一种大肠杆菌H血清型分型检测试剂盒及检测方法与流程

本发明涉及一种对大肠杆菌53个h血清型进行检测分型的试剂盒及检测方法，属于生物检测技术领域。

背景技术

大肠杆菌的o抗原分型和h抗原分型是致病性大肠杆菌流行病学研究中最为常用的分型策略。其中h抗原有鞭毛蛋白构成，可以分为do、d1、d2和d3，4个主要的区域：d0和d1区分别形成鞭毛的内管和外管，d2和d3区分布于鞭毛菌丝表面。d0和d1的蛋白高度保守，而d2和d3的蛋白是高变的，从而导致h抗原的多样性。所以应用h抗原的特异性抗血清，可以与对应h抗原的菌株发生凝集反应，从而实现对h血清型的分型鉴定。应用这种方法，目前国际上已发现53种大肠杆菌的h血清型，编号为h1～h56(h13，h22和h50除外)。

虽然利用抗血清对大肠杆菌h抗原进行检测分型最为常用，但在现实的工作应用中还是存在一些问题。例如，为了获得良好的分型结果，目标菌株需要多次传代，然后多次凝集，最后获取单一的h血清分型，过程耗时耗力；凝集结果判断依赖操作人员经验，客观性不强；在现场工作中，部分菌株存在交叉凝集和不凝集现象，影响结果判断；另外，完整的h分型血清库价格昂贵且效期较短，不利于推广应用。

大肠杆菌的h鞭毛抗原是由其染色体上的flic基因或flic基因的同源基因编码的。这些同源基因又被称为非flic鞭毛蛋白编码基因，包括flka，flla和flma。对这些基因的序列进行分析的结果显示，相同h型中的序列在相似性大于97％，高度保守，而不同的h型的序列相似性多小于70％，变异较大。虽然这其中h1/h12，h5/h56，h8/h40和h30/h32的基因序列相似性也大于90％，我们认为通过对这几组序列的特殊处理，大肠杆菌flic和非flic基因中显著的序列多样性和保守性足以构建用于鉴定大肠杆菌h型的分子方法。

目前，研究人员已开发出了一些基于pcr的h型分型方法。但这些方法要么只针对flic基因，要么未细分上述高序列相似性的h血清型，均不能完全区分大肠杆菌的53个h血清型。另外这些方法的后续结果分析也是采用凝胶电泳，对比传统maker的方法，区分度较低，且分组较多，工作量较大，在结果判断上也存在一定的不稳定性。

技术实现要素：

本发明目的是解决现有技术中对大肠杆菌h血清型分型方法的技术要求高、不全面、耗时、耗力以及交叉反应导致的误判问题，提供一种利用pcr的方法对大肠杆菌h血清型进行全面、快速检测分型的试剂盒及检测方法。

技术方案

本发明根据大肠杆菌h血清型鞭毛抗原编码基因序列相似性的高低，设计针对并覆盖53种h血清型的特异性引物，并与毛细管电泳技术相结合，辅以h分型基因标准物，从而使试剂盒具有良好和快速的分型能力。具体如下：

一种大肠杆菌h血清型分型检测试剂盒，包括扩增大肠杆菌h血清型h1～h12、h14～h21、h23～h49、h51～h56的pcr引物，

所述扩增大肠杆菌h4血清型的pcr引物由引物h4-pf和h4-pr组成，引物h4-pf的核苷酸序列如seqidno.1所示，引物h4-pr的核苷酸序列如seqidno.2所示；

所述扩增大肠杆菌h25血清型的pcr引物由引物h25-pf和h25-pr组成，引物h25-pf的核苷酸序列如seqidno.3所示，引物h25-pr的核苷酸序列如seqidno.4所示；

所述扩增大肠杆菌h9血清型的pcr引物由引物h9-pf和h9-pr组成，引物h9-pf的核苷酸序列如seqidno.5所示，引物h9-pr的核苷酸序列如seqidno.6所示；

所述扩增大肠杆菌h2血清型的pcr引物由引物h2-pf和h2-pr组成，引物h2-pf的核苷酸序列如seqidno.7所示，引物h2-pr的核苷酸序列如seqidno.8所示；

所述扩增大肠杆菌h48血清型的pcr引物由引物h48-pf和h48-pr组成，引物h48-pf的核苷酸序列如seqidno.9所示，引物h48-pr的核苷酸序列如seqidno.10所示；

