本发明涉及生物
技术领域：
中，一组针对her2基因的探针与相关试剂盒。
背景技术：
：人类表皮生长因子受体-2(her2)基因又名erbb2，c-erbb-2，表皮生长因子受体(egfr)家族成员,属于原癌基因，位于17q21，编码相对分子质量185kd的跨膜糖蛋白(跨膜酪氨酸激酶受体)；研究表明：30％以上的人类肿瘤中存在her2基因的扩增/过度表达(如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等)；her2也是卵巢癌、乳腺癌等重要的预后判断因子，her2阳性的卵巢癌、乳腺癌对常规的化疗和内分泌治疗反应差，肿瘤浸润性强，无病生存期短，预后差。her2阳性(过表达或扩增)的乳腺癌，其临床特点和生物学行为也有特殊表现，治疗模式也与其他类型的乳腺癌有很大的区别。因此，快速准确鉴别her2阳性组织细胞对于临床病例的诊断及有效用药治疗有着重要意义。目前关于表皮生长因子受体-2(her2)检测一般采用免疫组织化学(ihc)检测her2蛋白过度表达，应用原位杂交法检测her2基因扩增的水平。fda已经批准的检测方式包括免疫组化(ihc)、荧光原位杂交方法(fluorescenceinsituhybridization，fish)和显色原位杂交方法(chromogenicinsituhybridization，cish)。此外还有亮视野原位杂交(brightfieldinsituhybridization)。由于cish与fish相比具有符合率高、观察便捷、标本可长期保存等特点，现已被国内外许多检测机构采用。但不同的检测方法、计算的准确性和试剂的选择都会影响her2检测的结果。美国的一项调查结果显示，近1/4患者是因检测结果不准确而接受了不恰当的治疗。ihc检测her2蛋白过度表达的错误率平均为18％，fish检测her2基因扩增的错误率在13％。但目前在制备探针过程中通常需要采用以her2基因为模板，对her2基因中的非重复序列进行聚合酶连反应，扩增产物通常在几百碱基对大小不等的dna片段，产物经过荧光标记后获得her2基因序列荧光原位杂交探针，用于her2基因荧光原位杂交检测，在此过程中，片段的选择设计，pcr扩增效率，突变引入，荧光标记效率，非特异性结合，反应成本等问题都可能影响相关产品的使用与推广。另外较长的探针对于靶序列变异的识别能力又有所降低。特别对于仅是单个碱基(snp)或少数碱基不同的两序列，克隆探针不能区分，往往杂交信号相当，易导致假阳性的出现。技术实现要素：本发明的目的是提供一种将若干带有荧光信号且带有修饰核酸序列用于标记细胞内人类表皮生长因子受体-2(her2)基因核酸的成套探针。本发明提供的成套探针，包括名称为erbb2-1、erbb2-16和erbb2-18的探针；所述erbb2-1、所述erbb2-16和所述erbb2-18的序列分别为序列表中序列1、16和18。所述成套探针可仅由erbb2-1、erbb2-16和erbb2-18组成。该成套探针中所述erbb2-1、所述erbb2-16和所述erbb2-18的摩尔数可相等。上述探针中，所述成套探针还可由erbb2-1、erbb2-16和erbb2-18以及名称分别为erbb2-2、erbb2-3、erbb2-4、erbb2-5、erbb2-6、erbb2-7、erbb2-8、erbb2-9、erbb2-10、erbb2-11、erbb2-12、erbb2-13、erbb2-14、erbb2-15、erbb2-17、erbb2-19和erbb2-20这17种探针中的至少一种组成；所述erbb2-2、所述erbb2-3、所述erbb2-4、所述erbb2-5、所述erbb2-6、所述erbb2-7、所述erbb2-8、所述erbb2-9、所述erbb2-10、所述erbb2-11、所述erbb2-12、所述erbb2-13、所述erbb2-14、所述erbb2-15、所述erbb2-17、所述erbb2-19和所述erbb2-20的序列分别为序列表中序列2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、17、19和20。