一种循环水养殖系统及其专用微生态菌剂的制作方法

本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及一种循环水养殖系统及其专用微生态菌剂。

背景技术：

20世纪，欧洲部分地区由于缺水以及环保要求的提高，开始发展循环水养殖模式。随着先进环境工程技术和工厂化管理观念的融入，循环水养殖模式迅速发展。中国在90年代开始建立循环水养殖示范区，随着经济发展和城市化进程，循环水养殖模式以其高效率、低污染的优点渐渐得到国家和企业的认可和支持，现在还处在迅速发展状态。此外，中国对水产品的需求一直递增，循环水养殖模式被视为现代渔业发展的重要方向，其集约化、智能化、高密度等特点大大优胜于现有粗放型养殖模式。

然而，循环水养殖模式水处理方法主要是把水体有害的含氮物质转化为毒性较低的硝酸盐，由于长期不换水，系统中硝酸盐会稳步积累到相当高的浓度，养殖对象摄入后，在体内微生物作用下，产生毒性较大的亚硝酸盐，导致养殖对象产生痉挛、休克、体色变淡等问题。目前循环水养殖模式主要通过换水来解决硝酸盐积累问题。在其它领域，硝酸盐的积累主要采用离子交换法和固相反硝化法去除。但是，离子交换法成本较高，技术不完善，且容易受氯离子、硫酸根离子等的影响；固相反硝化法不仅需要操作人员适时投加碳源，而且要求溶氧浓度不能高，这对养殖系统运行管理有较高要求，同时固相反硝化法的硝酸盐去除效果不稳定，容易诱发亚硝酸盐浓度升高等问题。水产养殖领域难以承受这两种成本高昂的方法。

技术实现要素：

本发明的目的是去除水产养殖水体中的硝酸盐。

本发明首先保护一种微生态菌剂，其可包括脱氮副球菌。

所述微生态菌剂还可包括反硝化盐单胞菌和产碱假单胞菌。

所述微生态菌剂具体可由反硝化盐单胞菌、产碱假单胞菌和脱氮副球菌组成。所述微生态菌剂中，反硝化盐单胞菌、产碱假单胞菌和脱氮副球菌的菌落形成单位(cfu)数目比可为(7×10⁷-7×10⁹)cfu：(5×10⁷-5×10⁹)cfu：(5×10⁷-5×10⁹)cfu(如7×10⁸cfu：(5×10⁷-5×10⁹)cfu：(5×10⁷-5×10⁹)cfu或7×10⁸cfu：5×10⁸cfu：5×10⁸cfu)。

上述任一所述微生态菌剂还可包括用于维持细菌(如脱氮副球菌、反硝化盐单胞菌、产碱假单胞菌)生长的营养元素。

所述用于维持细菌生长的营养元素可包括淀粉、乙二胺四乙酸、硫酸镁、磷酸氢二钠、硫酸铁、磷酸二氢钾、氯化钙、硫酸铜、氯化锰、钼酸铵和氯化钴。

所述用于维持细菌生长的营养元素具体可由淀粉、乙二胺四乙酸、硫酸镁、磷酸氢二钠、硫酸铁、磷酸二氢钾、氯化钙、硫酸铜、氯化锰、钼酸铵和氯化钴组成。

上述任一所述微生态菌剂具体可由反硝化盐单胞菌、产碱假单胞菌、脱氮副球菌、淀粉、乙二胺四乙酸、硫酸镁、磷酸氢二钠、硫酸铁、磷酸二氢钾、氯化钙、硫酸铜、氯化锰、钼酸铵和氯化钴组成。所述微生态菌剂中，反硝化盐单胞菌、产碱假单胞菌、脱氮副球菌、淀粉、乙二胺四乙酸、硫酸镁、磷酸氢二钠、硫酸铁、磷酸二氢钾、氯化钙、硫酸铜、氯化锰、钼酸铵和氯化钴的比例可为(7×10⁷-7×10⁹)cfu：(5×10⁷-5×10⁹)cfu：(5×10⁷-5×10⁹)cfu：(720-880)mg：(45-55)mg：(0.009-0.011)mg：(27-33)mg：(1.8-2.2)mg：(27-33)mg：(0.09-0.11)μg：(0.027-0.033)ng：(0.018-0.022)ng：(0.018-0.022)ng：(0.018-0.022)ng(如7×10⁸cfu：(5×10⁷-5×10⁹)cfu：(5×10⁷-5×10⁹)cfu：(720-880)mg：(45-55)mg：(0.009-0.011)mg：(27-33)mg：(1.8-2.2)mg：(27-33)mg：(0.09-0.11)μg：(0.027-0.033)ng：(0.018-0.022)ng：(0.018-0.022)ng：(0.018-0.022)ng或7×10⁸cfu：5×10⁸cfu：5×10⁸cfu：800mg：50mg：0.01mg：30mg：2mg：30mg：0.1μg：0.03ng：0.02ng：0.02ng：0.02ng)。

