一种编码重组人骨形态发生蛋白质-2的氨基酸序列的制作方法

文档序号:19827900发布日期:2020-02-04 12:04阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种编码重组人骨形态发生蛋白质-2的氨基酸序列,其特征在于,所述氨基酸序列如下seqidno.1或seqidno.2所示。

2.根据权利要求1所述的氨基酸序列,其特征在于,编码所述氨基酸序列的dna序列如下seqidno.3所示。

3.一种制备重组人骨形态发生蛋白质-2的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)设计编码重组人骨形态发生蛋白质-2的氨基酸序列和dna序列;

(2)构建表达载体,转化大肠杆菌宿主细胞;

(3)筛选阳性克隆进行培养,诱导目标蛋白表达;

(4)表达产物复性、纯化,得到所述重组人骨形态发生蛋白质-2。

4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(4)中采用稀释法进行复性,复性液蛋白质终浓度控制在0.05-0.5mg/ml。

5.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(4)中采用多步离子交换层析进行纯化,具体步骤如下:

(1)将复性好的重组人骨形态发生蛋白质-2溶液上样于平衡好的强阴离子柱,上样完毕后用平衡缓冲液a冲洗到达基线;

(2)用洗脱缓冲液a进行盐梯度逐步增加的梯度进行洗脱,收集主峰;

(3)将从强阴离子柱洗脱收集的目标峰溶液混合,上样于弱阴离子柱,上样完毕后用平衡缓冲液b冲洗到达基线;

(4)用洗脱缓冲液b进行盐梯度逐步增加的梯度进行洗脱,收集主峰。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述的平衡缓冲液a包含10-50mm的tris-hcl、1-5m的尿素、1%-10%的甘露醇,ph为8.5-8.9;所述的洗脱缓冲液a包含10-50mm的tris-hcl、1-5m的尿素、1%-10%的甘露醇、1-5m的nacl,ph为8.5-8.9;所述的平衡缓冲液b包含10-50mm的磷酸缓冲液pb、1-5m的尿素、1%-10%的甘露醇,ph为6.0-6.5;所述的洗脱缓冲液b包含10-50mm的磷酸缓冲液pb、1-5m的尿素、1%-10%的甘露醇、1-5m的nacl,ph为6.0-6.5。

7.根据权利要求1或2所述的氨基酸序列,所述的序列经过了糖基化修饰。

8.根据权利要求7所述的氨基酸序列,所述的糖基化修饰为人工体外进行修饰或者在真核生物体内进行表达而被修饰。

9.根据权利要求8所述的氨基酸序列,所述的人工修饰为采用peg进行修饰。

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