1.一种cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,在下列物质的存在下,诱导扩增培养cd8t细胞:
(1)k3ec细胞;所述k3ec细胞为表达cd2配体cd58、nkg2d配体mica/b和cd137配体cd137l的k562工程细胞,用于提供激活cd8t细胞的共刺激受体第2信号;
(2)靶标抗原的肽段重叠文库,用于提供激活cd8t细胞的tcr第1信号。
2.如权利要求1所述cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,所述靶标抗原为巨细胞病毒-pp65蛋白。
3.如权利要求2所述cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,所述培养方法中,将k3ec细胞与外周血单个核细胞共培养。
4.如权利要求3所述cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,所述培养方法中,pbmc与k3ec细胞共培养的比例在20:1到5:1之间。
5.如权利要求1-4之一所述的cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,在扩增培养抗原特异性cd8t细胞时,补充细胞因子作为cd8t细胞增殖的第3信号。
6.如权利要求5cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,所述细胞因子为il15及il2或il15及il7。
7.如权利要求1-4之一所述的cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,还包括以下步骤,采用多聚甲醛固定k3ec细胞;然后分选富集均质性cd8t细胞,再培养扩增cd8t细胞至需要的数量。
8.一种cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,所述培养方法包括步骤:
(1)收集外周血,离心分离获得外周血单个核细胞;
(2)将k3ec细胞与外周血单个核细胞共培养;所述k3ec细胞为表达cd2配体cd58、nkg2d配体mica/b和cd137配体cd137l的k562工程细胞,用于提供激活cd8t细胞的共刺激受体第2信号;
(3)步骤(2)共培养同时,采用巨细胞病毒-pp65蛋白的全蛋白肽段重叠文库激活cd8t细胞的tcr第1信号;
(4)t细胞通过步骤(2)和步骤(3)扩增培养时,补充细胞因子作为cd8t细胞增殖的第3信号;
(5)采用多聚甲醛固定k3ec细胞,然后组织分选富集均质性cd8t细胞;
(6)培养扩增均质性cd8t细胞至需要的数量。
9.如权利要求8所述cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,所述细胞因子为il15及il2或il15及il7。
10.如权利要求8述cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,所述pbmc与k3ec细胞共培养的比例在20:1到5:1之间。
11.如权利要求9所述cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,所述pbmc与k3ec细胞共培养的比例在20:1到5:1之间。
12.如权利要求9所述cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,所述pbmc与k3ec细胞共培养的比例为5:1。
13.如权利要求7-12之一所述cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,所述培养方法还包括:(7)对步骤(6)获得的均质性cd8t细胞进行质量检验。
14.如权利要求13所述cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,所述质量检验为:
检测所述cd8t细胞特性,包括检测细胞组份(tscm/cm)、抗原特异性应答能力和tcr识别的反应性肽段。
15.如权利要求13所述cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,所述质量检验还包括检测生物安全性指标,包括细胞存活率、致热源、病原体和k3ec细胞残留。
16.如权利要求14所述cd8t细胞的扩增培养方法,其特征在于,所述质量检验还包括检测生物安全性指标,包括细胞存活率、致热源、病原体和k3ec细胞残留。
17.如权利要求1‐16之一所述cd8t细胞的扩增培养方法获得的cd8t细胞。
18.一种k3ec细胞,其特征在于,所述k3ec细胞为k562工程细胞,可以均质性表达cd58、mica/b和cd137l。
19.如权利要求18所述k3ec细胞,其特征在于,所述k3ec细胞中导入cd137l和cd64基因。