本发明涉及一种合成方法，具体涉及的是一种熊去氧胆酸的酶法合成方法。
背景技术
鹅去氧胆酸是制备熊去氧胆酸的原料，在采用鹅去氧胆酸制备熊去氧胆酸的工艺中，熊去氧胆酸是用其7位差向异构体鹅去氧胆酸氧化得5β-3α-羟基-7-羰基胆烷酸(7k-lca)，再还原来合成。在现有技术中，由于鹅去氧胆酸的结构中含有两个羟基，在制备过程中，理论上会存在一个或者两个被氧化的情况。并且本行业技术人员通常是采用nbs、pcc、三氧化铬等物质对鹅去氧胆酸进行氧化，采用金属钠或者pd/c催化氢化来实现7-酮基石胆酸(7-klca)的还原。
在现有技术中，上述氧化方式虽然达到了7位羟基被氧化的目的，但是同时也对部分3位的羟基进行了氧化，由于本领域的研究者对于3位和7位单独被氧化的情况研究甚少，尤其是7位羟基的单独氧化方式，虽然有文献报道使用nbs于丙酮和水中氧化cdca，制得5β-3α-羟基-7-羰基胆烷酸(7k-lca)，收率高达89％。但是最终的纯度不高，氧化制成的成品中也存在部分两个同时被氧化的情况。
上述还原的方法中也存在选择性低，工业化放大生产不容易控制且不安全的问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于解决现有技术中采用鹅去氧胆酸制备熊去氧胆酸时，在氧化还原过程中常常出现同时氧化3位羟基的情况，导致收率和纯度不高的问题；提供解决上述问题的一种熊去氧胆酸的酶法合成方法。
为达到上述目的，本发明的技术方案如下：
一种熊去氧胆酸的酶法合成方法，包括：
步骤1，制成如式一所示的7-klca；
式一：
步骤2，将7-klca加入到磷酸缓冲液中制成反应液，在反应液中加入l-苹果酸钠、苹果酸脱氢酶、7-β类固醇脱氢酶，控制反应温度在25～30℃、反应ph为7.0～7.5条件下，反应直到7-klca残留低于0.1％，反应完成后，加碱升温到60～80℃搅拌1～3小时，然后降温至常温，过滤，滤液加酸结晶得到熊去氧胆酸；
其中，步骤1的具体制备步骤包括：
步骤1.1，将鹅去氧胆酸溶于甲醇溶剂中制成混合溶液，向混合溶液中加入溴化钠配置成电解体系；
步骤1.2，将电解体系加入到石墨电极的无隔膜电解槽中，持续通电10～12h获得氧化产物，无隔膜电解槽中电流为3～5a，反应温度为-5～5℃；
步骤1.3，向氧化产物中滴加稀硫酸溶液，反应30min以上，反应温度为20～60℃；反应产生的气体伸入到naoh溶液中与naoh溶液反应制成溴化钠；
步骤1.4，提纯制成7-klca。
通过上述设置，能有效实现7位羟基完全单独氧化，不会氧化3位羟基，达到选择性氧化的目的，提高纯度和收率，效果十分显著。
本发明不仅仅能够达到选择性氧化的目的，而且，本发明中的溴元素可以重复使用，即，采用高沸点的稀硫酸溶液能够有效置换出低沸点的溴化氢，将置换出的溴化氢加入到naoh溶液中，经过干燥也可以重新制成原料溴化钠，进而达到重复利用的目的，生产成本更低。
进一步，所述步骤1.2中的溴化钠与步骤三种的稀硫酸的摩尔比为2.1～2.3︰1。所述步骤1.2的反应温度为0～5℃。所述步骤1.3的反应温度为40～50℃。
为了达到更好的纯度，所述提纯的方法为：抽滤步骤1.3反应后的溶液，用纯水洗涤，分液，干燥，减压浓缩制成成品。
通过上述设置，能有效获得更好的收率以及纯度，收率可以达到95％以上，纯度可以达到98％以上，效果十分显著。
进一步，所述步骤2中的酸为无机酸，结晶ph为2～3。所述步骤2中l-苹果酸钠用量为7-klca重量的50～60％；苹果酸脱氢酶用量为7-klca重量的1.5～2.2％；7-β类固醇脱氢酶用量为7-klca重量的0.1～0.3％。
本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：
