本发明涉及水飞蓟籽油的纯化精炼领域，尤其涉及一种水飞蓟宾的循环式分离纯化方法。
背景技术：
水飞蓟素(silymarin)是从水飞蓟的种子中提取出来的一种黄酮木质素类混合物，它包括水飞蓟宾(silibinin，或sylibin)、异水飞蓟宾(isosylibinin)、水飞蓟亭(silicristin)、水飞蓟宁(silidianin)等成分。水飞蓟宾(figure1)本身也是由等比例水飞蓟宾a和水飞蓟宾b构成的两个非对映体混合物。体外和动物实验研究结果表明水飞蓟宾有很好的保护肝细胞免受毒素损伤的作用。水飞蓟宾有四个手性中心，水飞蓟宾a(2r，3r，10r，11r)和水飞蓟宾b(2r，3r，10s，11s)，约占水飞蓟素总量的60％-70％，是主要活性成分。目前，水飞蓟宾作为保肝药物被广泛应用于治疗肝炎、肝硬化及代谢中毒性肝损伤等疾病，其机制是抗氧化、抗脂质过氧化、抗纤维化、细胞膜稳定和免疫调节作用，并能增强肝再生能力等，被称为“天然的保肝药；同时，大量的研究表明水飞蓟宾还具有降血脂、保护心肌及抗糖尿病的作用。在动物研究实验中表明其没有明显的慢性毒副作用。近些年来的研究发现，水飞蓟宾还具有较强的抗肿瘤活性，使其越来越受到国内外研究者的关注。
目前，水飞蓟宾有多种提取分离方法，但主要方法包括：(1)先将水飞蓟种子去油，再以乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂加热回流，经过多次萃取、洗脱，提取分离得到水飞蓟宾产品，该方法利用甲醇、丙酮、乙酸乙酯等对人体有害溶剂提取的产品存在着有害溶剂残留，残留量超标等问题，而且该方法操作时间长，能耗大，污染环境；(2)使用超临界二氧化碳萃取法提取分离水飞蓟宾，该方法虽然改善了有机溶剂残留问题，但是操作时间较长，对操作温度、压力有一定要求；(3)国外也有研究用高温高压热水代替有机溶剂提取飞蓟宾，但是高温高压生产难度大，危险性高，不利于工业生产。
针对上述缺陷，本申请的发明人此前也研究了一种水飞蓟宾的分离纯化方法，具体见中国专利cn106083834一种高纯度水飞蓟宾分离纯化方法，该专利采用双相萃取技术、膜分离技术和重结晶技术相结合的方式提纯水飞蓟宾，降低有机溶剂使用，且获得了高纯度的水飞蓟宾，但是上述技术还是存在一定的不足之处，也是现有技术中水飞蓟宾提纯的不足之处，其转移率、收率均不高，无疑增加了水飞蓟宾的成本。
本发明针对现有提纯技术水飞蓟宾收率低的问题进行了纯化工艺的优化，提高转移率以及收率，有利于水飞蓟药材的综合利用，降低水飞蓟宾的成本。
技术实现要素：
发明目的：为了克服现有技术中存在的缺陷，本发明提出了一种水飞蓟宾的循环式分离纯化方法，不仅获得的水飞蓟宾纯度高，尤其有效提高了水飞蓟宾的转移率以及收率，有利于水飞蓟药材的综合利用，降低水飞蓟宾的成本。
技术方案：为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：一种水飞蓟宾的循环式分离纯化方法，以水飞蓟素为原料，进行多次循环的提纯方法，具体包括如下步骤：
(1)取一份水飞蓟素，加入其重量3-5倍的乙醇溶液a，加热保持微沸5-10min后，自然冷却水浴至30℃以下，过滤得滤饼，用1-2倍重量的乙醇溶液a对滤饼进行洗涤后得粗品i；
(2)向粗品i内加入其重量2-3倍的乙醇溶液b，加热保持微沸3-5min后，自然冷却水浴至30℃以下，过滤得滤饼以及滤液，用1-2倍重量的乙醇溶液b对滤饼进行洗涤后得粗品ii；对滤液进行浓缩干燥得粗品ii滤渣；