所述微生态菌剂中，所述微生态菌剂的活性成分可为反硝化盐单胞菌、产碱假单胞菌和脱氮副球菌经发酵培养后，或直接使用或浓缩使用或经载体吸附而制成的活菌制品。

所述微生态菌剂中，反硝化盐单胞菌的含量可为(7×10⁷-7×10⁹)cfu/g(如7×10⁸cfu/g)。产碱假单胞菌的含量可为(5×10⁷-5×10⁹)cfu/g(如5×10⁸cfu/g)。脱氮副球菌的含量可为(5×10⁷-5×10⁹)cfu/g(如5×10⁸cfu/g)。淀粉的含量可为(720-880)mg/g(如800mg/g)。乙二胺四乙酸的含量可为(45-55)mg/g(如50mg/g)。硫酸镁的含量可为(0.009-0.011)mg/g(如0.01mg/g)。磷酸氢二钠的含量可为(27-33)mg/g(如30mg/g)。硫酸铁的含量可为(1.8-2.2)mg/g(如2mg/g)。磷酸二氢钾的含量可为(27-33)mg/g(如30mg/g)。氯化钙的含量可为(0.09-0.11)μg/g(如0.1μg/g)。硫酸铜的含量可为(0.027-0.033)ng/g(如0.03ng/g)。氯化锰的含量可为(0.018-0.022)ng/g(如0.02ng/g)。钼酸铵的含量可为(0.018-0.022)ng/g(如0.02ng/g)。氯化钴的含量可为(0.018-0.022)ng/g(如0.02ng/g)。

上述任一所述反硝化盐单胞菌具体可为反硝化盐单胞菌(halomonasdenitrificans)cgmcc1.7484。

上述任一所述产碱假单胞菌具体可为产碱假单胞菌(pseudomonasalcalophila)cgmcc1.8055。

上述任一所述脱氮副球菌具体可为脱氮副球菌(paracoccusdenitrificans)atcc13543。

上述任一所述微生态菌剂具体可为下述至少一种菌剂：1)去除硝酸盐的微生态菌剂；2)去除水中硝酸盐的微生态菌剂；3)去除水产养殖水体中硝酸盐的微生态菌剂。

本发明还保护制备上述任一所述微生态菌剂的方法，可为将上述任一所述反硝化盐单胞菌、产碱假单胞菌、脱氮副球菌、淀粉、乙二胺四乙酸、硫酸镁、磷酸氢二钠、硫酸铁、磷酸二氢钾、氯化钙、硫酸铜、氯化锰、钼酸铵和氯化钴按照所述比例混合，得到所述微生态菌剂。

上述制备微生态菌剂的方法中，反硝化盐单胞菌、产碱假单胞菌和脱氮副球菌可先分别发酵培养制备发酵液，然后再与其它组分按照所述比例混合。所述发酵培养的培养基可为lb液体培养基。所述发酵培养的温度可为35-39℃(如35-37℃、37-39℃、35℃、37℃或39℃)。所述发酵培养的时间可为36-60h(如36-48h、48-60h、36h、48h或60h)。

本发明还保护上述任一所述微生态菌剂的应用，可为a1)-a4)的至少一种：a1)去除硝酸盐；a2)去除水中硝酸盐；a3)制备去除硝酸盐的产品；a4)制备去除水中硝酸盐的产品。