1、本发明能有效实现7位羟基完全单独氧化，不会氧化3位羟基，达到选择性氧化的目的；
2、本发明中的溴元素可以重复使用，即，采用高沸点的稀硫酸溶液能够有效置换出低沸点的溴化氢，将置换出的溴化氢加入到naoh溶液中，经过干燥也可以重新制成原料溴化钠，进而达到重复利用的目的，生产成本更低；
3、本发明的收率可以达到90％以上，纯度可以达到98％以上，效果十分显著。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
一种熊去氧胆酸的酶法合成方法，包括：
步骤1，制成如式一所示的7-klca；
式一：
步骤2，将100g7-klca加入到500ml磷酸缓冲液中制成反应液，在反应液中加入55gl-苹果酸钠、2g苹果酸脱氢酶、0.2g7-β类固醇脱氢酶，控制反应温度在25～30℃、反应ph为7.0～7.5条件下，反应直到7-klca残留低于0.1％，反应完成后，加质量分数为30％的naoh溶液10g升温到70℃搅拌2小时，然后降温至常温，过滤，滤液加无机酸直至ph达到2～3，结晶后得到熊去氧胆酸。
其中，步骤1的具体制备步骤包括：
步骤1.1，将100g鹅去氧胆酸溶于1000ml甲醇溶剂中制成混合溶液，向混合溶液中加入溴化钠1.03g配置成电解体系；
步骤1.2，将电解体系加入到石墨电极的无隔膜电解槽中，持续通电12h获得氧化产物，无隔膜电解槽中电流为4a，反应温度为2℃；
步骤1.3，向氧化产物中滴加7.19g质量分数为30％的稀硫酸溶液，反应时间为1h，反应温度为45℃；反应产生的气体通入到naoh溶液的底端，使气体与naoh溶液反应制成溴化钠溶液，溴化钠溶液干燥后制成原料溴化钠；
步骤1.4，提纯制成式一所述的7-klca。
对上述成品进行检测，检测结果显示：7-klca的收率达到了97％、纯度达到了99％，熊去氧胆酸的收率达到90％、纯度达到了98％，效果十分显著。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于，本实施例中步骤1的反应参数不同，具体设置如下：
步骤1.1，将200g鹅去氧胆酸溶于1500ml甲醇溶剂中制成混合溶液，向混合溶液中加入溴化钠2.10g配置成电解体系；
步骤1.2，将电解体系加入到石墨电极的无隔膜电解槽中，持续通电12h获得氧化产物，无隔膜电解槽中电流为3a，反应温度为5℃；
步骤1.3，向氧化产物中滴加15.42g质量分数为30％的稀硫酸溶液，反应时间为1h，反应温度为40℃；
步骤1.4，抽滤，用纯水洗涤，分液，干燥，减压浓缩制成式一所述的7-klca。
对上述成品进行检测，检测结果显示：7-klca的收率达到了95％，纯度达到了98％。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于，本实施例中个步骤的反应参数不同，具体设置如下：
步骤1.1，将100g鹅去氧胆酸溶于1000ml甲醇溶剂中制成混合溶液，向混合溶液中加入溴化钠1.10g配置成电解体系；
步骤1.2，将电解体系加入到石墨电极的无隔膜电解槽中，持续通电12h获得氧化产物，无隔膜电解槽中电流为5a，反应温度为0℃；
步骤1.3，向氧化产物中滴加9.42g质量分数为30％的稀硫酸溶液，反应时间为1h，反应温度为35℃；
步骤1.4，抽滤，用纯水洗涤，分液，干燥，减压浓缩制成式一所述的7-klca。
对上述成品进行检测，检测结果显示：7-klca的收率达到了91％，纯度达到了95％。
上述实施例仅为本发明的优选实施例，并非对本发明保护范围的限制，但凡采用本发明的设计原理，以及在此基础上进行非创造性劳动而作出的变化，均应属于本发明的保护范围之内。