所述扩增大肠杆菌h54血清型的pcr引物由引物h54-pf和h54-pr组成，引物h54-pf的核苷酸序列如seqidno.11所示，引物h54-pr的核苷酸序列如seqidno.12所示；

所述扩增大肠杆菌h49血清型的pcr引物由引物h49-pf和h49-pr组成，引物h49-pf的核苷酸序列如seqidno.13所示，引物h49-pr的核苷酸序列如seqidno.14所示；

所述扩增大肠杆菌h43血清型的pcr引物由引物h43-pf和h43-pr组成，引物h43-pf的核苷酸序列如seqidno.15所示，引物h43-pr的核苷酸序列如seqidno.16所示；

所述扩增大肠杆菌h55血清型的pcr引物由引物h55-pf和h55-pr组成，引物h55-pf的核苷酸序列如seqidno.17所示，引物h55-pr的核苷酸序列如seqidno.18所示；

所述扩增大肠杆菌h35血清型的pcr引物由引物h35-pf和h35-pr组成，引物h35-pf的核苷酸序列如seqidno.19所示，引物h35-pr的核苷酸序列如seqidno.20所示；

所述扩增大肠杆菌h45血清型的pcr引物由引物h45-pf和h45-pr组成，引物h45-pf的核苷酸序列如seqidno.21所示，引物h45-pr的核苷酸序列如seqidno.22所示；

所述扩增大肠杆菌h10血清型的pcr引物由引物h10-pf和h10-pr组成，引物h10-pf的核苷酸序列如seqidno.23所示，引物h10-pr的核苷酸序列如seqidno.24所示；

所述扩增大肠杆菌h44血清型的pcr引物由引物h44-pf和h44-pr组成，引物h44-pf的核苷酸序列如seqidno.25所示，引物h44-pr的核苷酸序列如seqidno.26所示；

所述扩增大肠杆菌h52血清型的pcr引物由引物h52-pf和h52-pr组成，引物h52-pf的核苷酸序列如seqidno.27所示，引物h52-pr的核苷酸序列如seqidno.28所示；

所述扩增大肠杆菌h14血清型的pcr引物由引物h14-pf和h14-pr组成，引物h14-pf的核苷酸序列如seqidno.29所示，引物h14-pr的核苷酸序列如seqidno.30所示；

所述扩增大肠杆菌h21血清型的pcr引物由引物h21-pf和h21-pr组成，引物h21-pf的核苷酸序列如seqidno.31所示，引物h21-pr的核苷酸序列如seqidno.32所示；

所述扩增大肠杆菌h30血清型的pcr引物由引物h30-pf和h30-pr组成，引物h30-pf的核苷酸序列如seqidno.33所示，引物h30-pr的核苷酸序列如seqidno.34所示；

所述扩增大肠杆菌h34血清型的pcr引物由引物h34-pf和h34-pr组成，引物h34-pf的核苷酸序列如seqidno.35所示，引物h34-pr的核苷酸序列如seqidno.36所示；

所述扩增大肠杆菌h3血清型的pcr引物由引物h3-pf和h3-pr组成，引物h3-pf的核苷酸序列如seqidno.37所示，引物h3-pr的核苷酸序列如seqidno.38所示；

所述扩增大肠杆菌h19血清型的pcr引物由引物h19-pf和h19-pr组成，引物h19-pf的核苷酸序列如seqidno.39所示，引物h19-pr的核苷酸序列如seqidno.40所示；

所述扩增大肠杆菌h41血清型的pcr引物由引物h41-pf和h41-pr组成，引物h41-pf的核苷酸序列如seqidno.41所示，引物h41-pr的核苷酸序列如seqidno.42所示；

所述扩增大肠杆菌h1血清型的pcr引物由引物h1-pf和h1-pr组成，引物h1-pf的核苷酸序列如seqidno.43所示，引物h1-pr的核苷酸序列如seqidno.44所示；

所述扩增大肠杆菌h33血清型的pcr引物由引物h33-pf和h33-pr组成，引物h33-pf的核苷酸序列如seqidno.45所示，引物h33-pr的核苷酸序列如seqidno.46所示；

所述扩增大肠杆菌h38血清型的pcr引物由引物h38-pf和h38-pr组成，引物h38-pf的核苷酸序列如seqidno.47所示，引物h38-pr的核苷酸序列如seqidno.48所示；