上述应用中，所述去除硝酸盐或所述去除水中硝酸盐的方式可为厌氧反硝化、好氧反硝化和同化中的至少一种。

上述应用中，所述去除水中硝酸盐具体可为去除水产养殖的水体中硝酸盐。

本发明还保护一种去除硝酸盐的方法，可包括如下步骤：向含硝酸盐氮的液相体系中加入上述任一所述微生态菌剂，从而去除液相体系中的硝酸盐。

上述方法中，所述含硝酸盐氮的液相体系具体可为含30mg/l以上硝酸盐氮的液相体系。

上述方法中，所述液相体系可为水产养殖的水体。

本发明还保护一种循环水养殖系统，包括养殖池、好氧池和过滤池；所述循环水养殖系统还可包括缺氧池；所述缺氧池位于养殖池的下游、好氧池的上游。

上述循环水养殖系统中，所述缺氧池的体积可为养殖池体积的1/(3-5)(如1/3、1/4或1/5)。

上述循环水养殖系统中，所述缺氧池可由至少一个处理池组成；每一个处理池可包括池体、进水口和出水口；进水口和出水口中一个位于池体侧壁的上部，另一个位于池体侧壁的底部。

上述循环水养殖系统中，所述处理池还可设有用于降低水力停留时间的水处理装置。

所述用于降低水力停留时间的水处理装置具体可为聚丙烯蜂窝斜板或聚丙烯蜂窝斜管。

上述循环水养殖系统中，所述好氧池可安置曝气系统或装有球形聚乙烯填料(目的为保持曝气)。

上述循环水养殖系统中，所述过滤池装有过滤材料(如鹅卵石、碎石、石英砂)。

在本发明的一个实施例中，所述缺氧池具体由3个处理池组成。第3个处理池中设置聚丙烯蜂窝斜板。

在本发明的另一个实施例中，所述缺氧池由1个处理池组成，该处理池中设置聚丙烯蜂窝斜板。

本发明还保护去除水产养殖水体中硝酸盐的方法，具体可为s1)或s2)或s3)。

s1)采用上述任一循环水养殖系统进行水产养殖，向水体加入上述任一所述微生态菌剂，去除水体中的硝酸盐。

s2)采用上述任一循环水养殖系统进行水产养殖，向缺氧池和/或好氧池加入上述任一所述微生态菌剂，去除水体中的硝酸盐。

s3)向水产养殖的水体加入上述任一所述微生态菌剂，去除水体中的硝酸盐。

上述s1)中，所述“向水体加入上述任一所述微生态菌剂”具体可为当水体中的硝酸盐氮浓度达到30mg/l以上，加入上述任一所述微生态菌剂。

上述s2)中，所述“向缺氧池和/或好氧池加入上述任一所述微生态菌剂”具体可为当水体中的硝酸盐氮浓度达到30mg/l以上，向缺氧池和/或好氧池加入上述任一所述微生态菌剂(上述任一所述微生态菌剂可先进行活化。活化方式为：将1质量份上述任一所述微生态菌剂和15质量份水(如自来水或河流水)混合，静置2h以上(如3h))。上述任一所述微生态菌剂可以投入缺氧池和好氧池各半，也可以只投入缺氧池，也可以只投入好氧池，也可以根据缺氧池和好氧池的体积确定投入缺氧池和好氧池上述任一所述微生态菌剂的比例。

上述s3)中，所述“向水产养殖的水体加入上述任一所述微生态菌剂”具体可为当水产养殖的水体中的硝酸盐氮浓度达到30mg/l以上，加入上述任一所述微生态菌剂。

上述任一所述微生态菌剂的投入量具体可为200-600g/m³水体(如200-400g/m³水体、400-500g/m³水体、500-600g/m³水体、200g/m³水体、250g/m³水体、400g/m³水体、500g/m³水体或600g/m³水体)。

为使硝酸盐的去除效果更加持久，可以每隔一段时间(如30天)投入上述任一所述微生态菌剂。为了增加微生态菌剂中菌株在微生物群落中的优势，投入上述任一所述微生态菌剂可分1次以上(如2次)进行。在本发明的一个实施例中，每隔30天进行如下操作：先投入上述任一所述微生态菌剂(投入量为500g/m³水体)，3天之后，再投入上述任一所述微生态菌剂(投入量为250g/m³水体)。

试验证明，本发明制备的微生态菌剂在好氧和厌氧状态都能发挥脱氮功能，通过厌氧反硝化、好氧反硝化和同化三种方式去除水体硝酸盐，因此可同时投放在缺氧池和好氧池。同时本发明操作简单、成本低，而且在去除硝酸盐同时能降低氨氮、亚硝酸盐等的浓度。由此可见，采用本发明提供的循环水养殖系统及其专用微生态菌剂可以改善循环水养殖模式的硝酸盐积累问题，而且节省水源、降低养殖成本、对环境无害。本发明优化了循环水养殖模式，具有重要的应用价值。

