一种戈舍瑞林的合成方法与流程

本发明涉及多肽合成技术领域，特别涉及一种戈舍瑞林的合成方法。

背景技术：

醋酸戈舍瑞林是一种促黄体生成素释放激素类似物(lhrha)，其氨基酸序列为pyr-his-trp-ser-tyr-d-ser(tbu)-leu-arg-pro-azagly-nh2。它可以抑制性激素的分泌(睾丸酮和雌二醇)，从而使激素敏感性肿瘤萎缩；是一种皮下植入剂，属于长效的激素制剂，作用时间可维持1个月。原研厂家为阿斯利康(astrazenecaplc)，商品名zoladex“诺雷得”，1987年3月在英国首次完成研发；1990年5月在美国上市；1996年应用于药物治疗乳腺癌在中国上市。该药物目前的销量在lhrha制剂中世界排名第二。

该产品合成方法主要有两大类，一类是液相合成；另一类是固相合成。液相合成的策略主要是采用片段缩合法，即先合成不同片段，再片段缩合；比如“4+6”、“5+5”、“3+7”等策略。液相合成的方法主要有以下专利和文献：

j.med.chem121(10),1018-1024,1978采用“4+6”片段缩合法，首先采用液相合成法合成保护六肽z-tyr(bzl)-d-ser-arg(no2)-pro-azagly-nh2，合成除四肽pglu-his-trp-ser-ome；将合成出来的四肽片段和六肽片段再次采用叠氮物法合成出戈舍瑞林。us4024248pl194997等采用“3+7”片段或“5+5”缩合法。首先，液相合成保护三肽pglu-his-trp-ome，再合成七肽z-ser-tyr-d-ser(tbu)-leu-arg-pro-azagly-nh2。再通过肼解，脱保护，叠氮法缩合得戈舍瑞林。但液相片段缩合存在合成周期长，合成操作繁琐，后处理纯化等比较复杂，粗肽纯度低且需肼解，叠氮化，钯碳脱除保护基等步骤。不易放大生产。

而固相合成的策略主要是针对保护基策略和脱保护方法。常用的策略有先合成全保护肽，再与nh2-azagly-nh2缩合，最后采用不同的方式脱除保护基。采用固液相结合，这一类合成方法，大致都是先合成全保护肽，再进行c端修饰，再脱保护基。只是保护基的选择不同，采用的脱除方式也不相同。主要的保护基位点是his、ser、tyr、arg的侧链。例如：专利201010256054.6采用his(trt)、ser(trt)、arg(hcl)保护，5％tfa-dcm脱除；专利201210155366.7采用his(trt)、tyr(bzl)、arg(no2)保护，钯碳氢转移方式脱除；专利201310557778.8采用his(trt)、ser(bzl)、tyr(bzl)、arg(no2)，采用甲醇或乙醇溶液中钯碳催化氢解脱除；专利201510005951.2采用his(trt)、tyr(bzl)、arg(no2)保护，分两步脱除，先采用20％tfa-dcm脱除trt，再采用氢转移反应脱除bzl和no2。但固液相缩合的方式，大多均采用了bn、no2这类保护基，需要液体脱除，而常用的脱除方式均为钯碳氢化还原，或者钯碳/醋酸/60℃加热脱除，高温会导致消旋化和多肽立体结构的破坏，高压反应釜钯碳氢化还原，对设备要求较高。且在液相进行c端修饰，存在全保护肽自身缩合等副反应，导致收率降低，上述四篇专利公开的技术方案下戈舍瑞林的粗肽收率仅达到30％～40％。

因此，急需开发一种新的合成工艺，来解决液相操作繁琐，不利于纯化的缺点，同时避免使用钯碳还原等一系列问题。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明提供了一种戈舍瑞林的合成方法。该合成方法得到的戈舍瑞林收率高，操作简单，利于纯化，同时避免了使用钯碳还原。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种戈舍瑞林的合成方法，包括如下步骤：

步骤a：将azagly与树脂进行偶联，得到azagly-树脂；

步骤b：在azagly-树脂氨基端依次偶联pro、arg(alloc)2、leu、d-ser(tbu)、tyr(trt)、ser(trt)、trp、his(mmt)、pyr，得到pyr-his(mmt)-trp-ser(trt)-tyr(trt)-d-ser(tbu)-leu-arg(alloc)2-pro-azagly-树脂；

