一种含取代联苯的萘及其应用的制作方法

本发明涉及有机化合物，具体涉及萘化合物，该化合物能够抑制程序性细胞死亡受体1/程序性细胞死亡配体1(pd1/pd-l1)的相互结合，可用于治疗肿瘤。

背景技术：

肿瘤免疫疗法被越来越多的运用在癌症治疗领域。目前，肿瘤免疫治疗主要运用的药物是大分子生物抗体。其中pd-1/pd-l1的抑制剂(也被称为免疫检查点抑制剂)对多种肿瘤有效。因此，近年来，pd1/pd-l1成为抗肿瘤药物设计中最吸引人的一个靶标，同时也已被列为最具前景的肿瘤治疗靶点之一，因而备受关注。

pd-1在凋亡t杂交瘤细胞中被发现，由于与细胞凋亡相关，故被命名为程序性细胞死亡受体1。pd-1是一种重要的免疫抑制分子，在抑制肿瘤、病毒感染等疾病相关的抗原特异性t细胞应答中起着关键作用。体内肿瘤微环境诱导浸润的t细胞过度表达pd1，与此同时，肿瘤细胞过度表达配体pd-l1和pd-l2。pd-1与pd-l1的结合导致肿瘤患者t细胞效应功能下调，从而抑制抗肿瘤免疫应答，导致了t细胞的衰竭。pd-1/pd-l1抑制剂可以阻断pd-1和pd-l1的结合，干扰负调控信号，恢复t细胞的活性，从而增强免疫应答。pd-1/pd-l1的抑制剂(也被称为免疫检查点抑制剂)对多种肿瘤有效。到目前为止，fda已经批准了6种免疫检查点抑制剂，它们都是单克隆抗体，包括ipilimumab(bms研发，anti-ctla-4)，nivolumab(bms研发，anti-pd-1)，pembrolizumab(merck研发，anti-pd-1)、atezolizumab(anti-pd-l1，罗氏研发)，duvalumab(抗pd-l1，阿斯利康研发)，avelumab(抗pd-l1，辉瑞和默克共同研发)。抗体介导的免疫检查点阻滞剂(icb)在多种肿瘤类型如晚期转移性非小细胞肺癌、尿路上皮癌和头颈部鳞状细胞癌的临床试验中显示出很好的疗效。这些治疗方案已被采用作为相关癌症治疗的标准。然而，目前的pd-1/pd-l1单克隆抗体只对一小部分病例和肿瘤类型产生疗效。

pd-1/pd-l1抗体药物就其药效动力学而言具有靶点专属特异性和高效性等方面的优点。然而就其药代动力学而言，抗体药物的缺点也非常明显，首先，对相关组织和肿瘤细胞穿透性差，代谢半衰期长，口服生物利用度低等，其次，抗体药物具有免疫原性，因此会引起严重的不良反应，而且，抗体药物制造和分离纯化过程很复杂，导致其生产成本非常高昂。与大分子抗体药物相反，小分子化合物在药效动力学方面具有很多优势，例如，小分子化合物具有较好的口服生物利用度，对相关组织和肿瘤细胞渗透率高，半衰期合理等，而且小分子化合物具有毒性低，较高的选择性和有效性等优点，因此，小分子肿瘤免疫类药物有望克服大分子抗体药物存在的缺点。在肿瘤免疫治疗领域，小分子化合物既可以完善现有的抗体药物存在的不足，也可以与抗体药物共同使用发挥协同作用。随着科研人员在小分子肿瘤免疫药物研究中作出的巨大努力，一些高效的小分子化合物陆续被报道，其中有些小分子化合物已经进入临床研究。然而，迄今为止，没有一款小分子肿瘤免疫药物被fda批准用于癌症相关治疗。因此，以小分子为基础的肿瘤免疫疗法仍然是肿瘤免疫治疗最值得的关注的科学领域之一。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是提供一种含取代联苯的萘，该萘能够抑制程序性细胞死亡受体1/程序性细胞死亡配1(pd1/pd-l1)的相互结合，可用于制备pd1/pd-l1抑制剂。

