本发明属药物化学领域，涉及9,10-蒽醌类化合物及其药物用途，具体涉及9,10-蒽醌类化合物或其药学上可接受的盐及其在制备磷酸甘油酸变位酶抑制剂中的用途以及在制备治疗癌症药物中的用途。
背景技术：
据资料显示，癌症已是人类生命健康的第一杀手。根据《2012年中国卫生统计提要》数据显示，恶性肿瘤在2011年十大中国疾病死亡率中排名第一。世界卫生组织报告显示，2008年全世界约有1270万癌症新增患者，760万死于癌症，尤其在发展中国家，癌症新增例数达56％，据推测到2020年前，全球癌症发病率将增加50％，即每年将新增1500万癌症患者。不仅如此，癌症的死亡人数也在全球迅猛上升，2030年该数字可能会增至1320万。
据报道，上世纪30年代，德国科学家warburg发现肿瘤和正常人体组织存在着代谢差异，无论在氧气充足与否的条件下，肿瘤细胞都偏好通过糖酵解途径低效率的产能(1分子葡萄糖产生约4分子atp)，并产生大量的乳酸，而不是通过正常的氧化磷酸化途径在线粒体中产能(1分子葡萄糖产生36分子atp)，这种代谢性质使得肿瘤细胞的耗糖速度远大于正常细胞。肿瘤细胞对糖酵解通路产能依赖增强的现象，被称为“warburgeffect”，warburg因此获得1931年诺贝尔奖。但业内至今对其作用机制仍未十分清楚。
研究显示，糖酵解通路是所有生物细胞糖代谢过程的第一步，是生物体进行能量代谢的必须通路，该通路共包含了十步反应，其中有多个酶参与精确调节该通路的循环及平衡。越来越多的研究发现该通路的代谢异常与癌症密切相关(science,2010；330(6009):1340-1344.)，在癌细胞中糖酵解通路中的一些关键酶活性比正常细胞升高或降低(己糖激酶及丙酮酸激酶m2等)会导致整个通路的代谢异常，从而使代谢中间产物的浓度改变，导致其他受代谢中间产物影响的代谢网络活性异常。近几年来，该代谢通路受到越来越多的科学研究关注，其中的丙酮酸激酶m2(pkm2)亚型蛋白作为一个明星蛋白质，已经成为癌症研究的一大热点。研究者认为，这些糖酵解通路中的关键酶可作为药物治疗癌症的重要候选靶点，通过小分子化合物作用于通路中的靶标酶能够调控糖酵解通路的开关，将可能改变肿瘤的代谢网络从而抑制肿瘤的生长发育。已有报道激活丙酮酸激酶m2的小分子能够抑制癌细胞的生长和发展，提供了一种新的研究思路——调控糖酵解代谢通路中的特定靶标酶活性能够治疗癌症(nat.chem.biol.2012；8(10):839-47)。
研究显示，磷酸甘油酸变位酶(phosphoglyceratemutase,pgm)是糖酵解通路中一个重要的酶，能够将3-磷酸甘油酸(3pg)可逆的催化生成2-磷酸甘油酸(2pg)，2,3-二磷酸甘油酸(2,3-bpg)则是该酶的激活剂，能够磷酸化活性残基11位的组氨酸而加快反应。该酶存在两个亚型，其中m亚型存在于肌肉组织中，而b亚型则存在于其他组织中。研究发现，b亚型的磷酸甘油酸变位酶(pgam1)在肿瘤细胞中呈现高表达状态，该酶能够调控底物3-磷酸甘油酸和产物2-磷酸甘油酸的浓度，高表达高活性状态下使平衡向2-磷酸甘油酸方向移动；进一步研究发现，底物3-磷酸甘油酸是6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6pgd)的抑制剂，而产物2-磷酸甘油酸是磷酸甘油酸脱氢酶(phgdh)的激活剂，调控pgam1的活性能够影响磷酸戊糖通路(靶标酶为6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶)及丝氨酸合成通路(靶标酶为磷酸甘油酸脱氢酶)的活性(cancercell.2012；22(5):585-600)。磷酸戊糖通路是细胞合成核苷酸及产生nadph的一条重要途径，为细胞分裂增殖提供了必要的核苷酸骨架及电子供体nadph，而丝氨酸合成通路通量上升会提高氨基酸合成速率并促进细胞分裂(nature.2011；476(7360):346-350)，这两条通路在细胞的生物合成及分裂增殖中有着极其重要的意义。
研究结果综合显示，pgam1在代谢网络中处于一个十分重要的位置，该酶本身作为一个参与糖酵解的酶能够影响糖酵解通路的速率，影响肿瘤对于糖的消化吸收及能量生成，还可以调控底物与产物的浓度从而影响其他代谢通路的活性，因此只作用于pgam1的抑制剂(包括sirna及小分子化合物)就能够通过影响产物与底物的浓度抑制癌细胞的两条生物合成通路(核糖及氨基酸合成通路)，从而能够极其有效的抑制癌细胞的生长，被认为是一种治疗癌症的“一石二鸟”的策略(cancercell.2012；22(5):565-566)。该研究成果不仅为理解复杂的肿瘤代谢网络提供了新的信息，更提出了一个重要的抗肿瘤策略：单独作用于pgam1的抑制剂就能够同时抑制肿瘤能量代谢及生物合成通路，抑制肿瘤生长。
pgam1与癌症的关系仅仅在最近几年的研究中偶尔被提及，而该酶作为癌症代谢网络中的一个全新药物作用靶标酶则在近两年被人们所认可(nat.rev.drug.discov.2013；(12):829-46)。在早期的研究中，一些课题组采用pgam1底物类似物作为抑制剂进行糖酵解通路的机理研究，这些化合物从活性和成药性角度来讲离实际应用有一定的距离。最近有专利申请报道pgam1小分子抑制剂pgmi-004a是从先导化合物茜素磺酸钠(alizarinreds，后面简称reds)衍生化而来，能够在细胞及动物模型上表现出优异的抑制肿瘤生长的能力，并且无明显毒副作用(cancercell.2012；22(5):585-600)。但是，该化合物体外活性也仅在微摩尔级别，细胞水平活性仅仅在几十微摩尔级别，尚达不到成药的标准。
基于现有技术的基础，本申请的发明人拟提供9,10-蒽醌类化合物及其药物用途，具体涉及9,10-蒽醌类化合物或其药学上可接受的盐及其在制备磷酸甘油酸变位酶抑制剂中的用途以及在制备治疗癌症药物中的用途。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷和不足，提供9,10-蒽醌类化合物及其药物用途，具体涉及9,10-蒽醌类化合物或其药学上可接受的盐及其在制备磷酸甘油酸变位酶抑制剂中的用途以及在制备治疗癌症药物中的用途。
本发明的第一个目的是提供9,10-蒽醌类化合物或其药学上可接受的盐；所述的9,10-蒽醌类化合物是具有如式(i)所示结构的化合物或其盐，
式中
r1为羟基、2-氧乙酸或2-氧乙酸酯；
r2为羟基、烷氧基(小于12个碳)、酯基、2-氧乙酸基、2-氧乙酸酯、2-氧乙酰胺及酰胺衍生物；
r3选自氢及取代磺胺基；r3可以在如结构式(i)所示的3号位或4号位；
r4选自自烷基(小于12个碳)、环烷基、胺基、n-氮杂环烷基、苯基、吡啶基、萘基、噻唑、联苯基、喹啉基以及上述基团的取代衍生物，其中取代衍生物的取代基选自f，cl，br，i，烷基，烷氧基，no2，cn，-cf3，-ocf3，羟基、酯基、氨基、酰胺基及取代胺基中的任意一个到五个取代基；
r5选自氢，甲基，烷基，环烷基及上述基团的取代衍生物；
r2与r5可以进行连接环合，连接的原子数为2-4个，连接原子为氧或碳原子。
本发明中，r1、r2为羟基时，r3为3位取代的磺酰胺类衍生物。
本发明中，r3为3位取代的磺酰胺类衍生物时，r4选自自烷基(小于12个碳)、环烷基、胺基、n-氮杂环烷基、苯基、吡啶基、萘基、噻唑、联苯基、喹啉基、异喹啉基以及上述基团的取代衍生物，其中取代衍生物的取代基选自f，cl，br，i，烷基，烷氧基，no2，cn，-cf3，-ocf3，羟基、酯基、氨基、n-氮杂环烷基、酰胺基及取代胺基中的任意一个到五个取代基。
本发明中，r3为3位取代的磺酰胺类衍生物，r4为取代苯基时，苯环上取代基选自f，cl，br，i，烷基，烷氧基，no2，cn，-cf3，-ocf3，羟基、酯基、氨基、n-氮杂环烷基、酰胺基及取代胺基中的任意一个到五个取代基。
本发明中，可以进一步地描述为式ⅰ-1～式ⅰ-62的化合物：
本发明中部分化合物含有酸性基团如羧基、羟基等可与碱成盐，也有部分化合物含有碱性基团如胺基等能与酸成盐，采用普通手段可以形成衍生物的盐。包括有机酸盐如乙酸盐、枸橼酸盐、富马酸盐、马来酸盐、草酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、樟脑磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、三氟醋酸盐、三氟甲磺酸盐等；无机酸盐如氢卤酸(氢氟酸、氢氯酸、氢溴酸、氢碘酸)盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐等。或与氨基酸，如谷氨酸或天冬氨酸可形成谷氨酸盐或天冬氨酸盐。
本发明9,10-蒽醌类化合物的溶剂合物也属本发明的保护范围，其溶剂优选为水、乙醇或甲醇。
本发明的第二个目的是提供式(i)所示的9,10蒽醌类化合物在制备磷酸甘油酸变位酶小分子抑制剂中的用途。本发明采用文献报道的酶联定量检测方法测定式(i)所示的9,10-蒽醌类化合物对磷酸甘油酸变位酶的抑制活性(cancercell.2012；22(5):585-600)，通过其中的nadh的含量变化计算出抑制剂对磷酸甘油酸变位酶催化3pg转变为2pg活性的改变。
基于酶联法的活性测试实验表明，式(i)所示的9,10-蒽醌类化合物具有亚微摩尔级的磷酸甘油酸变位酶抑制活性，是抑制磷酸甘油酸变位酶的有效成分；酶联法检测所述化合物对磷酸甘油酸变位酶的抑制活性如表1所示。