所述扩增大肠杆菌h5血清型的pcr引物由引物h5-pf和h5-pr组成，引物h5-pf的核苷酸序列如seqidno.49所示，引物h5-pr的核苷酸序列如seqidno.50所示；

所述扩增大肠杆菌h42血清型的pcr引物由引物h42-pf和h42-pr组成，引物h42-pf的核苷酸序列如seqidno.51所示，引物h42-pr的核苷酸序列如seqidno.52所示；

所述扩增大肠杆菌h29血清型的pcr引物由引物h29-pf和h29-pr组成，引物h29-pf的核苷酸序列如seqidno.53所示，引物h29-pr的核苷酸序列如seqidno.54所示；

所述扩增大肠杆菌h51血清型的pcr引物由引物h51-pf和h51-pr组成，引物h51-pf的核苷酸序列如seqidno.55所示，引物h51-pr的核苷酸序列如seqidno.56所示；

所述扩增大肠杆菌h16血清型的pcr引物由引物h16-pf和h16-pr组成，引物h16-pf的核苷酸序列如seqidno.57所示，引物h16-pr的核苷酸序列如seqidno.58所示；

所述扩增大肠杆菌h23血清型的pcr引物由引物h23-pf和h23-pr组成，引物h23-pf的核苷酸序列如seqidno.59所示，引物h23-pr的核苷酸序列如seqidno.60所示；

所述扩增大肠杆菌h26血清型的pcr引物由引物h26-pf和h26-pr组成，引物h26-pf的核苷酸序列如seqidno.61所示，引物h26-pr的核苷酸序列如seqidno.62所示；

所述扩增大肠杆菌h46血清型的pcr引物由引物h46-pf和h46-pr组成，引物h46-pf的核苷酸序列如seqidno.63所示，引物h46-pr的核苷酸序列如seqidno.64所示；

所述扩增大肠杆菌h12血清型的pcr引物由引物h12-pf和h12-pr组成，引物h12-pf的核苷酸序列如seqidno.65所示，引物h12-pr的核苷酸序列如seqidno.66所示；

所述扩增大肠杆菌h39血清型的pcr引物由引物h39-pf和h39-pr组成，引物h39-pf的核苷酸序列如seqidno.67所示，引物h39-pr的核苷酸序列如seqidno.68所示；

所述扩增大肠杆菌h40血清型的pcr引物由引物h40-pf和h40-pr组成，引物h40-pf的核苷酸序列如seqidno.69所示，引物h40-pr的核苷酸序列如seqidno.70所示；

所述扩增大肠杆菌h56血清型的pcr引物由引物h56-pf和h56-pr组成，引物h56-pf的核苷酸序列如seqidno.71所示，引物h56-pr的核苷酸序列如seqidno.72所示；

所述扩增大肠杆菌h28血清型的pcr引物由引物h28-pf和h28-pr组成，引物h28-pf的核苷酸序列如seqidno.73所示，引物h28-pr的核苷酸序列如seqidno.74所示；

所述扩增大肠杆菌h18血清型的pcr引物由引物h18-pf和h18-pr组成，引物h18-pf的核苷酸序列如seqidno.75所示，引物h18-pr的核苷酸序列如seqidno.76所示；

所述扩增大肠杆菌h32血清型的pcr引物由引物h32-pf和h32-pr组成，引物h32-pf的核苷酸序列如seqidno.77所示，引物h32-pr的核苷酸序列如seqidno.78所示；

所述扩增大肠杆菌h8血清型的pcr引物由引物h8-pf和h8-pr组成，引物h8-pf的核苷酸序列如seqidno.79所示，引物h8-pr的核苷酸序列如seqidno.80所示；

所述扩增大肠杆菌h15血清型的pcr引物由引物h15-pf和h15-pr组成，引物h15-pf的核苷酸序列如seqidno.81所示，引物h15-pr的核苷酸序列如seqidno.82所示；

所述扩增大肠杆菌h37血清型的pcr引物由引物h37-pf和h37-pr组成，引物h37-pf的核苷酸序列如seqidno.83所示，引物h37-pr的核苷酸序列如seqidno.84所示；

所述扩增大肠杆菌h20血清型的pcr引物由引物h20-pf和h20-pr组成，引物h20-pf的核苷酸序列如seqidno.85所示，引物h20-pr的核苷酸序列如seqidno.86所示；