本发明解决上述技术问题的方案如下：

一种含取代联苯的萘，该萘的化学结构如下式(i)所示，

式(i)中，r¹是氢或1，4-二氧六环基，r²是乙二胺、n,n-二甲基乙二胺、n-叔丁氧羰基-1,2-乙二胺、羟基、乙醇胺、乙酰乙二胺、d-丝氨酸、顺式-4-羟基-l-脯氨酸、l-半胱氨酸、2-甲基丙氨酸。

2、根据权利要求1所述的一种含取代联苯的萘，其特征在于，所述的萘为下述化合物中的一种：

当r¹是氢，r²是乙二胺时，所述萘的化学结构为

当r¹是氢，r²是n,n-二甲基乙二胺时，所述萘的化学结构为

当r¹是氢，r²是n-叔丁氧羰基-1,2-乙二胺时，所述萘的化学结构为

当r¹是氢，r²是羟基时，所述萘的化学结构为

当r¹是氢，r²是乙醇胺时，所述萘的化学结构为

当r¹是氢，r²是乙酰乙二胺时，所述萘的化学结构为

当r¹是氢，r²是d-丝氨酸时，所述萘的化学结构为

当r¹是氢，r²是顺式-4-羟基-l-脯氨酸时，所述萘的化学结构为

当r¹是氢，r²是l-半胱氨酸时，所述萘的化学结构为

当r¹是氢，r²是2-甲基丙氨酸时，所述萘的化学结构为

当r¹是1，4-二氧六环基，r²是乙二胺时，所述萘的化学结构为

当r¹是1，4-二氧六环基，r²是n,n-二甲基乙二胺时，所述萘的化学结构为

当r¹是1，4-二氧六环基，r²是n-叔丁氧羰基-1,2-乙二胺时，所述萘的化学结构为

当r¹是1，4-二氧六环基，r²是乙醇胺时，所述萘的化学结构为

当r¹是1，4-二氧六环基，r²是乙酰乙二胺时，所述萘的化学结构为

当r¹是1，4-二氧六环基，r²是d-丝氨酸时，所述萘的化学结构为

当r¹是1，4-二氧六环基，r²是顺式-4-羟基-l-脯氨酸时，所述萘的化学结构为

当r¹是1，4-二氧六环基，r²是l-半胱氨酸时，所述萘的化学结构为

当r¹是1，4-二氧六环基，r²是2-甲基丙氨酸时，所述萘的化学结构为

上述一种含取代联苯的萘的制备方法包括以下步骤：

本发明的含取代联苯的萘的制备方法，该方法包括以下步骤：首先将化合物v和化合物iv进行光延反应生成化合物iii；然后将化合物iii和化合物ii进行还原胺化生成化合物i。

上述方法的反应式如下所示：

上述反应式中，r¹是氢或1，4-二氧六环基，r²是乙二胺、n,n-二甲基乙二胺、n-叔丁氧羰基-1,2-乙二胺、羟基、乙醇胺、乙酰乙二胺、d-丝氨酸、顺式-4-羟基-l-脯氨酸、l-半胱氨酸、2-甲基丙氨酸。

上述含取代联苯的萘能够抑制程序性细胞死亡受体1/程序性细胞死亡配体1(pd1/pd-l1)的相互结合，可用于制备pd1/pd-l1抑制剂，该抑制剂的抗肿瘤效果显著。所述的pd1/pd-l1抑制剂由所述的含取代联苯的萘和医学上可接受的辅料组成。

采用htrf(均相时间分辨荧光)技术标准操作程序测定本发明所述的含取代联苯的萘对pd1/pd-l1的抑制效果，结果显示该类化合物对pd1/pd-l1具有较好抑制效果。

以下结合具体实施方式对本发明作进一步说明。

具体实施方式

实施例1(制备n1)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：化合物iii的制备

将4g化合物v和4.2g化合物iv，8.4g三苯基磷(pph3)加入40ml无水四氢呋喃中，搅拌15分钟，将8.4ml偶氮二甲酸二异丙酯(diad)分批次少量滴入反应液中，反应10小时，薄层色谱(tlc)监测，反应结束后，将反应液倾入100ml水中，用乙酸乙酯(100ml×5)萃取，静置分液，有机相分别用5％的碳酸氢钠(nahco3)(80ml×3)、饱和食盐水(80ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝10:1得黄色固体iii3g。

