一种制备3-乙酰基人参皂苷F1的方法与流程

本发明属于化学领域，具体涉及一种制备人参皂苷f1衍生物的方法，人参皂苷f1衍生物包括3-乙酰基人参皂苷f1、6’-乙酰基人参皂苷f1和6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1。

背景技术

前期研究发现，3-乙酰基人参皂苷f1、6’-乙酰基人参皂苷f1、6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1具有优异的酪氨酸酶抑制活性，可以用于制备美白化妆品。从化学结构上看，3-乙酰基人参皂苷f1、6’-乙酰基人参皂苷f1、6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1为人参皂苷f1的衍生物，但是人参皂苷f1对酪氨酸酶的抑制活性极弱，远不如其衍生物。

目前，分离制备3-乙酰基人参皂苷f1、6’-乙酰基人参皂苷f1、6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1必须依赖于反复硅胶柱层析，但是，反复硅胶柱层析死吸附强，损失大，根本不适用于规模化制备。而大孔树脂和高速逆流不仅样品损失少，而且易于规模化使用。若能够通过大孔树脂和高速逆流色谱的组合使用就分离得到3-乙酰基人参皂苷f1、6’-乙酰基人参皂苷f1、6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1，必然具有广阔应用前景。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种制备人参皂苷f1衍生物的方法，人参皂苷f1衍生物包括3-乙酰基人参皂苷f1、6’-乙酰基人参皂苷f1和6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

一种制备3-乙酰基人参皂苷f1的方法，包括如下步骤：

步骤1、总提物的制备

取干燥的人参花蕾，用粉碎机粉碎，过筛，得人参花蕾粉末。随后用95％乙醇热回流提取，浓缩成膏状即为总提物。

步骤2、大孔树脂富集

将总提物用25％乙醇溶解调整浓度为0.2g生药/ml，过滤，上样量为0.8bv，lx-68大孔吸附树脂柱的柱床径高比为1:9，先用3bv的40％乙醇除杂，再用9bv的75％乙醇洗脱，收集8-9bv的75％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味后冷冻干燥得到粗品冻干粉。

步骤3、高速逆流分离

(1)两相溶剂系统配制

两相溶剂系统为体积比1:18:1:18:0.5的正丁醇/乙酸乙酯/甲醇/水/氯仿，将各溶剂按照体积比例加入分液漏斗中，剧烈振摇使充分混合，后静置分层。将上相和下相分别放置不同容器，超声脱气待用。

(2)样品溶液配制

取粗品冻干粉用溶剂系统下相超声溶解配制成浓度为10mg/ml的溶液，即为样品溶液。

(3)hsccc分离

将配制好的溶剂系统上相泵入hsccc螺旋管中作为固定相，待上相完全充满整个柱子，打开高速逆流色谱仪，设置转速900r/min、体积流量1.5ml/min、检测波长210nm，将溶剂系统下相泵入螺旋管中，待流动相开始从检测器尾端持续流出时，表明螺旋管内两相溶剂达到流体动力学平衡。进样阀注入10ml样品溶液，开始记录色谱图并持续泵入流动相分离。

(4)目标化合物流份收集

根据色谱图收集6’-乙酰基人参皂苷f1对应的洗脱流份，浓缩至干得6’-乙酰基人参皂苷f1。根据色谱图收集3-乙酰基人参皂苷f1对应的洗脱流份，浓缩至干得3-乙酰基人参皂苷f1。根据色谱图收集6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1对应的洗脱流份，浓缩至干得6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1。

优选地，步骤1中，粉碎后过80目筛。

优选地，步骤1中，提取时的料液比为1:10。

优选地，步骤1中，用95％乙醇热回流提取3次，每次2h，合并提取液，浓缩成膏状。

优选地，步骤2中，用脱脂棉过滤。

优选地，步骤3中，超声脱气20min待用。

有益效果：

本发明提供的制备方法不需要使用反复硅胶柱层析，仅通过大孔树脂和高速逆流配合使用即可分离得到高纯度的6’-乙酰基人参皂苷f1、3-乙酰基人参皂苷f1和6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1，易于规模化应用。

附图说明

图1为高速逆流色谱图。根据色谱图收集6’-乙酰基人参皂苷f1对应的洗脱流份，浓缩至干得6’-乙酰基人参皂苷f1。根据色谱图收集3-乙酰基人参皂苷f1对应的洗脱流份，浓缩至干得3-乙酰基人参皂苷f1。根据色谱图收集6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1对应的洗脱流份，浓缩至干得6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1。

具体实施方式

下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

一、实验材料和仪器

人参花蕾干品购于亳州中药材市场。

lx-68大孔吸附树脂购于郑州勤实科技有限公司。

高速逆流色谱仪teb300b购于上海同田生物技术股份有限公司。

二、实验方法和结果

1、总提物的制备

取5kg干燥的人参花蕾，用粉碎机粉碎，过80目筛，得人参花蕾粉末。随后用95％乙醇以料液比1:10热回流提取3次，每次2h，合并提取液，浓缩成膏状即为总提物。

2、大孔树脂富集

将总提物用25％乙醇溶解调整浓度为0.2g生药/ml，脱脂棉过滤，上样量为0.8bv，lx-68大孔吸附树脂柱的柱床径高比为1:9，先用3bv的40％乙醇除杂，再用9bv的75％乙醇洗脱，收集8-9bv的75％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味后冷冻干燥得到粗品冻干粉。

3、高速逆流分离

(1)两相溶剂系统配制

两相溶剂系统为正丁醇:乙酸乙酯:甲醇:水:氯仿(体积比1:18:1:18:0.5)，将各溶剂按照体积比例加入分液漏斗中，剧烈振摇使充分混合，后静置分层。将上相和下相分别放置不同容器，超声脱气20min待用。

(2)样品溶液配制

取粗品冻干粉用溶剂系统下相超声溶解配制成浓度为10mg/ml的溶液，即为样品溶液。

(3)hsccc分离

将配制好的溶剂系统上相泵入hsccc螺旋管中作为固定相，待上相完全充满整个柱子，打开高速逆流色谱仪，设置转速900r/min、体积流量1.5ml/min、检测波长210nm，将溶剂系统下相泵入螺旋管中，待流动相开始从检测器尾端持续流出时，表明螺旋管内两相溶剂达到流体动力学平衡。进样阀注入10ml样品溶液，开始记录色谱图并持续泵入流动相分离。

(4)目标化合物流份收集

色谱图如图1所示。根据色谱图收集6’-乙酰基人参皂苷f1对应的洗脱流份，浓缩至干得6’-乙酰基人参皂苷f1。根据色谱图收集3-乙酰基人参皂苷f1对应的洗脱流份，浓缩至干得3-乙酰基人参皂苷f1。根据色谱图收集6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1对应的洗脱流份，浓缩至干得6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1。

4、纯度检测

使用hplc-dad分别测定得到的6’-乙酰基人参皂苷f1、3-乙酰基人参皂苷f1、6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1的纯度，分别为98.6％、98.1％、99.5％。

本发明提供的制备方法不需要使用反复硅胶柱层析，仅通过大孔树脂和高速逆流配合使用即可分离得到高纯度的6’-乙酰基人参皂苷f1、3-乙酰基人参皂苷f1和6’-丙二酰甲酰基人参皂苷f1，易于规模化应用。

上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。