗效果优于利阿唑。
虽然目前已有一些治疗银屑病的药物进入临床应用，但其治疗效果仍然有限。仍需要研发新的、疗效更好的银屑病治疗药物。
技术实现要素：
针对现有的存在的上述问题，本发明的目的之一是提供一种新型的双苯并咪唑类化合物。为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种双苯并咪唑类化合物，具有如下通式所示的结构：
其中X为只含一个氮原子的氨基取代基，X通过氮原子与苯并咪唑的苯环碳原子共价连接；R为甲基。
优选的，所述X为烷基氨基、二烷基氨基或吡咯烷基中的一种。
优选的，所述X为异丙基氨基、二乙基氨基、3-甲基吡咯烷基中的一种。
优选的，所述X为异丙基氨基。
优选的，所述X为二乙基氨基。
优选的，所述X为3-甲基吡咯烷基。
本发明的另一方面提供了上述双苯并咪唑类化合物在制备银屑病治疗药物中的用途。
本发明的又一方面提供了上述双苯并咪唑类化合物的化学合成方法，包括如下步骤：
第一步，化合物1在路易斯酸的作用下与化合物2发生傅-克烷基化反应得化合物3；
第二步，化合物3在路易斯酸的作用下与化合物4发生傅-克烷基化反应得化合物5；
第三步，化合物5在Pd/C的催化作用下加氢发生还原反应得化合物6；
第四步，化合物6通过重氮化反应、桑德麦尔反应得化合物7；
第五步，化合物7在碱的作用下与胺通过霍夫曼烷基化反应得目标产物8。
优选的，上述第一步、第二步反应中所述路易斯酸为ZnCl2、AlCl3、FeCl3、SnCl4、NbCl5中的任一种；第四步反应中所述桑德麦尔反应的亚铜盐为CuBr、CuCl中的任一种；第五步反应中，所述霍夫曼烷基化反应所用碱为NaOH、Na2CO3、NaHCO3、KOH、K2CO3、KHCO3、CsOH中的任一种；第五步反应中，所述胺为异丙胺、二乙基胺、3-甲基吡咯烷中的一种。
当X为异丙基氨基时所述的双苯并咪唑类化合物的化学合成方法包括如下步骤：
第一步，三氯化铝溶于硝基苯，在0oC下加入化合物2，搅拌；将化合物1溶于硝基苯，在搅拌的情况下加入到上述溶液中，反应在100oC下搅拌过夜；反应完成后，在0oC下以NaOH溶液中和；二氯甲烷萃取，收集有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥；过滤，滤液减压蒸馏得到粗品；粗品经硅胶过滤、乙酸乙酯中重结晶得化合物3。
第二步，三氯化铝溶于硝基苯，在0oC下加入化合物3，搅拌；将化合物4溶于硝基苯，在搅拌的情况下加入到上述反应液中，反应在120oC下搅拌过夜；反应完成后，在0oC下以NaOH溶液中和；二氯甲烷萃取，收集有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥；过滤，滤液减压蒸馏得到粗品；粗品经柱层析纯化得到化合物5。
第三步，化合物5溶于无水乙醇，加入5% Pd/C，室温下H2加压反应过夜；反应停止后，硅藻土除去Pd/C，收集滤液，减压除去溶剂得到粗品；粗品经柱层析纯化得到化合物6。
第四步，化合物6溶于盐酸溶液，冰水浴降温至-5oC，亚硝酸钠溶于水中，缓慢滴加到上述溶液中，搅拌，形成反应液1；溴化亚铜、浓盐酸以及二氯甲烷混合，降温至10~15℃，形成反应液2；将反应液1缓慢滴加至反应液2中，10~15℃搅拌4小时；反应完毕后，二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥；过滤，滤液减压蒸馏得到粗品，粗品经重结晶得到化合物7。
第五步，碳酸钾溶于DMF中，加入异丙胺，剧烈搅拌；化合物7溶于DMF中，在氮气保护的条件下逐滴加入上述溶液，加料完毕后，加热回流4小时；反应停止后，反应液冷却至室温后加入 4%的氢氧化钠溶液及乙酸乙酯，萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥；过滤，滤液减压蒸馏除去得到粗品；粗品经柱层析纯化得到化合物8。
