一种多粘类芽孢杆菌及其应用的制作方法

文档序号:16068820发布日期:2018-11-24 12:56阅读:403来源:国知局

本发明属于微生物技术领域,具体涉及一种多粘类芽孢杆菌及其应用。

背景技术

小麦赤霉病别名麦穗枯、烂麦头、红麦头,是小麦的主要病害之一。小麦赤霉病在全世界普遍发生,主要分布于潮湿和半潮湿区域,尤其气候湿润多雨的温带地区受害严重。从幼苗到抽穗都可受害,主要引起苗枯、茎基腐、秆腐和穗腐,其中为害最严重的是穗腐。

茭白胡麻斑病又称茭白叶枯病。主要为害叶片。叶斑初为褐色小点,后扩大为褐色椭圆形斑,大小和形状如芝麻粒,故称胡麻斑病。病斑常围有黄晕,湿度大时斑面生暗灰至黑色霉状物。发病严重时,病斑密布,有的连片为大斑块,终致叶片干枯。

番茄早疫病又称为“轮纹病”,各地普遍发生,是危害番茄的重要病害之一。此病原寄主范围广泛,除危害番茄外,还可危害茄子、辣椒等等茄科蔬菜作物和马铃薯。

水稻稻瘟病是水稻重要病害之一,可引起大幅度减产,严重时减产40%~50%,甚至颗粒无收。世界各稻区均匀发生。本病在各地均有发生,其中以叶部、节部发生为多,发生后可造成不同程度减产,尤其穗颈瘟或节瘟发生早而重,可造成白穗以致绝产。

目前针对小麦赤霉病、茭白胡麻斑病、番茄早疫病和水稻稻瘟病,采取的主要方法为使用化学药剂。这些方法尽管在一定程度上控制了病害,但是化学药剂大量使用不仅容易引起病原菌抗药性的形成从而造成病菌再猖獗,而且也易引起农产品安全问题和环境污染。



技术实现要素:

针对现有技术存在的问题,本发明的目的在于设计提供一种多粘类芽孢杆菌及其应用的技术方案。

所述的多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501,其保藏号为gdmccno:60356。

所述的多粘类芽孢杆菌hzz1501在防治小麦赤霉病中的应用。

所述的多粘类芽孢杆菌hzz1501在防治茭白胡麻斑病中的应用。

所述的多粘类芽孢杆菌hzz1501在防治番茄早疫病中的应用。

所述的多粘类芽孢杆菌hzz1501在防治水稻稻瘟病中的应用。

本发明中多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501已保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称gdmcc,地址:广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所,邮政编码:510075),保藏号为gdmccno:60356,保藏时间为:2018年4月16日,分类命名为paenibacilluspolymyxa

本发明提供的多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501及其菌剂对小麦赤霉病菌、茭白胡麻斑病菌、番茄早疫病菌、水稻稻瘟病菌菌丝有抑制生长作用,可有效防治小麦赤霉病、茭白胡麻斑病、番茄早疫病和水稻稻瘟病,且防效高,克服了化学杀菌剂容易产生抗性的弊端。

具体实施方式

以下结合实施例来进一步说明本发明。

实施例1:多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501的筛选

称取5-20cm处的稻田土壤(采集于杭州临安太阳镇水稻田中)10g,加入到装有90ml无菌水的300ml三角瓶中,200rpm室温振荡30min后,按10倍梯度进行稀释,分别取100μl梯度稀释液涂布营养肉汤培养基平板,平板于28℃培养2d;挑取单细菌菌落接种于距离中央2.5cm处的pda平板,平板中央同时分别接种小麦赤霉病菌、茭白胡麻斑病菌、番茄早疫病菌和水稻稻瘟病菌,每个平板接种4个不同的菌落后,平板于28℃培养4d,根据菌落直径,计算抑制率,挑选抑制率最高的菌株。

菌株培养基采用营养肉汤培养基:每升培养基含蛋白胨10g,牛肉膏粉3g,氯化钠5g,琼脂粉20g,ph值7.4。液体培养基不加琼脂粉。

实施例2:多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501的鉴定

将实施例1筛选得到的菌株进行its序列鉴定,通过pcr扩增its序列,并经ncbi比对为多粘类芽孢杆菌,并命名为多粘类芽孢杆菌hzz1501。该多粘类芽孢杆菌hzz1501的its序列如seqidno.1所示。

同时,对该菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称gdmcc,地址:广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所,邮政编码:510075),保藏号为gdmccno:60356,保藏时间为:2018年4月16日,分类命名为paenibacilluspolymyxa

