本发明属于多肽药物领域，具体为一种治疗ⅱ型糖尿病的多肽药物索玛鲁肽的制备方法。
背景技术：
索玛鲁肽(semaglutide)是一种新的长效glp-1受体激动剂，不仅具有显著的降血糖疗效，还具有明显的减肥功效，该药也是诺和诺德糖尿病管线中第2种兼具降糖及减肥功效的glp-1降糖药(另一种为利拉鲁肽)。索玛鲁肽的分子式为c187h291n45o59，其对应的分子量为4111.1，从结构上看，索玛鲁肽需要将26位lys接上aeea、谷氨酸和十八烷酸脂肪链，其中，8位采用非天然氨基酸氨基异丁酸。与利拉鲁肽相比，索玛鲁肽的脂肪链更长，疏水性增加，但是索玛鲁肽经过短链的aeea修饰，亲水性大大增强。aeea修饰后不但可以与白蛋白紧密结合，掩盖dpp-4酶水解位点，还能降低肾排泄，可延长生物半衰期，达到长循环的效果。肽序列结构如下：h-his7-ala8-glu9-gly10-thr11-phe12-thr13-ser14-asp15-val16-ser17-ser18-tyr19-leu20-glu21-gly22-gln23-ala24-ala25-lys26(aeea-aeea-γ-glu-octadecanedioicacidmono-tert-butylester)-glu27-phe28-ile29-ala30-trp31-leu32-val33-arg34-gly35-arg36-gly37-oh。
目前已报道的索玛鲁肽的制备方法分为三类：第一类为片段法合成索玛鲁肽，例如cn104356224a和cn106749613a，该方法浪费原料，所得中间体需要纯化并建立质量标准，理论上节约时间，实际由于步骤增多、纯化和检测中间体耗时等原因，导致最终合成周期延长，成本增加；第二类为将修饰后的lys接入索玛鲁肽主链，例如cn106478806a，该方法存在反应不完全、活性弱、生产成本高，需多步纯化等缺点；第三类为完成索玛鲁肽主链合成后脱除侧链保护，然后完成侧链修饰，例如cn106928343a和cn101133082a，该方法将极易消旋的his过早引入树脂，作为索玛鲁肽末端结构的his在后期多步侧链缩合过程中不断消旋，导致最终消旋杂质越来越多，也缺乏合理性，不利于工业生产。
因此，现在急需一种纯度和收率高，合成成本低的索玛鲁肽的制备方法。
技术实现要素：
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种新的索玛鲁肽的制备方法，它包括以下步骤：
(1)将树脂固相载体和fmoc-gly-oh偶联得到fmoc-gly-树脂；
(2)取步骤(1)所得的fmoc-gly-树脂，通过固相合成法，按索玛鲁肽主链c端至n端肽序，依次偶联具有n端fmoc保护的氨基酸至lys26，得到以下序列肽树脂：r1-lys26(r2)-glu27-phe28-ile29-ala30-trp31-leu32-val33-arg34-gly35-arg36-gly37-树脂；
其中，lys采用r1-lys(r2)-oh为原料，r1、r2分别独立地选自fmoc、alloc、dde、mtt或mmt；
(3)脱除lys26侧链r2保护基，依次偶联侧链氨基酸序列及十八烷二酸单叔丁酯，完成索玛鲁肽侧链的合成修饰，得到以下结构：r1-lys26(aeea-aeea-γ-glu-octadecanedioicacidmono-tert-butylester)-glu27-phe28-ile29-ala30-trp31-leu32-val33-arg34-gly35-arg36-gly37-树脂；
(4)脱除主链lys26的r1保护基，依次偶联具有n端fmoc保护的氨基酸，其中，his7采用pr-his(trt)-oh，完成索玛鲁肽主链合成，获得索玛鲁肽全保护肽树脂；其中，所述pr为氨基保护基；
(5)全保护肽树脂经裂解液裂解后即得索玛鲁肽粗品；
(6)索玛鲁肽粗品经反相高效液相色谱法纯化，凝胶色谱法精制与除盐后即得索玛鲁肽精品。
进一步地，步骤(1)中，所述偶联是在活化剂存在的条件进行的，所述活化剂选自diea、tea或者dbu；所述的树脂固相载体为2-ctc树脂或wang树脂；所述fmoc-gly-树脂的替代度为0.2～0.5mmol/g，当树脂为2-ctc树脂时，fmoc-gly-树脂的替代度优选为0.25～0.40mmol/g；当树脂为wang树脂时，fmoc-gly-树脂的替代度优选为0.25～0.45mmol/g。