上述成套探针中各探针均可由荧光物质标记。所述荧光物质具体可为cy3。上述成套探针中，所述erbb2-1～所述erbb2-20的摩尔数相等。在所述成套探针由20条探针组成时，该成套试剂中各探针的摩尔数均相等。在所述成套探针由4-20条探针组成时，该成套探针中所包含的探针间均满足由20条探针组成时的成套探针中相应探针间的摩尔比关系。所述成套探针中各探针可独立包装，也可包装在一起。本发明还提供了检测her2的系统，所述系统包括所述成套探针。上述系统还可包括利用荧光原位杂交方法检测her2所需的试剂和/或仪器。所述系统可为仅包括试剂的试剂盒。所述检测her2可为检测组织、细胞或细胞培养液中的her2基因。所述检测her2可为检测her2基因的表达和/或扩增。所述扩增是指目的基因中的拷贝数量或表达数量出现增加。本发明还提供了所述成套探针或所述系统在标记her2基因的表达和/或分布中的应用。本发明还提供了所述成套探针或所述系统在制备标记her2基因的表达和/或分布产品中的应用。本发明还提供了所述成套探针或所述系统在鉴定或辅助鉴定肿瘤发生和/或发展中的应用。本发明还提供了所述成套探针或所述系统在制备鉴定或辅助鉴定肿瘤发生和/或发展产品中的应用。所述肿瘤可为实体肿瘤。所述实体肿瘤可为乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、胃癌或前列腺癌。实验证明，利用本发明的成套探针可成功标记细胞内或组织切片人类表皮生长因子受体-2(her2)基因，可以方便、准确、快速地标记肿瘤细胞或非肿瘤细胞中肿瘤标志基因her2的表达与分布，可用于协助判断肿瘤的发生发展阶段与趋势。本发明的成套探针的稳定结合力及特异性高，非特异性背景信号低，具有很高的应用前景。附图说明图1为靶向actb基因的探针的结果。其中，actb表示靶向actb基因的探针的结果，dapi表示dapi对细胞核的染色，merge表示前两幅图的合并。图2为nc探针检测mcf7和293t的结果。图3为三种细胞中her2基因的检测结果。her2+17表示用成套探针2与靶向17号染色体着丝点区域的探针一同检测，在检测时所用每条探针的摩尔数均相同。图4为人乳腺癌组织石蜡切片的检测结果。图5为人乳腺癌组织冰冻切片的检测结果。具体实施方式下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。所用试剂如下：20×ssc为由溶剂和溶质组成的无菌溶液，溶剂为depc水，溶质及其浓度分别为nacl175.3g/l，一水合柠檬酸钠63g/l，ph7.0；2×ssc和0.4×ssc分别由无菌depc水将20×ssc稀释10倍和50倍得到，三种试剂均室温保存。杂交缓冲液为由溶剂和溶质组成的无菌溶液，溶剂为depc水，溶质及其浓度分别为nacl5.265g/100ml，去离子甲酰胺60ml/100ml，20×ssc25ml/100ml，10％(质量百分比)sds水溶液5ml/100ml，硫酸葡聚糖10g/100ml，室温保存备用。0.1％tritonx-100为向pbs中添加tritonx-100得到的tritonx-100体积百分浓度为0.1％的溶液，室温保存备用。蛋白酶k溶液为将蛋白酶k利用2×ssc按照1:1000稀释得到，-20℃保存。0.4×ssc/0.3％tween20为向0.4×ssc中添加tween20得到的tween20体积百分浓度为0.3％的溶液。2×ssc/0.1％tween20为向2×ssc中添加tween20得到的tween20体积百分浓度为0.1％的溶液。变性液为由溶剂和溶质组成的溶液，溶剂为ddh2o，溶质及其浓度分别为20×ssc4ml/40ml，去离子甲酰胺：28ml/40ml，每次现用现配。杂交后水洗溶液为由溶剂和溶质组成的溶液，溶剂为ddh2o，溶质及其浓度分别为20×ssc4ml/40ml，去离子甲酰胺20ml/40ml，每次现用现配。0.1mol枸橼酸缓冲液为由溶剂和溶质组成的溶液，溶剂为ddh2o(超纯水)，溶质及其浓度分别为枸橼酸三钠3g/l，枸橼酸0.4g/l。