将所得到的黄色固体采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.14(s,1h),8.30(s,1h),7.99–7.94(m,2h),7.87(d,j＝8.5hz,1h),7.53(dd,j＝6.4,2.6hz,1h),7.46(d,j＝7.5hz,2h),7.43–7.40(m,1h),7.38(dd,j＝3.9,2.3hz,3h),7.37–7.36(m,1h),7.35–7.31(m,2h),5.28(s,2h),2.34(s,3h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ191.95,159.49,143.07,141.80,138.20,134.64,134.37,134.20,132.44,131.24,130.37,129.36,128.10,128.08,128.03,127.79,126.91,125.68,123.67,120.19,107.26,69.32,16.18.由上述鉴定结果可知，所得黄色固体为化合物iii。

步骤二：化合物n1的制备

将40mg化合物iii和50mg乙二胺，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入40mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物n110mg。

将所得到的化合物n1采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：

¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.82(d,j＝4.0hz,1h),7.80(d,j＝3.5hz,1h),7.77(s,1h),7.54(s,1h),7.51–7.48(m,2h),7.46(d,j＝7.6hz,2h),7.40(d,j＝7.4hz,1h),7.35(d,j＝1.4hz,1h),7.33(s,1h),7.30(d,j＝7.5hz,1h),7.28–7.25(m,1h),7.23(s,1h),5.27(s,2h),3.84(s,2h),2.82(t,j＝5.7hz,2h),2.67(t,j＝5.5hz,2h),2.24(s,3h).由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物n1。

实施例2(制备n2)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：n2的制备

将40mg化合物iii和60mgn,n-二甲基乙二胺，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入42mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物n28mg。

将所得到的n2采用核磁共振谱、质谱技术进行鉴定，鉴定结果为：

¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.78(d,j＝3.7hz,1h),7.76(d,j＝3.2hz,1h),7.74(s,1h),7.53(dd,j＝6.9,2.0hz,1h),7.48(dd,j＝3.9,2.8hz,1h),7.46(s,1h),7.44(s,1h),7.41–7.37(m,2h),7.36(d,j＝1.3hz,1h),7.31(dd,j＝5.5,3.0hz,3h),7.28–7.24(m,1h),5.23(s,2h),3.99(s,2h),2.78(t,j＝6.1hz,2h),2.50(t,j＝6.1hz,2h),2.43(s,1h),2.32(s,3h),2.25(s,6h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ156.73,142.92,141.93,135.51,135.24,134.33,133.64,130.12,129.38,129.26,129.01,128.04,128.00,127.19,126.94,126.81,126.46,125.58,119.04,106.89,69.12,58.94,53.97,46.42,45.44,16.14.esi-ms：m/z＝425.8[m+1]⁺.由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为n2。

实施例3(制备n3)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：n3的制备

将40mg化合物iii和62mgn-叔丁氧羰基-1,2-乙二胺，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入45mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物n39mg。

将所得到的n3采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：

¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.80(s,1h),7.78(s,1h),7.73(s,1h),7.55(dd,j＝6.5,2.5hz,1h),7.51–7.49(m,1h),7.48(d,j＝2.0hz,1h),7.47(d,j＝1.8hz,1h),7.42(d,j＝1.3hz,1h),7.41–7.37(m,2h),7.33(dd,j＝4.4,2.5hz,3h),7.30(dd,j＝6.7,2.2hz,1h),5.24(s,2h),3.96(s,2h),3.31(d,j＝5.2hz,2h),2.83(t,j＝5.8hz,2h),2.35(s,3h),2.04(s,1h),1.52(s,9h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ156.84,156.20,142.95,141.95,135.26,134.33,133.76,130.15,129.42,129.31,129.03,128.10,128.02,127.13,127.08,126.87,126.51,125.63,119.18,106.97,79.16,69.14,53.48,48.51,40.24,28.46,16.18.由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为n3。

实施例4(制备n4)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：n4的制备

将40mg化合物iii加入5ml无水甲醇中，搅拌，然后加入45mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝6:1得白色固体化合物n415mg。将所得到的化合物n4采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：

¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.80(dd,j＝8.8,2.7hz,3h),7.54(dd,j＝6.7,2.2hz,1h),7.52–7.49(m,1h),7.46(d,j＝7.5hz,2h),7.43–7.40(m,1h),7.39(d,j＝1.6hz,1h),7.37(s,1h),7.34–7.31(m,3h),7.31–7.28(m,1h),5.25(s,2h),4.85(s,2h),2.34(s,3h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ157.01,142.96,141.92,136.17,135.18,134.34,134.04,130.16,129.46,129.39,128.93,128.07,128.01,127.22,126.84,125.89,125.61,125.53,119.28,106.96,69.14,65.48,16.16.