进一步地，步骤(2)中，所述r1-lys(r2)-oh的组合为下述组合中的任一种：
a.当fmoc-gly-树脂为fmoc-gly-ctc且r1为alloc时，r2可以为fmoc或dde；
b.当fmoc-gly-树脂为fmoc-gly-ctc且r1为dde时，r2可以为fmoc或alloc；
c.当fmoc-gly-树脂为fmoc-gly-wang且r1为alloc时，r2可以为fmoc、alloc、dde、mtt或mmt；
d.当fmoc-gly-树脂为fmoc-gly-wang且r1为mtt或mmt时，r2可以为fmoc、alloc或dde；
e.当fmoc-gly-树脂为fmoc-gly-wang且r1为dde时，r2可以为fmoc、alloc、mtt或mmt。
进一步地，步骤(3)和步骤(4)中，所述脱除的具体条件为：
当r1、r2为alloc时，保护基的脱除选用5～10当量的吗啡啉(或用5～10当量的苯硅烷替代吗啡啉)与0.1～0.3当量的四三苯基膦钯，脱除反应中选用dcm为溶剂；
当r1、r2为dde时，保护基的脱除选用含2％水合肼的dmf浸泡带dde保护的树脂3分钟，抽干树脂，滤掉脱保护液，重复操作2遍；
当r1、r2为mtt时，保护基的脱除选用含5％tfa的dcm浸泡带mtt保护的树脂30分钟，抽干树脂，滤掉脱保护液，重复操作1遍；
当r1、r2为mmt时，保护基的脱除选用含5％tfa的dcm浸泡带mmt保护的树脂30分钟，抽干树脂，滤掉脱保护液，重复上步操作1遍；
优选地，当r1、r2为alloc时，保护基的脱除选用5～10当量的吗啡啉(或用5～10当量的苯硅烷替代吗啡啉)与0.1当量的四三苯基膦钯。
进一步地，步骤(2)～步骤(4)中，所述偶联的缩合剂选自dic/cl-hobt、tbtu/hobt/diea、tbtu/cl-hobt/diea、tbtu/hoat/diea、tbtu/diea、pybop/diea、pyaop/diea、comu/diea；所述偶联的溶剂选自dmf、dcm、nmp或dmso中的一种或多种。
进一步地，步骤(3)中，偶联fmoc-glu(oh)-otbu时，采用cl-hobt/dic偶联试剂；偶联十八烷二酸单叔丁酯时，采用pybop/diea偶联试剂。
进一步地，步骤(4)中，所述pr选自叔丁氧羰基、苄氧羰基、9-芴甲氧羰基、苄基、对甲氧苯基。
进一步地，步骤(5)中，所述裂解液是由下述体积比的组分组成：tfa:phsme:phoh:edt:tis:h2o＝80:5:5:5:3:2。
进一步地，步骤(6)中，所述反相高效液相色谱法纯化的条件为：
流动相：a相为0.1％tfa水溶液，b相为乙腈
色谱柱：c18反相色谱柱；
检测波长：220nm；
梯度洗脱条件：洗脱剂为a相与b相的混合液，其中b相的体积百分比在45min内由10％上升至35％，之后保持35％的比例不变。
进一步地，步骤(6)中，所述凝胶色谱法精制与除盐的条件为：
动相a：水；流动相b:乙腈；
色谱填料：葡聚糖凝胶g-25；
检测波长：220nm；
洗脱条件：a：b＝70：30v/v，等度洗脱。
与现有技术相比，本发明具有下述优点：
(1)本发明采用逐一缩合法，为解决主链最后连接aeea、glu和十八烷二酸单叔丁酯这些难溶片段而导致的纯度和收率低的问题，本发明在短肽中提前引入aeea、glu和十八烷二酸单叔丁酯这些难溶的片段，且纯度较好，有利于剩余氨基酸的继续偶联，大大提高了索玛鲁肽粗品的纯度和收率，降低合成成本。
(2)本发明选用boc-his(trt)-oh原料，减少了最后一步脱fmoc操作，避免了his接触哌啶导致的消旋，能够降低消旋杂质，提高粗品纯度好收率，降低合成成本。
(3)采用侧链优先逐一法提高了合成效率，粗品纯度达到69.5％，合成收率达到119％(含tfa盐)，经纯化精制后，hplc纯度达到99.85％，收率达到35.5％，较以往报道方法有明显提高。
本发明中一些常用的缩写具有以下含义：
fmoc：芴甲氧羰基
fmoc-aa:芴甲氧羰基保护的氨基酸
tbtu:2-(1h-苯并三偶氮l-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯
hobt:1-羟基苯并三唑
diea:n,n-二异丙基乙胺