本发明的进一步目的是提供式(i)所示的9,10-蒽醌类化合物及其盐类或溶剂合物在治疗癌症中的用途，通过多种肿瘤细胞的体外抗肿瘤活性测试表明，所述化合物具有亚微摩尔级的抗肿瘤活性，活性结果如表1所示。
本发明通过实验证实，本发明公开的化合物与现有技术的磷酸甘油酸变位酶小分子抑制剂pgmi-004a相比，其对磷酸甘油酸变位酶的抑制活性显著高于pgmi-004a。本发明所述化合物，与pgmi-004a母核结构相同，但是由于本发明对蒽醌环的3位取代基进行优化，导致合成的新化合物活性显著提高，超出了可预计的范围，因而认为本发明所报道的化合物是新颖的。
在上述药物中还可以含有一种或多种药学上可接受的载体，所述载体包括药学领域的常规稀释剂，赋形剂，填充剂，粘合剂，湿润剂，崩解剂，吸收促进剂，表面活性剂，吸附载体，润滑剂等，必要时还可以加入香味剂，甜味剂等。
本发明的有益效果在于所提供的9,10-蒽醌类化合物是一类结构新颖的磷酸甘油酸变位酶抑制剂，具有亚微摩尔级的分子水平抑制活性，具有良好的潜力和应用前景，可进一步制成为治疗癌症的药物，所述的癌症为胰腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、肠癌、乳腺癌、宫颈癌、白血病或黑色素瘤。
具体实施方式
实施例1
制备二乙基2,2’-((9,10-二氧-9,10-二氢蒽-1,2-基)二氧)二乙酸酯(1)
向100ml圆底烧瓶中加入1,2-二羟基蒽-9,10-二酮(1.2g，5mmol)、碳酸钾(1.66g，12mmol)、溴乙酸乙酯(2g，12mmol)和n,n-二甲基甲酰胺(50ml)，80℃反应，tlc检测原料点消失停止反应。待反应液冷却至室温后，将反应液逐滴加入约350ml的10％盐酸中，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)，得黄色固体0.89g，产率43％。ms(esi)(m/z):413.1(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.13–8.07(m,2h),7.98(d,j＝8.7hz,1h),7.90–7.81(m,2h),7.50(d,j＝8.8hz,1h),5.04(s,2h),4.71(s,2h),4.17(qd,j＝4.2,7.2hz,4h),1.20(td,j＝2.6,7.2hz,6h).。
实施例2
制备2,2’-((9,10-二氧-9,10-二氢蒽-1,2-基)二氧)二乙酸(2)
向50ml圆底烧瓶中加入1(206mg,0.5mmol)、0.5m氢氧化锂水溶液(8ml)和甲醇(8ml)，30℃反应，tlc检测原料点消失停止反应。减压去除甲醇，把反应液逐滴加入约10％盐酸中，调ph1-2，析出黄色固体169mg，产率95％。ms(esi)(m/z):355.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.71(brs,2h),8.09(dt,j＝1.4,7.3hz,2h),7.96(d,j＝8.7hz,1h),7.84(m,2h),7.46(d,j＝8.8hz,1h),4.93(s,2h),4.62(s,2h).。
实施例3
制备2-((1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)氧)-n,n-二甲基乙酰胺(3)
一、制备乙基2-((1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-1,2-基)氧)乙酸酯(hkb-2)
hkb-2的制备方法同1，碳酸钾的量更换为0.83g，溴乙酸乙酯的量更换为1g，得橘黄色固体，产率48％。
二、制备2,-((1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-1,2-基)氧)乙酸(hkb-3)
hkb-3的制备方法同2，得橘黄色固体，产率95％。
三、制备2-((1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)氧)-n,n-二甲基乙酰胺(3)
向50ml圆底烧瓶中加入hkb-3(149mg,0.5mmol)、二甲氨基盐酸盐(31mg,0.68mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(120mg,0.6mmol)、1-羟基苯并三唑(80mg,0.6mmol)、n,n-二异丙基乙胺(175μl,1mmol)和干燥的n,n-二甲基甲酰胺(10ml)，室温反应，tlc检测原料点消失停止反应。把反应液逐滴加入约140ml水中，抽滤得橘红色固体114mg，产率70％。ms(esi)(m/z):324.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.68(s,1h),8.22–8.05(m,2h),7.93–7.81(m,2h),7.62(d,j＝8.5hz,1h),7.24(d,j＝8.5hz,1h),5.03(s,2h),2.96(s,3h),2.80(s,3h).。
实施例4
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-甲基苯磺酰胺(4)
一、制备3-硝基-1,2-二羟基蒽-9,10-二酮(hkb-10)
向1l圆底烧瓶中加入1,2-二羟基蒽-9,10-二酮(5g,20.8mmol)和冰醋酸(350ml)，50℃搅拌约10分钟，逐滴加入1.5ml浓硝酸，tlc检测原料点消失停止反应，待反应液恢复至室温后，抽滤得黄色固体，该粗产品可不经纯化直接用于下步反应,粗产率70％。
二、制备3-氨基-1,2-二羟基蒽-9,10-二酮(hkb-11)
向1l圆底烧瓶中加入hkb-10(1.75g,6.14mmol)和无水乙醇(350ml)，室温搅拌，依次加入锡粉(10.5g,341mmol)和二水合氯化亚锡(12.5g,55.4mmol)，再逐滴加入50.4ml浓盐酸，tlc检测原料点消失停止反应，抽滤除去锡粉，减压浓缩除去部分乙醇，将剩余反应液逐滴加入1l水中，抽滤并真空干燥得黑色固体，该粗产品可不经纯化直接用于下步反应，粗产率90％。
三、制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-甲基苯磺酰胺(4)
向25ml圆底烧瓶中加入hkb-11(255mg,1mmol)和干燥吡啶(5ml)，室温搅拌，缓慢加入对甲苯磺酰氯(286mg,1.5mmol)，反应4h。将反应液逐滴加入10％盐酸中，调ph1-2，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析分离(二氯甲烷)，得橙红色固体205mg，产率50％。ms(esi)(m/z):408.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.59(brs,1h),10.90(brs,1h),10.25(brs,1h),8.21–8.09(m,2h),7.93–7.85(m,2h),7.80(d,j＝8.2hz,2h),7.76(s,1h),7.40(d,j＝8.0hz,2h),2.35(s,3h).。
实施例5
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-硝基苯磺酰胺(5)
5的制备方法同4，将5反应三中的对甲苯磺酰氯换成对硝基苯磺酰氯，橘红色固体，产率50％。ms(esi)(m/z):439.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.58(brs,1h),10.95(brs,1h),10.76(brs,1h),8.38(d,j＝8.2hz,2h),8.22–8.04(m,4h),7.95–7.83(m,2h),7.70(s,1h).。
实施例6
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)甲磺酰胺(6)
6的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成甲磺酰氯，暗黄色固体，产率45％。ms(esi)(m/z):332.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.59(brs,1h),10.91(brs,1h),9.50(brs,1h),8.10(dt,j＝5.0,17.2hz,2h),7.90–7.76(m,2h),7.72(s,1h),3.08(s,3h).。
实施例7
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰胺(7)
7的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成苯磺酰氯，暗红色固体，产率55％。ms(esi)(m/z):394.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.52(brs,1h),10.83(brs,1h),10.29(brs,1h),8.14–8.03(m,2h),7.83(q,j＝4.9hz,4h),7.68(s,1h),7.55(dt,j＝7.6,15.5hz,3h).。