(3)向粗品ii内加入其重量8-12倍的无水乙醇，加热回流使其溶解，待完全溶解后趁热过滤，浓缩至原体积的20％-30％，室温放置14-18h析晶，过滤得滤饼以及滤液，滤液继续放置8-12h二次析晶，过滤得滤饼以及二次滤液，合并两次滤饼，用无水乙醇对滤饼进行洗涤后得精品i；对二次滤液进行浓缩干燥得精品i滤渣；
(4)向精品i内加入其重量8-12倍的无水乙醇，加热回流使其溶解，待完全溶解后趁热过滤，浓缩至原体积的20％-30％，室温放置24h析晶，过滤得滤饼以及滤液，用无水乙醇对滤饼进行洗涤后得精品ii；对滤液进行浓缩干燥得精品ii滤渣；
(5)二次循环提纯步骤：再取一份水飞蓟素，将步骤(2)所得的粗品ii滤渣与水飞蓟素一起重复步骤(1)得二次粗品i，再将步骤(3)所得的精品i滤渣与二次粗品i一起重复步骤(2)，得二次粗品ii与二次粗品ii滤渣，再将步骤(4)所得到的精品ii滤渣与粗品ii一起重复步骤(3)，得二次精品i与二次精品i滤渣，再将二次精品i重复步骤(4)得二次精品ii；
(6)多次循环提纯步骤：再取一份水飞蓟素，按步骤(5)的循环方式重复循环多次后得多次循环的精品ii，每次循环后得到的精品ii总和即为所得水飞蓟宾提纯后产物总和。
更为优选的，所述水飞蓟素中水飞蓟宾的质量含量为20％-40％。
更为优选的，所述乙醇溶液a的质量浓度为60％-70％。
更为优选的，所述乙醇溶液b的质量浓度为85％-95％。
步骤(6)中所述循环多次的次数为3-5次；达到水飞蓟宾的转移率和收率的较好的平衡状态。
有益效果：本发明提供的一种水飞蓟宾的循环式分离纯化方法，与现有技术相比，具备以下优点：将水飞蓟宾进行提纯后的滤渣进行循环多次利用，不仅获得的水飞蓟宾纯度高，更有效提高了水飞蓟宾的转移率以及收率，有利于水飞蓟药材的综合利用，降低水飞蓟宾的成本。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明：
实施例1：
一种水飞蓟宾的循环式分离纯化方法，以水飞蓟素为原料，进行多次循环的提纯方法，具体包括如下步骤：
(1)取100g水飞蓟素(其中水飞蓟宾的质量含量为27.9％，具体为27.9g)，加入其重量4倍的质量浓度为68％的乙醇，加热保持微沸8min后，自然冷却水浴至30℃以下，抽滤得滤饼，用1.5倍重量的质量浓度为68％的乙醇对滤饼进行洗涤后得粗品i；
(2)向粗品i内加入其重量2倍的质量浓度为90％的乙醇，加热保持微沸3min后，自然冷却水浴至30℃以下，抽滤得滤饼以及滤液，用1.5倍重量的质量浓度为90％的乙醇对滤饼进行洗涤后得粗品ii；对滤液进行浓缩干燥得粗品ii滤渣；
(3)向粗品ii内加入其重量10倍的无水乙醇，加热回流使其溶解，待完全溶解后趁热过滤，浓缩至原体积的20％，室温放置16h析晶，抽滤得滤饼以及滤液，滤液继续放置8h二次析晶，过滤得滤饼以及二次滤液，合并两次滤饼，用无水乙醇对滤饼进行洗涤后得精品i；对二次滤液进行浓缩干燥得精品i滤渣；
(4)向精品i内加入其重量10倍的无水乙醇，加热回流使其溶解，待完全溶解后趁热过滤，浓缩至原体积的20％，室温放置24h析晶，过滤得滤饼以及滤液，用无水乙醇对滤饼进行洗涤后得精品ii1.99g；对滤液进行浓缩干燥得精品ii滤渣；精品ii水飞蓟宾含量测定为99.9％；第一次提纯转移率为(1.99g/27.9g)*100％＝7.13％；
(5)二次循环提纯步骤：再取水飞蓟素100g，将步骤(2)所得的粗品ii滤渣与水飞蓟素一起重复步骤(1)得二次粗品i，再将步骤(3)所得的精品i滤渣与二次粗品i一起重复步骤(2)，得二次粗品ii与二次粗品ii滤渣，再将步骤(4)所得到的精品ii滤渣与粗品ii一起重复步骤(3)，得二次精品i与二次精品i滤渣，再将二次精品i重复步骤(4)得二次精品ii6.69g；第二次循环转移率为(6.69g/27.9g)*100％＝23.99％；
