一种抑制ROCK的化合物及其用途的制作方法

本发明属于药物合成领域，具体涉及一种抑制rock的化合物及其在治疗与rock相关疾病中的应用。
背景技术：
：rho属于小分子单聚体gtpase超家族，是ras超家族的哺乳动物基因同系物，通过其下游最主要的效应分子rho激酶(rho-associatedcoiled-coilcontainingproteinkinase，rock)，来调节细胞肌动蛋白骨架的重组，从而广泛参与细胞有丝分裂、细胞骨架调整、平滑肌细胞收缩、神经再生、肿瘤细胞浸润、细胞凋亡的调节等一系列生物学过程。rho/rock激活后可以作用于多种底物，从而产生生物学过程。最主要的两种底物是肌球蛋白轻链(mlc)和肌球蛋白轻链磷酸酶(mlcp)，mlc的磷酸化水平是决定平滑肌收缩程度的一个重要因素。肌球蛋白轻链激酶(mlck)磷酸化mlc的ser-19位点，导致平滑肌收缩；mlcp的抑制可以使mlc的磷酸化和平滑肌的收缩进一步增强。rock被激活以后，本身可以将mlc磷酸化而发生肌丝收缩作用；同时也能将mlcp磷酸化，使mlcp失活，导致细胞胞浆内mlc磷酸化程度增高，间接促进肌丝收缩。在动物模型中rho激酶活性的抑制展现出治疗人类疾病的多种益处，包括心血管疾病如肺动脉高压、高血压、动脉粥样硬化、心脏肥大、高眼压、脑缺血、脑血管痉挛等，和中枢神经系统病症如神经元变性等。研究表明rock表达和活性在自发性高血压大鼠中有所升高，说明其与这些动物高血压的发生具有关联(involvementofrho-kinaseinhypertensivevasculardisease:anoveltherapeutictargetinhypertension[j].fasebj.,2001,15(6):1062-4)。rock抑制剂y-27632可使三种大鼠高血压模型(自发性高血压、肾性高血压、醋酸脱氧皮质酮盐型高血压)中的血压显著降低，而对对照大鼠的血压作用较小(calciumsensitizationofsmoothmusclemediatedbyarho-associatedproteinkinaseinhypertension[j].nature,1997,389(6654):990-4)。也有研究表明rock抑制剂对肺动脉高压具有较好的作用(acutevasodilatoreffectsofarho-kinaseinhibitor,fasudil,inpatientswithseverepulmonaryhypertension[j].heart,2005:91(3):391-2)。目前已经研究开发的rock抑制剂可分为五大类：(1)异喹啉类：此类化合物结构特点是具有一个异喹啉结构和哌嗪环，两者通过磺酰基相连。代表物有法苏地尔(uehatam,ishizakit,satohh,etal.calciumsensitizationofsmoothmusclemediatedbyarho-associatedproteinkinaseinhypertension[j].nature,1997,389:990-994)、h-1152p(tamuram,nakaoh,yoshizakih,etal.developmentofspecificrho-kinaseinhibitorsandtheirclinicalapplication[j].biochimbiophysacta,2005,1754:245-252)；(2)4-氨基吡啶类：此类化合物结构除4-氨基吡啶母核外，在分子的中心位置还含有一个环己烷或苯环结构，在环己烷的4位具有侧链结构。代表物有y-30141(takamia,iwakubom,okaday,etal.designandsynthesisofrhokinaseinhibitors[j].bioorgmedchem,2004,12:2115-2137)；(3)吲唑类：此类化合物将5-氨基或5-烷氧基-1h吲唑作为骨架；(4)酰胺和脲类：此类化合物具有一个邻苯二甲酰亚胺和一个脲基构成的绞和结构。(5)其它类：其它不包含上述结构的rock抑制剂，代表物有rockout(yarrowjc,totsukawag,charrasgt,etal.screeningforcellmigrationinhibitorsviaautomatedmicroscopyrevealsarho-kinaseinhibitor[j].chembiol,2005,12:385-395)。目前已上市的rock抑制剂药物有asahikasei公司的eril(适用于脑血管痉挛的治疗)和kowa公司的(k-115)(适用于高眼压症和青光眼的治疗)。其中仅在日本上市销售。因此进行开发作用于rock的靶向小分子药物研究，得到活性更好、选择性更高、作用时间更长、稳定性更高、更低毒性和副作用、更经济的rock抑制剂，具有十分重要的社会和经济意义。技术实现要素：本发明提供了一种式(ⅰ)所示的化合物或其立体异构体：其中，n分别为0、1或2；r1分别独立地选自氢、羟基、卤素、氨基、羧基、三氟甲基、硝基、氰基、c1～6烷基；m分别为0、1、2、3、4或5；r3选自-nr2r2’、含n的杂环烷基；其中，含n的杂环烷基可以进一步被1～2个独立选自于卤素、c1～6烷基的取代基取代；r2、r2’分别独立选自氢、c1～6烷基；a环选自5～6元芳环、5～6元芳杂环或b环、c环分别独自选自5～6元芳环、5～6元芳杂环；r4分别独立地选自氢、卤素、硝基、氰基、c1～6烷基、c2～6烯基、c2～6炔基、3～6元环烷基、3～6元杂环烷基、-(ch2)mora、-(ch2)moc(o)ra、-(ch2)moc(o)nrarb、-(ch2)mnrarb、-(ch2)mnrac(o)rb、-(ch2)mnrac(o)orb、-(ch2)mc(o)ra、-(ch2)mc(o)ora、-(ch2)mc(o)nrarb；ra、rb分别独自选自氢、c1～6烷基、c2～6烯基、c2～6炔基、3～6元环烷基、3～6元杂环烷基、5～6元芳环、5～6元芳杂环；其中，3～6元环烷基、3～6元杂环烷基、5～6元芳环、5～6元芳杂环可以进一步被1～2个独立选自于卤素、c1～6烷基的取代基取代。优选的，所述r3选自的含n的杂环烷基为4～5元的含n杂环烷基；更进一步的，当r3选自含n的杂环烷基且a环有2个r4取代时，2个r4不同时为卤素；本发明还提供一种结构如式(ⅱ)所示的化合物或其立体异构体：其中，r1选自氢、羟基、卤素、氨基、羧基、三氟甲基、硝基、氰基、c1～6烷基；m分别为0、1、2或3；r2、r2’分别独立选自氢、c1～6烷基；a环选自5～6元芳环、5～6元芳杂环或b环、c环分别独自选自5～6元芳环、5～6元芳杂环；r4分别独立地选自氢、卤素、硝基、氰基、c1～6烷基、c2～6烯基、c2～6炔基、3～6元环烷基、3～6元杂环烷基、-(ch2)mora、-(ch2)moc(o)ra、-(ch2)mnrarb、-(ch2)mnrac(o)rb、-(ch2)mc(o)ra、-(ch2)mc(o)ora、-(ch2)mc(o)nrarb；ra、rb分别独自选自氢、c1～6烷基、c2～6烯基、c2～6炔基、3～6元环烷基、3～6元杂环烷基、5～6元芳环、5～6元芳杂环；其中，3～6元环烷基、3～6元杂环烷基、5～6元芳环、5～6元芳杂环可以进一步被1～2个独立选自于卤素、c1～6烷基的取代基取代。优选的，式(ⅱ)的化合物如下列结构式所示：另一方面，本发明还提供结构如式(ⅲ)所示的化合物或其立体异构体：r1选自氢、羟基、卤素、氨基、羧基、三氟甲基、硝基、氰基、c1～6烷基；m分别为0、1、2或3；a环选自5～6元芳环、5～6元芳杂环或b环、c环分别独自选自5～6元芳环、5～6元芳杂环；e环选自含n的杂环烷基；所述含n的杂环烷基可以进一步被1～2个独立选自于卤素、c1～6烷基的取代基取代；r4分别独立地选自氢、卤素、硝基、氰基、c1～6烷基、c2～6烯基、c2～6炔基、3～6元环烷基、3～6元杂环烷基、-(ch2)mora、-(ch2)moc(o)ra、-(ch2)mnrarb、-(ch2)mnrac(o)rb、-(ch2)mc(o)ra、-(ch2)mc(o)ora、-(ch2)mc(o)nrarb；ra、rb分别独自选自氢、c1～6烷基、c2～6烯基、c2～6炔基、3～6元环烷基、3～6元杂环烷基、5～6元芳环、5～6元芳杂环；其中，3～6元环烷基、3～6元杂环烷基、5～6元芳环、5～6元芳杂环可以进一步被1～2个独立选自于卤素、c1～6烷基的取代基取代。优选的，e环选自4～5元的含n的杂环烷基。更优选的，式(ⅲ)化合物如下列结构所示：本发明的再一方面，还提供上述化合物或其立体异构体、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物在制备治疗与rock活性异常相关的疾病的药物中的用途。进一步的，所述与rock活性异常相关的疾病是细胞骨架调整、平滑肌细胞收缩、神经再生相关的疾病。更进一步的，所述的疾病为高眼压症或者青光眼。本发明的另一方面，还提供一种药物，它是以上述化合物或其立体异构体、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。本发明中提供的化合物和衍生物可以根据iupac(国际纯粹与应用化学联合会)或cas(化学文摘服务社，columbus，oh)命名系统命名。关于本发明的使用术语的定义：除非另有说明，本文中基团或者术语提供的初始定义适用于整篇说明书的该基团或者术语；对于本文没有具体定义的术语，应该根据公开内容和上下文，给出本领域技术人员能够给予它们的含义。