实施例8
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)噻吩-2-磺酰胺(8)
8的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成噻吩-2-磺酰氯，黄色固体，产率50％。ms(esi)(m/z):400.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.51(brs,1h),10.64(brs,2h),8.16–8.01(m,2h),7.93–7.72(m,4h),7.59(d,j＝3.7hz,1h),7.10(t,j＝4.5hz,1h).。
实施例9
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-三氟甲基苯磺酰胺(9)
9的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成对三氟甲基苯磺酰氯，黄色固体，产率25％。ms(esi)(m/z):462.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.57(brs,1h),10.87(brs,1h),10.64(brs,1h),8.19–8.09(m,2h),8.06(d,j＝8.3hz,2h),7.98(d,j＝8.4hz,2h),7.92–7.83(m,2h),7.70(s,1h).。
实施例10
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-氰基苯磺酰胺(10)
10的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成对氰基苯磺酰氯，暗红色固体，产率60％。ms(esi)(m/z):419.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.57(brs,1h),10.74(brs,2h),8.19–8.10(m,2h),8.07(d,j＝8.1hz,2h),7.99(d,j＝8.2hz,2h),7.93–7.84(m,2h),7.68(s,1h).。
实施例11
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)萘-2-磺酰胺(11)
11的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成萘-2-磺酰氯，暗红色固体，产率65％。ms(esi)(m/z):444.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.45(brs,1h),10.58(brs,2h),8.48(s,1h),8.15–7.66(m,9h),7.60(p,j＝7.0hz,2h).。
实施例12
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)萘-1-磺酰胺(12)
12的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成萘-1-磺酰氯，黄色固体，产率65％。ms(esi)(m/z):444.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.50(brs,1h),10.82(brs,1h),10.71(brs,1h),8.78(d,j＝8.6hz,1h),8.27–8.16(m,2h),8.06(dd,j＝7.4,13.0hz,3h),7.80(qd,j＝3.6,7.8hz,2h),7.72–7.58(m,4h).。
实施例13
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-氟苯磺酰胺(13)
13的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成对氟苯磺酰氯，黄色固体，产率62％。ms(esi)(m/z):412.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.52(brs,1h),10.78(brs,1h),10.37(brs,1h),8.13–8.05(m,2h),7.94–7.78(m,4h),7.67(s,1h),7.39(t,j＝8.7hz,2h).。
实施例14
制备4-氯-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰胺(14)
14的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成对氯苯磺酰氯，黄色固体，产率56％。ms(esi)(m/z):427.8(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.57(brs,1h),10.91(brs,1h),10.43(brs,1h),8.18–8.07(m,2h),7.93–7.80(m,4h),7.74–7.60(m,3h).。
实施例15
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)喹啉-8-磺酰胺(15)
15的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成喹啉-8-磺酰氯，暗红色固体，产率40％。ms(esi)(m/z):445.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.42(brs,1h),11.10(brs,1h),9.42(brs,1h),9.05(d,j＝4.1hz,1h),8.52(d,j＝8.3hz,1h),8.40(d,j＝7.3hz,1h),8.28(d,j＝8.2hz,1h),8.06(t,j＝6.4hz,2h),7.89–7.76(m,3h),7.75–7.66(m,2h).。
实施例16
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)环己基磺酰胺(16)
16的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成环己基磺酰氯，橘黄色固体，产率60％。ms(esi)(m/z):400.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.65(brs,1h),10.99(brs,1h),9.46(brs,1h),8.19–8.07(m,2h),7.91–7.79(m,3h),3.05(tt,j＝3.5,12.0hz,1h),2.05(d,j＝12.4hz,2h),1.72(d,j＝12.4hz,2h),1.54(d,j＝12.1hz,1h),1.38(qd,j＝3.3,12.6hz,2h),1.25–1.00(m,3h).。
实施例17
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-3,4-二甲氧基苯磺酰胺(17)
17的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成3,4-二甲氧基苯磺酰氯，暗红色固体，产率45％。ms(esi)(m/z):454.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.57(s,1h),10.91(s,1h),10.09(s,1h),8.14–8.04(m,2h),7.89–7.78(m,2h),7.74(s,1h),7.51–7.42(m,2h),7.09(d,j＝8.6hz,1h),3.78(s,3h),3.76(s,3h).。
实施例18
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)丁烷-1-磺酰胺(18)
18的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成丁烷-1-磺酰氯，橘黄色固体，产率39％。ms(esi)(m/z):374.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.61(brs,1h),10.95(brs,1h),9.55(brs,1h),8.18–8.07(m,2h),7.91–7.80(m,2h),7.76(s,1h),3.21–3.13(m,2h),1.66(p,j＝7.7hz,2h),1.32(h,j＝7.4hz,2h),0.80(t,j＝7.3hz,3h).。
实施例19
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-[1,1’-联苯]-4-磺酰胺(19)