附图说明

图1为循环水养殖系统的水循环过程。

图2为实施例3中循环水养殖系统的水质变化。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。

下述实施例中的反硝化盐单胞菌(halomonasdenitrificans)cgmcc1.7484和产碱假单胞菌(pseudomonasalcalophila)cgmcc1.8055均保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(简称cgmcc，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编100101)，公众可从中国普通微生物菌种保藏管理中心获得。在下文中，反硝化盐单胞菌(halomonasdenitrificans)cgmcc1.7484简称反硝化盐单胞菌，产碱假单胞菌(pseudomonasalcalophila)cgmcc1.8055简称产碱假单胞菌。

下述实施例中的脱氮副球菌(paracoccusdenitrificans)atcc13543保藏于美国模式培养物集存库(简称atcc，地址：americantypeculturecollection(atcc)10801universityboulevardmanassas，va20110usa)，公众可从美国模式培养物集存库获得该菌株。在下文中，脱氮副球菌(paracoccusdenitrificans)atcc13543简称脱氮副球菌。

实施例1、微生态菌剂的制备

一、发酵液的获得

1、反硝化盐单胞菌发酵液的获得

(1)将0.1ml反硝化盐单胞菌保存液接种于200mllb液体培养基，37℃、200rpm振荡培养48h，得到种子液。

(2)完成步骤(1)后，将所述种子液全部接种于40llb液体培养基，37℃、200rpm振荡培养48h，得到反硝化盐单胞菌发酵液。

2、产碱假单胞菌发酵液的获得

(1)将0.1ml产碱假单胞菌保存液接种于200mllb液体培养基，37℃、200rpm振荡培养48h，得到种子液。

(2)完成步骤(1)后，将所述种子液全部接种于40llb液体培养基，37℃、200rpm振荡培养48h，得到产碱假单胞菌发酵液。

3、脱氮副球菌发酵液的获得

(1)将0.1ml脱氮副球菌保存液接种于200mllb液体培养基，37℃、200rpm振荡培养48h，得到种子液。

(2)完成步骤(1)后，将所述种子液全部接种于40llb液体培养基，37℃、200rpm振荡培养48h，得到脱氮副球菌发酵液。

二、微生态菌剂的制备

将步骤一获得的反硝化盐单胞菌发酵液、产碱假单胞菌发酵液、脱氮副球菌发酵液和营养元素混合粉(由淀粉、乙二胺四乙酸、硫酸镁、磷酸氢二钠、硫酸铁、磷酸二氢钾、氯化钙、硫酸铜、氯化锰、钼酸铵和氯化钴组成)混合，得到微生态菌剂。微生态菌剂中，反硝化盐单胞菌的含量为7×10⁸cfu/g，产碱假单胞菌的含量为5×10⁸cfu/g，脱氮副球菌的含量为5×10⁸cfu/g，淀粉的含量为800mg/g，乙二胺四乙酸的含量为50mg/g，硫酸镁的含量为0.01mg/g，磷酸氢二钠的含量为30mg/g，硫酸铁的含量为2mg/g，磷酸二氢钾的含量为30mg/g，氯化钙的含量为0.1μg/g，硫酸铜的含量为0.03ng/g，氯化锰的含量为0.02ng/g，钼酸铵的含量为0.02ng/g，氯化钴的含量为0.02ng/g。

需要说明的是，微生态菌剂中的重金属含量低，主要是微生物吸收，不会导致养殖对象的重金属超标。

实施例2、循环水养殖系统的建立及微生态菌剂在该循环水养殖系统中的使用

一、循环水养殖系统的建立

传统的循环水养殖系统中，养殖池的水进入固液分离系统，然后进入曝气生物滤池，没有独立明确的缺氧区。本发明的发明人经过大量实验，建立了如图1所示的循环水养殖系统(水循环过程为：养殖池排水进入缺氧池，缺氧池排水进入好氧池，好氧池排水进入过滤池，过滤池排水到养殖池)。与传统的循环水养殖系统相比，本发明建立的循环水养殖系统主要是在养殖池下游、好氧池上游设立缺氧池；通过检测水体的质量定时或不定时向缺氧池中投加实施例1制备的微生态菌剂。缺氧池的设立可达到两个目的，一是利于水体固体污染物的沉淀，二是使水体中的含氮有机物的进行氨化。