由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物n4。

实施例5(制备n5)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：n5的制备

将40mg化合物iii和50mg乙醇胺，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入47mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物n56mg。

将所得到的化合物n5采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.78(s,1h),7.76(s,1h),7.71(s,1h),7.53(dd,j＝6.7,2.2hz,1h),7.48(t,j＝1.4hz,1h),7.45(s,1h),7.45(s,1h),7.40(dd,j＝5.5,1.8hz,1h),7.38(d,j＝1.6hz,1h),7.37(d,j＝1.4hz,1h),7.33–7.30(m,3h),7.28(t,j＝3.2hz,1h),5.23(s,2h),3.96(s,2h),3.74–3.69(m,2h),2.90–2.84(m,2h),2.63(s,2h),2.32(s,3h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ156.88,142.94,141.92,135.19,134.78,134.32,133.77,130.14,129.38,129.28,128.96,128.06,127.99,127.13,127.06,126.83,126.63,125.60,119.23,106.92,69.13,60.74,53.38,50.43,16.15.由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物n5。

实施例6(制备n6)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：n6的制备

将40mg化合物iii和55mg乙酰乙二胺，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入48mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物n67mg。将所得到的化合物n6采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ173.39,157.73,142.92,141.80,134.87,134.69,134.23,130.17,129.74,129.54,129.34,128.61,128.05,127.93,127.89,127.10,126.84,126.10,125.59,119.98,106.78,69.08,51.80,47.66,36.90,22.92,16.11.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.82(s,1h),7.76(t,j＝8.8hz,2h),7.46(s,1h),7.44(dd,j＝6.0,2.3hz,3h),7.41(s,1h),7.37(dd,j＝5.4,1.8hz,1h),7.34–7.31(m,2h),7.29–7.25(m,3h),6.17(s,2h),5.13(s,2h),4.11(s,2h),3.44(d,j＝3.7hz,2h),3.05(s,2h),2.25(s,3h),1.95(s,3h).由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物n6。

实施例7(制备n7)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：n7的制备

将40mg化合物iii和50mgd-丝氨酸，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入49mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物n711mg。将所得到的化合物n7采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.85(dd,j＝9.1,3.5hz,3h),7.57–7.51(m,3h),7.47(t,j＝7.4hz,2h),7.40(d,j＝7.2hz,1h),7.34(d,j＝7.3hz,2h),7.29(dd,j＝7.6,4.7hz,2h),7.22(d,j＝7.4hz,1h),5.28(s,2h),4.10(dd,j＝29.0,13.3hz,2h),3.72–3.64(m,2h),3.19(d,j＝5.3hz,1h),2.24(s,3h).由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物n7。

实施例8(制备n8)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：n8的制备

将40mg化合物iii和60mg顺式-4-羟基-l-脯氨酸，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入50mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物n812mg。将所得到的化合物n8采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.84(t,j＝8.8hz,3h),7.56–7.50(m,3h),7.47(t,j＝7.3hz,2h),7.40(d,j＝7.3hz,1h),7.35(d,j＝1.4hz,1h),7.33(s,1h),7.31–7.25(m,2h),7.22(d,j＝6.8hz,1h),5.28(s,2h),5.00(s,1h),4.26–4.18(m,2h),3.87(d,j＝13.6hz,1h),3.00(d,j＝10.0hz,1h),2.80(s,1h),2.44–2.39(m,1h),2.24(s,3h),2.06–1.93(m,1h),1.84(d,j＝10.3hz,1h).由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物n8。

