一种用于抑制或杀灭幽门螺旋菌的化合物的制作方法

本发明公开了一类化合物制剂，应用于幽门螺旋杆菌(helicobacterpylori)感染及其相关疾病的治疗与预防。经我们研究发现，本类化合物，在单独应用的情况下(并非目前临床上常用的两种“三联疗法”或三种抗生素“四联疗法”的联合应用)，能够杀灭幽门螺旋杆菌(helicobacterpylori)。避免了由于多种光谱抗生素联合应用导致的副作用。加速由幽门螺旋杆菌导致感染性疾病(胃十二指肠溃疡等疾患)的痊愈。这类制剂的应用将为幽门螺旋杆菌(helicobacterpylori)感染及其相关疾病的治疗提供了新的治疗手段。

背景技术：

幽门螺旋杆菌(helicobacterpylori)，是一种人类常见的病原体。主要侵袭人体的胃肠道、与胃溃疡、十二指肠溃疡、慢性胃炎、以及胃癌等疾病的发病有关。据流行病学研究，国际上大约有50％的人群罹患幽门螺旋菌感染。

幽门螺旋杆菌感染是一类难于控制的感染性疾患。临床上，治疗幽门螺旋杆菌感染的常规治疗手段是多种抗生素的联合应用。例如三种药物联合(简称“三联疗法”，即克拉霉素，阿莫西林或甲硝唑(呋喃唑酮)，抗酸剂三种药物联合应用，并且治疗时间常常持续7-14天)。或者采用四种药物的联合(简称“四联疗法”，即枸橼酸铋钾240mg，阿莫西林750mg，甲硝唑400mg，奥美拉唑20mg四种药物联合应用。7～14日为一疗程，一疗程结束后，要继续单独服用枸橼酸铋钾6周)。近年来也有二连疗法，采用拉贝拉唑(rabeprazole，20mg)与左氧氟沙星(levofloxacin，500mg)或者拉贝拉唑(rabeprazole，20mg)与替硝唑(tinidazole，500mg)，每日两次，连续服用四天。

上述临床资料显示，单独一种抗生素的应用并不能根除幽门螺旋菌的感染。临床上不得不采用多种抗生素的联合应用，以达到杀灭幽门螺旋菌的目的。然而，抗生素的大量，长期使用，导致耐药性幽门螺旋菌的出现。并广范围扩散，使得传统治疗方法的有效性逐渐下降。因而，寻找新的杀灭幽门螺旋菌的有效疗法是临床上亟待解决的课题。

我们研究小组在最近研究中，意外发现了一类化合物，在终浓度分别为50～100μmol的浓度范围内，对幽门螺旋杆菌(96孔板，每孔1×10⁵/100μl)，具有显著的杀灭和抑制的作用。这将为幽门螺旋杆菌(h，pylori)的治疗提供了一类新的制剂。为治疗幽门螺旋杆菌的感染及其相关的疾病提供了新的治疗手段。经我们检索，未见国内外有同类报导。

技术实现要素：

目前，对于幽门螺旋杆菌的感染及其相关性疾病的治疗，临床上常采用两种或三种抗生素的联合使用，如“三联疗法”或“四联疗法”进行治疗。但是长期反复使用多种抗生素导致耐药性(antibioticresistance)的产生。为了解决这一难题，本发明提供了一类化合物的新用途，即这类化合物及其衍生物通过抑制或杀灭幽门螺旋杆菌，用于幽门螺旋杆菌诱发的相关的疾病的治疗或预防。

1.化合物通式：

式(i)

2.与现有治疗制剂相比，本发明至少具有以下有益效果：

(1)新发现的化合物，单独应用时对幽门螺旋杆菌就显示抑菌或杀菌作用。而现有的治疗方法需要两种或三种抗生素的联合应用。例如传统的疗法需要在克拉霉素，阿莫西林或甲硝唑(呋喃唑酮)中选择两种或三种联合应用；