步骤c：采用含有四三苯基膦钯和吗啡啉的脱除剂对步骤b得到的肽树脂中的arg胍基保护基alloc进行脱除，得到pyr-his(mmt)-trp-ser(trt)-tyr(trt)-d-ser(tbu)-leu-arg-pro-azagly-树脂；

步骤d：采用裂解液对步骤c得到的肽树脂进行裂解，得到pyr-his-trp-ser-tyr-d-ser(tbu)-leu-arg-pro-azagly-nh2，其氨基酸序列如seqidno：1所示，即戈舍瑞林。

在本发明步骤a和步骤b中，偶联所需氨基酸为fmoc-氨基酸。

作为优选，azagly、pro、arg(alloc)2、leu、d-ser(tbu)、tyr(trt)、ser(trt)、trp、his(mmt)分别为fmoc-azagly-oh或fmoc-azagly-ome、fmoc-pro、fmoc-arg(alloc)2、fmoc-leu、fmoc-d-ser(tbu)、fmoc-tyr(trt)、fmoc-ser(trt)、fmoc-trp、fmoc-his(mmt)。

作为优选，树脂为sieberresin树脂。

作为优选，sieberresin树脂的替代度为0.5～1.0mmol/g。

优选地，sieberresin树脂的替代度为0.9～1.0mmol/g。

更优选地，sieberresin树脂的替代度为1.0mmol/g。

作为优选，步骤a中偶联采用的偶联剂为hoat/dic或吡啶。

优选地，步骤a中偶联采用的偶联剂为hoat/dic。

作为优选，偶联剂hoat/dic中hoat与dic的当量比为(1～2)：(1～2)。

优选地，偶联剂hoat/dic中hoat与dic的当量比为1：1。

作为优选，步骤b中偶联采用的偶联剂为hobt/dic。

作为优选，偶联的时间为2～4h。

作为优选，四三苯基膦钯与吗啡啉的当量比为(0.2～0.8)：(15～25)。

优选地，四三苯基膦钯与吗啡啉的当量比为0.5：20。

作为优选，含有四三苯基膦钯和吗啡啉的脱除剂还包括溶剂dcm。

作为优选，裂解采用的裂解液为dcm、tfa、有机捕获剂的混合液，或者为dcm、tfa、有机捕获剂、水的混合液。

作为优选，有机捕获剂为tis、乙二硫醇(edt)、茴香硫醚或苯甲硫醚中的一种或几种的组合物。

作为优选，脱除为在氮气鼓动的条件下脱除。

作为优选，脱除的时间为2～3h。

作为优选，dcm、tfa、有机捕获剂、水的混合液中dcm、tfa、捕获剂与水的体积比为(70～90)：(5～30)：(2～10)：(2～10)。

优选的，裂解液中，dcm、tfa、有机捕获剂与水的体积比为(80～90)：(8～12)：(2～3)：(2～3)。

作为优选，dcm、tfa、有机捕获剂的混合液中dcm、tfa、有机捕获剂的体积比为(70～90)：(5～30)：(2～10)。

优选的，裂解液中，dcm、tfa与有机捕获剂的体积比为(80～90)：(8～12)：(2～3)。

作为优选，裂解液中，dcm：tfa：茴香硫醚：苯甲硫醚：tis的体积比为85：10：2：1：2；或者dcm：tfa：tis：h2o的体积比为85：10：2.5：2.5；或者dcm：tfa：茴香硫醚：苯甲硫醚：水的体积比为85：10：2：1：2；或者dcm：tfa：茴香硫醚：苯甲硫醚：edt的体积比为85：10：2：1：2。

作为优选，裂解的时间为1～3h。

作为优选，裂解后还包括乙醚沉淀、离心的步骤。

作为优选，乙醚沉淀为在冷冻温度下进行乙醚沉淀。

作为优选，离心后还包括将戈舍瑞林粗肽进行精制的步骤。

本发明提供了一种戈舍瑞林的合成方法。该合成方法包括如下步骤：将azagly与树脂进行偶联，得到azagly-树脂；在azagly-树脂氨基端依次偶联氨基酸，得到pyr-his(mmt)-trp-ser(trt)-tyr(trt)-d-ser(tbu)-leu-arg(alloc)2-pro-azagly-树脂；采用含有四三苯基膦钯和吗啡啉的脱除剂对步骤b得到的肽树脂中的arg胍基保护基alloc进行脱除，得到pyr-his(mmt)-trp-ser(trt)-tyr(trt)-d-ser(tbu)-leu-arg-pro-azagly-树脂；采用裂解液对步骤c得到的肽树脂进行裂解，得到戈舍瑞林。本发明具有的技术效果为：