实施例9(制备n9)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：n9的制备

将40mg化合物iii和50mgl-半胱氨酸，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入46mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物n92mg。将所得到的化合物n9采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.83(t,j＝7.1hz,3h),7.53(d,j＝10.2hz,3h),7.47(t,j＝7.4hz,2h),7.40(d,j＝7.2hz,1h),7.34(d,j＝7.1hz,2h),7.28(dd,j＝13.0,4.7hz,2h),7.22(d,j＝7.4hz,1h),5.27(s,2h),3.99(dd,j＝41.4,13.4hz,3h),3.35(s,1h),2.81(d,j＝5.6hz,1h),2.24(s,3h).由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物n9。

实施例10(制备n10)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：n10的制备

将40mg化合物iii和50mg2-甲基丙氨酸，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入43mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物n107mg。将所得到的化合物n10采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.92(s,1h),7.87(s,1h),7.85(s,1h),7.58(d,j＝8.4hz,1h),7.53(d,j＝6.2hz,2h),7.47(t,j＝7.4hz,2h),7.40(d,j＝7.5hz,1h),7.35(t,j＝8.9hz,2h),7.30(d,j＝7.4hz,2h),7.22(d,j＝7.5hz,1h),5.28(s,2h),4.06(s,2h),2.24(s,3h),1.39(s,6h).由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物n10。

实施例11(制备yn1)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：化合物iii的制备

将4g化合物v和5.5g化合物iv，8.5g三苯基磷(pph3)加入40ml无水四氢呋喃中，搅拌15分钟，将8.6ml偶氮二甲酸二异丙酯(diad)分批次少量滴入反应液中，反应10小时，薄层色谱(tlc)监测，反应结束后，将反应液倾入100ml水中，用乙酸乙酯(100ml×5)萃取，静置分液，有机相分别用5％的碳酸氢钠(nahco3)(80ml×3)、饱和食盐水(80ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝10:1得黄色固体iii4g

将所得到的黄色固体iii采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.13(s,1h),8.30(s,1h),7.98–7.94(m,2h),7.86(d,j＝8.5hz,1h),7.48(dd,j＝5.9,3.2hz,1h),7.37–7.33(m,2h),7.29(d,j＝2.6hz,1h),7.28(s,1h),6.95(d,j＝8.2hz,1h),6.88(d,j＝2.0hz,1h),6.83(dd,j＝8.3,2.1hz,1h),5.26(s,2h),4.34(s,4h),2.34(s,3h).由上述鉴定结果可知，所得黄色固体为化合物iii。

步骤二：化合物yn1的制备

将50mg化合物iii和50mg乙二胺，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入60mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物yn111mg。

将所得到的化合物yn1采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：

¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.81(d,j＝5.9hz,1h),7.79(d,j＝5.4hz,1h),7.76(s,1h),7.49(d,j＝7.3hz,3h),7.29–7.22(m,2h),7.18(d,j＝7.6hz,1h),6.93(d,j＝8.2hz,1h),6.80(d,j＝2.0hz,1h),6.77(dd,j＝8.2,2.1hz,1h),5.24(s,2h),4.29(s,4h),3.18(s,2h),2.76(d,j＝5.7hz,2h),2.64(d,j＝5.6hz,2h),2.25(s,3h).由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物yn1。

实施例12(制备yn2)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：yn2的制备

将40mg化合物iii和58mgn,n-二甲基乙二胺，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入46mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物yn28mg。

将所得到的yn2采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：

¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.77(d,j＝3.0hz,1h),7.75(d,j＝2.4hz,1h),7.73(s,1h),7.51–7.45(m,2h),7.30(d,j＝2.5hz,1h),7.28(s,1h),7.26(dd,j＝8.8,2.4hz,2h),6.94(d,j＝8.2hz,1h),6.88(d,j＝2.0hz,1h),6.83(dd,j＝8.2,2.1hz,1h),5.21(s,2h),4.33(s,4h),3.99(s,2h),2.78(t,j＝6.1hz,2h),2.54(s,1h),2.51(d,j＝5.9hz,2h),2.33(s,3h),2.26(s,6h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ156.79,143.00,142.56,142.34,135.31,135.17,135.03,134.46,133.69,130.16,129.26,128.97,127.81,127.14,127.01,126.58,125.51,122.56,119.11,118.22,116.80,106.87,69.13,64.39,58.67,53.83,46.11,45.30,16.15.由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为yn2。