所述扩增大肠杆菌h17血清型的pcr引物由引物h17-pf和h17-pr组成，引物h17-pf的核苷酸序列如seqidno.87所示，引物h17-pr的核苷酸序列如seqidno.88所示；

所述扩增大肠杆菌h27血清型的pcr引物由引物h27-pf和h27-pr组成，引物h27-pf的核苷酸序列如seqidno.89所示，引物h27-pr的核苷酸序列如seqidno.90所示；

所述扩增大肠杆菌h53血清型的pcr引物由引物h53-pf和h53-pr组成，引物h53-pf的核苷酸序列如seqidno.91所示，引物h53-pr的核苷酸序列如seqidno.92所示；

所述扩增大肠杆菌h47血清型的pcr引物由引物h47-pf和h47-pr组成，引物h47-pf的核苷酸序列如seqidno.93所示，引物h47-pr的核苷酸序列如seqidno.94所示；

所述扩增大肠杆菌h11血清型的pcr引物由引物h11-pf和h11-pr组成，引物h11-pf的核苷酸序列如seqidno.95所示，引物h11-pr的核苷酸序列如seqidno.96所示；

所述扩增大肠杆菌h24血清型的pcr引物由引物h24-pf和h24-pr组成，引物h24-pf的核苷酸序列如seqidno.97所示，引物h24-pr的核苷酸序列如seqidno.98所示；

所述扩增大肠杆菌h31血清型的pcr引物由引物h31-pf和h31-pr组成，引物h31-pf的核苷酸序列如seqidno.99所示，引物h31-pr的核苷酸序列如seqidno.100所示；

所述扩增大肠杆菌h7血清型的pcr引物由引物h7-pf和h7-pr组成，引物h7-pf的核苷酸序列如seqidno.101所示，引物h7-pr的核苷酸序列如seqidno.102所示；

所述扩增大肠杆菌h6血清型的pcr引物由引物h6-pf和h6-pr组成，引物h6-pf的核苷酸序列如seqidno.103所示，引物h6-pr的核苷酸序列如seqidno.104所示；

所述扩增大肠杆菌h36血清型的pcr引物由引物h36-pf和h36-pr组成，引物h36-pf的核苷酸序列如seqidno.105所示，引物h36-pr的核苷酸序列如seqidno.106所示。

具体见表1：

进一步，所述试剂盒还包括：2×premixtaq、基因组dna、dsh2o。

进一步，所述的试剂盒中还包括h血清型分型标准物。所述h血清型分型标准物包含53个h血清型的分型标准物，由各个h血清型的分型标准物混合制成，是进行结果分析的参照物。

利用上述试剂盒对大肠杆菌h血清型进行检测的方法，包括如下步骤：

(1)首先对pcr引物进行分组，第一组为用于扩增h4、h25、h9、h2、h48、h54、h49、h43、h55、h35和h45的引物；第二组为用于扩增h10、h44、h52、h14、h21、h30、h34、h3、h19、h41和h1的引物；第三组为用于扩增h33、h38、h5、h42、h29、h51、h16、h23、h26、h46和h12的引物；第四组为用于扩增h39、h40、h56、h28、h18、h32、h8、h15、h37和h20的引物；第五组为用于扩增h17、h27、h53、h47、h11、h24、h31、h7、h6和h36的引物；

(2)提取待检测的h血清型大肠杆菌的基因组dna，按步骤(1)的五组引物分5组进行pcr扩增，将得到的5个pcr扩增产物与53个h血清型分型标准物进行同步电泳，根据电泳结果进行分析，pcr扩增产物的电泳图上的特异条带与某个h血清型分型标准物的特异条带一致的，即为相应的h血清型；

5组pcr扩增的反应体系均为：2×premixtaq25μl、基因组dna0.1～10μl含量为10～100ng、引物混合物10μl，并用dsh2o补足50μl；每组pcr扩增的引物混合物分别对应步骤(1)的五组引物各自组内形成的引物混合物。