1、采用sieberresin树脂和本发明的保护氨基酸组合，可以实现在树脂上偶联、脱保护、修饰，不需要再进行c端修饰，该工艺操作简单，后处理方便，重现性好。

2、引入了胍基保护基alloc，脱除采用四三苯基膦钯/吗啡啉脱除，从而避免了精氨酸的胍基保护基团(no2)等，避开液相钯碳氢化还原步骤，氢化步骤对设备要求高，且不便于放大生产。

3、his(mmt)、ser(trt)、tyr(trt)这些侧链的弱酸性保护基，和sieberresin树脂的裂解条件一致，可以实现树脂裂解和保护基脱除一步完成。操作简便。

4、反应毕直接乙醚沉淀，而不是文献提及的浓缩tfa全保护肽，再进行c端修饰。在tfa浓缩的过程中，酸浓度增加，势必造成ser(tbu)侧链保护基tbu的脱除。该杂质与目标产物结构类似，难以除去。

附图说明

图1示实施例5中粗肽的hplc图谱；

图2示实施例5中精肽的hplc图谱；

图3示实施例6中粗肽的hplc图谱；

图4示实施例7中粗肽的hplc图谱；

图5示对比例1中粗肽的hplc图谱；

图6示对比例2中粗肽的hplc图谱；

图7示对比例3中粗肽的hplc图谱。

图8示本发明多肽合成流程图。

具体实施方式

本发明公开了一种戈舍瑞林的合成方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明多肽合成流程图见图8。

缩写及英文含义如下：

本发明提供的戈舍瑞林的合成方法中所用试剂或仪器等均可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1fmoc-azagly-nh-siebresin的合成

称取替代度sub＝0.76mmol/g的sieberresin，dcm溶胀10min，抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-dmf(脱fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，dmf洗涤5次，加入3倍量的fmoc-azagly-oh，1.2eqhoat/1.2eqdic，偶联2小时，茚三酮检测透明即可。然后采用酸酐/吡啶封闭树脂，dmf、dcm洗涤，甲醇收缩送替代度，替代度sub＝0.50mmol/g。

实施例2fmoc-azagly-nh-siebresin的合成

称取替代度sub＝0.5mmol/g的sieberresin，dcm溶胀10min，抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-dmf(脱fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，dmf洗涤5次，加入3倍量的fmoc-azagly-oh，1.2eqhoat/1.2eqdic，偶联2小时，茚三酮检测透明即可。然后采用酸酐/吡啶封闭树脂，dmf、dcm洗涤，甲醇收缩送替代度，替代度sub＝0.32mmol/g。

实施例3fmoc-azagly-nh-siebresin的合成

称取替代度sub＝1.0mmol/g的sieberresin，dcm溶胀10min，抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-dmf(脱fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，dmf洗涤5次，加入3倍量的fmoc-azagly-oh，1.2eqhoat/1.2eqdic，偶联2小时，茚三酮检测透明即可。然后采用酸酐/吡啶封闭树脂，dmf、dcm洗涤，甲醇收缩送替代度，替代度sub＝0.58mmol/g。

实施例4fmoc-azagly-nh-siebresin的合成

称取替代度sub＝1.0mmol/g的sieberresin，dcm溶胀10min，抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-dmf(脱fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，dmf洗涤5次，加入3倍量的fmoc-azagly-ome，3.5eq吡啶，偶联4小时，茚三酮检测透明即可。然后采用酸酐/吡啶封闭树脂，dmf、dcm洗涤，甲醇收缩送替代度，替代度sub＝0.34mmol/g。