“取代”是指分子中的氢原子被其它不同的原子或分子所替换。碳氢基团中碳原子含量的最小值和最大值通过前缀表示，例如，前缀ca～b烷基表明任何含“a”至“b”个碳原子的烷基。因此，例如，c1～4烷基是指包含1～4个碳原子的烷基。本发明中烯基可含有一个或多个碳碳双键。本发明中炔基可含有一个或多个碳碳三键。本发明中ca～b烷氧基、ca～b烷酯基、ca～b烷氨基、ca～b酰基分别是指含有“a”至“b”个碳原子的烷基与对应的氧原子、酯基、氨基、酰基相连得到的基团。本发明中的立体异构体包括对映异构体和非对映异构体。本发明中卤素包括氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等。本发明中杂原子包括氮原子、氧原子、硫原子等。本发明中环烷基指非芳香性的环状碳氢基团，包括饱和环烷基和部分饱和环烷基。本发明中杂环烷基指环中含有杂原子的非芳香性环烷基，包括饱和杂环烷基和部分饱和杂环烷基。本发明中芳环指具有芳香性的环状碳氢基团。本发明中芳杂环指环中含有杂原子的芳环。术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。术语“盐”和“可药用的盐”是指上述化合物或其立体异构体，与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物，或其立体异构体，与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明中所述盐可以是化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。在某些实施方式中，本发明的一种或多种化合物可以彼此联合使用。也可选择将本发明的化合物与任何其它的活性试剂结合使用，用于制备调控细胞功能或治疗疾病的药物或药物组合物。如果使用的是一组化合物，则可将这些化合物同时、分别或有序地对受试对象进行给药显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。附图说明图1为k115对正常眼压新西兰白兔的降眼压活性的实验结果图2为化合物5对正常眼压新西兰白兔的降眼压活性的实验结果图3为化合物11a对正常眼压新西兰白兔的降眼压活性的实验结果图4为化合物11a对高眼压新西兰白兔的降眼压活性的实验结果具体实施方式化合物结构通过核磁共振(nmr)和质谱(ms)来确定的。nmr位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。nmr的测定是用(brukeravanceiii400和brukeravance300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(dmso-d6)、氘代氯仿(cdcl3)、氘代甲醇(meod)，内标为四甲基硅烷(tms)。lc-ms的测定使用岛津液质联用仪(shimadzulc-ms2020(esi))。hplc的测定使用岛津高压液相色谱仪(shimadzulc-20a)。mplc(中压制备色谱)使用gilsongx-281反相制备色谱仪。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。薄层层析硅胶板用烟台黄海hsgf254或青岛gf254硅胶板，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于安耐吉化学、成都科龙化工、韶远化学科技、百灵威科技等公司。室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。实施例中无特殊说明，m是摩尔每升。实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。简写说明：dcm为二氯甲烷；ea、etoac为乙酸乙酯；pe为石油醚；thf为四氢呋喃；dmf为n,n-二甲基甲酰胺；diea为二异丙基乙胺；dmap为4-二甲氨基吡啶；edci为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；hobt为1-羟基苯并三唑；hbtu为苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐；pd(dppf)cl2为[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯。实施例1、n-(3-氨基-1-苯基丙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备。步骤1.(s)-n-苯亚甲基-2-甲基丙烷-2-磺酰胺室温下向苯甲醛(30.0g,283mmol)的四氢呋喃(150ml)溶液中加入叔丁基亚磺酰胺(51.4g,424mmol)和钛酸四异丙酯(100g,353mmol)，于60℃搅拌4小时后加水过滤，用乙酸乙酯萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得(s)-n-苯亚甲基-2-甲基丙烷-2-磺酰胺(54g，232mmol，产率82％)。ms(esi)m/z＝210(m+1)+。步骤2.(s)-2-甲基-n-(2-硝基-1-苯乙基)-丙烷-2-亚磺酰胺的制备(s)-n-苯亚甲基-2-甲基丙烷-2-磺酰胺(48.0g，229mmol)溶于四氢呋喃(500ml)，在氮气保护下于0℃加入叔丁醇钾(38.5g，344mmol)，反应液搅拌1小时后加入硝基甲烷(140g，2.29mol)，室温搅拌24小时。反应液用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得到(s)-2-甲基-n-(2-硝基-1-苯乙基)-丙烷-2-亚磺酰胺(18g，66.6mmol，产率29％)。ms(esi)m/z＝271(m+1)+。步骤3.(s)-2-甲基-n-(2-胺基-1-苯乙基)-丙烷-2-亚磺酰胺的制备将(s)-2-甲基-n-(2-硝基-1-苯乙基)-丙烷-2-亚磺酰胺(8.00g，29.6mmol)溶于甲醇(50.0ml)，加入雷尼镍(800mg，10％)，室温搅拌24小时。反应液用硅藻土过滤，减压蒸除溶剂得(s)-2-甲基-n-(2-胺基-1-苯乙基)-丙烷-2-亚磺酰胺(6.00g，21.5mmol，产率86％)。ms(esi)m/z＝241(m+1)+。步骤4.苄基-n-(((s)-叔丁基亚磺酰胺)-2-苯乙基)氨基甲酸酯的制备将(s)-2-甲基-n-(2-胺基-1-苯乙基)-丙烷-2-亚磺酰胺(7.00g，29.1mmol)溶于四氢呋喃(70.0ml)，加入三乙胺(11.8g，116mmol)和苯甲氧羰酰琥珀酰亚胺(8.70g，34.9mmol)，搅拌1小时后用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得苄基-n-(((s)-叔丁基亚磺酰胺)-2-苯乙基)氨基甲酸酯(6.02g，12.8mmol，产率44％)。ms(esi)m/z＝375(m+1)+。步骤5.苄基-n-(2-氨基-2-苯基-乙基)氨基甲酸酯的制备将苄基-n-(((s)-叔丁基亚磺酰胺)-2-苯乙基)氨基甲酸酯(5.00g，13.4mmol)溶于甲醇(10.0ml)，加入1,4-二氧六环的盐酸溶液(40.0ml，5mol/l)，搅拌1小时后减压蒸除溶剂得苄基-n-(2-氨基-2-苯基-乙基)氨基甲酸酯(3.01g，10.2mmol，产率76％)。ms(esi)m/z＝271(m+1)+。步骤6.苄基-n-((2s)-2-(异喹啉-6-甲酰胺)-2-苯基-乙基)氨基甲酸酯的制备将苄基-n-(2-氨基-2-苯基-乙基)氨基甲酸酯(2.00g，7.40mmol)溶于dmf(10.0ml)，加入苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(2.07g，8.14mmol),异喹啉-6-甲酸(1.28g，7.40mmol)和n,n-二异丙基乙胺(3.38g，29.6mmol)，搅拌1小时后用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得苄基-n-((2s)-2-(异喹啉-6-甲酰胺)-2-苯基-乙基)氨基甲酸酯(2.01g，4.24mmol，产率57％)。ms(esi)m/z＝426(m+1)+。步骤7.n-((s)-2氨基-1苯基-乙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备将苄基-n-((s)-2-(异喹啉-6-甲酰胺)-2-苯基-乙基)氨基甲酸酯(300mg，0.71mmol)溶于乙酸(5.00ml)，加入氢溴酸醋酸溶液(2.50ml，33％)，搅拌1小时后减压蒸除溶剂得n-((s)-2氨基-1苯基-乙基)异喹啉-6-甲酰胺(180mg，540μmol，产率76％)。ms(esi)m/z＝292(m+1)+。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.78-9.84(m，2h),8.94(s,1h),8.73-8.74(d,j＝4,1h),8.52-8.54(d,j＝8hz,1h),8.39-8.46(m,4h),7.50-7.52(d,j＝8,2h),7.32-7.42(m,3h),5.41-5.46(m,1h),3.44-3.49(m,1h),3.17-3.24(m,1h)。