探针应避光稀释并保存，且实验过程中加入探针后的操作应在避光条件下进行。dapi用pbs按照1:1000稀释，需避光保存和使用。实施例1、检测her2阳性组织或细胞的成套探针的制备本实施例提供的检测her2阳性组织或细胞的成套探针为成套探针1和成套探针2，成套探针1由名称分别为erbb2-1、erbb2-16和erbb2-18的三个探针组成，成套探针2由名称分别为erbb2-1～erbb2-20的20个探针组成。各探针序列如表1所示，各探针5'端均标记有cy3。表1、探针信息探针名称探针序列erbb2-15'gctccttggtccttcacctaaccttgccc3'(序列1)erbb2-25'cgtcaatgtccagcagccgagcca3'(序列2)erbb2-35'tgtgatgccaggagacagaccctacccg3'(序列3)erbb2-45'gcaggtcgggcagcaggcagagg3'(序列4)erbb2-55'cctcccaaccatcacaaaccacagcca3'(序列5)erbb2-65'gcaggtcgggcagcaggcagagg3'(序列6)erbb2-75'gcccagtccataaacgcccatcagta3'(序列7)erbb2-85'gcacagggcttgctgcacttctca3'(序列8)erbb2-95'ggatacactgccacttgtttattccttcacct3'(序列9)erbb2-105'gtcccaagagggtctgaggaaggatagg3'(序列10)erbb2-115'gggaggctgaggtgggcggat3'(序列11)erbb2-125'gtggtattgttcagcgggtctccattgtct3'(序列12)erbb2-135'cactgggttgtaagttgggagtttgcgg3'(序列13)erbb2-145'tggcgggcaggcactgggttgta3'(序列14)erbb2-155'gggtagagcacattgggcacaaagcagag3'(序列15)erbb2-165'ttgttcagcgggtctccattgtct3'(序列16)erbb2-175'ctgggctgaaggcaggaggagggtgg3'(序列17)erbb2-185'gggtggtattgttcagcgggtctccattgtct3'(序列18)erbb2-195'tgcttgggaagtagagggatttcagggg3'(序列19)erbb2-205'tggatggaaaggtcattcgcctgaacaag3'(序列20)成套探针1中erbb2-1、erbb2-16和erbb2-18的摩尔比为1：1：1，成套探针2中erbb2-1～erbb2-20的摩尔数均相等。成套探针1和成套探针2中各探针均独立包装。设计靶向17号染色体着丝点区域的探针(表2)和靶向作为内参基因actb基因(homosapiensactinbeta(actb),mrnancbireferencesequence:nm_001101.4)的探针(表3)，并设计nc探针(5'-gtgtaacacgtctatacgccca-3')作为阴性对照，靶向17号染色体着丝点区域的探针中各探针间的摩尔数均相等，靶向作为内参基因actb基因的探针中各探针间的摩尔数均相等。表2、靶向17号染色体着丝点区域的探针探针名称探针序列chr17-15'tgaactcgcagaggtgaacattcct3'(fam双标)chr17-25'tctcagagccctcttcgtggtgtt3'(fam双标)chr17-35'gaacattccgttggatggagcagt3'(fam双标)chr17-45'ctccgaagatgtctttggaaacgg3'(fam双标)chr17-55'ttggaccgctctgaggatttcgt3'(fam双标)chr17-65'cagagctgaacactccttgcgatgta3'(fam双标)chr17