实施例5戈舍瑞林粗肽及精肽的制备

称取实施例3获得的替代度sub＝0.58mmol/g的fmoc-azagly-nh-sieberresin10g(5.8mmol)，dcm溶胀10min，抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-dmf(脱fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，dmf洗涤5次，加入3倍量的fmoc-pro-oh，1.2eqhobt/1.2eqdic，偶联2小时，茚三酮检测透明；抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-dmf(脱fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，dmf洗涤5次，再参照以上固相合成的方法，依次偶联fmoc-arg(alloc)2-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-ser(tbu)-oh、fmoc-tyr(trt)-oh、fmoc-ser(trt)-oh、fmoc-trp-oh、fmoc-his(mmt)-oh、pyr-oh，偶联完毕，用dmf洗涤3次，dcm洗涤3次，抽干。

加入0.5eq四三苯基膦钯，20eq吗啡啉，dcm溶解，n2鼓动，反应2小时，抽干，1％哌啶-dmf洗涤3次，dmf洗涤5次，dcm洗涤5次，甲醇收缩得到肽树脂约21.02g。

取dcm340ml，tfa40ml，有机捕获剂tis10ml，h2o10ml，配成85：10：2.5：2.5的裂解液400l。取肽树脂21.0g，加入上述裂解液210ml，裂解2小时。过滤，滤液至于乙醚中冷冻沉淀，离心，得到粗肽，再氮气吹干，得到粗肽5.66g(4.46mmol)，色谱纯度约81.9％，收率76.9％。粗肽hplc纯度见图1。

采用0.3％醋酸铵溶液(ph7.0)-0.1％醋酸溶液-乙腈体系，kromasilc18填料的制备柱，经两次制备后得到精肽，纯度约99.41％，hplc见图2。

实施例6戈舍瑞林粗肽的制备

称取替代度sub＝0.32mmol/g的fmoc-azagly-nh-sieberresin10g(0.58mmol)，dcm溶胀10min，抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-dmf(脱fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，dmf洗涤5次，加入3倍量的fmoc-pro-oh，1.2eqhobt/1.2eqdic，偶联2小时，茚三酮检测透明；抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-dmf(脱fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，dmf洗涤5次，再参照以上固相合成的方法，依次偶联fmoc-arg(alloc)2-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-ser(tbu)-oh、fmoc-tyr(trt)-oh、fmoc-ser(trt)-oh、fmoc-trp-oh、fmoc-his(mmt)-oh、pyr-oh，偶联完毕，用dmf洗涤3次，dcm洗涤3次，抽干。

加入0.5eq四三苯基膦钯，20eq吗啡啉，dcm溶解，n2鼓动，反应1.5小时，抽干，1％哌啶-dmf洗涤3次，dmf洗涤5次，dcm洗涤5次，甲醇收缩得到肽树脂约16.02g。

取dcm170ml，tfa20ml，有机捕获剂包括tis4ml、茴香硫醚4ml、苯甲硫醚2ml，配成85：10：2：2：1的裂解液200l。取肽树脂16.0g，加入上述裂解液160ml(10倍)，裂解2小时。过滤，滤液至于乙醚中冷冻沉淀，离心，得到粗肽，再氮气吹干，得到粗肽3.19g，色谱纯度约72.4％，收率80.44％，粗肽hplc见图3。

实施例7戈舍瑞林粗肽的制备

称取替代度sub＝0.32mmol/g的fmoc-azagly—nh-sieberresin10g(0.58mmol)，dcm溶胀10min，抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-dmf(脱fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，dmf洗涤5次，加入3倍量的fmoc-pro-oh，1.2eqhobt/1.2eqdic，偶联2小时，茚三酮检测透明；抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-dmf(脱fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，dmf洗涤5次，再参照以上固相合成的方法，依次偶联fmoc-arg(alloc)2-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-ser(tbu)-oh、fmoc-tyr(trt)-oh、fmoc-ser(trt)-oh、fmoc-trp-oh、fmoc-his(mmt)-oh、pyr-oh，偶联完毕，用dmf洗涤3次，dcm洗涤3次，抽干。

加入0.5eq四三苯基膦钯，20eq吗啡啉，dcm溶解，n2鼓动，反应2小时，抽干，1％哌啶-dmf洗涤3次，dmf洗涤5次，dcm洗涤5次，甲醇收缩得到肽树脂约15.87g。