dic:n,n-二异丙基碳二亚胺
cl-hobt:6-氯-1-羟基苯并三氮唑
tbu:叔丁基
trt:三苯甲基
boc:叔丁氧羰基
pbf:2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基
phe:苯丙氨酸
his:组氨酸
val:缬氨酸
asp:天冬氨酸
gln:谷氨酰胺
leu:亮氨酸
lys:赖氨酸
arg:精氨酸
trp:色氨酸
glu:谷氨酸
ser:丝氨酸
gly:甘氨酸
thr:苏氨酸
ile:异亮氨酸
dmf:n,n-二甲基甲酰胺
meoh:甲醇
dcm:二氯甲烷
tfa:三氟乙酸
phsme:苯甲硫醚
phoh:苯酚
edt:乙二硫醇
mtbe:甲基叔丁基醚
acn:乙腈
h2o:水
alloc：氨基烯丙氧羰基
mtt：4-甲基-三苯甲基
mmt：4-甲氧基三苯甲基
aeea：2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙酸
2-ctcresin树脂：
wang树脂：
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为索玛鲁肽的合成工艺路线图。
图2为索玛鲁肽纯品的hplc谱图。
具体实施方式
本发明具体实施部分使用的原料和仪器均可通过市场购买得到，下面通过ctc树脂和wang树脂为载体，对本发明做进一步的阐述和说明。
实施例1、索玛鲁肽的制备
(1)制备替代度为0.35mmol/g的fmoc-gly37-ctc
a.将50g(45mmol)替代度为0.9mmol/g的ctcresin树脂加入反应釜中，加入800ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，再加入800ml二氯甲烷，混合40min后，滤除二氯甲烷，最后再加入800ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，该树脂备用。
b.称取10.2g的fmoc-gly-oh于烧杯中，加入800ml二氯甲烷和7ml的diea，将溶液于0-10℃下搅拌激活5min后，倒入步骤a得到的ctc树脂中，于20-25℃条件下混合10min后，补加20ml的diea，继续混合50min。待反应结束后，加入甲醇50ml，继续混合30min。反应结束后，抽滤，树脂用二氯甲烷洗5次，每次800ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次800ml；再用二氯甲烷洗2次，每次800ml；最后用甲醇洗3次，每次800ml，直至树脂充分分散开。
c.将步骤b中得到的树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)。烘干后，得到55g的fmoc-gly37-ctc，经紫外检测替代度为0.35mmol/g。
(2)索玛鲁肽中间体a，即fmoc-lys26(alloc)-glu27-phe28-ile29-ala30-trp31-leu32-val33-arg34-gly35-arg36-gly37-ctc的制备
a.将步骤(1)中得到的fmoc-gly37-ctc全部倒入反应釜中，用800mldcm溶胀混合15min后抽干。加入体积浓度为20％哌啶/dmf溶液500ml，于20-30℃条件下混合5min后，抽干。加入dmf800ml，混合5min后，抽干。加入体积浓度为20％哌啶/dmf溶液500ml，于20-30℃条件下混合10min后，抽干。加入dmf800ml，混合5min后，抽干。重复用dmf洗涤8次，每次800ml，每次混合5min，并在第七次洗涤后，用ph试纸检测滤液，结果显示ph在6.5-7.0为合格。
b.依次称取27.5g的fmoc-arg(pbf)-oh、31.5gtbtu和11ghobt于干净的2l烧杯中，加入体积比为1:1的dmf/dcm溶液600ml，置于冰水中于0-10℃条件下用机械搅拌器搅拌溶解，待温度恒定后，加入20mldiea，继续维持温度并搅拌激活5min。将以上激活液缓慢加入到反应釜中，于20-25℃条件下混合2h。待反应结束后，抽干，加入dmf800ml，混合5min后，抽干。重复用dmf洗涤6次，每次800ml，每次混合5min。最后用茚三酮检测为阴性，即得到fmoc-arg36-gly37-ctc。