实施例3:平皿抑菌活性

采用平皿对峙法,在pda平板中央接种病原菌,在距离平皿中央2.5cm处接种多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501,每平板接4点。于25℃培养箱培养5d,测量抑菌圈大小。结果显示对小麦赤霉病菌、茭白胡麻斑病菌、番茄早疫病菌和水稻稻瘟病菌等均有显著的抑菌效果,见表1。

表1为多粘类芽孢杆菌hzz1501的抑菌效果

实施例4:小麦赤霉防治效果

菌液制备:将多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501接种于营养肉汤培养基中,200rpm,28℃摇床培养48h,培养液达到109cfu/ml数量级,待用。

使用方法:设3个处理,每处理20m2,3次重复,随机排列。供试小麦品种扬麦20。在小麦始花期,将多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501培养液加水稀释10、50、100倍后,喷雾处理;7d后进行第二次喷雾处理。待小麦乳熟后进行病害调查。对照组,使用不含菌的肉汤培养基。

结果分析:0级无发病小穗,1级零星小穗发病,发病同小穗占总小穗数的25.0%以下;2级发病同小穗占总小穗数的25.0%-50.0%;3级发病同小穗占总小穗数的50.1%-75.0%;4级发病同小穗占总小穗数的75.1%以上。

病情指数=[∑(病级值×该级病穗数)/(调查总穗数×4)]×100%;防治效果=[1-(处理的病情指数/对照病情指数)]×100%。

多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501对小麦赤霉病防治效果见表2。

表2为多粘类芽孢杆菌hzz1501对小麦赤霉的防治效果

实施例5:茭白胡麻斑病防治效果

菌液制备:将多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501接种于营养肉汤培养基中,200rpm,28℃摇床培养48h,培养液达到109cfu/ml数量级,待用。

使用方法:设3个处理,每处理3墩茭白,调查所有叶片。将多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501培养液加水稀释10、50、100倍后,喷雾处理,2次用药,用药间隔7d。第1次药前调查发病基数,第2次药后14d调查发病情况。对照组,使用不含菌的肉汤培养基。

病级标准:0级无病斑;1级1-5个斑点;3级6-10个斑点;5级11-15个斑点;7级16-20个斑点;9级21个斑点以上。

病情指数=[∑(病级值×该级病穗数)/(调查总穗数×4)]×100%;防治效果=[1-(处理的病情指数×对照药前病情指数)/(对照病情指数×处理药前病情指数)]×100%。

多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501对茭白胡麻斑病防治效果见表3。

表3为多粘类芽孢杆菌hzz1501对茭白胡麻斑病的防治效果

实施例6:番茄早疫病防治效果

病叶分级标准,以叶片病斑面积占整个叶面积的百分率来分级:0级无病;1级出现病斑,病斑的感染面积为叶面总面积的1/4以下;2级出现病斑,病斑的感染面积为叶面总面积的1/4-1/2;3级出现病斑,病斑的感染面积为叶面总面积的1/2-3/4;4级出现病斑,病斑的感染面积为叶面总面积的3/4以上。

取3-4叶期的番茄植株进行盆栽防效测定。设3个处理,每处理10盆,每盆1株苗。hzz1501培养液加水稀释10、50、100倍后,均匀喷雾,喷雾1d后接种浓度为104cfu/ml数量的早疫病菌孢子悬浮液。番茄苗保湿培养7d后,调查发病情况。

多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501对番茄早疫病防治效果见表4。

表4为多粘类芽孢杆菌hzz1501对番茄早疫病的防治效果

实施例7:水稻稻瘟病叶瘟防治效果

叶瘟病级:0级:无病1级:仅有小的针尖大小的褐点2级:较大褐点3级:小而圆以至稍长的褐色的环死灰斑,直径1-2毫米。4级:典型的稻瘟病斑或椭圆型,长1-2厘米,常限于两条叶脉间,病斑面积不足叶面积的2%。5级:典型的稻瘟病斑,受害面积小于10%。6级:典型的稻瘟病斑,受害面积为10-25%7级:典型的稻瘟病斑,受害面积为26-50%8级:典型的稻瘟病斑,受害面积为51-75%9级:全部叶片死亡。

水稻品种选用日本晴。取3-4叶期的水稻植株进行盆栽防效测定。设3个处理,每处理3盆,每盆20株苗。多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501培养液加水稀释10、50、100倍后,均匀喷雾,喷雾1d后接种浓度为104cfu/ml数量的稻瘟病致病菌株孢子悬浮液。水稻苗保湿培养7d后,调查发病情况。

多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)hzz1501对水稻稻瘟病防治效果见表5。

表5为多粘类芽孢杆菌hzz1501对水稻稻瘟病的防治效果

序列表

<110>浙江省农业科学院

<120>一种多粘类芽孢杆菌及其应用

<160>1

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>1517

<212>dna

<213>多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)

<400>1

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