取dcm170ml，tfa20ml，有机捕获剂包括茴香硫醚4ml、苯甲硫醚2ml，水4ml，配成85：10：2：1：2的裂解液200l。取肽树脂15.5g，加入上述裂解液124ml(8倍)，裂解2小时。过滤，滤液至于乙醚中冷冻沉淀，离心，得到粗肽，再氮气吹干，得到粗肽3.29g，色谱纯度约84.12％，收率81.0％。粗肽hplc见图4。

对比例1戈舍瑞林粗肽的制备(常规方案)

称取替代度sub＝1.0mmol/g的2-ctcresin，dcm溶胀10min，抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入3倍当量的fmoc-pro-oh并加入约200mldmf溶解，偶联2小时，同时冰水浴降温，加入8.7mldipea活化10min后，将氨基酸活化液体加入至反应柱中反应，5min后再向反应器中加入17.5mldipea继续反应2小时，反应结束后，加入dmf、dcm洗涤，采用封闭液dcm/meoh/dipea(17：2:1体积比)封闭2次，每次10分钟，封闭结束后dmf洗涤meoh收缩，取样测得替代度0.52mmol/g

取19.2g(10mmol)上述fmoc-pro-ctcresin，dcm溶胀10min，抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-dmf(脱fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，dmf洗涤5次，加入3倍量的fmoc-arg(no2)-oh，1.2eqhobt/1.2eqdic，偶联2小时，茚三酮检测透明；抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-dmf(脱fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，dmf洗涤5次，再参照以上固相合成的方法，依次偶联fmoc-leu-oh、fmoc-d-ser(tbu)-oh、fmoc-tyr(bzl)-oh、fmoc-ser(trt)-oh、fmoc-trp-oh、fmoc-his(trt)-oh、pyr-oh，偶联完毕，用dmf洗涤3次，dcm洗涤3次，抽干。甲醇收缩。

上述肽树脂加入到1％tfa-dcm(v/v)溶液中搅拌2小时，浓缩至干，得到白色固体。(m＝1533.40)pyr-his(trt)-trp-ser(trt)-tyr(bzl)-d-ser(tbu)-leu-arg(no2)-pro-cooh。

加入dcm溶解上述固体，再加入hobt\dic，搅拌溶解，最后加入nh2-azagly-conh2的dmf溶液，搅拌反应2小时。加入5％柠檬酸水溶液洗涤2次，取dcm层，再采用10％na2co水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取dcm层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。pyr-his(trt)-trp-ser(trt)-tyr(bzl)-d-ser(tbu)-leu-arg(no2)-pro-azagly-nh2

将上述化合物溶解在甲醇中，加入1.1倍当量的10％pd/c，加压到10个大气压，室温反应5小时，过滤掉钯碳，反应液加入到冰冻的乙醚中，析出沉淀。总收率约32％，hplc69.07％(图5)。

对比例2戈舍瑞林粗肽的制备(7+2)

称取替代度sub＝1.0mmol/g的2-ctcresin，dcm溶胀10min，抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入3倍当量的fmoc-leu-oh并加入约200mldmf溶解，偶联2小时，同时冰水浴降温，加入8.7mldipea活化10min后，将氨基酸活化液体加入至反应柱中反应，5min后再向反应器中加入17.5mldipea继续反应2小时，反应结束后，加入dmf、dcm洗涤，采用封闭液dcm/meoh/dipea(17：2:1体积比)封闭2次，每次10分钟，封闭结束后dmf洗涤meoh收缩，取样测得替代度0.52mmol/g

取19.2g(10mmol)上述fmoc-leu-ctcresin，dcm溶胀10min，抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-dmf(脱fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，dmf洗涤5次，加入3倍量的fmoc-d-ser(tbu)-oh，1.2eqhobt/1.2eqdic，偶联2小时，茚三酮检测透明；抽干，dmf洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-dmf(脱fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，dmf洗涤5次，再参照以上固相合成的方法，依次偶联fmoc-tyr(bzl)-oh、fmoc-ser(trt)-oh、fmoc-trp-oh、fmoc-his(trt)-oh、pyr-oh，偶联完毕，用dmf洗涤3次，dcm洗涤3次，抽干。甲醇收缩。