-75'aacgggataaactgcacagaactaaacag3'(fam双标)chr17-85'tggaaacgcgataactgcacctaa3'(fam双标)chr17-95'tggaaacgggataaaccgcaca3'(fam双标)chr17-105'ttctgtggcatccgcaaggg3'(fam双标)chr17-115'gggaggctgaggtgggcggat3'(fam双标)chr17-125'tctgaggaatttgttggaaacggg3'(fam双标)chr17-135'gagctgagcattccttgcgatgta3'(fam双标)chr17-145'tggaaacgggataaaccgcaca3'(fam双标)chr17-155'tttggagggctttgtggtttgtg3'(fam双标)chr17-165'ggataaaccgcacagaactaaacagaaga3'(fam双标)chr17-175'ggaatctgcaagtggatatttgggc3'(fam双标)chr17-185'cgtttggagggctttgtggtttg3'(fam双标)chr17-195'aacgggataactgcacctaactaaacgg3'(fam双标)chr17-205'ggataaaccgcacagaactaaacagaaga3'(fam双标)表3、靶向actb基因的探针其中，表2和表3中fam双标表示在相应序列的两端均标记有fam。实施例2、her2阳性组织或细胞的检测本实施例利用实施例1的检测her2阳性组织或细胞的成套探针分别检测her2阳性组织或细胞。一、贴壁细胞或悬浮细胞(或悬浮成分)中her2阳性的检测(1)贴壁细胞(以48孔板为例)待测样本为乳腺癌细胞mcf7、卵巢癌细胞skov3与对照细胞293t。具体检测方法如下：a)在48孔板中放入已处理好的且大小合适的盖玻片，按照1×104细胞/孔的密度将处于培养基中的贴壁细胞接种于48孔板中的盖玻片上，于37℃5％co2培养箱中培养过夜；b)吸弃孔板中的培养基，pbs洗两次，每次5min；c)吸弃pbs，每孔加入100ul无水乙醇，室温固定15min；d)吸弃无水乙醇，每孔加入100ul0.1％tritonx-100(现用现配)室温处理细胞15min；e)吸弃0.1％tritonx-100，pbs洗两次，每次5min；f)吸弃pbs，每孔加入100ul2×ssc，37℃培养箱放置30min；g)吸弃2×ssc，每孔加入100ul70％(体积百分比)乙醇水溶液，室温放置3min；h)吸弃70％乙醇水溶液，每孔加入100ul85％(体积百分比)乙醇水溶液，室温放置3min；i)吸弃85％乙醇水溶液，每孔加入100ul无水乙醇水溶液，室温放置3min；j)吸弃无水乙醇，室温干燥；k)制备探针混合液：将杂交缓冲液提前在37℃水浴锅孵育2h；1od实施例1的成套探针2用40uldepc水溶解得到探针溶液，浓度为1ug/ul，避光备用；每孔配制100ul探针混合液：探针溶液，杂交缓冲液70ul，depc水补足至100ul。探针设置浓度为50ug/ml，20ug/ml，12.5ug/ml，6ug/ml四个梯度；73℃水浴锅变性5min；l)每孔加入100ul探针混合液，于37℃培养箱孵育过夜；m)杂交次日，将样本从37℃培养箱取出，吸弃探针混合液，每孔加入100ul于65℃预热的0.4×ssc/0.3％tween20洗涤2min；n)吸弃0.4×ssc/0.3％tween20，每孔加入100ul的2×ssc/0.1％tween20100ul，室温洗涤2min，吸弃洗涤液，于室温干燥；o)每孔加入100ul稀释后的dapi染液，避光染色20min，吸弃染液，加入100ulpbs，挑出盖玻片，于荧光显微镜下观察。按照上述方法，将实施例1的成套探针2替换为靶向17号染色体着丝点区域的探针、靶向actb基因的探针和nc探针(nc探针有两种，一种在5’端标记有fam，记为nc-fam；一种在5’端标记有cy3，记为nc-cy3，分别进行实验)，在荧光显微镜下观察不同探针下的结果。