进一步，步骤(2)中，所述引物混合物中，用于扩增h1、h3、h6、h19、h20、h23、h26、h35和h36的引物在对应组内的引物混合物中的浓度为0.1μm；用于扩增h53、h4、h7、h8、h10、h11、h12、h14、h15、h17、h18、h21、h24、h25、h27、h31、h37、h38、h39、h42、h43、h44、h45、h47、h48、h49、h52、h54、h55和h56的引物在对应组内的引物混合物中的浓度为0.15μm；用于扩增h2、h5、h9、h16、h28、h29、h30、h33、h34、h41、h46和h51的引物在对应组内的引物混合物中的浓度为0.2μm；用于扩增h32和h40的引物在对应组内的引物混合物中的浓度为0.3μm。

进一步，步骤(2)中，所述pcr扩增的反应条件为：94℃，1分钟，1个循环；94℃，30秒，59℃，30秒，72℃，1分钟，30个循环；72℃，10分钟，1个循环。

本发明的有益效果：本发明提供了一种大肠杆菌h血清型分型检测试剂盒及检测方法，本发明应用大肠杆菌h抗原编码基因的分型标准物，使分型检测更客观、简便和准确，并可同时检测大肠杆菌53个血清型，分型效果与传统血清分型一致，检测过程操作简便，结合毛细管电泳对扩增产物进行分析，可实现大肠杆菌h血清型分型检测的自动化与高通量。

附图说明

图1为第一组基因分型标准物的电泳图；

图2为第二组基因分型标准物的电泳图；

图3为第三组基因分型标准物的电泳图；

图4为第四组基因分型标准物的电泳图；

图5为第五组基因分型标准物的电泳图；

图6为菌株1、菌株2与第一组h血清型分型标准物的同步电泳图；

图7为菌株3、菌株4与第二组h血清型分型标准物的同步电泳图；

图8为菌株5、菌株6与第三组h血清型分型标准物的同步电泳图；

图9为菌株7、菌株8与第四组h血清型分型标准物的同步电泳图；

图10为菌株9、菌株10与第五组h血清型分型标准物的同步电泳图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

实施例1试剂盒的设计及扩增条件的确定

1.基因选择

选取大肠杆菌h抗原的编码基因flic或其flic以外的基因座上的同源物，从genebank下载基因模板序列。根据不同菌株同一h血清型编码基因的保守型和不同h血清型编码基因的多态性，设计引物。

2.扩增引物的设计与筛选

应用primer3，按照常规引物设计要求进行设计。以h2血清型编码基因为例，应用primer3自动搜寻引物，tm值得范围设定在56-64℃，设定产物长度分别为150-300，301-400，401-500，501-700，701-900，每个产物长度区间选择2-3对引物。

大肠杆菌h血清型的编码基因种h1与h12的相似性较高，应用mega7软件比对他们的编码基因，寻找差异碱基，将其确定为引物的3’端，并按照引物的一般设计原则和同上的扩增产物区间，手工设计引物。

上述引物经ncbiprimerblast比对，剔除对应血清型编码基因引物结合区有突变的引物和与其他血清型和菌株有非特异结合的引物，余下引物备用。

然后，对江苏省疾控中心保存的大肠杆菌53个h血清型的标准菌株分别用对应的引物进行单对引物扩增，确定特异性和扩增效率高的引物备用。pcr反应试剂来源自taraka的premixtaq^tm。反应体系配置如下：2×premixtaq25μl、基因组dna0.1～10μl含量为10～100ng、上下游引物(10μm)各2μl，并用dsh2o补足50μl。扩增的反应程序为：94℃，1分钟，1个循环；94℃，30秒，56℃，30秒，72℃，1分钟，30个循环；72℃，10分钟，1个循环。扩增产物应用qiagen的qiaxcel进行毛细管电泳，确定各引物的特异性和扩增效率。

3.复合扩增体系参数的设计

根据上一步最终备用引物扩增目的片段大小，每个血清型挑选一对引物，在保证区分度的基础上，将53对引物进行分组优化。然后，利用各个复合扩增体系对组内菌株进行55～65℃退火温度梯度扩增。

pcr反应试剂来源自taraka的premixtaq^tm。反应体系配置如下：2×premixtaq25μl、基因组dna0.1～10μl含量为10～100ng、引物混合物10μl，并用dsh2o补足50μl。扩增的反应程序为：94℃，1分钟，1个循环；94℃，30秒，退火温度分别为55℃，56℃，57℃，58℃，59℃，60℃，61℃，62℃，63℃，64℃和65℃，30秒，72℃，1分钟，30个循环；72℃，10分钟，1个循环。对扩增产物进行测序，并应用qiagen的qiaxcel进行毛细管电泳分析，根据各对引物的特异性，退火温度宽容度和引物二聚体等情况，确定最终优化的复合扩增引物体系的退火温度为59℃。