上述肽树脂加入到1％tfa-dcm(v/v)溶液中搅拌2小时，浓缩至干，得到白色固体。(m＝1533.40)pyr-his(trt)-trp-ser(trt)-tyr(bzl)-d-ser(tbu)-leu-cooh。

boc-pro-oh和dcm搅拌溶解，加入1.2倍当量的nh2-azagly-conh2的dmf溶液，然后加入1.2倍当量的dcc，室温反应过夜，点板监控，原料boc-pro-oh消失，加入5％柠檬酸水溶液洗涤2次，取dcm层，再采用10％na2co水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取dcm层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。boc-pro-nh-azagly-conh2。

将上述固体，溶解在氯化氢的乙酸乙酯溶液中，搅拌2小时，脱除boc，反应结束后，浓缩至干，加入dcm溶解，再采用10％na2co水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取dcm层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。nh2-pro-nh-azagly-conh2。

boc-arg(no2)-oh和dcm搅拌溶解，加入1.2倍当量的nh2-pro-nh-azagly-conh2的dmf溶液，然后加入1.2倍当量的dcc，室温反应过夜，点板监控，原料boc-arg(no2)-oh，加入5％柠檬酸水溶液洗涤2次，取dcm层，再采用10％na2co水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取dcm层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。boc-arg(no2)-pro-nh-azagly-conh2。

将上述固体，溶解在氯化氢的乙酸乙酯溶液中，搅拌2小时，脱除boc，反应结束后，浓缩至干，加入dcm溶解，再采用10％na2co水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取dcm层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。nh2-arg(no2)-pro-nh-azagly-conh2。

取pyr-his(trt)-trp-ser(trt)-tyr(bzl)-d-ser(tbu)-leu–cooh加入dcm搅拌溶解，加入1.1倍当量的nh2-arg(no2)-pro-nh-azagly-conh2的dmf溶液，然后加入1.1倍当量的dcc，室温反应，hplc监控，原料pyr-his(trt)-trp-ser(trt)-tyr(bzl)-d-ser(tbu)-leu–cooh消失，加入5％柠檬酸水溶液洗涤2次，取dcm层，再采用10％na2co水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取dcm层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。pyr-his(trt)-trp-ser(trt)-tyr(bzl)-d-ser(tbu)-leu-arg(no2)-pro-nh-azagly-conh2。

将上述化合物溶解在甲醇中，加入1.1倍当量的10％pd/c，加压到10个大气压，室温反应5小时，过滤掉钯碳，反应液加入到冰冻的乙醚中，析出沉淀。总收率约34％，hplc74.7％(图6)。

对比例3戈舍瑞林粗肽的制备(液相合成)

boc-pro-oh和dcm搅拌溶解，加入1.2倍当量的nh2-azagly-conh2的dmf溶液，然后加入1.2倍当量的dcc，室温反应过夜，点板监控，原料boc-pro-oh消失，加入5％柠檬酸水溶液洗涤2次，取dcm层，再采用10％na2co水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取dcm层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。boc-pro-nh-azagly-conh2。

将上述固体，溶解在氯化氢的乙酸乙酯溶液中，搅拌2小时，脱除boc，反应结束后，浓缩至干，加入dcm溶解，再采用10％na2co水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取dcm层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。nh2-pro-nh-azagly-conh2。

boc-arg(no2)-oh和dcm搅拌溶解，加入1.2倍当量的nh2-pro-nh-azagly-conh2的dmf溶液，然后加入1.2倍当量的dcc，室温反应过夜，点板监控，原料boc-arg(no2)-oh，加入5％柠檬酸水溶液洗涤2次，取dcm层，再采用10％na2co水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取dcm层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。boc-arg(no2)-pro-nh-azagly-conh2。

将上述固体，溶解在氯化氢的乙酸乙酯溶液中，搅拌2小时，脱除boc，反应结束后，浓缩至干，加入dcm溶解，再采用10％na2co水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取dcm层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。nh2-arg(no2)-pro-nh-azagly-conh2。

按照上述偶联和脱除方法，依次液相缩合leu、d-ser(tbu)、tyr(bzl)、ser(trt)、trp、his(trt)、pyr。得到pyr-his(trt)-trp-ser(trt)-tyr(bzl)-d-ser(tbu)-leu-arg(no2)-pro-nh-azagly-conh2。

将上述化合物溶解在甲醇中，加入1.1倍当量的10％pd/c，加压到10个大气压，室温反应5小时，过滤掉钯碳，反应液加入到冰冻的乙醚中，析出沉淀。总收率约19％，hplc62.94％(图7)。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。