缺氧池体积为养殖池体积的1/4，位于养殖池的下游、好氧池的上游。具体结构如下：缺氧池从上游至下游分别为处理池1、处理池2和处理池3；处理池1的池体体积为缺氧池体积的1/10，处理池1与养殖池相邻的池体侧壁的上部设置有进水口，另一池体侧壁的底部设置有出水口(该出水口也为处理池2的进水口)；处理池2的池体体积为缺氧池体积的4/10，处理池2与处理池3相邻的池体侧壁的上部设置有出水口(该出水口也为处理池3的进水口)；处理池3的池体体积为缺氧池体积的5/10，处理池3与好氧池相邻的池体侧壁的底部设置有出水口。处理池3中还设置聚丙烯蜂窝斜板，用于缩短沉淀时间，降低处理池所需水力停留时间。

运行时，养殖池的排水通过进水口流入处理池1，通过处理池1的出水口流入处理池2，通过处理池2的出水口流入处理池3，通过处理池3的出水口流入好氧池。

缺氧池的多个处理池的设置有利于鱼粪、残饲等污染物沉淀，为微生物提供多样的环境。其中第一个处理池主要是起缓冲过渡作用，后续处理池则形成兼氧-缺氧微环境，污染物在微生态菌剂作用下分解形成氨氮、短链有机酸等分子量较小的物质。

二、微生态菌剂步骤一建立的循环水养殖系统中的使用

取1质量份微生态菌剂，加入15质量份自来水或河流水，静置3h(目的为活化)，得到活化液。

微生态菌剂步骤一建立的循环水养殖系统中的使用方法如下：

1、当步骤一建立的循环水养殖系统的氨氮浓度为2mg/l以下、亚硝酸盐氮浓度为1mg/l以下和硝酸盐氮浓度在30mg/l以上，在缺氧池和好氧池分别投入活化液，投入量为500g微生态菌剂/m³养殖水体。

2、完成步骤1后的第3天，在缺氧池和好氧池分别投入活化液，投入量为250g微生态菌剂/m³养殖水体。

补加微生态菌剂的目的为增加微生态菌剂中菌株在微生物群落中的优势，从而使硝酸盐的去除效果更明显也更持久。

3、完成步骤1后的第5天，可适当的清除缺氧池和好氧池的污泥，有利于循环水养殖系统水质的改善。

实施例3、实施例1制备的微生态菌剂和实施例2建立的循环水养殖系统的应用

取1质量份微生态菌剂，加入15质量份自来水或河流水，静置3h(目的为活化)，得到活化液。

一、应用一

本发明的发明人在深圳龙岗区华大农业实验室建立了实施例2所述的循环水养殖系统。该循环水养殖系统由养殖区和水处理区组成。养殖区由两个圆柱形的养殖池组成，每个养殖池的体积为1m³。水处理区由0.5m³的缺氧池、1m³的好氧池和0.5m³的过滤池组成。缺氧池分为三格，依次对应处理池1、处理池2和处理池3，处理池3设置聚丙烯蜂窝斜板。好氧池装有球形聚乙烯填料，保持曝气。过滤池放置鹅卵石、碎石等过滤材料。

1、试验第1天，投入重约30g/尾的罗非鱼进行养殖。养殖密度为10kg/m³。每个养殖池投放饲料量为300g/天。养殖池溶氧量为2-2.5mg/l。

2、试验第40天，观察水体情况。结果表明，养殖区的鱼粪、残饲等固体废物大量积聚在缺氧池，积聚形式为沉淀污泥和上浮污泥；好氧池和过滤池的水体均较清澈。

3、试验期间，分别检测养殖池排水的氨氮浓度、亚硝酸盐氮浓度和硝酸盐氮浓度(氨氮、亚硝酸盐氮、硝酸盐氮的检测方法分别按照中国环保部颁布的hj535-2009、gb7493-87和gb7480-87标准)，并根据硝酸盐氮浓度进行处理。

试验至49天：养殖池排水的氨氮浓度和亚硝酸盐氮浓度先后出现高峰。

试验第50-70天：养殖池排水的水质开始稳定，氨氮浓度在0-3mg/l之间，亚硝酸盐氮浓度基本为零，硝酸盐氮浓度持续积累。

试验第71天：养殖池排水的氨氮浓度为1.2mg/l，亚硝酸盐氮浓度为0.2mg/l，硝酸盐氮浓度为49.2mg/l。由于硝酸盐氮浓度较高，开始投加实施例1制备的微生态菌剂进行处理。具体处理方式为：将8kg活化液投加至缺氧池，8kg活化液投加至好氧池。