乳腺癌细胞mcf7、卵巢癌细胞skov3及对照细胞293t在经靶向actb基因的探针处理后，均可见绿色荧光信号(图1)。两种nc探针检测mcf7和293t的结果如图2所示，在同样的操作过程中显示没有出现明显的非特异性荧光结合。成套探针2与靶向17号染色体着丝点区域的探针的结果如图3所示，结果显示，乳腺癌细胞mcf7/卵巢癌细胞skov3中erbb2(her2)基因出现细胞核内基因拷贝数量增加，细胞胞浆中erbb2(her2)基因表达量增加，出现多点或较多或较大荧光簇团；相对对照细胞293t进行目的基因表达水平和17号染色体着丝点重复序列设计探针结果显示胞浆和核内表达均处于正常水平，符合mcf7和skov3细胞her2基因阳性特征。而现在已有的研究表明，her2基因在乳腺癌细胞mcf7、卵巢癌细胞skov3及对照细胞293t分别为mcf7和skov3细胞her2基因阳性特征，而293t细胞呈现阴性正常即染色体双链中有个2个荧光标点。本实施例中的结果与现有研究的结果一致。(2)悬浮细胞或悬浮成分待测样本为乳腺癌细胞mcf7、卵巢癌细胞skov3与对照细胞293t的细胞悬浮液。具体检测方法如下：a)将悬浮细胞(成分)固定在玻片上：方法一：用甩片机使固定于无水乙醇的悬浮细胞贴在玻片(多聚赖氨酸处理)上；方法二：涂片，将细胞悬液滴在多聚赖氨酸处理过的载玻片上，另取一片载玻片做推片，将推片自细胞滴左侧向右移动，当细胞滴均匀地附着在两片之间时，再将推片向左平稳地移动(两片成30-40度夹角)推出均匀的细胞膜，于酒精灯上过几次烤干。b)将烤干的细胞涂片置于10cm培养皿中，滴加0.1％tritonx-100消化15min；c)吸弃0.1％tritonx-100，滴加pbs洗两次，每次5min；d)吸弃pbs，滴加100ul2×ssc，37℃培养箱放置30min；e)吸弃2×ssc，滴加100ul70％(体积百分比)乙醇水溶液，室温放置3min；f)吸弃70％乙醇水溶液，滴加100ul85％(体积百分比)乙醇水溶液，室温放置3min；g)吸弃85％乙醇水溶液，滴加100ul无水乙醇，室温放置3min；h)吸弃无水乙醇，室温干燥；i)制备探针混合液：将杂交缓冲液提前在37℃水浴锅孵育2h；1od实施例1的成套探针1用40uldepc水溶解得到探针溶液，浓度为1ug/ul，避光备用；每孔配制100ul探针混合液：探针溶液，杂交缓冲液70ul，depc水补足至100ul。探针设置浓度为50ug/ml，20ug/ml，12.5ug/ml，6ug/ml四个梯度；75-80℃水浴锅变性5min；j)每张玻片滴加100ul探针混合液，盖上盖玻片置于湿盒中，37℃培养箱孵育过夜；k)杂交次日，将样本从37℃培养箱取出，吸弃探针混合液，每张玻片滴加100ul于65℃预热的0.4×ssc/0.3％tween20洗涤2min；l)吸弃0.4×ssc/0.3％tween20，每张玻片滴加100ul的2×ssc/0.1％tween20100ul，室温洗涤2min，吸弃洗涤液，于室温干燥；m)每张玻片滴加100ul稀释后的dapi染液，避光染色20min，吸弃染液，每张玻片滴加100ulpbs洗2次，滴加甘油盖上盖玻片，于荧光显微镜下观察。按照上述方法，将实施例1的成套探针1分别替换为靶向17号染色体着丝点区域的探针、靶向actb基因的探针和nc探针，在荧光显微镜下观察不同探针下的结果。结果显示，步骤(2)的结果与步骤(1)的结果一致。(3)定量pcr利用her2的引物f：cctgctgaactggtgtatgc和r：gcccgaagtctgtaattttga分别对乳腺癌细胞mcf7、卵巢癌细胞skov3与对照细胞293t进行荧光定量pcr，该引物对的pcr产物为134bp。利用actb作为内参，内参引物序列为f：ctccctggagaagagctacgagc和r：ccaggaaggaaggctggaagag。结果显示，her2基因在乳腺癌细胞mcf7、卵巢癌细胞skov3及对照细胞293t分别为mcf7和skov3细胞呈her2基因阳性特征，而293t细胞呈现her2基因阴性特征，利用本发明的成套探针1和2得到的结果与上述结果一致。