当X为3-甲基吡咯烷基时，所述的双苯并咪唑类化合物的化学合成方法包括如下步骤：
第一步，三氯化铝溶于硝基苯，在0oC下加入化合物2，搅拌；将化合物1溶于硝基苯，在搅拌的情况下加入到上述溶液中，反应在100oC下搅拌过夜；反应完成后，在0oC下以NaOH溶液中和；二氯甲烷萃取，收集有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥；过滤，滤液减压蒸馏得到粗品；粗品经硅胶过滤、乙酸乙酯中重结晶得化合物3。
第二步，三氯化铝溶于硝基，在0oC下加入化合物3，搅拌；将化合物4溶于硝基苯，在搅拌的情况下加入到上述反应液中，反应在120oC下搅拌过夜；反应完成后，在0oC下以NaOH溶液中和；二氯甲烷萃取，收集有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥；过滤，滤液减压蒸馏得到粗品；粗品经柱层析纯化得到化合物5。
第三步，化合物5溶于无水乙醇，加入5% Pd/C，室温下H2加压反应过夜；反应停止后，硅藻土除去Pd/C，收集滤液，减压除去溶剂得到粗品；粗品经柱层析纯化得到化合物6。
第四步，化合物6溶于盐酸溶液，冰水浴降温至-5oC，亚硝酸钠溶于水中，缓慢滴加到上述溶液中，搅拌，形成反应液1；溴化亚铜、浓盐酸以及二氯甲烷混合，降温至10~15℃，形成反应液2；将反应液1缓慢滴加至反应液2中，10~15℃搅拌4小时；反应完毕后，二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥；过滤，滤液减压蒸馏得到粗品，粗品经重结晶得到化合物7。
第五步，氢氧化钾溶于DMF中，加入3-甲基吡咯烷，剧烈搅拌。化合物7溶于DMF中，在氮气保护的条件下逐滴加入上述溶液，加料完毕后，加热回流过夜。反应停止后，反应液冷却至室温后加入 4%的氢氧化钠溶液及乙酸乙酯，萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥。过滤，滤液减压蒸馏除去得到粗品。粗品经柱层析纯化得到化合物8。
本发明技术方案所述的本发明技术方案所述的DMF为二甲基甲酰胺，是化学合成常用的试剂。
相对于现有技术，本发明首次设计并合成了新型的双苯并咪唑类化合物，并首次发现了所述双苯并咪唑类化合物对银屑病的治疗活性。所发明的双苯并咪唑类化合物的合成方法起始原料廉价易得，合成步骤简洁，合成条件温和，合成过程易于控制，产率高，适于工业化生产。
具体实施方式
以下将结合具体实施例详细的解释本发明，该实施例仅对于本发明的技术方案进行解释说明，本发明不限于以下实施例。
实施例1 2-（4-甲氧基苯基）苯并咪唑（化合物3）的合成
称取三氯化铝（40g）加入到三口烧瓶中，加入硝基苯500ml，搅拌降温至0oC，然后称取茴香醚（10.8g）加入到反应液中，搅拌。称取2-溴-1H-苯并咪唑（19.7g）溶于硝基苯（20ml），在搅拌的情况下加入到上述反应液中，加料完毕后，将反应液升高至100oC搅拌过夜，薄层色谱法检测反应进程。反应完成后，将反应降温至0oC，缓缓加入1mol/lNaOH溶液300ml中和。分离有机相，水层用二氯甲烷萃取（100ml×3），合并有机相，饱和食盐水洗（200ml×1），无水硫酸镁干燥。过滤，收集滤液，减压蒸馏得到棕色固体物质。将该物质重新溶解于乙酸乙酯50ml中，通过200-300目硅胶过滤，收集滤液，减压蒸馏，得到浅黄色固体物质。将该固体物质在50oC的条件下溶于20ml乙酸乙酯中，然后将其降温至0oC下放置2小时，有大量固体物质析出，过滤，收集固体，真空干燥，得到目标产物2-（4-甲氧基苯基）苯并咪唑15.8g，产率70.5%。
1HNMR(400Hz, DMSO): δ 7.642-7.613(m,2H), 7.411-7.359(m, 2H), 7.119-7.102(m, 2H), 6.904-6.891(m, 2H), 4.733(br, 1H), 3.476(s, 3H).