19的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成[1,1’-联苯]-4-磺酰氯，橙红色固体，产率60％。ms(esi)(m/z):470.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.53(brs,1h),10.70(brs,1h),10.55(brs,1h),8.15–8.03(m,2h),7.93(d,j＝8.3hz,2h),7.88–7.77(m,4h),7.76(s,1h),7.66(d,j＝7.6hz,2h),7.39(dt,j＝7.4,26.0hz,3h).。
实施例20
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)吗啉-4-磺酰胺(20)
20的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成吗啉-4-磺酰氯，暗红色固体，产率49％。ms(esi)(m/z):403.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.62(brs,1h),10.93(brs,1h),9.81(brs,1h),8.13(dt,j＝4.9,18.3hz,2h),7.91–7.81(m,2h),7.80(s,1h),3.52(t,j＝4.5hz,4h),3.06(t,j＝4.6hz,4h).。
实施例21
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-2,4-二甲氧基苯磺酰胺(21)
21的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成2,4-二甲氧基苯磺酰氯，黄色固体，产率66％。ms(esi)(m/z):454.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.59(brs,1h),11.00(brs,1h),9.08(brs,1h),8.17–8.05(m,2h),7.90–7.80(m,2h),7.76(s,1h),7.71(d,j＝8.8hz,1h),6.66(d,j＝2.3hz,1h),6.60(dd,j＝2.3,8.8hz,1h),3.82(s,3h),3.76(s,3h).。
实施例22
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-n’,n’-二甲基磺二胺(22)
22的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成二甲氨基磺酰氯，橘黄色固体，产率45％。ms(esi)(m/z):361.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.68(brs,1h),10.95(brs,1h),9.74(brs,1h),8.18(d,j＝18.5hz,2h),7.92(s,2h),7.84(s,1h),2.77(s,6h).。
实施例23
制备2,4-二氯-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰胺(23)
23的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成2,4-二氯苯磺酰氯，橘红色固体，产率60％。ms(esi)(m/z):461.8(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.56(brs,1h),10.94(brs,1h),10.50(brs,1h),8.14–8.02(m,2h),7.95(d,j＝8.6hz,1h),7.89–7.78(m,3h),7.62–7.57(m,2h).。
实施例24
制备4-氯-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺(24)
24的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成4-氯-3-三氟甲基苯磺酰氯，黄色固体，产率71％。ms(esi)(m/z):495.8(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.55(brs,1h),10.96(brs,1h),10.61(brs,1h),8.26(d,j＝2.2hz,1h),8.16–8.07(m,2h),8.03(dd,j＝2.2,8.4hz,1h),7.92(d,j＝8.5hz,1h),7.91–7.80(m,2h),7.64(s,1h).。
实施例25
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-氟-3-三氟甲基苯磺酰胺(25)
25的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成4-氟-3-三氟甲基苯磺酰氯，黄色固体，产率50％。ms(esi)(m/z):480.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.55(brs,1h),10.94(brs,1h),10.55(brs,1h),8.24(dd,j＝2.2,6.7hz,1h),8.17–8.07(m,3h),7.92–7.81(m,2h),7.72(t,j＝9.6hz,1h),7.65(s,1h).。
实施例26
制备5-氯-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)噻吩-2-磺酰胺(26)
26的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成5-氯噻吩-2-磺酰氯，黄色固体，产率52％。ms(esi)(m/z):433.8(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.61(brs,1h),10.98(brs,1h),10.69(brs,1h),8.22–8.12(m,2h),7.94–7.86(m,2h),7.75(s,1h),7.48(d,j＝4.1hz,1h),7.22(d,j＝4.1hz,1h).。
实施例27
制备2,4,6-三氯-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰胺(27)
27的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成2,4,6-三氯苯磺酰氯，黄色固体，产率10％。ms(esi)(m/z):495.8(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.57(brs,1h),10.91(brs,1h),10.69(brs,1h),8.17–8.05(m,2h),7.88-7.83(m,4h),7.61(s,1h).。
实施例28
制备2,6-二氯-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰胺(28)
28的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成2,6-二氯苯磺酰氯，红色固体，产率12％。ms(esi)(m/z):461.8(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.54(brs,1h),10.93(brs,1h),10.48(brs,1h),8.06(dt,j＝5.7,14.9hz,2h),7.86–7.75(m,2h),7.59(d,j＝8.6hz,3h),7.50(t,j＝8.1hz,1h).。
实施例29
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-三氟甲氧基苯磺酰胺(29)
29的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成4-三氟甲氧基苯磺酰氯，黄色固体，产率41％。ms(esi)(m/z):478.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.58(brs,1h),10.91(brs,1h),10.48(brs,1h),8.19–8.09(m,2h),8.02–7.96(m,2h),7.92–7.82(m,2h),7.71(s,1h),7.58(dd,j＝1.1,9.1hz,2h).。
实施例30
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-2-三氟甲氧基苯磺酰胺(30)
30的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成2-三氟甲氧基苯磺酰氯，黄色固体，产率40％。ms(esi)(m/z):477.8(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.59(brs,1h),10.97(brs,1h),10.34(brs,1h),8.21–8.06(m,2h),7.97(dd,j＝1.8,8.0hz,1h),7.93–7.83(m,2h),7.80–7.72(m,1h),7.68(s,1h),7.60–7.48(m,2h).。
