一种酶解多肽及在制备蛋鸡饲料中的应用的制作方法

本发明属于化学领域，涉及一种酶解多肽及在制备蛋鸡饲料中的应用。

背景技术：

蛋鸡是指饲养起来专门生蛋以供应蛋只的鸡，跟肉用鸡不同，人们饲养蛋鸡的主要任务是提高鸡蛋质量和保持或提高产蛋量，而并非提高鸡肉品质。鸡蛋是饲养蛋鸡的主要收入来源。因此，蛋鸡的产蛋性能直接决定了蛋鸡养殖的收益。

提高蛋鸡的产蛋性能是蛋鸡养殖户不懈的追求。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种酶解多肽及在制备蛋鸡饲料中的应用。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

一、酶解多肽b的制备及应用：

一种酶解多肽，通过如下步骤制备得到：

步骤1、五味子蛋白的制备

将五味子粉碎，用pbs缓冲液浸泡，用氢氧化钠溶液调ph至9.5，45℃水浴并搅拌1h，4000r/min下离心20min，过滤，滤液用磷酸调ph至5.5，使蛋白析出，静置30min后，4000r/min离心20min，取下层沉淀水洗至中性，得到五味子蛋白，干燥备用。

步骤2、五味子蛋白的酶解

称取五味子蛋白，加入蒸馏水，在55℃下保温30min，再用0.1mol/l的naoh溶液调ph至8.0，中性蛋白酶添加量为16000u/g，酶解温度为40℃，酶解时间为6h，灭酶，冷却后在4000r/min下离心20min，取上清液冻干，即得酶解物。

步骤3、酶解物的分级纯化

将酶解物用超纯水溶解，然后依次用截留分子量为10000u、5000u的超滤膜对所得到的酶解物进行分离，将超滤所得分子量介于10000u和5000u之间的组分冷冻干燥，即得。

优选地，步骤s1粉碎后过40目筛。

优选地，步骤s1用pbs缓冲液浸泡8h，料液比为1:10g/ml。

优选地，步骤2称取五味子蛋白于烧杯中，加入的蒸馏水，料液比为1:5g/ml。

优选地，步骤2沸水浴10min灭酶。

优选地，步骤s3中1g酶解物加10ml超纯水。

上述酶解多肽用作蛋鸡饲料添加剂的用途。

二、酶解多肽c的制备及应用：

一种酶解多肽，通过如下步骤制备得到：

步骤1、五味子蛋白的制备

将五味子粉碎，用pbs缓冲液浸泡，用氢氧化钠溶液调ph至9.5，45℃水浴并搅拌1h，4000r/min下离心20min，过滤，滤液用磷酸调ph至5.5，使蛋白析出，静置30min后，4000r/min离心20min，取下层沉淀水洗至中性，得到五味子蛋白，干燥备用。

步骤2、五味子蛋白的酶解

称取五味子蛋白，加入蒸馏水，在55℃下保温30min，再用0.1mol/l的naoh溶液调ph至8.0，中性蛋白酶添加量为16000u/g，酶解温度为40℃，酶解时间为6h，灭酶，冷却后在4000r/min下离心20min，取上清液冻干，即得酶解物。

步骤3、酶解物的分级纯化

将酶解物用超纯水溶解，然后依次用截留分子量为5000u、3000u的超滤膜对所得到的酶解物进行分离，将超滤所得分子量介于5000u和3000u之间的组分冷冻干燥，即得。

优选地，步骤s1粉碎后过40目筛。

优选地，步骤s1用pbs缓冲液浸泡8h，料液比为1:10g/ml。

优选地，步骤2称取五味子蛋白于烧杯中，加入的蒸馏水，料液比为1:5g/ml。

优选地，步骤2沸水浴10min灭酶。

优选地，步骤s3中1g酶解物加10ml超纯水。

上述酶解多肽用作蛋鸡饲料添加剂的用途。

三、酶解多肽e的制备及应用：

一种酶解多肽，通过如下步骤制备得到：

步骤1、五味子蛋白的制备

将五味子粉碎，用pbs缓冲液浸泡，用氢氧化钠溶液调ph至9.5，45℃水浴并搅拌1h，4000r/min下离心20min，过滤，滤液用磷酸调ph至5.5，使蛋白析出，静置30min后，4000r/min离心20min，取下层沉淀水洗至中性，得到五味子蛋白，干燥备用。

步骤2、五味子蛋白的酶解

称取五味子蛋白，加入蒸馏水，在55℃下保温30min，再用0.1mol/l的naoh溶液调ph至8.0，中性蛋白酶添加量为16000u/g，酶解温度为40℃，酶解时间为6h，灭酶，冷却后在4000r/min下离心20min，取上清液冻干，即得酶解物。