实施例2、(s)-n-(3-氨基-1-(3-溴苯基)丙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备按照实施例1中步骤1到步骤7的方法，并将步骤1中的苯甲醛换为3-溴苯甲醛，得到(s)-n-(3-溴苯亚甲基)-2-甲基-叔丁基亚磺酰胺。ms(esi)m/z＝370,372(m+1)+。1hnmr(400mhz,meod):δ＝9.91(s,1h),8.96(s,1h),8.65-8.71(m,3h),8.49-8.52(j＝12hz,1h),7.78(t,j＝7.2hz,1h),7.54-7.57(m,2h),7.36-7.42(m,1h),3.64-3.75(m,1h),1.87-1.81(m,2h)。实施例3、(s)-n-(2-氨基-1-(4-(羟甲基)苯基)乙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备步骤1.(s)-4-(((叔丁基亚磺酰基)亚胺)甲基)苯甲酸异丙酯的制备室温下向(s)-叔丁基亚磺酰胺(83.1g，685mmol)的thf(50.0ml)溶液中加入4-甲酰基苯甲酸甲酯(50.0g，305mmol)和四异丙基钛(108g，381mmol)，回流搅拌2小时。待反应液冷却后用水(200ml)淬灭，滤出白色固体。滤液分层，水相用乙酸乙酯萃取(200ml×1)。合并有机相依次饱和食盐水(300ml×1)、水(300ml×1)洗各1次后用无水na2so4干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂。柱层析纯化得(s，e)-4-(((叔丁基亚磺酰基)亚胺)甲基)苯甲酸异丙酯(60g，203mmol，产率67％)。ms(esi)m/z＝296(m+1)+。步骤2.4-((s)-1-((s)-1,1-二甲基乙基亚磺酰胺)-2-硝基乙基)苯甲酸异丙酯的制备在冰浴下往硝基甲烷(31.0g，654mmol)的thf(400ml)溶液中分批加入叔丁醇钾(11.0g，98.1mmol)，氮气保护下室温搅拌30分钟。于冰浴下滴入(s)-4-(((叔丁基亚磺酰基)亚胺)甲基)苯甲酸异丙酯(18.0g，65.4mmol)的thf(200ml)溶液，氮气保护下室温搅拌过夜。反应液用水淬灭(400ml)，乙酸乙酯萃取(400ml)。有机相依次用饱和食盐水(400ml)洗1次后用无水na2so4干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂。柱层析纯化得4-((s)-1-((s)-1,1-二甲基乙基亚磺酰胺)-2-硝基乙基)苯甲酸异丙酯(12g，35.7mmol，产率55％)。ms(esi)m/z＝357(m+1)+。步骤3.4-((s)-2-氨基-1-((s)-1,1-二甲基乙基亚磺酰胺)乙基)苯甲酸异丙酯的制备氮气保护下于室温往4-((s)-1-((s)-1,1-二甲基乙基亚磺酰胺)-2-硝基乙基)苯甲酸异丙酯(10.0g，28.1mmol)的甲醇(30.0ml)溶液中加入雷尼镍(1.00g，10％w/w)和三乙胺(1.42g，14.0mmol)。于氢气下室温搅拌4小时。反应液过滤，滤饼甲醇洗涤，滤液减压蒸除溶剂得4-((s)-2-氨基-1-((s)-1,1-二甲基乙基亚磺酰胺)乙基)苯甲酸异丙酯(9.40g，26.9mmol，产率96％)。ms(esi)m/z＝327(m+1)+。步骤4.(s)-n-((s)-2-氨基-1-(4-(羟甲基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备氮气保护下于室温往4-((s)-2-氨基-1-((s)-1,1-二甲基乙基亚磺酰胺)乙基)苯甲酸异丙酯(8.00g，24.5mmol)的thf(200ml)溶液中加入libh4(4.50g，204mmol)。于氮气下回流16小时。反应液于冰浴下用水淬灭(300ml)，etoac萃取(300ml×2)。有机相用无水na2so4干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂得(s)-n-((s)-2-氨基-1-(4-(羟甲基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(4.6g，15.7mmol，产率77％)。ms(esi)m/z＝271(m+1)+。步骤5.(9h-芴-9-基)甲基-((s)-2-((s)-1,1-二甲基乙基亚磺酰胺)-2-(4-(羟甲基)苯基)乙基)氨基甲酸酯的制备室温下往(s)-n-((s)-2-氨基-1-(4-(羟甲基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3.97g，14.7mmol)的thf(20ml)和水(20ml)的溶液中加入(9h-芴-9-基)甲基-(2,5-二酮吡咯烷-1-基)碳酸酯(7.44g，22.1mmol)和nahco3(3.70g，44.1mmol)。于室温下搅拌1小时。用乙酸乙酯萃取(50ml×2)，合并有机相后用饱和食盐水(50ml×1)洗1次，有机相用无水na2so4干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂得(9h-芴-9-基)甲基((s)-2-((s)-1,1-二甲基乙基亚磺酰胺)-2-(4-(羟甲基)苯基)乙基)氨基甲酸酯(5.00g，9.70mmol，产率66％)。ms(esi)m/z＝493(m+1)+。步骤6.(s)-(9h-芴-9-基)甲基(2-氨基-2-(4-(羟基)苯基)乙基)氨基甲酸酯盐酸盐的制备室温下往(9h-芴-9-基)甲基((s)-2-((s)-1,1-二甲基乙基亚磺酰胺)-2-(4-(羟甲基)苯基)乙基)氨基甲酸酯(2.30g，4.67mmol)的甲醇(3.0ml)溶液中加入饱和盐酸二氧六环溶液(30ml)。于室温下搅拌30分钟。反应液减压蒸除溶剂得(s)-(9h-芴-9-基)甲基(2-氨基-2-(4-(羟基)苯基)乙基)氨基甲酸酯盐酸盐(1.90g，4.47mmol，产率96％)。ms(esi)m/z＝389(m+1)+。步骤7.(s)-(9h-芴-9-基)甲基(2-(4-(羟甲基)苯基)-2-(异喹啉-6-甲酰胺)乙基)氨基甲酸酯的制备室温下往异喹啉-6-甲酸(293mg，1.69mmol)和(s)-(9h-芴-9-基)甲基(2-氨基-2-(4-(羟基)苯基)乙基)氨基甲酸酯盐酸盐(600mg，1.41mmol)的dmf(10.0ml)溶液中加入edci(325mg，1.69mmol)，hobt(229mg，1.69mmol)和dmap(17.2mg，0.14mmol)。于室温下搅拌2小时。用水淬灭(30ml)，etoac萃取(30ml×2)。合并有机相用饱和食盐水(30ml×1)洗1次，有机相用无水na2so4干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂。柱层析纯化得(s)-(9h-芴-9-基)甲基(2-(4-(羟甲基)苯基)-2-(异喹啉-6-甲酰胺)乙基)氨基甲酸酯(497mg，0.86mmol，产率61％)。ms(esi)m/z＝544(m+1)+。步骤8.(s)-n-(2-氨基-1-(4-(羟甲基)苯基)乙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备室温下往(s)-(9h-芴-9-基)甲基(2-(4-(羟甲基)苯基)-2-(异喹啉-6-甲酰胺)乙基)氨基甲酸酯(140mg，0.258mmol)的thf(15.0ml)溶液中加入哌啶(219mg，2.58mmol)。于室温下搅拌1小时。反应液减压蒸除溶剂，mplc纯化得(s)-n-(2-氨基-1-(4-(羟甲基)苯基)乙基)异喹啉-6-甲酰胺(38.4mg，92.4μmol，产率95％)。ms(esi)m/z＝322(m+1)+。1hnmr(400mhz,meod):δ＝9.91(s,1h),8.90(d,j＝16.48hz,1h),8.71(d,j＝6.8hz,1h),8.66(s,1h),8.64(s,1h),8.48(dd,j＝1.52hz,j＝1.60hz,1h),7.56(s,1h),7.54(s,1h),7.47(s,1h),7.45(s,1h),5.57(q,1h),4.67(q,2h),3.62(t,1h),3.49(t,1h)。实施例4、(s)-4-(2-氨基-1-(异喹啉-6-甲酰胺基)乙基)苯基2,4-二甲基苯甲酸酯的制备步骤1.(s)-4-(2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-1-(异喹啉-6-甲酰胺基)乙基)苯基2,4-二甲基苯甲酸酯室温下往(s)-(9h-芴-9-基)甲基(2-(4-(羟甲基)苯基)-2-(异喹啉-6-甲酰胺)乙基)氨基甲酸酯(158mg，281μmol)和2,4-二甲基苯甲酸(50.7mg，328μmol)的二氯甲烷溶液(40.0ml)中加入edci(70.2mg，366μmol)和dmap(3.44mg，128μmol)，室温搅拌过夜。减压蒸除溶剂，柱层析纯化得(s)-4-(2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-1-(异喹啉-6-甲酰胺基)乙基)苯基2,4-二甲基苯甲酸酯(151mg，0.22mmol，产率77％)。ms(esi)m/z＝676(m+1)+。