实施例31
制备4-环己基-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰胺(31)
31的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成4-环己基苯磺酰氯，橘黄色固体，产率52％。ms(esi)(m/z):476.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.55(brs,1h),10.92(brs,1h),10.34(brs,1h),8.17–8.06(m,2h),7.91–7.72(m,5h),7.42(d,j＝8.2hz,2h),2.53(t,j＝3.1hz,1h),1.68(dd,j＝10.8,26.2hz,5h),1.42–1.10(m,5h).。
实施例32
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-2,3,4,5,6-五氟苯磺酰胺(32)
32的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成2,3,4,5,6-五氟苯磺酰氯，橘黄色固体，产率15％。ms(esi)(m/z):483.8(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.57(brs,1h),10.91(brs,2h),8.19–8.09(m,2h),7.92–7.83(m,2h),7.61(s,1h).。
实施例33
制备4-叔丁基-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰胺(33)
33的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成4-叔丁基苯磺酰氯，橘黄色固体，产率65％。ms(esi)(m/z):450.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.54(brs,1h),10.87(brs,1h),10.24(brs,1h),8.12–8.03(m,2h),7.86–7.73(m,5h),7.57(d,j＝8.3hz,2h),1.20(s,9h).。
实施例34
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4’-氟-[1,1’-联苯]-4-磺酰胺(34)
34的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成4’-氟-[1,1’-联苯]-4-磺酰氯，橘红色固体，产率53％。ms(esi)(m/z):488.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.55(brs,1h),10.91(brs,1h),10.34(brs,1h),8.14–8.03(m,2h),7.93(d,j＝8.2hz,2h),7.84(dd,j＝2.7,7.9hz,4h),7.78–7.68(m,3h),7.26(t,j＝8.7hz,2h).。
实施例35
制备4’-氯-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-[1,1’-联苯]-4-磺酰胺(35)
35的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成4’-氯-[1,1’-联苯]-4-磺酰氯，黄色固体，产率55％。ms(esi)(m/z):504.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.56(brs,1h),10.91(brs,1h),10.37(brs,1h),8.15–8.06(m,2h),7.96–7.81(m,6h),7.76(s,1h),7.71(d,j＝8.6hz,2h),7.50(d,j＝8.3hz,2h).。
实施例36
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-2-氟苯磺酰胺(36)
36的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成2-氟苯磺酰氯，黄色固体，产率42％。ms(esi)(m/z):412.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.56(brs,1h),10.90(brs,1h),10.44(brs,1h),8.16–8.03(m,2h),7.90–7.75(m,3h),7.71–7.62(m,2h),7.40(t,j＝9.4hz,1h),7.32(t,j＝7.7hz,1h).。
实施例37
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-2,3-二氟苯磺酰胺(37)
37的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成2,3-二氟苯磺酰氯，暗红色固体，产率52％。ms(esi)(m/z):412.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.57(brs,1h),10.80(brs,2h),8.20–8.08(m,2h),7.93–7.83(m,2h),7.76(q,j＝8.6hz,1h),7.66(s,1h),7.59(t,j＝7.0hz,1h),7.41–7.31(m,1h).。
实施例38
制备3-溴-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰胺(38)
38的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成3-溴苯磺酰氯，黄色固体，产率54％。ms(esi)(m/z):473.8(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.54(brs,1h),10.93(brs,1h),10.48(brs,1h),8.15–8.05(m,2h),8.04(s,1h),7.88–7.77(m,4h),7.65(s,1h),7.51(t,j＝8.0hz,1h).。
实施例39
制备2-溴-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰胺(39)
39的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成2-溴苯磺酰氯，暗黄色固体，产率46％。ms(esi)(m/z):471.8(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.57(brs,1h),11.05(brs,1h),10.19(brs,1h),8.14–8.00(m,3h),7.88–7.79(m,3h),7.61–7.48(m,3h).。
实施例40
制备2-碘-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰胺(40)
40的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成2-碘苯磺酰氯，暗黄色固体，产率48％。ms(esi)(m/z):519.8(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.59(brs,1h),11.13(brs,1h),9.98(brs,1h),8.15–8.01(m,4h),7.88–7.80(m,2h),7.60(s,1h),7.56(td,j＝1.2,7.7hz,1h),7.28(td,j＝1.6,7.6hz,1h).。
实施例41
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-3-甲氧基苯磺酰胺(41)
41的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成3-甲氧基苯磺酰氯，橘黄色固体，产率51％。ms(esi)(m/z):424.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.55(brs,1h),10.91(brs,1h),10.31(brs,1h),8.14–8.03(m,2h),7.88–7.78(m,2h),7.70(s,1h),7.50–7.38(m,3h),7.16(dt,j＝2,8hz,1h),3.76(s,3h).。
实施例42
制备乙基2-((4-((4-氯苯基)磺酰胺基)-1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)氧)乙酸酯(42)
一、制备乙基2-((1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-1,2-基)氧)乙酸酯(hkb-2)
