本发明涉及医疗技术领域，具体地说，本发明涉及一种多基取代嘌呤类衍生物及其制备方法与应用。
背景技术：
病毒感染性疾病是严重危害人类生命健康的一大类疾病。乙肝病毒(hbv)是乙型肝炎的主要病原体。虽然目前乙肝疫苗已成功的研发并广泛推广，但是乙肝病毒因其极强的传染性和致病性，社会危害性仍然极大。此外，干扰素和核苷类药物的实施是抗乙型肝炎治疗的一项重大突破，但是由于耐药性的出现及长期服药的毒性问题极大地限制了该疗法的应用，具有新结构、新机制的抗乙型肝炎药物的研发刻不容缓。
杂环化合物具有广泛的抗病毒活性，它们一般是作为构成药效团的基本结构母核，以适合药物特殊作用靶点的空间要求，或者是作为活性取代基或环系的组成部分而产生相应的生物活性。药物之所以依赖于杂环是因为杂环较脂肪或芳香化合物在体内更不易代谢分解，且具有更好的生物相容性。苯并咪唑环是一类重要的芳杂环，其衍生物具有广泛的生物活性以及临床应用。本发明基于苯并咪唑类似物良好的抗hbv活性，利用生物电子等排体嘌呤环取代苯并咪唑环，设计合成了一系列取代嘌呤类衍生物，现有技术中未见此类化合物及其应用。
技术实现要素：
为实现上述目的，本发明的一个目的为提供了一种多基取代嘌呤类衍生物，所述多基取代嘌呤类衍生物的化学结构式为式（a）所示，
进一步地，r、r1与r2为氨基、硝基、羟基、氢、c1～c6烷基、c1～c6烷氧基，苄基、取代苄基；
进一步地，r3为c1～c6烷基、c1～c6烷氧基、各种取代的六元杂环、各种取代的五元杂环、各种取代的六元并五元杂环、各种取代的六元并六元杂环、各种取代的五元并五元杂环、各种取代的苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环；
进一步地，r4为烷基、环烷基、酰基、烷基酰基、磺酰基、烷基磺酰基；
进一步地，x为氯原子、氟原子、溴原子或碘原子。
进一步地，所述式（a）结构选自：
本发明的另一个目的为提供了所述式（a）的合成路线为：
反应步骤为：
（1）将式（b）化合物与式（c）化合物加入到反应容器中，在有机溶剂与碱存在下加入催化剂，水浴加热并不断搅拌，tlc检测反应完成，生成式（d）化合物；
（2）步骤（1）生成的式（d）化合物在亚硫酰氯存在下经过加热回流生成式（e）化合物；
（3）步骤（2）生成的式（e）化合物与式（f）化合物溶于二氧六环中，在50%的氢氧化钠溶液存在下发生反应，生成式（a）化合物；
进一步地，所述步骤（1）中的有机溶剂为二氯甲烷，所述碱为碳酸钠，所述催化剂为1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁氯化钯。
进一步地，所述步骤（1）中加热温度为80-100℃。
合成过程中通过先制备酰氯再通过酰氯和酚进行进一步的酯化反应，有利于反应的顺利进行。本发明合成的化合物多具有很好的化学活性，使得这些化合物具有很好的可拓展性，也为它们的药理活性提供了很好的活性基团。
本发明从经济效益出发，对反应条件和反应路线进行了优化，无论是溶剂的用量、反应物的种类及用量、还是反应温度的选择都进行了条件优化，所得的反应路线和条件是我们挑选的路线中具有原子经济性和环保性的路线。
本发明的另一个目的在于提供了一种多基取代嘌呤类衍生物药物组合物，包括权利要求1所述的式（a）和药学上可接受的载体。
进一步地，所述式（a）作为唯一活性成分。
进一步地，所述药学上可接受的载体为填料、粘合剂、保湿剂、崩解剂、缓溶剂、润湿剂或润滑剂中的一种或多种。
本发明的另一个目的在于提供了一种多基取代嘌呤类衍生物式（a）在病毒感染疾病药物方面中的应用，该病选自呼吸道病毒感染、病毒性肝炎、脊髓灰质炎、流感病毒。