步骤3、酶解物的分级纯化

将酶解物用超纯水溶解，然后用截留分子量为1000u的超滤膜对所得到的酶解物进行分离，将超滤所得分子量为1000u以下的组分冷冻干燥，即得。

优选地，步骤s1粉碎后过40目筛。

优选地，步骤s1用pbs缓冲液浸泡8h，料液比为1:10g/ml。

优选地，步骤2称取五味子蛋白于烧杯中，加入的蒸馏水，料液比为1:5g/ml。

优选地，步骤2沸水浴10min灭酶。

优选地，步骤s3中1g酶解物加10ml超纯水。

上述酶解多肽用作蛋鸡饲料添加剂的用途。

有益效果：

料蛋比就是产一公斤蛋需料多少公斤，该指标直接体现了生产1公斤鸡蛋需要投入多少公斤饲料，该指标越低，饲料投资越少，可以节约大量成本，养殖收益率大大提高。结果表明，本发明提供的酶解多肽b、酶解多肽c、酶解多肽e添加到饲料中可以大大节约蛋鸡的饲料成本，提高蛋鸡养殖收益率。

附图说明

图1为实验第30周各组料蛋比。

具体实施方式

下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

实施例1：酶解多肽的制备

一、实验材料

五味子购自亳州中药材市场，鉴定确认为木兰科五味子schisandrachinensis(turcz.)baill.的干燥成熟果实。洗净阴干备用。

中性蛋白酶(13万u/g)购自广西东恒华道生物科技有限公司。

二、实验方法和结果

1、五味子蛋白的制备

将五味子粉碎，过40目筛，用pbs缓冲液浸泡8h，料液比为1:10g/ml，用氢氧化钠溶液调ph至9.5，45℃水浴并搅拌1h，4000r/min下离心20min，过滤，滤液用磷酸调ph至5.5，使蛋白析出，静置30min后，4000r/min离心20min，取下层沉淀水洗至中性，得到五味子蛋白，干燥备用。

2、五味子蛋白的酶解

称取五味子蛋白20g于烧杯中，加入100ml的蒸馏水，在55℃下保温30min，再用0.1mol/l的naoh溶液调ph至8.0，中性蛋白酶添加量为16000u/g，酶解温度为40℃，酶解时间为6h，沸水浴灭酶10min，冷却后在4000r/min下离心20min，取上清液冻干，即得酶解物。

3、酶解物的分级纯化

将酶解物用超纯水溶解(1g酶解物加10ml超纯水)，然后依次用截留分子量为10000u、5000u、3000u及1000u的超滤膜对所得到的酶解物进行分离，将超滤所得组分冷冻干燥(含水量≤5％)即得不同分子量大小的酶解多肽，即：

酶解多肽a，分子量为10000u以上；

酶解多肽b，分子量介于10000u和5000u之间；

酶解多肽c，分子量介于5000u和3000u之间；

酶解多肽d，分子量介于3000u和1000u之间；

酶解多肽e，分子量为1000u以下。

实施例2：酶解多肽对蛋鸡产蛋性能的影响

一、实验材料

基础日粮的配制组成见表1。其中，每千克预混料含：va318mg，vd32.25mg，ve860mg，vk112.5mg，vb145mg，vb2187.5mg，vb6105mg，vb120.375mg，烟酸900mg，泛酸30mg，叶酸30mg，生物素2.25mg，胆碱88g，fe2.25g，cu0.63g，mn2.4g，zn2.38g，i7mg，se15mg。

表1基础日粮的组成

二、实验方法

1、实验分组及饲喂方法

选取体重相近、处于产蛋高峰期(22周龄)的海兰褐商品蛋鸡360只，采用单因子随机区组设计，将蛋鸡随机分为6个处理，每个处理3个重复，每个重复20只鸡。其中对照组饲喂基础日粮，5个实验组分别饲喂添加0.50g/kg酶解多肽a～e的基础日粮。

2、产蛋性能的测定

每天收集鸡蛋，单枚称重，统计产蛋数、蛋重，计算实验第30周平均蛋重和料蛋比。

平均蛋重＝实验期产蛋总重/产蛋总数

料蛋比＝实验期总耗料量/总产蛋量

3、数据处理和分析

试验数据采用excel软件整理，结果用平均值±标准差表示。采用spss17.0中anova进行单因素方差分析，lsd进行多重比较，以p＜0.05作为显着性差异判断标准。

三、实验结果

实验结果如表2和图1所示。结果可见，各实验组的平均蛋重与对照组无显著差异(p＞0.05)，但是酶解多肽b组、酶解多肽c组、酶解多肽e组料蛋比显著高于对照组(p＜0.05)，而酶解多肽a组料蛋比与对照组无显著差异(p＞0.05)，酶解多肽d组料蛋比比对照组还显著升高(p＜0.05)。

表2实验第30周各组平均蛋重和料蛋比

料蛋比就是产一公斤蛋需料多少公斤，该指标直接体现了生产1公斤鸡蛋需要投入多少公斤饲料，该指标越低，饲料投资越少，可以节约大量成本，养殖收益率大大提高。上述结果表明，本发明提供的酶解多肽b、酶解多肽c、酶解多肽e添加到饲料中可以大大节约蛋鸡的饲料成本，提高蛋鸡养殖收益率。

上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。