hkb-2的制备方法同hkb-6制备方法的反应一。
二、制备乙基2-((1-羟基-4-硝基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-1,2-基)氧)乙酸酯(hkb-12)
hkb-12的制备方法同4制备方法的反应一，将其中的1,2-二羟基蒽-9,10-二酮换成乙基2-((1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-1,2-基)氧)乙酸酯(hkb-2)，得黄色固体，产率73％。
三、制备乙基2-((4-氨基-1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-1,2-基)氧)乙酸酯(hkb-18)
hkb-18的制备方法同4制备方法的反应二，将其中的3-硝基-1,2-二羟基蒽-9,10-二酮(hkb-10)换成乙基2-((1-羟基-4-硝基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-1,2-基)氧)乙酸酯(hkb-12)，得紫色固体，粗产率93％。
四、制备乙基2-((4-((4-氯苯基)磺酰胺基)-1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-
基)氧)乙酸酯(42)
42的制备方法同4，将制备4的反应三中的对甲苯磺酰氯换成对氯苯磺酰氯，将3-氨基-1,2-二羟基蒽-9,10-二酮(hkb-11)换成乙基2-((4-氨基-1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-1,2-基)氧)乙酸酯(hkb-18)，红色固体，产率6％。ms(esi)(m/z):514.2(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.31(s,1h),12.39(s,1h),8.14(d,j＝7.2hz,2h),7.89(p,j＝7.3hz,2h),7.81(d,j＝8.3hz,2h),7.59(d,j＝8.3hz,2h),7.26(s,1h),5.04(s,2h),4.19(q,j＝7.1hz,2h),1.21(t,j＝7.1hz,3h).。
实施例43
制备2-((4-((4-氯苯基)磺酰胺基)-1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)氧)乙酸(43)
43的制备方法同制备3的反应二，将乙基2-((1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-1,2-基)氧)乙酸酯(hkb-2)换成乙基2-((4-((4-氯苯基)磺酰胺基)-1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)氧)乙酸酯(42)，红色固体，产率95％。ms(esi)(m/z):485.8(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.30(s,1h),12.46(s,1h),8.12(d,j＝6.5hz,2h),7.85(dt,j＝7.4,23.9hz,4h),7.57(d,j＝8.2hz,2h),7.29(s,1h),4.93(s,2h).。
实施例44
制备乙基2-((3-((4-氯苯基)磺酰胺基)-1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)氧)乙酸酯(44)
44的制备方法同3制备方法的反应一，将1,2-二羟基蒽-9,10-二酮换成4-氯-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰胺(14)，黄色固体，产率24％。ms(esi)(m/z):514.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.65(s,1h),10.51(s,1h),8.14–8.01(m,2h),7.92–7.78(m,4h),7.69(s,1h),7.63(d,j＝8.3hz,2h),4.77(s,2h),4.10(q,j＝7.1hz,2h),1.14(t,j＝7.2hz,3h).。
实施例45
制备2-((3-((4-氯苯基)磺酰胺基)-1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)氧)乙酸(45)
45的制备方法同2，将二乙基2,2’-((9,10-二氧-9,10-二氢蒽-1,2-基)二氧)二乙酸酯(1)换成乙基2-((3-((4-氯苯基)磺酰胺基)-1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)氧)乙酸酯(44)，黄色固体，产率95％。ms(esi)(m/z):486.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.67(s,1h),8.14–8.05(m,2h),7.92–7.82(m,4h),7.70(s,1h),7.66(d,j＝8.6hz,2h),4.75(s,2h).。
实施例46
制备4-氯-n-(4-羟基-3-甲氧基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰氯(46)
向25ml圆底烧瓶中加入4-氯-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰胺(14)(215mg,0.5mmol)、碳酸钾(70mg,0.5mmol)、碘化钾(70mg,12mmol)和n,n-二甲基甲酰胺(2.5ml)，室温反应，tlc检测原料点消失停止反应。待反应液冷却至室温后，将反应液逐滴加入约20ml的10％盐酸中，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析分离(石油醚：二氯甲烷＝1:9)，得黄色固体115mg，产率52％。ms(esi)(m/z):442.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.66(brs,1h),11.00(brs,1h),8.26–8.12(m,2h),7.97–7.87(m,2h),7.68(q,j＝8.5hz,4h),7.42(s,1h),3.18(s,3h).。
实施例47
制备4-氯-n-(4-羟基-3-甲氧基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-n-甲基苯磺酰氯(47)
47的制备方法同46，室温改为40℃，得橘黄色固体，产率50％。ms(esi)(m/z):456.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.73(s,1h),8.22–8.07(m,2h),7.95–7.86(m,2h),7.70(q,j＝8.5hz,4h),7.35(s,1h),3.74(s,3h),3.17(s,3h).。
实施例48
制备4-((4-氯苯基)磺酰基)-12-羟基-3,4-二氢-2h-蒽[2,3-b][1,4]嗪-6,11-二酮(48)
48的制备方法同1，溴乙酸乙酯更换为1,2-二溴乙烷，得橘黄色固体，产率32％。ms(esi)(m/z):456.0(m+h)+.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.59(s,1h),8.13(t,j＝8.2hz,2h),8.07(s,1h),7.93–7.83(m,2h),7.79(d,j＝8.4hz,2h),
7.67(d,j＝8.3hz,2h),4.01(dd,j＝4.5,16.7hz,4h).。
实施例49
制备4-氯-n-(3-(2-(1,3-二氧异吲哚-2-基)乙氧基)-4-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰胺(49)
一、制备2-(2-溴乙基)异吲哚-1,3-二酮
2-(2-溴乙基)异吲哚-1,3-二酮的制备方法同1，溴乙酸乙酯的量更换为1,2-二溴乙烷，碳酸钾换成氢氧化钾，得白色固体,产率73％。
二、制备4-氯-n-(3-(2-(1,3-二氧异吲哚-2-基)乙氧基)-4-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢
蒽-2-基)苯磺酰胺(49)
49的制备方法同1，溴乙酸乙酯更换为2-(2-溴乙基)异吲哚-1,3-二酮，得橘红色固体，产率65％。ms(esi)(m/z):601.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.54(s,1h),10.64(s,1h),8.05(d,j＝6.6hz,2h),7.90–7.68(m,9h),7.63(d,j＝8.3hz,2h),4.22(t,j＝5.6hz,2h),3.95(t,j＝5.6hz,2h).。
实施例50
制备4-氯-n-(3-(2-酰肼-2-乙氧基)-4-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰氯(50)