步骤2.(s)-4-(2-氨基-1-(异喹啉-6-甲酰胺基)乙基)苯基2,4-二甲基苯甲酸酯的制备室温下往(s)-4-(2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-1-(异喹啉-6-甲酰胺基)乙基)苯基2,4-二甲基苯甲酸酯(150mg，222μmol)的thf(10.0ml)溶液中加入哌啶(378mg，4.44mmol)。于室温下搅拌过夜。减压蒸除溶剂后经mplc纯化得(s)-4-(2-氨基-1-(异喹啉-6-甲酰胺基)乙基)苯基-2,4-二甲基苯甲酸酯(35mg，71.4μmol，产率14％)。ms(esi)m/z＝454(m+1)+。1hnmr(400mhz,meod):δ＝9.89(s,1h),8.88(s,1h),8.70(d,j＝6.52hz,1h),8.65(d,j＝3.24hz,1h),8.63(s,1h),8.48(dd,j＝1.48hz,j＝1.52hz,1h),7.83(d,j＝7.96hz,1h),7.59(q,4h),7.12(s,1h),7.09(d,j＝8.0hz,1h),5.59(q,1h),5.36(s,2h),3.63(q,1h),3.50(dd,j＝4.92hz,j＝4.52hz,1h),2.55(s,3h),2.36(s,3h)。实施例5、n-((1s)-2-(二甲氨基)-1-苯基-乙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备步骤1.n-((s)-2-(二甲氨基)-1-苯基-乙基)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺的制备将(s)-2-甲基-n-(2-胺基-1-苯乙基)-丙烷-2-亚磺酰胺(700mg，2.96mmol)溶于甲醇(70ml)，加入乙酸(178mg，2.96mmol)和甲醛水溶液(266mg，8.88mmol)，搅拌1小时后加入氰基硼氢化钠(744mg，11.8mmol)，继续反应2小时后用ea和水萃取，再将水相用ea萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得n-((1s)-2-(二甲氨基)-1-苯基-乙基)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(201mg，0.59mmol，产率20％)。ms(esi)m/z＝269(m+1)+。步骤2.(1s)-n’,n’-二甲基-1-苯基-乙烷-1,2-联氨的制备将n-((1s)-2-(二甲氨基)-1-苯基-乙基)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(200mg，0.75mmol)溶于甲醇(5.0ml)，加入盐酸二氧六环溶液(10ml，5m)搅拌1小时后减压蒸除溶剂得(1s)-n’,n’-二甲基-1-苯基-乙烷-1,2-联氨(100mg，0.48mmol，产率65％)。ms(esi)m/z＝165(m+1)+。步骤3.n-((1s)-2-(二甲氨基)-1-苯基-乙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备将(1s)-n’,n’-二甲基-1-苯基-乙烷-1,2-联氨(90.0mg，550μmol)溶于dmf(10.0ml)，加入苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(153mg，600μmol)、异喹啉-6-甲酸(105mg，600μmol)和n,n-二异丙基乙胺(284g，2.19mmol)，搅拌1小时后用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得苄基-n-((2s)-2-(异喹啉-6-甲酰胺)-2-苯基-乙基)氨基甲酸酯(52mg，0.13mmol，产率24％)。ms(esi)m/z＝320(m+1)+。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.11(s,1h),10.00-10.3(d,j＝8.4,1h),9.88(s,1h),9.02(s,1h),8.74-8.75(d,j＝6.4,1h),8.46-8.56(m,3h),7.59-7.61(m,2h),7.34-7.43(m,3h),5.62-5.66(m,1h),3.86-3.92(m,1h),3.45-3.49(m,1h),2.88-2.92(m,6h)。实施例6、n-(3-氨基-1-(3-氯苯基)丙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备。步骤1.3-氨基-3-(3-氯苯基)丙烯腈的制备室温下往3-氯苯腈(8.00g，58.2mmol)的甲苯(50.0ml)溶液中加入乙腈(4.77g，116mmol)和叔丁醇钾(15.0g，134mmol)并且搅拌6小时，用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得到3-氨基-3-(3-氯苯基)丙烯腈(4.99g，28.0mmol，产率48％)。ms(esi)m/z＝179(m+1)+。步骤2.3-氨基-3-(3-氯苯基)丙腈的制备将3-氨基-3-(3-氯苯基)丙烯腈(5.00g，28.0mmol)溶于乙醇(10.0ml)，室温下加入氰基硼氢化钠(2.11g，33.6mmol)和1滴0.5％的溴甲酚绿乙醇溶液。然后加入浓盐酸直到反应液保持黄色，继续室温搅拌3小时。减压蒸除溶剂并用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得到3-氨基-3-(3-氯苯基)丙腈(5.02g，27.7mmol，产率99％)。ms(esi)m/z＝181(m+1)+。步骤3.n-(1-(3-氯苯基)-2-氰乙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备将6-异喹啉甲酸(1.50g，8.30mmol)溶于dmf(15.0ml)，室温下加入hbtu(3.47g，9.13mmol)、diea(3.21g，24.9mmol)和3-氨基-3-(3-氯苯基)丙腈(1.58g，9.13mmol)。室温下搅拌3小时。减压蒸除溶剂并用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得n-(1-(3-氯苯基)-2-氰乙基)异喹啉-6-甲酰胺(1.8g，5.36mmol，产率65％)。ms(esi)m/z＝336(m+1)+。步骤4.n-(3-氨基-1-(3-氯苯基)丙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备将n-(1-(3-氯苯基)-2-氰乙基)异喹啉-6-甲酰胺(70.0mg，210μmol)溶于甲醇(5.00ml)，室温下加入雷尼镍(10.0mg)。在氢气下于室温搅拌3小时。过滤除去固体，减压蒸除溶剂。经mplc纯化得n-(3-氨基-1-(3-氯苯基)丙基)异喹啉-6-甲酰胺(15.2mg，42.0μmol，产率20％)。ms(esi)m/z＝340(m+1)+。1hnmr(400mhz,meod):δ＝9.34(s,1h),8.56-8.54(m,1h),8.44(s,1h),8.25-8.23(m,1h),8.10-8.08(m,1h),7.98-7.96(m,1h),7.53-7.52(m,1h),7.44-7.41(m,1h),7.39-7.37(m,1h),7.34-7.31(m,1h),5.31-5.27(m,1h),2.92-2.78(m,2h),2.24-2.06(m,2h)。实施例7、4-(3-(3-氨基-1-(异喹啉-6-甲酰胺)丙基)苯基)噻吩-2-羧酸乙酯的制备步骤1.叔丁基(1-(3-氯苯基)-2-氰乙基)氨基甲酸酯的制备将3-氨基-3-(3-氯苯基)丙腈(5.00g，27.7mmol)溶于thf/h2o/meoh＝4/1/1(100.00ml)的混合溶液中，室温下加入碳酸钠(8.80g，83.0mmol)和碳酸二叔丁酯(6.65g，30.5mmol)。室温搅拌3小时。减压蒸除溶剂并用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得叔丁基(1-(3-氯苯基)-2-氰乙基)氨基甲酸酯(5.6g，20mmol，产率72％)。ms(esi)m/z＝281(m+1)+。步骤2.叔丁基(3-氨基-1-(3-氯苯基)丙基)氨基甲酸甲酯的制备将叔丁基(1-(3-氯苯基)-2-氰乙基)氨基甲酸酯(2.00g，7.12mmol)溶于甲醇(25.0ml)，室温下加入雷尼镍(200mg)，在氢气下于室温搅拌3小时。过滤除去固体，减压蒸除溶剂。经mplc纯化得到叔丁基(3-氨基-1-(3-氯苯基)丙基)氨基甲酸甲酯(2.01g，7.02mmol，产率99％)。ms(esi)m/z＝285(m+1)+。步骤3.苄基叔丁基(1-(3-氯苯基)丙烷-1,3-取代基)二氨基甲酸酯的制备将叔丁基(3-氨基-1-(3-氯苯基)丙基)氨基甲酸甲酯(2.00g，7.02mmol)溶于四氢呋喃(50.0ml)，室温下加入三乙胺(2.13g，21.1mmol)。室温搅拌3小时。减压蒸除溶剂并用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得到苄基叔丁基(1-(3-氯苯基)丙烷-1,3-取代基)二氨基甲酸酯(2.81g，6.68mmol，产率95％)。