c.按如上a的去保护方法和b的偶联方法，依主链35-26先后顺序，依次分别偶联剩余氨基酸，即：fmoc-gly-oh、fmoc-arg(pbf)-oh、fmoc-val-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-trp(boc)-oh、fmoc-ala-oh、fmoc-ile-oh、fmoc-pheoh、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-lys(alloc)-oh的偶联。最后用二氯甲烷洗5次，每次800ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次800ml；再用二氯甲烷洗2次，每次800ml；最后用醇洗3次，每次800ml，直至树脂充分分散开。将该树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)。得到索玛鲁肽中间体a的ctc肽树脂89g。
(3)索玛鲁中间体b，即alloc-lys26(aeea-aeea-γ-glu-octadecanedioicacidmono-tert-butylester)-glu27-phe28-ile29-ala30-trp31-leu32-val33-arg34-gly35-arg36-gly37-ctc的制备
a.将步骤(2)中得到的中间体a的ctc肽树脂89g加入反应釜中，加入800ml二氯甲烷，混合15min后，滤除二氯甲烷，该树脂备用。
b.加入体积浓度为20％哌啶/dmf溶液500ml，于20-30℃条件下混合5min后，抽干。加入dmf800ml，混合5min后，抽干。加入体积浓度为20％哌啶/dmf溶液500ml，于20-30℃条件下混合10min后，抽干。加入dmf800ml，混合5min后，抽干。重复用dmf洗涤8次，每次800ml，每次混合5min，并在第七次洗涤后，用ph试纸检测滤液，结果显示ph在6.5-7.0为合格。
c.依次称取27.5gfmoc-aeea-oh、31.5gtbtu和11ghobt于干净的2l烧杯中，加入体积比为1:1的dmf/dcm溶液600ml，置于冰水中于0-10℃条件下用机械搅拌器搅拌溶解，待温度恒定后，加入20mldiea，继续维持温度并搅拌激活5min。将以上激活液缓慢加入到反应釜中，于20-25℃条件下混合2h。待反应结束后，抽干，加入dmf800ml，混合5min后，抽干。重复用dmf洗涤6次，每次800ml，每次混合5min。最后用茚三酮检测为阴性。
d.按照以上方法继续偶联fmoc-aeea-oh后，依次偶联fmoc-glu(oh)-otbu、十八烷二酸单叔丁酯。在偶联fmoc-glu(oh)-otbu时，采用cl-hobt/dic缩合体系，即加入12.5g的cl-hobt和20ml的dic。在偶联十八烷二酸单叔丁酯时，采用pybop/diea体系，即加入35.6g的pybop和20ml的diea，溶剂选用dmf：nmp＝1:1v/v，其余反应条件均不变。偶联完成后用甲醇收缩，得到索玛鲁肽中间体b的ctc肽树脂109g。
(4)索玛鲁肽全肽的制备
a.将步骤(3)中得到的索玛鲁肽中间体b的ctc肽树脂109g加入反应釜中，加入800ml二氯甲烷，混合15min后，滤除二氯甲烷，该树脂备用。
b.于步骤a得到的树脂中加入300ml的dcm，依次加入30ml苯硅烷和3g四三苯基膦钯，于20-30℃条件下通氮气鼓泡1h后，抽干。重复用dcm洗涤8次，每次300ml，每次混合5min。树脂备用。
c.依次称取17.5g的fmoc-ala-oh、16.5gtbtu和6.4ghobt于干净的2l烧杯中，加入体积比为1:1的dmf/dcm溶液600ml，置于冰水中于0-10℃条件下用机械搅拌器搅拌溶解，待温度恒定后，加入20mldiea，继续维持温度并搅拌激活5min。将以上激活液缓慢加入到反应釜中，于20-25℃条件下混合2h。待反应结束后，抽干，加入dmf800ml，混合5min后，抽干。重复用dmf洗涤6次，每次800ml，每次混合5min。最后用茚三酮检测为阴性。
d.按如上去保护和偶联方法，依主链25-7先后顺序，即：