本发明没有对式（a）或包含式（a）的药物组合物的施用方式进行特别限制，代表性的施用方式包括（但并不限于）：口服、静脉注射、局部给药。用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，式（ⅰ）与至少一种常规惰性赋形剂（或载体）混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：（a）填料，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；（b）粘合剂，例如羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；（c）保湿剂，例如甘油；（d）崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、碳酸钠；（e）缓溶剂，例如石蜡；（f）吸收加速剂，例如季胺化合物；（g）润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；（h）吸附剂，例如高岭土；（i）润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的其它药物联合给药。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其他多种形式的修改、替换或变更。
本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：
1、本发明先通过亚硫酰氯制备性质比较活泼的酰氯，减少了副产物的产生，且副产物仅为二氧化硫与氯化氢，均为气体，提纯方便；再通过酰氯和酚进行进一步的酯化反应，有利于反应的顺利进行，反应彻底，大大的提高了最终产物的收率。
2、本发明噁唑酮类衍生物的作用部位和方式独特,具有很高的抗病毒活性，尤其是抗hbv活性，适合药物特殊作用靶点的空间要求，具有更好的生物相容性，对呼吸道病毒感染、病毒性肝炎、脊髓灰质炎、流感病毒疾病均具有良好的治疗效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步阐述，实施例仅助于理解本发明，但是不能限制本发明的内容，不应理解为本发明范围的任何限制。
本发明选自上述化合物中的如下结构式（a）进行具体实施说明，但并不局限于如下结构式（a）。
具体合成路线如下：
实施例1
[2-[（2-硝基-4-羟基-5-基）嘧啶]-4-吡啶]嘌呤-8-基-甲酸（d）的合成。
结构式：
将(2-氯-6-吡啶)嘌呤-8-基甲酸（b）（5g，1.8mol）与（2-硝基-4-羟基）嘧啶-5-基-硼酸二甲酯（c）（5.8g，2.3mol）加入到反应容器中，在有机溶剂二氯甲烷（50ml）与碳酸钠（0.8g）存在下加入催化剂1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁氯化钯（0.32g），水浴加热至85℃并不断搅拌，tlc检测反应完成，生成[2-[（2-硝基-4-羟基-5-基）嘧啶]-4-吡啶]嘌呤-8-基-甲酸（d）（9.69g，2.4mol）。
[2-[（2-硝基-4-羟基-5-基）嘧啶]-4-吡啶]嘌呤-8-基-甲酰氯（e）的合成。
结构式：
将上述生成的[2-[（2-硝基-4-羟基-5-基）嘧啶]-4-吡啶]嘌呤-8-基-甲酸（d）（9.69g，2.4mol）在亚硫酰氯（40ml）存在下经过加热回流生成[2-[（2-硝基-4-羟基-5-基）嘧啶]-4-吡啶]嘌呤-8-基-甲酰氯（e）（9.28g，2.3mol）。
[2-[（2-硝基-4-羟基-5-基）嘧啶]-4-吡啶]嘌呤-8-基-甲酸-（2-氯-4-甲基）苯酯（a）的合成。
结构式：