MS(EI): 225.1(MH+)
实施例2 2-（4-甲氧基苯基）-6（5-硝基-1H-苯并咪唑-2-基）-1H-苯并咪唑（化合物5）的合成
称取三氯化铝（26.7g）加入到三口烧瓶中，然后加入硝基苯300ml，搅拌降温至0oC，然后称取2-（4-甲氧基苯基）-1H-苯并咪唑（14.2g）溶液硝基苯20ml加入到反应液中，搅拌。称取2-溴-5硝基-1H-苯并咪唑（16.9g）溶于硝基苯（20ml），在搅拌的情况下加入到上述反应液中，加料完毕后，将反应液升高至120oC搅拌过夜，薄层色谱法检测反应进程。反应完成后，将反应降温至0oC，缓缓加入1mol/lNaOH溶液200ml中和。分离有机相，水层用二氯甲烷萃取（100ml×3），合并有机相，饱和食盐水洗（200ml×1），无水硫酸镁干燥。过滤，收集滤液，减压蒸馏得到红棕色固体物质。该固体物质经柱层析纯化（200-300目硅胶，乙酸乙酯：正己烷=2:1作为洗提液）得到目标产物2-（4-甲氧基苯基）-6（5-硝基-1H-苯并咪唑-2-基）-1H-苯并咪唑11.5g，收率47.2%。
1HNMR(400Hz, DMSO): δ 8.427(s, 1H), 8.074-8.061(m, 1H), 7.964-7.915(m, 2H), 7.638(s, 1H), 7.419-7.352(m, 3H), 6.873-6.797(m, 2H), 5.274(s, 1H), 4.629(br, 1H), 3.419(s, 3H).
MS(EI): 386.1(MH+)
实施例3 2-（4-甲氧基苯基）-6（5-氨基-1H-苯并咪唑-2-基）-1H-苯并咪唑（化合物6）的合成
将2-（4-甲氧基苯基）-6（5-硝基-1H-苯并咪唑-2-基）-1H-苯并咪唑（10.2g，）溶于100ml无水乙醇中，然后加入5% Pd/C（1.2g），将反应置于室温下H2加压(20~60psi)反应过夜。反应停止后，硅藻土过滤除去Pd/C，收集滤液，减压除去溶剂得到黄色油状物。该黄色油状物质经柱层析纯化（200-300目硅胶，二氯甲烷：甲醇=1:1作为洗提液）得到目标产物2-（4-甲氧基苯基）-6（5-氨基-1H-苯并咪唑-2-基）-1H-苯并咪唑8.4g，收率89.3%。
1HNMR(400Hz, DMSO): δ 7.924(m, 1H), 7.611-7.596(d, J=6.0Hz, 1H), 7.485-7.446(m, 2H), 7.324-7.295(m, 2H), 6.912-6.845(m, 3H), 6.574-6.523(m, 1H), 5.023(br, 1H), 4.862-4.851(s, 2H), 4.554-4.542(s, 1H), 3.358(s, 3H).