实施例13(制备yn3)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：yn3的制备

将40mg化合物iii和64mgn-叔丁氧羰基-1,2-乙二胺，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入45mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物yn39mg。

将所得到的yn3采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：

¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.77(s,1h),7.75(s,1h),7.71(s,1h),7.49(dd,j＝6.0,3.0hz,1h),7.46(dd,j＝8.4,1.5hz,1h),7.31(d,j＝1.7hz,1h),7.28(d,j＝2.6hz,2h),7.26(d,j＝2.4hz,1h),6.95(d,j＝8.2hz,1h),6.90(d,j＝2.0hz,1h),6.83(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),5.21(s,2h),4.31(d,j＝4.8hz,4h),3.94(s,2h),3.29(d,j＝5.3hz,2h),2.81(t,j＝5.8hz,2h),2.34(s,3h),2.11(s,1h),1.49(s,9h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ156.82,156.17,143.03,142.59,142.35,135.30,135.18,135.09,134.44,133.73,130.17,129.26,128.97,127.81,127.08,127.06,126.51,125.54,122.56,119.17,118.24,116.83,106.92,79.15,69.14,64.39,53.44,48.46,40.18,28.41,16.17.由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为yn3。

实施例14(制备yn4)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：yn4的制备

将40mg化合物iii和52mg乙醇胺，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入47mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物yn47mg。

将所得到的化合物yn4采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.76(d,j＝8.6hz,2h),7.71(s,1h),7.49(dd,j＝6.2,2.8hz,1h),7.45(dd,j＝8.4,1.4hz,1h),7.30(d,j＝2.5hz,1h),7.28(s,1h),7.27(dd,j＝6.4,2.5hz,2h),6.95(d,j＝8.2hz,1h),6.89(d,j＝2.0hz,1h),6.83(dd,j＝8.2,2.1hz,1h),5.21(s,2h),4.33(s,4h),3.96(s,2h),3.73–3.68(m,2h),2.88–2.84(m,2h),2.51(s,2h),2.33(s,3h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ156.87,143.01,142.57,142.35,135.30,135.14,134.83,134.45,133.75,130.17,129.25,128.95,127.81,127.11,127.04,126.59,125.53,122.56,119.22,118.23,116.81,106.90,69.14,64.39,60.77,53.38,50.42,16.16.由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物yn4。

实施例15(制备yn5)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：yn5的制备

将40mg化合物iii和59mg乙酰乙二胺，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入46mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物yn57mg。将所得到的化合物yn5采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.83(s,1h),7.76(t,j＝9.6hz,2h),7.46(d,j＝8.5hz,1h),7.42(t,j＝4.6hz,1h),7.25–7.21(m,4h),6.91(d,j＝8.2hz,1h),6.84(d,j＝2.0hz,1h),6.78(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),5.77(s,2h),5.11(s,2h),4.30(s,4h),4.13(s,2h),3.44(s,2h),3.07(s,2h),2.27(s,3h),1.96(s,3h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ173.59,157.78,143.00,142.57,142.33,135.18,134.83,134.74,134.36,130.20,129.76,129.74,129.64,128.58,127.99,127.71,127.07,125.71,125.52,122.52,120.02,118.19,116.81,106.77,69.09,64.36,51.89,47.95,37.01,22.93,16.14.由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物yn5。

实施例16(制备yn6)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：yn6的制备

将40mg化合物iii和54mgd-丝氨酸，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入50mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物yn611mg。将所得到的化合物yn6采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.88–7.78(m,3h),7.55(d,j＝9.8hz,1h),7.50(dd,j＝8.4,4.9hz,2h),7.30–7.24(m,2h),7.18(d,j＝6.8hz,1h),6.93(d,j＝8.2hz,1h),6.81(d,j＝2.0hz,1h),6.77(dd,j＝8.2,2.1hz,1h),5.25(s,2h),4.29(s,4h),4.17–4.06(m,2h),3.69(dd,j＝11.9,5.5hz,2h),3.21(d,j＝5.8hz,1h),2.25(s,3h).由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物yn6。