fmoc-ala-oh、fmoc-ala-oh、fmoc-gln(art)-oh、fmoc-gly-oh、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-tyr(otbu)-oh、fmoc-ser(otbu)-oh、fmoc-ser(otbu)-oh、fmoc-val-oh、fmoc-asp(otbu)-oh、fmoc-ser(otbu)-oh、fmoc-thr(otbu)-oh、fmoc-pheoh、fmoc-thr(otbu)-oh、fmoc-gly-oh、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-aib-oh、boc-his(trt)-oh的偶联。最后用二氯甲烷洗5次，每次800ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次800ml；再用二氯甲烷洗2次，每次800ml；最后用醇洗3次，每次800ml，直至树脂充分分散开。将该树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)，得到ctc树脂的全保护肽树脂161g。
(5)索玛鲁肽粗品的制备
裂解液配比为tfa：phsme：phoh：edt：tis：h2o＝80:5:5:5:3:2(体积比)，于15℃条件下，向1.5l裂解液中加入步骤(4)中所得的ctc树脂的全保护肽树脂161g，升温至30℃，继续搅拌反应3小时，然后用砂芯漏斗进行过滤，滤出的树脂再用200ml的tfa洗涤，重复操作两次后合并滤液，减压浓缩至滤液体积为原始体积的30％，然后将浓缩液缓慢加入到预冷的5l甲基叔丁基醚中，沉降过夜后离心5次，每次用甲基叔丁基醚800ml，得到白色固体粉末，先用氮气吹干4h后，再用真空干燥箱干燥10小时，取出称重，即得索玛鲁肽粗品110g，收率为89.1％，hplc纯度为69.5％。
(6)索玛鲁肽粗品的纯化
使用反相高效液相色谱法对粗肽进行初步纯化，其色谱条件如下：
流动相：a相为体积分数为0.1％的tfa水溶液，b相为乙腈
色谱柱：50*250mm的c18反相色谱柱；
检测波长：220nm
流速：100ml/min
先以流动相a平衡柱子，然后取索玛鲁肽粗品45g，先用流动相a溶解后，再用流动相a冲洗20min，然后采用梯度洗脱：洗脱剂为a相与b相的混合液，其中b相的体积百分比在45min内由10％上升至35％，之后保持35％的比例不变，在65min时开始收集，分峰顶前、峰顶附近、峰顶后分段收集。将峰顶前和峰顶后的收集液进行浓缩后再次进样纯化，如此重复三次后合并减压浓缩至2500ml，含量为15mg/ml，hplc纯度为98.95％，hplc谱图见图2，收率为46.7％，将其冷冻暂存。
(7)索玛鲁肽的精制及除盐
使用凝胶色谱法对纯化肽进行精制与除盐，其流动相为：
动相a：水；流动相b:乙腈
色谱填料：葡聚糖凝胶g-25
检测波长：220nm
流速：100ml/min
a将葡聚糖凝胶干粉分别依次用乙醇、无盐水、盐酸各浸泡24h后用去离子水洗至中性，并将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内；然后取纯化肽的溶液2500ml进样，上样控制在1-4％的柱体积，脱盐时高径比为5:1，用体积占比为30％的乙腈作为流动相，即流动相a：b＝70：30，进行等度洗脱，以时间为节点收集，在80min时开始收集，之后继续用流动相等度洗脱，待收集到9500ml洗脱液时停止收集，将其减压浓缩，即得到所述无盐形式的索玛鲁肽精制液900ml，含量35.6mg/ml,hplc纯度为99.5％。
b以0.22μm的滤膜进行过滤，将滤液冻干，即制得索玛鲁肽精品15.4g，hplc纯度99.85％，收率为35.5％。
实施例2、索玛鲁肽的制备
(1)制备替代度为0.35mmol/g的fmoc-gly-wang
a.将50g(45mmol)替代度为0.9mmol/g的wang树脂加入反应釜中，加入800ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，再加入800ml二氯甲烷，混合40min后，滤除二氯甲烷，最后再加入800ml二氯甲烷，混合2min后，滤除二氯甲烷，该树脂备用。
