技术特征：
技术总结
本发明是一种快速构建CRISPR/Cas9基因编辑载体库的方法，包括以下步骤：设计特异性sgRNA；人工合成寡核苷酸DNA，并分别在上下游引物的5’端加入粘性末端DNA碱基；DNA寡核苷酸双链退火，形成双链sgRNA；利用T4/T7 DNA连接酶将双链sgRNA连接至酶切线性CRISPR/Cas9质粒中；将连接产物转化大肠杆菌提取质粒后得到编辑载体库。本发明利用双链退火原理构建了一种规模化基因编辑载体构建的方法，具有很好的正确率、覆盖度和均一性，可通过一次操作实现成百上千个基因编辑载体的构建，大幅提高载体构建效率，对于各物种基因功能研究和种质资源开发都具有重要意义。
技术研发人员：张建铎;李雪梅;陈章玉;杨光宇;向海英;曾婉俐;张涛;高茜;宋春满;许力;蒋佳芮;邓乐乐;杨文武;贾凌;夏庆友
受保护的技术使用者：云南中烟工业有限责任公司
技术研发日：2018.11.13
技术公布日：2019.06.07