ms(esi)m/z＝419(m+1)+。步骤4.苄基叔丁基(1-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)丙烷-1,3-取代基)二氨基甲酸酯的制备将苄基叔丁基(1-(3-氯苯基)丙烷-1,3-取代基)二氨基甲酸酯(2.20g，5.25mmol)溶于1,4-二氧六环(30.0ml)，室温下加入联硼酸频那醇酯(5.34g，421mmol)、2-双环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(43.1mg，110μmol)、醋酸钯(118mg，530μmol)和醋酸钾(1.54g，15.8mmol)。氮气保护下于100℃搅拌4小时。减压蒸除溶剂并用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得到苄基叔丁基(1-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)丙烷-1,3-取代基)二氨基甲酸酯(1.5g，2.94mmol，产率56％)。ms(esi)m/z＝511(m+1)+。步骤5.4-(3-(3-(苄氧甲酰胺)-1-(叔丁氧羰酰胺)丙基)苯基)噻吩-2-甲酸乙酯的制备将苄基叔丁基(1-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)丙烷-1,3-取代基)二氨基甲酸酯(1.20g，2.35mmol)溶于1,4-二氧六环(15.0ml)，室温下加入pd(dppf)cl2(172mg，240μmol)、碳酸钾(975mg，7.05mmol)和4-溴噻吩-2-羧酸乙酯(608mg，2.59mmol)。氮气保护下于100℃搅拌4小时。减压蒸除溶剂并用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得到4-(3-(3-(苄氧甲酰胺)-1-(叔丁氧羰酰胺)丙基)苯基)噻吩-2-甲酸乙酯(1.1g，2.04mmol，产率87％)。ms(esi)m/z＝539(m+1)+。步骤6.4-(3-(1-氨基-3-(苄氧甲酰胺)丙基)苯基)噻吩-2-羧酸乙酯的制备将4-(3-(3-(苄氧甲酰胺)-1-(叔丁氧羰酰胺)丙基)苯基)噻吩-2-甲酸乙酯(1.10g，2.04mmol)溶于甲醇(10.0ml)，室温下加入浓盐酸(5.00ml)。室温搅拌3小时。减压蒸除溶剂。经mplc纯化得4-(3-(1-氨基-3-(苄甲氧酰胺)丙基)苯基)噻吩-2-羧酸乙酯(864mg，1.97mmol，产率97％)。ms(esi)m/z＝439(m+1)+。步骤7.4-(3-(3-(苄氧甲酰胺)-1-(异喹啉-6-甲酰胺)丙基)苯基)噻吩-2-羧酸乙酯的制备将6-异喹啉甲酸(390mg，2.26mmol)溶于dmf(15.0ml)，室温下加入hbtu(573mg，2.26mmol)、diea(794mg，6.16mmol)和4-(3-(1-氨基-3-(苄甲氧酰胺)丙基)苯基)噻吩-2-羧酸乙酯(900mg，2.05mmol)。室温搅拌3小时。减压蒸除溶剂并用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得4-(3-(3-(苄氧甲酰胺)-1-(异喹啉-6-甲酰胺)丙基)苯基)噻吩-2-羧酸乙酯(1.01g，1.68mmol，产率83％)。ms(esi)m/z＝594(m+1)+。步骤8.4-(3-(3-氨基-1-(异喹啉-6-甲酰胺)丙基)苯基)噻吩-2-羧酸乙酯的制备将4-(3-(3-(苄氧甲酰胺)-1-(异喹啉-6-甲酰胺)丙基)苯基)噻吩-2-羧酸乙酯(1.00g，1.68mmol)溶于醋酸(5.00ml)，室温下加入氢溴酸醋酸溶液(5.00ml)。室温搅拌3小时。减压蒸除溶剂。经mplc纯化得4-(3-(3-氨基-1-(异喹啉-6-甲酰胺)丙基)苯基)噻吩-2-羧酸乙酯(50.3mg，0.09mmol，产率5.3％)。ms(esi)m/z＝594(m+1)+。1hnmr(400mhz,meod):δ＝9.34(s,1h),8.55-8.54(m,2h),8.46(s,1h),8.25-8.22(m,1h),8.19-8.18(m,1h),8.12-8.09(m,1h),8.02-8.01(m,1h),7.97-7.96(m,1h),7.85(s,1h),7.70-7.67(m,1h),7.51-7.50(m,2h),5.40-5.37(m,1h),4.41-4.36(m,2h),3.36-3.12(m,1h),3.06-2.99(m,1h),2.51-2.31(m,2h),1.40(t,j＝6.8hz,3h)。实施例8、n-(3-(二甲氨基)-1-苯基-丙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备步骤1.叔丁基n-(3-(二甲氨基)-1-苯基-丙基)氨基酸甲酯的制备将叔丁基(1-(3-氯苯基)-2-氰乙基)氨基甲酸酯(500mg，1.78mmol)溶于甲醇(10.0ml)，室温下加入钯碳(50.0mg)。在氢气下于室温搅拌3小时。加入甲醛溶液(535mg，17.8mmol)，在氢气下室温搅拌3小时。过滤除去固体，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得叔丁基n-(3-(二甲氨基)-1-苯基-丙基)氨基酸甲酯(402mg，1.44mmol，产率81％)。ms(esi)m/z＝279(m+1)+。步骤2.n',n'-二甲基-1苯基-丙基-1,3-二胺的制备将叔丁基n-(3-(二甲氨基)-1-苯基-丙基)氨基酸甲酯(200mg，0.72mmol)溶于甲醇(5.00ml)，室温下加入浓盐酸(5.00ml)。室温搅拌3小时，减压蒸除溶剂。经mplc纯化得n',n'-二甲基-1苯基-丙基-1,3-二胺(121mg，0.67mol，产率94％)。ms(esi)m/z＝179(m+1)+。步骤3.n-(3-(二甲氨基)-1-苯基-丙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备将6-异喹啉甲酸(100mg，570μmol)溶于dmf(5.00ml)，室温下加入hbtu(219mg，570μmol)、diea(224mg，1.73mmol)和n',n'-二甲基-1苯基-丙基-1,3-二胺(100mg，570μmol)。室温搅拌3小时。减压蒸除溶剂并用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得n-(3-(二甲氨基)-1-苯基-丙基)异喹啉-6-甲酰胺(39.6mg，120μmol，产率21％)。ms(esi)m/z＝334(m+1)+。1hnmr(400mhz,meod):δ＝9.80(s,1h),8.74(s,1h),8.46(s,1h),8.66(d,j＝6.0hz,1h),8.58-8.54(m,2h),8.37-8.35(m,1h),7.56-7.53(m,1h),7.46-7.43(m,1h),7.38-7.34(m,1h),5.34-5.31(m,1h),3.48-3.36(m,1h),3.29-3.19(m,1h),2.96(s,6h),2.56-2.46(m,1h),2.44-2.35(m,1h).实施例9、(n-氮杂环丁烷-基-苯甲基)异喹啉-6-甲酰胺的制备。步骤1.1-二苯甲基-n-甲氧基-n-甲基-氮杂环丁烷-3-甲酰胺的制备室温下往1-苯基氮杂环丁烷-3-甲酸(10.0g，37.4mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液中加入n,n-二异丙基乙胺(19.3g，150mmol)、n-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(5.56g，41.2mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(7.90g，41.2mmol)后室温搅拌4小时，用乙酸乙酯萃取，再将水相用乙酸乙酯和水萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得到1-二苯甲基-n-甲氧基-n-甲基-氮杂环丁烷-3-甲酰胺(9.8g，29.0mmol，产率78％)。ms(esi)m/z＝311(m+1)+。步骤2.(1-苯基氮杂环丁烷-3-基)-苯基-甲酮的制备将1-二苯甲基-n-甲氧基-n-甲基-氮杂环丁烷-3-甲酰胺(5.00g，16.1mmol)溶于四氢呋喃(50ml)，氮气保护下于0℃加入苯基溴化镁(80.6ml，1m，80.6mmol)，搅拌1小时后升至室温反应1小时。用饱和氯化铵溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得(1-苯基氮杂环丁烷-3-基)-苯基-甲酮(3.02g，8.25mmol，产率51％)。ms(esi)m/z＝328(m+1)+。步骤3.(1-苄基氮杂环丁烷-3-基)-苯基-甲氨基的制备将(1-苯基氮杂环丁烷-3-基)-苯基-甲酮(500mg，1.53mmol)溶于甲醇(25ml)和二氯甲烷(25ml)，加入乙酸(90.0mg，1.53mmol)和乙酸铵(1.47g，6.11mmol)，氮气下反应1小时后，加入氰基硼氢化钠(380mg，6.11mmol)。