MS(EI): 356.2(MH+)
实施例4 2-（4-甲氧基苯基）-6（5-溴-1H-苯并咪唑-2-基）-1H-苯并咪唑（化合物7）的合成
称取2-（4-甲氧基苯基）-6（5-氨基-1H-苯并咪唑-2-基）-1H-苯并咪唑（8.0g）加入到反应瓶中，然后向反应瓶中加入3mol/l盐酸溶液（24ml），搅拌使2-（4-甲氧基苯基）-6（5-氨基-1H-苯并咪唑-2-基）-1H-苯并咪唑充分溶解于盐酸溶液中，降温至-5oC，然后将亚硝酸钠（1.6g）溶于5ml水中，形成溶液，缓慢滴加到上述反应瓶中，控制温度在0~5℃，缓慢滴加完毕后，维持温度为0~5℃反应1小时。另取一反应瓶中加入溴化亚铜（0.65g）、浓盐酸（10ml）以及二氯甲烷（50ml），在搅拌的情况下降温至10~15℃，然后将上述反应液缓慢滴加至该反应瓶中，滴加完毕后，控制反应温度10~15℃搅拌4小时，薄层色谱跟踪反应，反应完毕后，分离有机层，水层以二氯甲烷萃取（50ml×2），合并有机层，饱和食盐水洗（50ml×1），无水硫酸镁干燥。过滤，收集滤液，减压蒸馏除去溶剂，得到黄色固体物质，将该黄色固体物质以甲醇进行重结晶，得到目标产物2-（4-甲氧基苯基）-6（5-溴-1H-苯并咪唑-2-基）-1H-苯并咪唑7.8g，产率82.6%。
1HNMR(400Hz, DMSO): δ 7.934(s, 1H), 7.842-7.834(d, J=Hz, 1H), 7.643-7.675(m, 1H), 7.512-7.437(m, 3H), 7.369-7.308(m, 2H), 6.825-6.799(m, 2H), 5.269(br, 1H), 4.697(br, 1H), 3.469(s, 3H).
MS(EI): 419.4(MH+)
实施例5 2-（4-甲氧基苯基）-6-[5-(异丙基氨基）-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-苯并咪唑（化合物8a）的合成
称取碳酸钾（0.6g）溶于DMF（20ml）中，搅拌5分钟使固体物质溶解，室温下加入异丙胺（4.5g），剧烈搅拌10分钟。称取2-（4-甲氧基苯基）-6（5-溴-1H-苯并咪唑-2-基）-1H-苯并咪唑（1.6g）溶于DMF（5ml）中，在氮气保护的条件下逐滴加入到上述溶液中，加料完毕后，加热回流4小时，薄层色谱法检测反应进程。反应停止后，将反应液冷却至室温，然后向反应液中加入 4%的氢氧化钠溶液（100ml）以及乙酸乙酯（100ml），搅拌5分钟，分离有机层，水层以乙酸乙酯萃取（50ml×2），合并有机层，饱和食盐水洗（50ml×1），无水硫酸镁干燥。过滤，收集滤液，减压蒸馏除去溶剂得到黄色固体物质。该黄色固体物质经柱层析纯化（中性氧化铝，二氯甲烷：甲醇=6:1作为洗提液）得到目标产物2-（4-甲氧基苯基）-6-[5-(2-甲基乙基氨基）-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-苯并咪唑1.1g，收率72.5%。
1HNMR(400Hz, DMSO): δ 7.919(s, 1H), 7.643-7.675(m, 1H), 7.453-7.367(m, 4H), 6.911-6.794(m, 3H), 6.436-6.411(m, 1H), 5.647(s, 1H), 4.589(br, 1H), 4.235(s, 1H), 3.394(s, 3H), 3.094-3.011(m, 1H), 0.987-0.968(d, J=7.6Hz, 6H).
13C NMR(400Hz, DMSO):162.382, 156.161, 155.829, 143.557, 140.473, 139.892, 138.716, 130.843, 129.076, 126.455, 125.968, 122.781, 119.687, 117.552, 117.494, 115.083, 114.961, 105.679, 58.436, 36.592, 19.855.