二、组织切片her2阳性的检测1、石蜡切片待测样本为人乳腺癌组织石蜡切片(经过了研究对象知情同意)。具体检测方法如下：a.脱蜡：(a)石蜡切片在60℃烤箱中预热30min；(b)每张切片滴加二甲苯100ul中60℃放置20min；(c)在梯度乙醇水溶液中(100％、95％、90％、80％)室温孵育各10min。b.蛋白酶处理：(a)蛋白酶k溶液预热至37℃；(b)每张切片滴加蛋白酶k溶液100ul，37℃孵育20min；(c)每张切片滴加2×ssc100ul在室温下洗切片3次，每次1min；(d)梯度乙醇水溶液(70％、80％、90％、100％(-20℃预冷))脱水，每次2min，空气中干燥；c.变性：(a)75-80℃预热变性液；(b)每张切片滴加预热变性液100ul，78℃孵育8min；(c)梯度乙醇水溶液(70％、80％、90％、100％(-20℃预冷))脱水，每次2min，空气中干燥；d.杂交：(a)准备探针混合液：1od实施例1的成套探针1用40uldepc水溶解得到探针溶液，浓度为1ug/ul，避光备用；配制探针混合液，每100ul探针混合液含：探针溶液，杂交缓冲液70ul，depc水补足至100ul。探针设置浓度为50ug/ml，20ug/ml，12.5ug/ml，6ug/ml四个梯度；73℃水浴锅变性3-8min；(b)准备湿盒，交叉放置切片；(c)滴100ul探针混合液在切片上，加盖玻片；(d)盖上湿盒盖，37℃孵育12-16h。e.杂交后水洗：(a)43℃预热杂交后水洗溶液；(b)镊子小心去除切片上的盖玻片，每张切片滴加预热的杂交后水洗溶液100ul洗切片15min；(d)2×ssc(预热至37℃)洗2次，每次10min；(e)pbs洗1次，10min。f.细胞核染色：(a)每张切片加10uldapi，覆盖盖玻片并在室温下避光孵育5min；(b)显微镜下观察，或置于湿盒中4℃保存。按照上述方法，将实施例1的成套探针1替换为nc探针(在5’端标记有fam)，在荧光显微镜下观察不同探针下的结果。结果显示，成套探针1的检测结果中出现了明显的阳性信号(图4中左图)，而nc探针在相同条件操作没有明显阳性信号(图4中右图)。2、冰冻切片待测样本为人乳腺癌组织冰冻切片(经过了研究对象知情同意)。具体检测方法如下：1.复水：1)冰冻切片取出，每张切片滴加0.1mol枸橼酸缓冲液100ul，室温放置15min；2)吸弃0.1mol枸橼酸缓冲液，滴加pbs100ul洗两次，每次5min；2.蛋白酶处理：1)蛋白酶k溶液预热至37℃；2)每张切片滴加蛋白酶k溶液100ul，37℃孵育20min；3)每张切片滴加2×ssc100ul在室温下漂洗切片3次，每次1min；4)梯度乙醇水溶液(70％、80％、90％、100％(-20℃预冷))脱水，每次2min，空气中干燥。3.变性：1)78℃预热变性液；2)每张切片滴加预热后的变性液100ul，孵育8min；3)梯度乙醇水溶液(70％、80％、90％、100％(-20℃预冷))脱水，每次2min，空气中干燥。4.杂交：1)准备探针混合液：1od实施例1的成套探针2用40uldepc水溶解得到探针溶液，浓度为1ug/ul，避光备用；配制探针混合液，每100ul探针混合液含：探针溶液，杂交缓冲液70ul，depc水补足至100ul。探针设置浓度为50ug/ml，20ug/ml，12.5ug/ml，6ug/ml四个梯度；73℃水浴锅变性5min；2)准备湿盒，交叉放置切片；3)滴100ul探针混合液在切片上，加盖玻片；4)盖上湿盒盖，37℃孵育12-16h。5.杂交后水洗：1)43℃预热杂交后水洗溶液；2)镊子小心去除切片上的盖玻片，每张切片滴加预热的杂交后水洗溶液100ul43℃洗切片15min；3)2×ssc(预热至37℃)洗2次，每次10min；4)pbs洗1次，10min。6.细胞核染色：1)每张切片加10uldapi，覆盖盖玻片并在室温下避光孵育20min；2)显微镜下观察，或置于湿盒中4℃保存。