4.引物浓度优化

为保证同一复合体系中不同引物的扩增效率相近，需要对引物配比进行优化。具体做法为，将不同h血清型大肠杆菌的基因组模板稀释到同一浓度，对同一复合扩增体系进行多次反复实验，调节引物配比，优化扩增效果，确定最终优化引物配比，引物的序列及在各组混合体系中的优化浓度见表2:

表2

实施例2分型标准物的制备

制备方法：

①取江苏省疾控中心保存的大肠杆菌h1～h12，h14～h21，h23～h49，h51～h56等53个h血清型的标准菌株，将53个h血清型的标准菌株复苏，挑取单菌落，煮沸法提取基因组dna；

②进行pcr扩增，

pcr反应试剂来源自taraka的premixtaq^tm。反应体系配置如下：2×premixtaq25μl、基因组dna0.1～10μl含量为10～100ng、对应引物(终浓度见表2)，并用dsh2o补足50μl。

扩增的反应程序为：94℃，1分钟，1个循环；94℃，30秒，59℃，30秒，72℃，1分钟，30个循环；72℃，10分钟，1个循环。

③得到的53个扩增产物即为53个h血清型的分型标准物，是进行结果分析的参照物。将得到的53个扩增产物根据表2的分组进行混合，得到5组基因分型标准物。-20℃冻存备用。

将分组后的5组基因分型标准物进行毛细管电泳，得到的5个分型标准物的电泳图分别见图1-5，图1-5即为待测样本pcr扩增产物的电泳图的对照图，将待测样本pcr扩增产物的电泳图与图1-5比较，即可找出其对应的h血清型。

实施例3复合扩增体系的特异性检测

对江苏省疾控中心保存的大肠杆菌h1～h12，h14～h21，h23～h49，h51～h56等53个h血清型标准菌株分别进行扩增反应，每一个h血清型标准菌株按表1的五组引物进行5次扩增，扩增体系：2×premixtaq25μl、基因组dna0.1～10μl含量为10～100ng、引物混合物10μl，并用dsh2o补足50μl；扩增的反应程序为：94℃，1分钟，1个循环；94℃，30秒，退火温度分别为55℃，56℃，57℃，58℃，59℃，60℃，61℃，62℃，63℃，64℃和65℃，30秒，72℃，1分钟，30个循环；72℃，10分钟，1个循环。最后将扩增产物进行毛细管电泳。结果见表3：

表3

*：+为有扩增阳性；-为扩增阴性

结果显示，各组复合扩增体系对组内菌株均有特异的扩增条带，对组外菌株无扩增。

实施例410株大肠杆菌菌株的h分型检测

菌株来源于江苏省疾控中心保存的大肠杆菌菌株，随机抽取了不同时间收集的10株菌株(记为菌株1-10)。经传统的血清学方法检测，这些菌株可以分为10种不同的h血清型。

(1)首先对pcr引物进行分组，第一组为用于扩增h4、h25、h9、h2、h48、h54、h49、h43、h55、h35和h45的引物；第二组为用于扩增h10、h44、h52、h14、h21、h30、h34、h3、h19、h41和h1的引物；第三组为用于扩增h33、h38、h5、h42、h29、h51、h16、h23、h26、h46和h12的引物；第四组为用于扩增h39、h40、h56、h28、h18、h32、h8、h15、h37和h20的引物；第五组为用于扩增h17、h27、h53、h47、h11、h24、h31、h7、h6和h36的引物；见实施例1的表1；

(2)提取待检测的h血清型大肠杆菌的基因组dna，按步骤(1)的五组引物分5组进行pcr扩增(反应程序和反应条件同实施例3)，将得到的5个pcr扩增产物与5组h血清型分型标准物进行同步电泳，根据电泳结果进行分析，pcr扩增产物的电泳图上的特异条带与某个h血清型分型标准物的特异条带一致的，即为相应的h血清型，电泳图见6-10，分析结果见表4：

表4

*：-为扩增阴性

分析电泳图6-10可以判断：这1-10株菌株分别对应的是h2、h55、h10、h41、h33、h12、h28、h32、h7、h47。10株菌株的分型结果同传统血清学方法一致。