本发明涉及分离纯化
技术领域：
，具体涉及一种环氧氨基层析介质及其制备方法。
背景技术：
：甲氨基层析介质是一种强阴离子型层析介质，通过带正电荷的氨基与带负电荷的蛋白、病毒等生物分子吸附结合，带正电荷的杂质流穿，从而达到蛋白或病毒分离纯化目的。强阴离子层析介质常用于蛋白、病毒、多肽、核酸等多有带电的生物分子的分离纯化，应用广泛。传统的甲氨基层析介质的制备方法是通过微球上的羟基与环氧基活化连接中间臂，甲氨基再通过氨基与中间臂键合到微球上，反应分为多步，生产成本高，制备周期长。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是提供一种制备简单、合成周期短、纯化产物结合量高的环氧氨基层析介质及其制备方法。本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种环氧氨基层析介质，由多糖微球与氨基环氧物开环反应而成，其结构如下：r1为-(ch2)n，n为0或1或2或3,r2为h或-(ch2)mch3，m为1或2，r3为h或-(ch2)kch3或k为1或2。在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：n为1或2或3。本发明的环氧氨基层析介质的有益效果是：用本方法制备得到的环氧氨基层析介质具有较长的中间臂，降低了空间位阻效应，从而在相同配基浓度下，提高其蛋白结合载量，尤其是在大粒径环氧氨基层析介质的应用过程中，上样流速快，样品保留时间较短。本发明还提供了制备上述环氧氨基层析介质的制备方法，将将多糖微球与氨基环氧物反应制得环氧氨基层析介质，反应方程式为：r1为-(ch2)n，n为0或1或2或3,r2为h或-(ch2)mch3，m为1或2，r3为h或-(ch2)kch3或k为1或2。在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：进一步，多糖微球与氨基环氧物的具体反应步骤为：将多糖微球加入反应瓶中，加水并搅拌，然后依次加入氨基环氧物、氢氧化钠和硼氢化钠，所述水、氨基环氧物、氢氧化钠、硼氢化钠与所述多糖微球的质量比分别为：200～1000:200～600:10～100:1～10:1000，加热至20～60℃，300～500rpm下搅拌反应16～24h得到混合物，除去上清保留沉淀并使用纯水洗涤得到环氧氨基层析介质。进一步，所述多糖微球为琼脂糖微球、葡聚糖微球、纤维素微球中的任一种，所述多糖微球的粒径为5μm-300μm。进一步，所述氨基环氧物为环氧乙烷-2-胺、氯化缩水甘油三甲基铵、(2,3-环氧丙基)甲基苯胺中的任一种，制得的环氧氨基层析介质结构式如下所示：本发明的制备方法的有益效果是：该制备方法选择含有氨基环氧物直接在碱性条件下环氧基开环与微球上的羟基结合，只需要一步反应就可以将甲氨基结合在微球上，生产周期短，成本低，且工艺简单稳定，过程易控制。并且该方法应用广泛，还可以用于制备各种离子型配基类型的微球，将需要键合的功能配基进行筛选时，一端为环氧基，一端为键合的功能基团即可快速通过环氧基键合在微球上。具体实施方式以下结合具体实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。实施例1称取1000g的focurose6bb微球加入5000ml玻璃反应瓶中，称取200g纯水加入反应瓶中，500rpm恒速搅拌，称取200g氯化缩水甘油三甲基铵加入玻璃反应瓶中，然后分别称取10g氢氧化钠和10g硼氢化钠加入反应瓶中，加热至50℃,500rpm恒速剧烈搅拌反应18h得到混合物，除去上清保留沉淀并用10倍体积的纯水真空抽滤洗涤微球，加入20％的乙醇保存液中，室温下保存，取样检测离子载量和蛋白载量。实施例2称取1000g的focurose6bb微球加入5000ml玻璃反应瓶中，称取200g纯水加入反应瓶中，500rpm恒速搅拌，称取400g氯化缩水甘油三甲基铵加入玻璃反应瓶中，然后分别称取50g氢氧化钠和10g硼氢化钠加入反应瓶中，加热至50℃,500rpm恒速剧烈搅拌反应18h得到混合物，除去上清保留沉淀并用10倍体积的纯水真空抽滤洗涤微球，加入20％的乙醇保存液中，室温下保存，取样检测离子载量和蛋白载量。实施例3称取1000g的focurose6bb微球加入5000ml玻璃反应瓶中，称取200g纯水加入反应瓶中，500rpm恒速搅拌，称取600g氯化缩水甘油三甲基铵加入玻璃反应瓶中，然后分别称取100g氢氧化钠和10g硼氢化钠加入反应瓶中，加热至50℃,500rpm恒速剧烈搅拌反应18h得到混合物，除去上清保留沉淀并用10倍体积的纯水真空抽滤洗涤微球，加入20％的乙醇保存液中，室温下保存，取样检测离子载量和蛋白载量。实施例4称取1000g的focurose6bb微球加入5000ml玻璃反应瓶中，称取200g纯水加入反应瓶中，500rpm恒速搅拌，称取400g(2,3-环氧丙基)甲基苯胺加入玻璃反应瓶中，然后分别称取50g氢氧化钠和10g硼氢化钠加入反应瓶中，加热至50℃,500rpm恒速剧烈搅拌反应18h得到混合物，除去上清保留沉淀并用10倍体积的纯水真空抽滤洗涤微球，加入20％的乙醇保存液中，室温下保存，取样检测离子载量和蛋白载量。实施例5称取1000g的focurose6bb微球加入5000ml玻璃反应瓶中，称取200g纯水加入反应瓶中，500rpm恒速搅拌，称取400g环氧乙烷-2-胺加入玻璃反应瓶中，然后分别称取50g氢氧化钠和10g硼氢化钠加入反应瓶中，加热至50℃,500rpm恒速剧烈搅拌反应18h得到混合物，除去上清保留沉淀并用10倍体积的纯水真空抽滤洗涤微球，加入20％的乙醇保存液中，室温下保存，取样检测离子载量和蛋白载量。对比例称取1000g的focurose6bb微球加入5000ml玻璃反应瓶中；称取200g的纯水加入玻璃反应瓶中，100rpm恒速搅拌；称取400g的环氧氯丙烷加入玻璃反应瓶中；分别称取10g的氢氧化钠和10g硼氢化钠加入玻璃反应瓶中，加热控制温度50℃，300rpm恒速剧烈搅拌反应18h得到混合物，除去上清保留沉淀用10倍体积的纯水真空抽滤清洗微球；称取1000g的缩水甘油醚活化微球加入玻璃反应瓶中；称取200g的纯水加入玻璃反应瓶中，100rpm恒速搅拌；称取50g的碳酸钠加入l玻璃反应瓶中；称取300g的三甲铵盐酸盐加入玻璃反应瓶中，调节ph至10.5，加热控制温度50℃，300rpm恒速剧烈搅拌反应18h；加入20％乙醇保存液，在室温中保存，取样检测离子载量和蛋白载量，。检测结果实施例离子载量(cl-umol/ml)蛋白载量(bsamg/ml)对比例254.771.6实施例1153.6156.7实施例2202.1220.8实施例3186.3192.4实施例4148.9157.9实施例5155.2161.1用本方法制备的环氧氨基层析介质其蛋白载量显著高于一般的甲氨基层析介质，并且离子载量低于一般的甲氨基层析介质，其纯化层析效率高于普通的甲氨基层析介质。以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12