(2)传统“三联疗法”或“四联疗法”的疗程为1-2周，常常为2周或2周以上。且容易产生耐药。

(3)多种抗生素联合应用，长期应用多有严重的毒副作用，如导致肠道菌群失调。导致肠道粘膜免疫屏障破坏，反而导致机体易于感染。而新化合物并非广谱抗生素，导致肠道菌群失调的危险性显著降低。

附图说明

图1为用于抑制或杀灭幽门螺旋菌的新型化合物的结构通式图

具体实施方式

下面通过实施例详细说明本发明，应当理解，下述实施例仅用于说明本发明，而不以任何方式限制本发明的范围。

实施例

我们采用国际广泛采用的标准方法，既美国国家临床试验标准化委员会提出的指导方案(nccls)进行分析鉴定。通过用含血mueller-hintonbroth培养基中，对获得的临床耐药幽门螺旋杆菌(helicobacterpylori)进行培养，并对我们获得的化合物及其衍生物的增值与存活进行检测，确定我们待测化合物及其衍生物的最低抑菌浓度(minimuminhibitoryconcentration，mic)与最低杀菌浓度(minimumlethalconcentration，mlc)。并与临床常用的抗幽门螺旋杆菌抗生素(包括克拉霉素，阿莫西林或甲硝唑(呋喃唑酮)左氧氟沙星(levofloxacin)进行比较，发现新型化合物的mic与mlc与三种抗生素(克拉霉素，阿莫西林或甲硝唑)作用一致，优于左氧氟沙星(levofloxacin)。说明可以用新型化合物替代目前临床上常用的抗生素的联合。减少多种抗生素联用的毒副作用。具体研究过程如下。

材料与方法：

1.实验药材：待测化合物，本实验室合成。分子结构式如下：

2.菌种来源：细菌菌株由中国科学院微生物所提供。

3.培养基：(1)lbbroth(cat.no.02-136，batch.no.20130912.aoboxbiotechnology产品，北京奥博星生物技术有限责任公司)。(2)mueller-hintonbroth(cat.no.02-052，batch.no.20130808.aoboxbiotechnology产品，北京奥博星生物技术有限责任公司)。(3)ham’s/f12(hyclone公司产品，catlogno：sh30026.18，lotno：nvm0358。thermoscientificcorporation，logan，utah，usa)。

4.主要实验仪器(1)多用途微生物培养箱：heratherm^tmmicrobiologicalincubators(thermoscientific产品。型号：herathermigs60，仪器序列号：41318194。thermoelectronledgmbh，robert-bosch-strasse1，63505langenselbold，germany)

a)thermomultiskanmk3全自动酶标仪(thermoscientific^tm产品，thermofisherscientific，81wymanstreet，waltham，mausa02451)

5.实验方法与步骤：

1)配制mueller-hintonbroth液体培养基中培养(培养基含5％sheepblood)。以0.22μ滤器过滤除菌后。将供试菌种接种于mueller-hintonbroth培养基中，每孔100μl。供试菌悬液含菌浓度为1×10⁶/ml)。置37℃恒温箱中培养72小时。

2)空白管只加mueller-hintonbroth，每孔100μl。

3)在无菌净化台内分别将用待测化合物溶于蒸馏水中，用0.22μ的无菌滤器过滤。并倍比稀释为以下浓度：

表1：待试化合物的浓度梯度

4)将不同浓度的待测化合物与抗生素加入96孔板中，置于微量振荡板上震荡5分钟，使各种液体充分混合；然后置于多用途微生物培养箱(heratherm^tmmicrobiologicalincubators)中孵育，培养72hat37℃。孵育结束后，测定死亡helicobacterpylori的数目。

5)确定mic(最低抑菌浓度)和mlc(最低杀菌浓度)。

表2：新化合物及其衍生物对幽门螺旋杆菌的最低抑菌浓度与最低杀菌浓度

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明。尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换、改进等。均应包含在本发明的保护范围之内。