按照上述方法，将实施例1的成套探针2分别替换为靶向17号染色体着丝点区域的探针、靶向actb基因的探针和nc探针(在5’端标记有fam)，在荧光显微镜下观察不同探针下的结果。结果显示，成套探针2的检测结果中出现了明显的阳性信号(图5中左图)，而nc探针在相同条件操作没有明显阳性信号(图5中右图)。<110>苏州吉玛基因股份有限公司、上海吉玛制药技术有限公司<120>一组针对her2基因的探针与相关试剂盒<160>20<170>patentinversion3.5<210>1<211>29<212>dna<213>人工序列<220><223><400>1gctccttggtccttcacctaaccttgccc29<210>2<211>24<212>dna<213>人工序列<220><223><400>2cgtcaatgtccagcagccgagcca24<210>3<211>28<212>dna<213>人工序列<220><223><400>3tgtgatgccaggagacagaccctacccg28<210>4<211>23<212>dna<213>人工序列<220><223><400>4gcaggtcgggcagcaggcagagg23<210>5<211>27<212>dna<213>人工序列<220><223><400>5cctcccaaccatcacaaaccacagcca27<210>6<211>23<212>dna<213>人工序列<220><223><400>6gcaggtcgggcagcaggcagagg23<210>7<211>26<212>dna<213>人工序列<220><223><400>7gcccagtccataaacgcccatcagta26<210>8<211>24<212>dna<213>人工序列<220><223><400>8gcacagggcttgctgcacttctca24<210>9<211>32<212>dna<213>人工序列<220><223><400>9ggatacactgccacttgtttattccttcacct32<210>10<211>28<212>dna<213>人工序列<220><223><400>10gtcccaagagggtctgaggaaggatagg28<210>11<211>21<212>dna<213>人工序列<220><223><400>11gggaggctgaggtgggcggat21<210>12<211>30<212>dna<213>人工序列<220><223><400>12gtggtattgttcagcgggtctccattgtct30<210>13<211>28<212>dna<213>人工序列<220><223><400>13cactgggttgtaagttgggagtttgcgg28<210>14<211>23<212>dna<213>人工序列<220><223><400>14tggcgggcaggcactgggttgta23<210>15<211>29<212>dna<213>人工序列<220><223><400>15gggtagagcacattgggcacaaagcagag29<210>16<211>24<212>dna<213>人工序列<220><223><400>16ttgttcagcgggtctccattgtct24<210>17<211>26<212>dna<213>人工序列<220><223><400>17ctgggctgaaggcaggaggagggtgg26<210>18<211>32<212>dna<213>人工序列<220><223><400>18gggtggtattgttcagcgggtctccattgtct32<210>19<211>28<212>dna<213>人工序列<220><223><400>19tgcttgggaagtagagggatttcagggg28<210>20<211>29<212>dna<213>人工序列<220><223><400>20tggatggaaaggtcattcgcctgaacaag29当前第1页12