将44(20mg,0.04mmol)、水合肼(85％,5μl,0.16mmol)和乙醇(1.5ml)加入5ml圆底烧瓶中，76℃回流，tlc检测原料点消失停止反应，反应液析出黄色固体，抽滤得14mg，产率72％。ms(esi)(m/z):500.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.93(brs,1h),8.41–7.34(m,9h),4.51(s,2h).。
实施例51
制备3-((4-氯苯基)磺酰胺基)-1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基甲磺酸酯(51)
将14(107mg,0.25mmol)、n,n-二异丙基乙胺(50μl,0.3mmol)和吡啶(1.5mmol)加入5ml圆底烧瓶中，再加入甲磺酰氯(23μl,0.3mmol)，室温反应4h。将反应液逐滴加入10％盐酸中，调ph1-2，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析分离(二氯甲烷)，得黄色固体83mg，产率65％。ms(esi)(m/z):505.8(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.74(s,1h),8.11–8.02(m,2h),7.97(d,j＝8.6hz,2h),7.87–7.80(m,2h),7.71(d,j＝8.3hz,2h),7.59(s,1h),3.60(s,3h).。
实施例52
制备3-([1,1’-联苯]-4-磺酰胺基)-1-羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基乙酸酯(52)
52的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成乙酰氯，hkb-11换成19，黄色固体，产率42％。ms(esi)(m/z):470.1(m-ac)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.50(s,1h),11.21(brs,1h),8.13–8.03(m,2h),8.02–7.77(m,7h),7.66(d,j＝7.6hz,2h),7.39(dt,j＝7.4,24.8hz,3h),2.31(s,3h).。
实施例53
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-(哌啶-1基)苯磺酰胺(53)
一、制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-碘苯磺酰胺
n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-碘苯磺酰胺的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成对碘苯磺酰氯，得黄色固体，产率54％。
二、制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-(哌啶-1基)苯磺酰胺(53)
把n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-碘苯磺酰胺(52.1mg,0.1mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(9.2mg,0.01mmol)、(±)-2,2'-双-(二苯膦基)-1,1'-联萘(9.3mg,0.015mmol)、叔丁醇钠(48.1mg,0.5mmol)和哌啶(1ml)加入5ml圆底烧瓶，依次抽真空、充氮气三次，80℃反应，tlc检测原料点消失停止反应。待反应液冷却至室温后，将反应液逐滴加入约20ml的10％盐酸中，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析分离(二氯甲烷)，得橘红色固体33mg，产率68％。ms(esi)(m/z):477.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.15–8.03(m,2h),7.88–7.79(m,2h),7.76(s,1h),7.61(d,j＝8.7hz,2h),6.92(d,j＝8.8hz,2h),3.43–3.14(m,8h),1.04(t,j＝7.0hz,2h).。
实施例54
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯磺酰胺(54)
54的制备方法同53，将反应二中的哌啶换成甲基哌嗪，暗黄色固体，产率42％。ms(esi)(m/z):492.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.75(brs,2h),8.15(dd,j＝6.5,15.5hz,2h),7.95–7.84(m,2h),7.80(s,1h),7.75(d,j＝8.6hz,2h),7.12(d,j＝8.7hz,2h),3.38(s,4h),3.23(s,4h),2.76(s,3h).。
实施例55
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-(3,5-二甲基哌啶-1-基)苯磺酰胺(55)
55的制备方法同53，将反应二中的哌啶换成3,5-二甲基哌啶，橘黄色固体，产率63％。ms(esi)(m/z):505.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.56(brs,1h),10.81(brs,1h),9.83(brs,1h),8.17–8.05(m,2h),7.90–7.80(m,2h),7.76(s,1h),7.60(d,j＝8.9hz,2h),6.94(d,j＝8.9hz,2h),3.80(d,j＝12.2hz,2h),2.24(t,j＝12.2hz,2h),1.67(d,j＝12.9hz,1h),1.58–1.41(m,2h),1.04(t,j＝7.0hz,1h),0.80(d,j＝6.6hz,6h).。
实施例56
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-(吡咯烷-1-基)苯磺酰胺(56)
56的制备方法同53，将反应二中的哌啶换成吡咯烷，黄色固体，产率65％。ms(esi)(m/z):463.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.60(brs,1h),10.83(brs,1h),9.80(brs,1h),8.20–8.08(m,2h),7.93–7.84(m,2h),7.82(s,1h),7.66(d,j＝8.8hz,2h),6.56(d,j＝8.7hz,2h),3.24(t,j＝6.4hz,4h),1.96–1.84(m,4h).。
实施例57
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-3-(吡咯烷-1-基)苯磺酰胺(57)
57的制备方法同53，将反应二中的哌啶换成吡咯烷，n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-碘苯磺酰胺换成38，暗红色固体，产率51％。ms(esi)(m/z):463.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.55(brs,1h),10.87(brs,1h),10.13(brs,1h),8.14–8.04(m,2h),7.88–7.78(m,2h),7.75(s,1h),7.27(t,j＝7.9hz,1h),7.06–6.98(m,2h),6.67(d,j＝8.2hz,1h),3.16(t,j＝6.4hz,4h),1.96–1.83(m,4h).。
实施例58
制备4-(氮杂环丁烷-1-基)-n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)苯磺酰胺(58)
58的制备方法同53，将反应二中的哌啶换成氮杂环丁烷，橘红黄色固体，产率63％。ms(esi)(m/z):449.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.58(brs,1h),10.82(brs,1h),9.81(brs,1h),8.17–8.08(m,2h),7.92–7.82(m,2h),7.77(s,1h),7.63(d,j＝8.8hz,2h),6.38(d,j＝8.8hz,2h),3.85(t,j＝7.3hz,4h),2.27(p,j＝7.3hz,2h).。
实施例59
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-2-(吡咯烷-1-基)苯磺酰胺(59)