反应液用饱和氯化铵溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得(1-苄基氮杂环丁烷-3-基)-苯基-甲氨基(199mg，0.53mmol，产率34％)。ms(esi)m/z＝329(m+1)+。步骤4.四叔丁基-n-((1-苄基氮杂环丁烷-3-基)-苯基-甲基)氨基甲酸酯的制备将(1-苄基氮杂环丁烷-3-基)-苯基-甲氨基(1.20g，3.65mmol)溶于四氢呋喃(70ml)，加入碳酸钾(2.01g，14.6mmol)和二碳酸二叔丁酯(875mg，4.02mmol)，搅拌1小时后用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得四叔丁基-n-((1-苄基氮杂环丁烷-3-基)-苯基-甲基)氨基甲酸酯(1.10g，2.31mmol，产率63％)。ms(esi)m/z＝429(m+1)+。步骤5.四叔丁基-n-(氮杂环丁烷-3-基(苯基)甲基)氨基甲酸酯的制备将四叔丁基-n-((1-苄基氮杂环丁烷-3-基)-苯基-甲基)氨基甲酸酯(1.20g，2.80mmol)溶于甲醇(10ml)，加入氢氧化钯(39mg，10％)后在氢气下搅拌24小时。用硅藻土过滤后，减压蒸除溶剂得四叔丁基-n-(氮杂环丁烷-3-基(苯基)甲基)氨基甲酸酯(503mg，1.52mmol，产率54％)。ms(esi)m/z＝263(m+1)+。步骤6.烯丙基-3-((叔丁氧碳基酰胺)-苯基-甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸酯的制备将四叔丁基-n-(氮杂环丁烷-3-基(苯基)甲基)氨基甲酸酯(1.00g，3.81mmol)溶于四氢呋喃(10ml)，加入三乙胺(770mg，7.62mmol)和氯甲酸烯丙酯(367g，3.05mmol)，搅拌2小时后用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得烯丙基-3-((叔丁氧碳基酰胺)-苯基-甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸酯(597mg，1.39mmol，产率55％)。ms(esi)m/z＝347(m+1)+。步骤7.烯丙基-3-(苯甲基胺)氮杂环丁烷-1-羧酸酯的制备将烯丙基-3-((叔丁氧碳基酰胺)-苯基-甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸酯(500mg，1.44mmol)溶于甲醇(10.0ml)，冰浴下加入浓盐酸(3.00ml)，搅拌2小时后减压蒸除溶剂得烯丙基-3-(苯甲基胺)氮杂环丁烷-1-甲酸酯(121mg，0.39mol，产率27％)。ms(esi)m/z＝247(m+1)+。步骤8.烯丙基-3-(异喹啉-6-甲酰胺)苯甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸酯的制备室温下往烯丙基-3-(苯甲基胺)氮杂环丁烷-1-甲酸酯(150mg，610μmol)的dmf(10.0ml)溶液中加入n,n-二异丙基乙胺(315mg，2.44mmol)、n-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(120mg，0.61mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(156mg，0.61mmol)，室温搅拌4小时后用乙酸乙酯萃取，再将水相用乙酸乙酯和水萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得烯丙基-3-(异喹啉-6-甲酰胺)苯甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸酯(121mg，0.27mmol，产率44％)。ms(esi)m/z＝402(m+1)+。步骤9.n-(氮杂环丁烷-3-基-苯甲基)异喹啉-6-甲酰胺的制备室温下往烯丙基-3-(异喹啉-6-甲酰胺)苯甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸酯(120mg，0.30mmol)的四氢呋喃(5.00ml)溶液中加入四三苯基膦钯(3.45mg，0.30mmol)和吗啉(260mg，2.99mmol)，室温搅拌2小时后减压蒸除溶剂。柱层析纯化得n-(氮杂环丁烷-3-基-苯甲基)异喹啉-6-甲酰胺(6.0mg，0.14μmol，产率4.9％)。ms(esi)m/z＝318(m+1)+。1hnmr(400mhz,dmso-d6+d2o):δ＝9.78(s,1h),8.62-8.68(m,2h),8.49-8.55(m,2h),8.24-8.26(d,j＝8.8hz,1h),7.31-7.45(m,5h),5.39-5.41(d,j＝10.4hz,1h),4.12-4.16(m,1h),3.85-3.95(m,2h),3.72-3.78(m,1h),3.42-3.48(m,1h)。实施例10、(甲基-n-氮杂环丁烷-苯基)异喹啉-6-甲酰胺的制备。步骤1.四叔丁基(甲基-n-氮杂环丁烷-3-基(苯基)甲基)氨基甲酸酯的制备将四叔丁基-n-(氮杂环丁烷-3-基(苯基)甲基)氨基甲酸酯(1.00g，3.81mmol)溶于甲醇(10.0ml)，加入乙酸(266mg，3.81mmol)和甲醛水溶液(572mg，19.1mmol)，搅拌1小时后加入氰基硼氢化钠(239mg，3.81mmol)。用饱和氯化铵水溶液淬灭后，用乙酸乙酯萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得四叔丁基(甲基-n-氮杂环丁烷-3-基(苯基)甲基)氨基甲酸酯(796mg，2.03mmol，产率53％)。ms(esi)m/z＝277(m+1)+。步骤2.(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)-苯甲胺的制备将四叔丁基(甲基-n-氮杂环丁烷-3-基(苯基)甲基)氨基甲酸酯(773mg，2.80mmol)溶于甲醇(10ml)，冰浴下加入浓盐酸(3.00ml)，搅拌2小时后减压蒸除溶剂得烯丙基-3-(苯甲基胺)氮杂环丁烷-1-甲酸酯(0.48g，2.2mmol，产率78％)。ms(esi)m/z＝177(m+1)+。步骤3.n-((1-甲基氮杂环丁烷-3-基)-苯甲基)异喹啉-6-甲酰胺的制备室温下往烯丙基-3-(苯甲基胺)氮杂环丁烷-1-甲酸酯(400mg，2.27mmol)的dmf(10.0ml)溶液中加入n,n-二异丙基乙胺(1.17g，9.08mmol)、n-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(430mg，2.27mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(460mg，2.27mmol)，室温搅拌4小时，用乙酸乙酯萃取，再将水相用乙酸乙酯和水萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化到n-((1-甲基氮杂环丁烷-3-基)-苯甲基)异喹啉-6-甲酰胺(20.2mg，48.0μmol，产率2.1％)。ms(esi)m/z＝332(m+1)+。1hnmr(400mhz,meod):δ＝9.86(s,1h),8.77(s,1h),8.60-8.68(m,3h),8.36-8.38(d,j＝8.8hz,1h),7.52-7.54(d,j＝8.0hz,2h),7.42-7.45(m,2h),7.36-7.38(m,1h),5.51-5.60(m,1h),4.44-4.58(m,1h),4.11-4.23(m,2h),3.96-4.02(m,1h),3.62-3.71(m,1h),2.96-3.01(d,j＝12hz,3h)。实施例11、n-((s)-苯基-((r)-四氢吡咯-3-基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺和n-((r)-苯基-((r)-四氢吡咯-3-基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺的制备步骤1.(r)-叔丁基3-(甲氧基(甲基)甲酰胺基)四氢吡咯-1-甲酸酯的制备将(r)-1-叔丁氧基羰基四氢吡咯-3-羧酸(15.0g，69.7mmol)溶于dcm(200ml)，加入edci(14.6g，76.7mmol)，hobt(10.4g，76.7mmol)，diea(27.0g，209mmol)和二甲羟胺(6.38g，104.5mmol)，搅拌1小时后用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得叔丁基(r)-3-(甲氧基(甲基)氨基甲酰)四氢吡咯-1-甲酸酯(15g，58mmol，83％产率)。ms(esi)m/z＝259(m+1)+和203(m+1-56)+。步骤2.叔丁基(r)-3-苯甲酰基四氢吡咯-1-甲酸酯的制备将叔丁基(r)-3-(甲氧基(甲基)氨基甲酰)四氢吡咯-1-甲酸酯(10g，38.7mmol)溶于thf(30ml)，苯基溴化镁(194mmol，1m，194ml)滴加入反应体系在0℃搅拌1小时后用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得叔丁基(r)-3-苯甲酰基四氢吡咯-1-甲酸酯(9.1g，33mmol，84％产率)。