(6)三次循环提纯步骤：再取一份水飞蓟素100g，按步骤(5)的循环方式重复循环一次后得三次循环的三次精品ii10.98g，第三次循环转移率为(10.98g/27.9g)*100％＝39.35％；
取三次循环后得到的精品ii总和即为所得水飞蓟宾提纯后产物总和为1.99g+6.69g+10.98g＝19.66g，其收率为(19.66g/300g)*100％＝6.55％；总转移率为三次转移率的平均值为23.49％。
实施例2：
一种水飞蓟宾的循环式分离纯化方法，以水飞蓟素为原料，进行多次循环的提纯方法，具体包括如下步骤：
(1)取100g水飞蓟素(其中水飞蓟宾的质量含量为27.9％，具体为27.9g)，加入其重量4倍的质量浓度为65％的乙醇，加热保持微沸10min后，自然冷却水浴至30℃以下，抽滤得滤饼，用2倍重量的质量浓度为65％的乙醇对滤饼进行洗涤后得粗品i；
(2)向粗品i内加入其重量2倍的质量浓度为92％的乙醇，加热保持微沸5min后，自然冷却水浴至30℃以下，抽滤得滤饼以及滤液，用2倍重量的质量浓度为92％的乙醇对滤饼进行洗涤后得粗品ii；对滤液进行浓缩干燥得粗品ii滤渣；
(3)向粗品ii内加入其重量10倍的无水乙醇，加热回流使其溶解，待完全溶解后趁热过滤，浓缩至原体积的30％，室温放置18h析晶，抽滤得滤饼以及滤液，滤液继续放置8h二次析晶，过滤得滤饼以及二次滤液，合并两次滤饼，用无水乙醇对滤饼进行洗涤后得精品i；对二次滤液进行浓缩干燥得精品i滤渣；
(4)向精品i内加入其重量10倍的无水乙醇，加热回流使其溶解，待完全溶解后趁热过滤，浓缩至原体积的30％，室温放置24h析晶，过滤得滤饼以及滤液，用无水乙醇对滤饼进行洗涤后得精品ii1.48g；对滤液进行浓缩干燥得精品ii滤渣；精品ii水飞蓟宾含量测定为99.9％；第一次提纯转移率为(1.48g/27.9g)*100％＝5.30％；
(5)二次循环提纯步骤：再取水飞蓟素100g，将步骤(2)所得的粗品ii滤渣与水飞蓟素一起重复步骤(1)得二次粗品i，再将步骤(3)所得的精品i滤渣与二次粗品i一起重复步骤(2)，得二次粗品ii与二次粗品ii滤渣，再将步骤(4)所得到的精品ii滤渣与粗品ii一起重复步骤(3)，得二次精品i与二次精品i滤渣，再将二次精品i重复步骤(4)得二次精品ii5.99g；第二次循环转移率为(5.99g/27.9g)*100％＝21.47％；
(6)三次循环提纯步骤：再取一份水飞蓟素100g，按步骤(5)的循环方式重复循环一次后得三次循环的三次精品ii10.23g，第三次循环转移率为(10.23g/27.9g)*100％＝36.67％；
(7)四次循环提纯步骤：再取一份水飞蓟素100g，按步骤(5)的循环方式重复循环一次后得四次循环的四次精品ii14.01g，第四次循环转移率为(14.01g/27.9g)*100％＝50.21％；
取四次循环后得到的精品ii总和即为所得水飞蓟宾提纯后产物总和为31.71g，其收率为(31.71g/400g)*100％＝7.92％；总转移率为四次转移率的平均值为28.41％。
实施例1-2的精品ii收量以及转移率具体见表1所示：
表1实施例1-2各循环提纯过程水飞蓟宾的转移率
从实施例1-2可以看出，本申请一种水飞蓟宾的循环式分离纯化方法，对水飞蓟宾提纯中间过程产生的滤渣进行了重复循环利用，不仅获得的水飞蓟宾纯度高，更有效提高了水飞蓟宾提取过程中的转移率以及收率，总转移率在25％左右，收率接近8％，有利于水飞蓟药材的综合利用，降低水飞蓟宾的成本。