将上述生成的式[2-[（2-硝基-4-羟基-5-基）嘧啶]-4-吡啶]嘌呤-8-基-甲酰氯（e）（9.28g，2.3mol）与4-甲基-3-氯苯酚（f）（10g，1.5mol）溶于二氧六环中（60ml），在50%的氢氧化钠溶液（20ml）存在下发生反应，生成[2-[（2-硝基-4-羟基-5-基）嘧啶]-4-吡啶]嘌呤-8-基-甲酸-（2-氯-4-甲基）苯酯（a）（17.25g，3.1mol）,收率96.87%。
本实施例中有机溶剂的用量与50%的氢氧化钠溶液并没有严格的限定，本领域技术人员可根据实际情况进行合适的选择与确定，其用量大小以方便反应进行即可，在此不在进行详细的描述。
实施例2-4
改变实施例1中的催化剂，其它操作均不变，重复实施例1的操作步骤，得到实施例2～4，结果见下表。
结合实施例1与实施例2～4，催化剂对本发明的合成具有重要影响，使用1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁氯化钯做催化剂具有很好的催化效果，不使用催化剂或使用钯作为催化剂或使用1,1'-双(二-苯基膦基)二茂铁作为催化剂，最终收率为10.58%或60.12%或48.77%，均严重影响[2-[（2-硝基-4-羟基-5-基）嘧啶]-4-吡啶]嘌呤-8-基-甲酸-（2-氯-4-甲基）苯酯（a）的收率。
实施例5
将实施例1中的碱去掉，其它操作均不变，重复实施例1的操作步骤，得到实施例5，结果见下表。
结合实施例1与实施例5，在无碱存在下，最终[2-[（2-硝基-4-羟基-5-基）嘧啶]-4-吡啶]嘌呤-8-基-甲酸-（2-氯-4-甲基）苯酯（a）的收率大大的降低了，故碱在本发明反应中具有重要的作用。
实施例6-11
改变实施例1中水浴加热的温度，其它操作均不变，重复实施例1的操作步骤，得到实施例6-11，结果见下表。
结合实施例1与实施例6-11，改变水浴加热的温度，[2-[（2-硝基-4-羟基-5-基）嘧啶]-4-吡啶]嘌呤-8-基-甲酸-（2-氯-4-甲基）苯酯（a）的收率随之改变。当温度越来越高时，[2-[（2-硝基-4-羟基-5-基）嘧啶]-4-吡啶]嘌呤-8-基-甲酸-（2-氯-4-甲基）苯酯（a）的收率也越来越高，但并不是一直趋于增高趋势，当温度到达96℃时，[2-[（2-硝基-4-羟基-5-基）嘧啶]-4-吡啶]嘌呤-8-基-甲酸-（2-氯-4-甲基）苯酯（a）的收率的收率最高，当唯独超过96℃时，[2-[（2-硝基-4-羟基-5-基）嘧啶]-4-吡啶]嘌呤-8-基-甲酸-（2-氯-4-甲基）苯酯（a）的收率降低。
本发明多基取代嘌呤类衍生物的抗hbv活性及应用
通过细胞株对新合成的本发明多基取代嘌呤类衍生物进行了体外抗hbv活性研究，以拉米夫定(3tc)为阳性对照药物，利用elisa法测定目标化合物在体外抑制hbsag(表面抗原)和hbeag(核心抗原)分泌的活性；通过pcr法测定了部分化合物的抑制hbvdna复制活性；采用cck-8法检测样品化合物的细胞毒性，从而对样品化合物的抗hbv活性进行筛选。
下表为多基取代嘌呤类衍生物抗乙肝病毒初筛活性。
下表为部分化合物的抗hbsag和hbeag分泌活性。
注：bic50：抑制50％hbsag或hbeag分泌时化合物的浓度；ccc50：抑制50％细胞生长时化合物的浓度；dsi：选择指数，cc50/ic50的比值；ena：无活性。
由以上可以看出，本发明的多基取代嘌呤类衍生物可作为非核苷类hbv抑制剂应用。具体地说，可作为hbv抑制剂用于制备抗乙型肝炎药物。
一种多基取代嘌呤类衍生物药物组合物，包括本发明多基取代嘌呤类衍生物和药学上可接受的载体。本发明提供了结构全新的多基取代嘌呤类衍生物及其制备方法，抗hbv活性筛选结果及其在制备抗乙型肝炎药物中的应用。经过实验证明，本发明的取代嘌呤类衍生物可作为hbv抑制剂应用并具有潜在的应用价值。具体地说，作为hbv抑制剂用于制备抗呼吸道病毒感染、病毒性肝炎、脊髓灰质炎、流感病毒。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。