ms(esi)m/z＝276(m+1)+和220(m+1-56)+。步骤3.(r)-叔丁基-3-((羟亚胺)(苯基)甲基)四氢吡咯-1-甲酸酯的制备将叔丁基(r)-3-苯甲酰基四氢吡咯-1-甲酸酯(10g，36.3mmol)溶于meoh(150ml)，室温下加入na2co3(11.6g，109mmol)和盐酸羟胺(6.00g，182mmol)，50℃搅拌2小时后用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得(r)-叔丁基-3-((羟亚胺)(苯基)甲基)四氢吡咯-1-甲酸酯(8.1g，28mmol，77％产率)。ms(esi)m/z＝291(m+1)和235(m+1-56)+。步骤4.叔丁基(3r)-3-(氨基(苯基)甲基)四氢吡咯-1-甲酸酯的制备将(3r)-3-((e)-n-羟基-c-苯基-碳化二亚胺)四氢吡咯-1-甲酸酯(8.0g，27mmol)溶于meoh(150.00ml)，室温下加入雷尼镍，氢气室温下搅拌2小时后用抽滤，滤液减压蒸除溶剂。柱层析纯化得叔丁基(r)-3-(氨基(苯基)甲基)四氢吡咯-1-甲酸酯(4.9g，18mmol，65％产率)。ms(esi)m/z＝277(m+1)+和221(m+1-56)+。步骤5.叔丁基(r)-3-((异喹啉-6-甲酰胺)-苯基-甲基)四氢吡咯-1-甲酸酯的制备将异喹啉-6-甲酸(3.00g，17.3mmol)溶于dmf(20.0ml)，加入苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(7.26g，19.06mmol)，叔丁基(r)-3-(氨基(苯基)甲基)四氢吡咯-1-甲酸酯(4.79g，17.3mmol)和n,n-二异丙基乙胺(3.38g，29.6mmol)，搅拌1小时后用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得叔丁基(r)-3-((异喹啉-6-甲酰胺)-苯基-甲基)四氢吡咯-1-甲酸酯(6.01g，13.9mmol，80％产率)。ms(esi)m/z＝432(m+1)+和376(m+1-56)+。步骤6.n-((s)-苯基-((r)-四氢吡咯-3-基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺和n-((r)-苯基-((r)-四氢吡咯-3-基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺的制备将叔丁基(r)-3-((异喹啉-6-甲酰胺)-苯基-甲基)四氢吡咯-1-甲酸酯(5.00g，11.6mmol)溶于乙酸乙酯(30.0ml)，加入浓盐酸(10.0ml)，搅拌1小时后减压蒸除溶剂，经pre-plc制备得到n-((s)-苯基-((r)-四氢吡咯-3-基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺(0.89g，2.69mmol，23％产率)和n-((r)-苯基-((r)-四氢吡咯-3-基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺(1.0g，,3.0mmol，26％产率)。ms(esi)m/z＝332(m+1)+。化合物11a:1hnmr(400mhz,meod):δ＝9.31(s,1h),8.53-8.49(m,2h),8.39(s,1h),8.19(d,j＝8.8hz,1h),8.04(d,j＝8.4hz,1h),7.93(d,j＝5.6hz,1h),7.55(d,j＝7.6hz,2h),7.45-7.41(m,2h),7.37-7.33(m,1h),5.18(d,j＝10.0hz,1h),3.55-3.49(m,1h),3.41-3.36(m,1h),3.19-3.11(m,2h),3.00-2.94(m,1h),2.45-2.39(m,1h),2.11-2.01(m,1h)。化合物11b:1hnmr(400mhz,meod):δ＝9.32(s,1h),8.53(d,j＝5.6hz,1h),8.47(s,1h),8.39(s,1h),8.20(d,j＝8.4hz,1h),8.05(d,j＝8.8hz,1h),7.94(d,j＝6.0hz,1h),7.54(d,j＝7.6hz,2h),7.45-7.41(m,2h),7.37-7.33(m,1h),5.15(d,j＝10.8hz,1h),3.69-3.64(m,1h),3.49-3.43(m,1h),3.31-3.26(m,2h),3.16-3.10(m,1h),1.93-1.85(m,1h),1.80-1.70(m,1h)。实施例12、n-((r)-((r)-1-甲基四氢吡咯-3-基)(苯基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺的制备将n-((r)-苯基-((r)-四氢吡咯-3-基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺(250mg，1.51mmol)溶于甲醇(15.0ml)，加入乙酸(9.1mg，0.15mmol)和甲醛水溶液(0.58ml，13m，7.55mmol)，搅拌1小时后加入醋酸硼氢化钠(0.96g，4.53mmol)，继续反应2小时后用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得n-((r)-((r)-1-甲基四氢吡咯-3-基)(苯基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺(30mg，83umol，11％产率)。ms(esi)m/z＝346(m+1)+。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ＝11.08-10.77(m,1h),9.77(s,1h),9.65-9.63(m,1h),8.76.-8.70(m,2h),8.47(d,j＝8.4hz,1h),8.37(s1h),8.27(t,j＝8.4hz,1h),7.52(t,j＝8.0hz,2h),7.41-7.36(m,2h),7.32-7.28(m,1h),5.16-5.07(m,1h),3.82-3.77(m,1h),3.55-3.48(m,2h),3.30-3.15(m,1h),3.13-3.05(m,1h),2.81(s,3h),1.79-1.61(m,2h)。实施例13、n-((s)-((r)-1-甲基四氢吡咯-3-基)(苯基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺的制备将n-((s)-苯基-((r)-四氢吡咯-3-基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺(250mg，1.51mmol)溶于甲醇(15.0ml)，加入乙酸(9.1mg，0.15mmol)和甲醛水溶液(0.58ml，13m，7.55mmol)，搅拌1小时后加入醋酸硼氢化钠(0.96g，4.53mmol)，继续反应2小时后用乙酸乙酯和水萃取，再将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。柱层析纯化得n-((s)-((r)-1-甲基四氢吡咯-3-基)(苯基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺(21mg，58umol，7.7％产率)。ms(esi)m/z＝346(m+1)+。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ＝11.17-10.90(m,1h),9.79(s,1h),9.65-9.48(m,1h),8.81.-8.70(m,2h),8.49(d,j＝8.4hz,1h),8.40-8.39(m,1h),8.28(d,j＝8.4hz,1h),7.57-7.49(m,2h),7.41-7.37(m,2h),7.32-7.29(m,1h),5.19-5.10(m,1h),3.63-3.51(m,2h),3.25-3.10(m,2h),3.08-2.91(m,1h),2.76-2.73(m,3h),2.37-2.23(m,1h),2.03-1.85(m,1h)。实施例14、n-((s)-苯基-((s)-四氢吡咯-3-基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺和n-((r)-苯基-((s)-四氢吡咯-3-基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺的制备按照实施例11中步骤1到步骤6的方法，将步骤1中的(r)-1-叔丁氧基羰基四氢吡咯-3-羧酸替换为(s)-1-叔丁氧基羰基四氢吡咯-3-羧酸，得到n-((s)-苯基-((s)-四氢吡咯-3-基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺(28mg，总产率5.1％)和n-((r)-苯基-((s)-四氢吡咯-3-基)甲基)异喹啉-6-甲酰胺(22mg，总产率4.9％)。ms(esi)m/z＝332(m+1)+。