MS(EI): 398.1(MH+)
实施例6 2-（4-甲氧基苯基）-6[5-(二乙基氨基）-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-苯并咪唑（化合物8b）的合成
称取氢氧化铯（0.75g）溶于DMF（20ml）中，搅拌5分钟使固体物质溶解，室温下加入二乙基胺（7.3g），剧烈搅拌10分钟。称取2-（4-甲氧基苯基）-6（5-溴-1H-苯并咪唑-2-基）-1H-苯并咪唑（2.1g）溶于DMF（5ml）中，在氮气保护的条件下逐滴加入到上述溶液中，加料完毕后，加热回流过夜，薄层色谱法检测反应进程。反应停止后，将反应液冷却至室温，然后向反应液中加入 4%的氢氧化钠溶液（100ml）以及乙酸乙酯（100ml），搅拌5分钟，分离有机层，水层以乙酸乙酯萃取（50ml×2），合并有机层，饱和食盐水洗（50ml×1），无水硫酸镁干燥。过滤，收集滤液，减压蒸馏除去溶剂得到黄色固体物质。该黄色固体物质经柱层析纯化（中性氧化铝，二氯甲烷：甲醇=7:1作为洗提液）得到目标产物2-（4-甲氧基苯基）-6[5-(二乙基氨基）-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-苯并咪唑1.3g，收率63.1%。
1HNMR(400Hz, DMSO): δ 8.016(s, 1H), 7.714-7.011(m, 1H), 7.598-7.585(m, 1H), 7.502-7.489(m, 1H), 7.369-7.314(m, 2H), 7.005-6.856(m, 3H), 6.548-6.529(m, 1H), 5.335(br, 1H), 4.589(br, 1H), 3.891(s, 3H), 3.058-3.037(m, 4H), 1.057-1.015(t, J=8.8Hz, 6H).
13C NMR(400Hz, DMSO): 160.847, 155.963, 154.231, 148.726, 140.082, 139.819, 138.924, 129.859, 128.634, 125.149, 123.248, 122.291, 118.198, 118.074, 116.248, 113.586, 112.894, 106.316, 59.447, 39.282, 20.831.
MS(EI): 412.2(MH+)
实施例7 2-（4-甲氧基苯基）-6[5-(3-甲基吡咯烷基）-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-苯并咪唑（化合物8c）的合成
称取氢氧化钾（0.3g）溶于DMF（20ml）中，搅拌5分钟使固体物质溶解，室温下加入3-甲基吡咯烷（10.2g），剧烈搅拌10分钟。称取2-（4-甲氧基苯基）-6（5-溴-1H-苯并咪唑-2-基）-1H-苯并咪唑（2.2g）溶于DMF（5ml）中，在氮气保护的条件下逐滴加入到上述溶液中，加料完毕后，加热回流过夜，薄层色谱法检测反应进程。反应停止后，将反应液冷却至室温，然后向反应液中加入 4%的氢氧化钠溶液（100ml）以及乙酸乙酯（100ml），搅拌5分钟，分离有机层，水层以乙酸乙酯萃取（50ml×2），合并有机层，饱和食盐水洗（50ml×1），无水硫酸镁干燥。过滤，收集滤液，减压蒸馏除去溶剂得到黄色固体物质。该黄色固体物质经柱层析纯化（中性氧化铝，二氯甲烷：甲醇=15:2作为洗提液）得到目标产物2-（4-甲氧基苯基）-6[5-(3-甲基吡咯烷基）-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-苯并咪唑0.92g，收率41.3%。
1HNMR(400Hz, DMSO): δ 7.947-7.930(m, 1H), 7.695-7.602(m, 1H), 7.517-7.499(m, 1H), 7.481(s, 1H), 7.334-7.291(m, 2H), 7.004-6.842(m, 3H), 6.647-6.601(m, 1H), 5.042(br, 1H), 4.862(s, 1H), 3.737(s, 3H), 3.082-2.919(m, 4H), 1.591-1.484(m, 2H), 1.336-1.299(m, 1H), 0.887-0.865(d, J=8.8Hz, 3H).
13C NMR(400Hz, DMSO): 161.316, 156.442, 155.947, 150.583, 141.369, 140.916, 140.023, 129.716, 128.055, 125.996, 125.023, 124.276, 119.158, 118.731, 116.043, 115.619, 114.887, 106.994, 62.691, 60.004, 48.639, 37.868, 35.186, 17.561.