将36(143mg,0.34mmol)、叔丁醇钠(166mg,1.7mmol)和吡咯烷(2ml)加入10ml圆底烧瓶，90℃反应，tlc检测原料点消失停止反应。待反应液冷却至室温后，将反应液逐滴加入约20ml的10％盐酸中，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析分离(二氯甲烷)，得橘黄色固体103mg，产率65％。ms(esi)(m/z):463.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.58(brs,1h),11.20(brs,1h),9.56(brs,1h),8.16–8.02(m,2h),7.88–7.78(m,3h),7.69(s,1h),7.47(t,j＝7.8hz,1h),7.34(d,j＝8.1hz,1h),7.07(t,j＝7.6hz,1h),3.16(t,j＝6.0hz,4h),1.85(t,j＝6.0hz,4h).。
实施例60
制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-二甲氨基苯磺酰胺(60)
一、制备4-二甲氨基苯磺酰氯
将4-二甲氨基苯磺酸(402mg,2mmol)加入5.5ml的干燥二氯甲烷中，搅拌使其溶解，再缓慢加入五氯化磷(458mg,2.2mmol)搅拌1.5h，此步反应可不经处理纯化直接进行下步反应。
二、制备n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-二甲氨基苯磺酰胺
60的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成上步的4-二甲氨基苯磺酰氯反应液，红色固体，产率20％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.59(brs,1h),10.79(brs,1h),9.79(brs,1h),8.23–8.11(m,2h),7.95–7.79(m,3h),7.67(d,j＝8.6hz,2h),6.74(d,j＝8.6hz,3h),2.95(s,6h).。
实施例61
制备2-(n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)磺酰胺基)苯基乙酸酯(61)一、制备2-乙酰氧基苯磺酸钠
将2-羟基苯磺酸钠(2g,10mmol)和乙酰氯(10ml)加入干燥的50ml圆底烧瓶中，50℃反应5h，减压浓缩去除乙酰氯，此步反应可不经纯化直接进入下步反应。
二、制备2-(磺酰氯基)苯基乙酸酯
向上步所得2-乙酰氧基苯磺酸钠中加入二氯亚砜(10ml)和一滴n,n-二甲基甲酰胺，反应5h，减压浓缩去除二氯亚砜，用5ml甲苯洗涤残存液体并减压浓缩去除甲苯三次，得灰色油状液体，该粗产物可不经纯化，直接进行下步反应。三、制备2-(n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)磺酰胺基)苯基乙酸酯
61的制备方法同4，将4反应三中的对甲苯磺酰氯换成上步所得的2-(磺酰氯基)苯基乙酸酯，暗黄色固体，产率40％。ms(esi)(m/z):463.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.07–7.96(m,2h),7.83–7.70(m,4h),7.63(s,1h),7.22(d,j＝8.5hz,2h),2.14(s,3h).。
实施例62
制备n-(6-溴-3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-甲基苯磺酰胺(62)
一、制备6/7-溴-1,2-二羟基蒽-9,10-二酮
将氯化铝(50g)和氯化钠(11g)加入250ml圆底烧瓶，125℃搅拌至熔融状态，再加入4-溴邻苯二甲酸酐(7.38g，32.5mmol)和邻苯二酚(2.75g,25mmol)，逐渐升温至185℃，搅拌4h，待反应体系冷却后加入冰盐酸中，100℃回流1h，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝17：3)，得橘黄色固体1.12g，产率15％。
二、制备6/7-溴-1,2-二羟基-3-硝基蒽-9,10-二酮
6/7-溴-1,2-二羟基-3-硝基蒽-9,10-二酮的制备方法同3-硝基-1,2-二羟基蒽-9,10-二酮(hkb-10)，将hkb-10反应中的1,2-二羟基蒽-9,10-二酮换成上步所得的6/7-溴-1,2-二羟基蒽-9,10-二酮，得黄色固体，粗产率60％。
三、制备3-氨基-6/7-溴-1,2-二羟基蒽-9,10-二酮
3-氨基-6/7-溴-1,2-二羟基蒽-9,10-二酮的制备方法同3-氨基-1,2-二羟基蒽-9,10-二酮(hkb-11)，将hkb-11反应中的hkb-10换成上步所得的6/7-溴-1,2-二羟基-3-硝基蒽-9,10-二酮，得黑色固体，粗产率80％。
四、制备n-(6-溴-3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-甲基苯磺酰胺
n-(6-溴-3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-甲基苯磺酰胺的制备方法同n-(3,4-二羟基-9,10-二氧-9,10-二氢蒽-2-基)-4-甲基苯磺酰胺(4)，将4反应三中的hkb-11换成上步所得的3-氨基-6/7-溴-1,2-二羟基蒽-9,10-二酮，最后经硅胶柱层析分离(二氯甲烷)和制备高效液相分离(甲醇：水＝13:7)得黄色固体，产率15％。ms(esi)(m/z):488.0(m-h)-.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.50(brs,1h),10.20(brs,1h),9.74(brs,1h),8.00(s,1h),7.90–7.83(m,2h),7.78(d,j＝8.2hz,2h),7.70(s,1h),7.34(d,j＝8.0hz,2h),2.30(s,3h).。
实施例63
本发明所述的9,10-蒽醌类化合物对pgam1的体外酶抑制活性测试
采用酶联法来测定小分子抑制剂对于pgam1的抑制活性，具体反应步骤如下：
以3-phosphoglycerate(3pg)为底物，通过phosphoglyceratemutase1(pgam1)、enolase、pyruvatekinase(pk)及lactatedehydrogenase(ldh)四个酶的共同作用，最后转化为乳酸，在最后一步反应中一分子reducedformofnicotinamide-adeninedinucleotide(nadh)被氧化生成nicotinamideadeninedinucleotide(nad+)，我们通过检测nadh的信号变化(λ＝340nm)，来测定小分子的抑制能力。由于该酶联反应涉及4个酶，为了验证小分子化合物作用的专一性及特异性，我们同时以2-phosphoglycerate(2pg)作为底物，以enolase、pk及ldh作为催化的酶，来测定反应速率作为阴性对照，从而排除可能抑制后面3个靶标酶的假阳性小分子化合物。
实验主要试剂：
重组pgam1(由大肠杆菌系统表达纯化)、enolase(sigma-aldrich)、pkm2(sigma-aldrich)、ldh(sigma-aldrich)、tris-hcl(国药集团化学试剂有限公司)、kcl(国药集团化学试剂有限公司)、mgcl2(国药集团化学试剂有限公司)、adp(sigma-aldrich)、nadh(sigma-aldrich)。
实验步骤：
配置含有100mmtris-hcl,100mmkcl,5mmmgcl2,1mmadp,0.2mmnadh,5mg/mlpgam1,0.5units/mlenolase,0.5units/mlpyruvatekinasem2,and0.1units/mlldh的反应混合液，加入终浓度为2mm的3pg开始反应，以nadh的氧化导致的紫外吸收(od:340nm)降低作为pgam1的活性。同时进行对照实验，配置含有100mmtris-hcl,100mmkcl,5mmmgcl2,1mmadp,0.2mmnadh,0.5units/mlenolase,0.5units/mlpyruvatekinasem2,and0.1units/mlldh的反应混合液，加入终浓度为2mm的2pg开始反应，以nadh的氧化导致的紫外吸收(od:340nm)降低作为enolase、pkm2和ldh的活性，排除假阳性。
实施例64
本发明所述的9,10-蒽醌类化合物体外抑制肿瘤细胞活力实验
细胞培养：
h1299在含有10％fetalbovineserum(fbs)和100units/ml青霉素，100mg/ml链霉素的rpmi1640培养基中培养。培养条件：37℃，5％co2。
细胞活力实验：
在96孔板中每孔种1x103个细胞，24h后加入含有药物的培养基，孵育72h，去除培养基，加入含0.5mg/mlmtt的培养基，孵育4h，去除培养基，加入200μl的dmso，读取紫外吸收值(od:570nm)。把对应的药物浓度及od值输入graphpadprism7软件，计算出半数有效浓度(ec50)。其他肿瘤细胞(panc-1，k562)活性测定方法与h1299类似。
表1.化合物式ⅰ对磷酸甘油酸变位酶及不同肿瘤细胞株的抑制活性
半数抑制浓度ic50：*:>100μm,**:10-100μm,***:1-10μm,****:<1μm。