化合物14a:1hnmr(400mhz,dmso-d6):9.96(s,1h),9.79-9.81(d,j＝8.4hz,1h),9.51(s,2h),8.88(s,1h),8.75-8.76(d,j＝6hz,1h),8.57-8.61(m,2h),8.37-8.40(m,1h),7.58-7.59(m,2h),7.36-7.40(m,2h),7.30-7.31(m,1h),5.09-5.14(m,1h),3.29-3.31(m,1h),3.36-3.18(m,1h),3.2-3.06(m,1h),2.83-2.89(m,2h),2.23-2.27(m,1h),1.82-1.88(m,1h)。化合物14b:1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.90(s,1h),9.84(d,j＝7.6hz,1h),9.64(s,h),9.50(s,h),8.88(s,1h),8.74(d,j＝6.4hz,1h),8.49-8.57(m,2h),8.35(d,j＝8.8hz,1h),7.55-7.57(m,2h),7.37-7.40(m,2h),7.30-7.31(m,1h),5.06(t,j＝6.0hz,1h),3.52(m,1h),3.28(m,1h),3.06(m,3h),1.64(m,1h)。实施例15、n-((s)-2-(二甲氨基)-1-(3-甲氧基苯基)乙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备步骤1.n-((1s)-2-(二甲氨基)-1-(3-甲氧基苯基)乙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备按照实施例1中步骤1至步骤3、实施例5中步骤1至步骤3的方法，用3-甲氧基苯甲醛替代实施例1中步骤1中的苯甲醛，得到n-((s)-2-(二甲氨基)-1-(3-甲氧基苯基)乙基)异喹啉-6-甲酰胺。ms(esi)m/z＝350(m+1)+。1hnmr(400mhz,meod):δ＝9.75(s,1h),8.87(s,1h),8.66(d,j＝6.4hz,1h),8.55-8.53(m,1h),8.48(d,j＝6.4hz,1h),8.45-8.42(m,1h),7.39(t,j＝8.0hz,1h),7.20-7.16(m,2h),6.99-6.96(m,1h),5.80-5.76(m,1h),3.99-3.93(m,1h),3.85(s,1h),3.67-3.62(m,1h),3.11-3.08(m,6h)。实施例16、n-((s)-2-(二甲氨基)-1-(3-氯苯基)乙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备步骤1.n-((s)-2-(二甲氨基)-1-(3-氯苯基)乙基)异喹啉-6-甲酰胺的制备按照实施例1中步骤1至步骤3、实施例5中步骤1至步骤3的方法，用3-氯苯甲醛替代实施例1中步骤1中的苯甲醛，得到n-((s)-2-(二甲氨基)-1-(3-甲氧基苯基)乙基)异喹啉-6-甲酰胺。ms(esi)m/z＝354(m+1)+。1hnmr(400mhz,meoh):δ＝9.91(s,1h),9.06(s,1h),8.72-8.64(m,3h),8.57(d,j＝8.8hz,2h),7.69(s,1h),7.48-7.41(m,2h),5.82(d,j＝11.6hz,1h),4.06(t,j＝11.6hz,1h),3.64(t,j＝13.6hz,1h),3.12(s,3h),3.08(s,3h)。为了说明本发明的有益效果，本发明提供以下试验例：试验例1、rock2抑制活性的检测rock2能够磷酸化s6k(krrrlaslr)多肽底物，将atp转化成adp。在激酶反应后，加入adp-glotm试剂，使激酶反应终止，并消耗完剩余的atp。加入激酶检测试剂，它在使adp转化成atp的同时，atp再被ultra-glotm萤光素酶转化成光发光信号，发光信号与激酶活性正相关。按以下步骤进行rock2抑制活性的检测：1.检测缓冲液:40mmtrisph7.5，20mmmgcl2，0.1％bsa(w/v)，50μmdtt；2.加12μl2.5x0.1μg/mlrock2工作液进入96孔pcr板；3.加6μl6x化合物工作液进入96孔pcr板混匀，25℃预孵育10min；4.加入12μl2.5x37.5μg/mls6k底物和12.5μmatp混合工作液，30℃孵育60min；5.取25μl反应混合物到一个新96孔pcr板，并加入25μladp-glotm试剂混匀，25℃孵育40min终止反应；6.取40μl终止反应混合物到一个新96孔pcr板，并加入40μl激酶检测试剂混匀，25℃孵育40min；7.读取luminescence(冷光)信号值，计算抑制率。按照上述方法对实施例制备的化合物进行rock2抑制活性检测，试验结果见表1，其中测定各化合物的ic50按照说明分类，表1中：“+”表示ic50测定值大于500nm；“++”表示ic50测定值小于500nm大于100nm；“+++”表示ic50测定值小于100nm表1、化合物对rock2的抑制活性上述实验表明，本发明的化合物对rock2具有良好的酶学抑制活性。试验例2、细胞原位免疫印迹(in-cellwestern)检测肌球蛋白轻链磷酸化使用大鼠平滑肌细胞系a7r5。rock2通过磷酸化肌球蛋白轻链t18/s19两个氨基酸位点导致细胞骨架的改变。将a7r5细胞接种入96孔透明底黑色板，培养条件为含10％fbs的dmem。过夜培养后，血清饥饿4小时，在无血清培养基中将细胞与化合物一起温育1小时。使用phspho-mlc-t18/s19特异性抗体和第二检测抗体，通过细胞原位免疫印迹检测肌球蛋白轻链磷酸化水平。未处理的细胞作为阳性对照，一抗未孵育样品作为阴性对照，细胞内总蛋白作为内参。使用graphpadprism5.01软件，使用具有变化斜率的非线性回归曲线拟合，确定ec50值。按照上述方法对实施例制备的化合物进行大鼠平滑肌细胞系a7r5肌球蛋白轻链磷酸化抑制活性检测，试验结果见表1，其中测定各化合物的ic50按照说明分类，表1中：“+”表示ic50测定值大于1μm；“++”表示ic50测定值小于1μm大于250nm；“+++”表示ic50测定值小于250nm表2、化合物对大鼠平滑肌细胞系a7r5的抑制活性实施例化合物a7r5实施例化合物a7r51++2+++4+5++6+++7++8+9++10++11a++13++15++16++上述试验结果表明，本发明的化合物对大鼠平滑肌细胞系a7r5具有良好的抑制活性，进而，本发明的化合物可以抑制由rock2通过磷酸化肌球蛋白轻链t18/s19两个氨基酸位点导致细胞骨架的改变，并具有治疗与此相关疾病的潜在活性。试验例3、动物实验(正常眼压模型)将24只雄性新西兰白兔分为4组，每组6只。使用考虑了体重的计算机随机化算法，将动物随机分配到各组当中。在实验开始前3天至前1天，所有动物需要被训练适应眼压测量的操作过程，每天应进行3次，间隔约3小时。眼压测定使用tonovet眼压计，固定测试动物，并将待测眼置于tonovet眼压计相垂直的位置上。测量至少3次眼压，直至眼压读数稳定。取最后3次稳定的测量数据(±3mmhg)，取均值，视作最终眼压值。称取检测化合物，用生理盐水溶解成使用浓度。实验开始时，待测化合物、对照品k115、或阴性对照溶剂(50μl)将被施于每只动物的右眼，左眼则滴加生理盐水。在滴加药物之后的第pre,1,2,4,6,8,10小时之后测量眼压。使用student-t检验来分析单个时间点的数据。眼压随时间的变化曲线将使用anova检验来分析。p值小于0.05将被视为具有统计学显著性，数据的展示方式是平均值正负标准误。实验结果(见图1、图2、图3)表明，本发明化合物5与化合物11a具有与对照品k115类似的降眼压活性，并且具有更长的作用时间。试验例4、动物实验(高眼压单眼造模模型)将10只雄性新西兰白兔分为2组，每组5只。使用考虑了体重的计算机随机化算法，将动物随机分配到各组当中。在实验开始前3天至前1天，所有动物需要被训练适应眼压测量的操作过程，每天应进行3次，间隔约3小时。眼压测定使用tonovet眼压计，固定测试动物，并将待测眼置于tonovet眼压计相垂直的位置上。测量至少3次眼压，直至眼压读数稳定。取最后3次稳定的测量数据(±3mmhg)，取均值，视作最终眼压值。称取检测化合物，用生理盐水溶解成使用浓度。诱导高眼压前，测量双眼的眼压值，作为基础眼压记录。随后，通过静脉注射(50％)戊巴比妥钠50mg/kg对白兔进行麻醉。使用尖30-g针建立临时前房穿刺，向白兔右眼前房注射50μl的粘性物质，以诱导高眼压，对侧眼给予相同体积的生理盐水。随后，使用棉签按压前房穿刺，以防止房水回流。每组造模动物的右眼給予受试化合物，一天三次分别在第0,3,6小时给药1次,50μl/眼。对测眼将在相同时间点給予相同体积的生理盐水或特定溶媒。第0,1,2,3,4,6,8小时之后测量眼压。使用student-t检验来分析单个时间点的数据。眼压随时间的变化曲线将使用anova检验来分析。p值小于0.05将被视为具有统计学显著性，数据的展示方式是平均值正负标准误。实验结果(见图4)表明，本发明的化合物11a对高眼压具有良好的降压活性。本发明的上述试验表明，本发明实施例的化合物具有良好的rock抑制活性，可以有效用于与rock活性异常疾病的治疗。综上所述，本发明公开的式i所示的新化合物，表现出了良好的rock抑制活性，为临床治疗与rock活性异常相关的疾病提供了一种新的药用可能。当前第1页12