实施例17(制备yn7)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：yn7的制备

将40mg化合物iii和61mg顺式-4-羟基-l-脯氨酸，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入50mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物yn712mg。将所得到的化合物yn7采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.82(dd,j＝16.4,7.6hz,3h),7.50(t,j＝7.8hz,3h),7.29–7.24(m,2h),7.18(d,j＝6.6hz,1h),6.93(d,j＝8.2hz,1h),6.81(d,j＝2.0hz,1h),6.77(dd,j＝8.2,2.1hz,1h),5.25(s,2h),4.84(s,1h),4.29(s,4h),4.22(s,1h),4.16(d,j＝13.0hz,1h),3.75(d,j＝12.8hz,1h),2.91(d,j＝10.0hz,1h),2.68(dd,j＝5.8,3.7hz,1h),2.41–2.38(m,1h),2.25(s,3h),2.04–1.98(m,1h),1.84–1.80(m,1h).由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物yn7。

实施例18(制备yn8)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：yn8的制备

将40mg化合物iii和51mgl-半胱氨酸，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入45mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物yn82mg。将所得到的化合物yn8采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：¹³cnmr(101mhz,dmso)δ172.32,143.37,142.91,142.05,135.88,134.89,134.41,134.00,133.72,130.03,129.67,128.78,128.10,127.81,127.35,127.31,127.22,125.86,124.95,124.82,124.71,122.55,119.32,118.14,117.19,107.54,68.90,64.51,50.90,26.43,16.25.¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.82(dd,j＝13.2,8.1hz,3h),7.51(t,j＝9.8hz,3h),7.28–7.22(m,2h),7.18(d,j＝7.4hz,1h),6.95–6.91(m,1h),6.82–6.75(m,2h),5.25(s,2h),4.29(s,4h),3.98(dd,j＝42.4,13.5hz,3h),3.34(s,1h),2.80(s,1h),2.25(s,3h).由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物yn8。

实施例19(制备yn9)

结构式为化合物的制备方法由以下步骤组成：

步骤一：yn9的制备

将40mg化合物iii和53mg2-甲基丙氨酸，2滴冰醋酸加入5ml无水甲醇中，搅拌，加热至60℃，反应4小时，然后加入45mg氰基硼氢化钠(nabh3cn)，室温反应12小时，tlc监测，反应结束后，旋干溶剂，将反应物倾入100ml水中，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，静置分液，有机相分别用5％的nahco3(20ml×3)、饱和食盐水(20ml×3)洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，减压除去乙酸乙酯，之后进行柱层析v(石油醚)：v(乙酸乙酯)＝2:1得白色固体化合物yn97mg。将所得到的化合物yn9采用核磁共振谱技术进行鉴定，鉴定结果为：¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.92(s,1h),7.88(s,1h),7.86(s,1h),7.58(d,j＝8.5hz,1h),7.53(d,j＝2.2hz,1h),7.49(d,j＝7.4hz,1h),7.32–7.28(m,1h),7.26(d,j＝7.5hz,1h),7.19(d,j＝6.8hz,1h),6.93(d,j＝8.2hz,1h),6.80(d,j＝2.0hz,1h),6.77(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),5.26(s,2h),4.29(s,4h),4.07(s,2h),2.25(s,3h),1.40(s,6h).由上述鉴定结果可知，所得白色固体产物为化合物yn9。