b.称取6.2g的fmoc-gly-oh和3.2g的hobt于烧杯中，加入800mldmf和37ml的diea，将溶液于0-10℃下搅拌激活5min后，倒入步骤a所得wang树脂中，加入7.5g的dmap，于20-25℃条件下混合2h。待反应结束后，加入醋酸酐20ml，继续混合1h。反应结束后，抽滤，树脂用dmf洗5次，每次800ml；洗毕，用甲醇洗两次，每次800ml；再用二氯甲烷洗2次，每次800ml；最后用甲醇洗3次，每次800ml，直至树脂充分分散开。
c.将步骤b所得树脂于20-30℃条件下真空干燥箱中干燥4h，直至恒重(连续两次称重，误差低于1％)。烘干后，得到62g的fmoc-gly-wang，经紫外检测替代度为0.35mmol/g。
(2)索玛鲁肽中间体a，即fmoc-lys26(alloc)-glu27-phe28-ile29-ala30-trp31-leu32-val33-arg34-gly35-arg36-gly37-wang的制备
将步骤(1)中得到的fmoc-gly-wang全部倒入反应釜中，用800mldcm溶胀混合15min后抽干。剩余操作完全同实施例1中的步骤(2)，即：按相同的去保护和偶联方法，依主链35-26先后顺序，即：fmoc-gly-oh、fmoc-arg(pbf)-oh、fmoc-val-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-trp(boc)-oh、fmoc-ala-oh、fmoc-ile-oh、fmoc-pheoh、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-lys(alloc)-oh的偶联，得到索玛鲁肽中间体a的wang肽树脂88g。
(3)索玛鲁肽中间体b，即alloc-lys26(aeea-aeea-γ-glu-octadecanedioicacidmono-tert-butylester)-glu27-phe28-ile29-ala30-trp31-leu32-val33-arg34-gly35-arg36-gly37-wang的制备
将步骤(2)中得到的中间体a的wang肽树脂88g加入反应釜中，剩余操作完全同实施例1中的步骤(3)，即：脱完fmoc后，按照相同去保护和偶联方法继续依次偶联fmoc-aeea-oh、fmoc-aeea-oh、fmoc-glu(oh)-otbu、十八烷二酸单叔丁酯。偶联完成后用甲醇收缩，得到索玛鲁肽片段b的wang肽树脂108g。
(4)索玛鲁肽全肽的制备
将步骤(3)中得到的片段b的wang肽树脂108g加入反应釜中，剩余操作完全同实施例1中的步骤(4)，脱完alloc后，按照相同的去保护和偶联方法，依主链25-7先后顺序，即：fmoc-ala-oh、fmoc-ala-oh、fmoc-gln(art)-oh、fmoc-gly-oh、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-tyr(otbu)-oh、fmoc-ser(otbu)-oh、fmoc-ser(otbu)-oh、fmoc-val-oh、fmoc-asp(otbu)-oh、fmoc-ser(otbu)-oh、fmoc-thr(otbu)-oh、fmoc-pheoh、fmoc-thr(otbu)-oh、fmoc-gly-oh、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-aib-oh、boc-his(trt)-oh的偶联。偶联完成后用甲醇收缩干燥后，得到wang树脂的全保护肽树脂160g。
(5)索玛鲁肽粗品的制备
裂解液配比为tfa：phsme：phoh：edt：tis：h2o＝80:5:5:5:3:2(体积比)，于15℃条件下，向1.5l裂解液中加入步骤(4)中所得的wang树脂的全保护肽树脂160g，剩余操作完全同实施例1中的步骤(5)，经相同方法裂解和干燥后，即得索玛鲁肽粗品108g，hplc纯度为69.1％。
(6)索玛鲁肽粗品的纯化
同实施例1步骤(6)。
(7)索玛鲁肽的精制及除盐
同实施例1步骤(7)。
综上，本发明通过选择特定的合成方法大大提高了索玛鲁肽粗品的纯度和收率，降低了合成成本，适合大规模生产，具有广阔的市场应用前景。