MS(EI): 424.3(MH+)
实施例8 化合物治疗银屑病的药效学实验
一、药物
1.阳性对照药物：
1.1Hoechst 33258：Hoechst 33258是一种双苯并咪唑化合物，分子量为533.88，
CAS 号：23491-45-4，是一种可以穿透细胞膜的物质，对细胞毒性较低。常用作细胞核染色材料。该化合物与本发明的化合物结构相似，因此作为阳性对照。Hoechst 33258购自上海信裕生物科技有限公司。
1.2 盐酸利阿唑：英文名Liarozole hydrochloride，CAS号：115575-11-6，是一种含单个苯并咪唑结构的维A酸模拟物，可阻断维A酸的代谢，增加血及组织中内源性维A酸，临床试验证明其对慢性斑块型银屑病具有治疗作用。该化合物与本发明的化合物均具有苯并咪唑结构，且属于抗银屑病药物，因此作为阳性对照。盐酸利阿唑购自上海超研生物科技有限公司。
实验药物
实施例5-7的化合物8a、8b、8c分别作为实验药物。
二、实验动物模型及分组和给药
1.实验动物模型的建立
SPF级BALB /c 小鼠，雄性，体重18至22g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。动物在SPF环境中适应性饲养一周作为检疫期。
检疫期过后，动物背部采用10%的硫化钠水溶液脱毛，脱毛面积为2x2 平方厘米。将脱毛后小鼠用苦味酸标记编号后单笼饲养24 小时。单笼饲养24 小时后，各小鼠以咪喹莫特乳膏（湖北科益药业股份有限公司，3g:0.15g/支）均匀涂于背部脱毛区皮肤，涂药面积2x2 平方厘米，1 次/日，每次50 mg乳膏，连续14日。采用PASI指数(Psoriasis area and severity index，银屑病面积和严重程度指数)对模型大鼠背部造模区域的红斑、鳞屑、浸润程度三个症状进行评分，三者评分相加得到PASI总评分。红斑、鳞屑、浸润程度分别用0-4分评价：0=无；1=轻度；2=中度；3=重度；4=极重度。每只小鼠红斑、鳞屑、浸润程度三个指标评分的总和作为该小鼠银屑病严重程度的评分，即每只小鼠的银屑病严重程度评分为0至12分。
分组及给药
将造模成功的小鼠随机分为5组，每组6只。分别在背部造模区域涂抹Hoechst 33258、盐酸利阿唑、化合物8a、化合物8b或化合物8c的乙醇分散液。其中Hoechst 33258、盐酸利阿唑、化合物8a、化合物8b、化合物8c的给药剂量均为每日1mg，连续给药14日。
三.药效学评价指标及实验结果
分别于造模后首次给药前及末次给药后24小时采用PASI指数对各组小鼠银屑病严重程度评分进行评价和记录，各组小鼠的银屑病严重程度评分以该组小鼠的均值表示。结果见下表。
a:与给药前相比P<0.05; b:与盐酸利阿唑组相比P<0.01; c:与盐酸利阿唑组相比P<0.05。
由上述结果可见，给药前各组小鼠银屑病严重程度PASI评分无显著差异，说明各组在给药前的银屑病严重程度具有可比性。
给药后Hoechst 33258组小鼠的PASI评分与给药前无显著差异，说明Hoechst 33258对银屑病无治疗效果。盐酸利阿唑、化合物8a、化合物8b、化合物8c给药后小鼠的PASI评分显著低于给药前，说明这些化合物对银屑病有治疗作用。其中化合物8a、化合物8b、化合物8c给药后小鼠的PASI评分显著低于盐酸利阿唑组，说明化合物8a、化合物8b、化合物8c对银屑病的治疗效果优于盐酸利阿唑组。其中化合物8a、化合物8b、化合物8c组给药后PASI评分由低到高依次为：化合物8a、化合物8b、化合物8c，说明化合物8a、化合物8b、化合物8c对银屑病的治疗效果依次降低。可见化合物8c的闭环N取代基可能会在一定程度上影响药效。