实施例20、含取代联苯的萘对pd1/pd-l1的抑制效果研究

本发明化合物的对pd1/pd-l1的抑制效果采用如下方法测试所证明。

这些效果表明本发明化合物对pd1/pd-l1的抑制效果明显，其可用于治疗癌症，特别是治疗转移性非小细胞肺癌、尿路上皮癌和头颈部鳞状细胞癌。具体测试方法如下：

一、实验目的及原理

参考公开号为cn108593615a专利申请说明书第[0016]、[0017]和[0034]段所述方法，采用htrf方法快速高效检测实施例1～11所制备的化合物(编号依次为n1～n10，yn1～yn9)对pd1/pd-l1的抑制效果。htrf(均相时间分辨荧光)检测技术是基于时间分辨荧光(trf)和荧光共振能量转移(fret)两大技术原理开通的高通量药物筛选技术。时间分辨荧光(trf)利用稀土元素中镧系元素半衰期长，荧光比普通荧光持续时间长的特性，通过延迟50-100微秒排除背景，从而反映样品实际情况。荧光共振能量转移(fret)是指在两个不同的荧光基团中，如果一个荧光基团(供体donor)的发射光谱与另一个基团(受体acceptor)的吸收光谱有一定的重叠，当这两个荧光基团间的距离合适时(一般小于)，就可观察到荧光能量由供体向受体转移的现象，即以前一种基团的激发波长激发时，可观察到后一个基团发射的荧光。简单地说，就是在供体基团的激发状态下由一对偶极子介导的能量从供体向受体转移的过程。能量供给体－接受体(d–a)对之间发生有效能量转移的条件是苛刻的，主要包括：(1)能量供体的发射光谱与能量受体的吸收光谱必须重叠；(2)能量供体与能量受体的荧光生色团必须以适当的方式排列；(3)能量供体、能量受体之间必须足够接近，这样发生能量转移的几率才会高。htrf是利用了具有穴状结构的铕(eu)元素的螯和标记物作为一个能量供体(donor)和xl665(改良过的别藻蓝蛋白)作为一个能量受体(acceptor)，是基于eu穴状化合物的供体与xl665受体(第二荧光标记物)之间的时间分辨荧光(trf)和荧光共振能量转移(fret)特性开通的高通量药物筛选技术。在荧光共振能量转移中，受体发射荧光的寿命等同与供体的发射荧光的寿命。因为eu的荧光衰减周期较长，所以含eu的供体会诱导xl665受体长时间地发射荧光，受体激发后产生的荧光便能持续较长时间，这样通过时间分辨就可以区分短寿命的自身散射荧光，这样从短寿命荧光背景中就很容易区分出fret信号。当由于生物分子相互作用导致两个荧光基团接近时，在激发时被eu穴状化合物捕获的部分能量释放，发射波长为620nm；另一部分能量转移到受体(acceptor)上，发射波长为665nm。665nm的发射光仅由供体(donor)引起的fret产生。在htrf检测试剂盒中，eu穴状化合物的能量供体能够特异性的结合pd-l1蛋白，xl665能量受体能够特异性的结合pd-1蛋白，从而形成四个物质聚合的复合物。拉近donor和acceptor的距离，能量能够从donor上转移到acceptor上，使acceptor产生荧光；若测试化合物能够阻断二者结合，则随着测试化合物浓度的增加，665nm/620nm的比值降低；待检测体系稳定后测定荧光值的变化便可量化阻断剂的效价ic50；检测的为htrf两个荧光665nm和620nm，即时间分辨荧光(trf)，当665nm/620nm的比值降低，阻断剂的效应越高。htrf检测试剂盒，就是综合利用抗原抗体的特异性结合反应，受体供体间能量共振转移而开发的，高灵敏度，快速免洗，低背景的高通量检测技术。

二、试剂基本信息

三、实验试剂准备

四、实验过程

(1)向96孔板中每孔加入2μl的化合物稀释液，1000rpm离心1min.

(2)向每孔加入4μl(2.5x)pd-1混合液，1000rpm离心1min.

(3)向每孔加入4ul(2.5x)pd-l1混合液，1000rpm离心1min，室温孵育15min.(4)每孔加入10μl(2x)测试混合液,1000rpm离心1min.

(5)室温孵育120min,使用tecan酶标仪读取荧光值(ex:320nm；em:620and665nm).(6)按下列公式计算抑制率，抑制率(inibition)％＝(1-(各孔665nm/620nm信号值-低对照组平均值)/(高对照组平均值-低对照组平均值))*100。其中高对照组为没有加化合物处理，仅用等量浓度dmso溶液加入反应体系组；低对照组为没有pd-1混合液，只加入等量detection检测混合液。该检测体系中，dmso终浓度为0.5％。

下表列出了在pd-1/pd-l1均相时间分辨荧光(htrf)结合测定中测量的本发明的实施例1-实施例19的ic50。化合物的ic50在1μm到10μm之间被标示为++；化合物的ic50在10μm到100μm之间被标示为+。具体见下表：

化合物n1～n10，yn1～yn9对pd1/pd-l1的抑制效果

根据上述体外实验结果，我们可以得出专利所述的一种含取代联苯的萘，该类化合物能够抑制程序性细胞死亡受体1/程序性细胞死亡配体1(pd1/pd-l1)的相互结合。