试验第72天：养殖池排水的硝酸盐氮浓度为31.8mg/l(比试验第71天降低17.4mg/l)，氨氮浓度为2.0mg/l(比试验第71天稍微上升)，亚硝酸盐氮浓度为1.2mg/l(比试验第71天稍微上升)。

试验第73天和第74天：养殖池排水的硝酸盐氮浓度分别为33.5mg/l和36.3mg/l(硝酸盐氮积累速度与投加微生态菌剂前基本一致)，氨氮浓度分别为0.6mg/l和1.9mg/l，亚硝酸盐氮浓度均为0.2mg/l。由此可见，投加微生态菌剂后并没有引起水质明显恶化和硝酸盐迅速反弹。

试验第74天：投加微生态菌剂进行处理。具体处理方式为：将4kg活化液投加至缺氧池，4kg活化液投加至好氧池。

试验第75天：养殖池排水的硝酸盐氮浓度为28.3mg/l，氨氮浓度为0.8mg/l，亚硝酸盐氮浓度为0.9mg/l。

之后每隔30天(如试验第101天、试验第131天和试验第161天，将8kg活化液投加至缺氧池，8kg活化液投加至好氧池；试验第104天、试验第134天和试验第164天，将4kg活化液投加至缺氧池，4kg活化液投加至好氧池)按照上述方法投加微生态菌剂，并检测养殖池排水的氨氮浓度、亚硝酸盐氮浓度和硝酸盐氮浓度。

养殖池排水的水质变化见图2：投加微生态菌剂后硝酸盐浓度下降。不投加微生态菌剂的硝酸盐则是持续积累的。结果表明，投加微生态菌剂后硝酸盐浓度得到一定程度的控制。

检测整个过程中罗非鱼的重金属含量和生长、繁殖、代谢等指标。结果表明，罗非鱼的重金属含量不超标，生长、繁殖、代谢等指标完全正常，与不投加微生态菌剂的循环水养殖系统养殖的罗非鱼相比均无显著差异。

二、应用二

本发明的发明人在深圳大鹏新区建立了实施例2所述的循环水养殖系统。该循环水养殖系统为一个3m×5m×0.6m(分别对应长宽高)的长方形水泥池，其中一半作为养殖区(4.5m³)，一半作为水处理区(4.5m³)。

水处理区域用隔板平均分为缺氧区(1.5m³)、好氧区(1.5m³)、过滤区(1.5m³)。缺氧区设置聚丙烯蜂窝斜板。好氧区安置曝气系统，溶解氧在2-3mg/l之间。过滤区投放石英砂。隔板中有孔洞，养殖区域的水体按顺序流经缺氧区、好氧区和过滤区，用水泵抽取过滤区水体补充到养殖区域。

1、试验第1天，投入重约96g/尾的锦鲤进行养殖。养殖密度为5kg/4.5m³(即养殖区投入5kg锦鲤)。养殖区投放饲料量为150g/天。

2、试验第80天：水体的硝酸盐氮浓度为75.4mg/l。由于硝酸盐氮浓度较高，开始投加实施例1制备的微生态菌剂进行处理。具体处理方式为：将24kg活化液投加至缺氧池，24kg活化液投加至好氧池。

3、试验第81天、第82天和第83天：水体的硝酸盐氮浓度分别为50.3mg/l、52.7mg/l和53.9mg/l。

4、试验第83天：投加微生态菌剂进行处理。具体处理方式为：将12kg活化液投加至缺氧池，12kg活化液投加至好氧池。

5、试验第84天、第85天和第86天：水体的硝酸盐氮浓度分别为38.4mg/l、40.5mg/l和41.7mg/l，氨氮浓度和亚硝酸盐浓度均在0-2mg/l之间。

结果表明，锦鲤存活率达到96％，水体硝酸盐氮浓度明显降低。

检测整个过程中锦鲤的重金属含量和生长、繁殖、代谢等指标。结果表明，锦鲤的重金属含量不超标，生长、繁殖、代谢等指标完全正常，与不投加微生态菌剂的循环水养殖系统养殖的锦鲤相比均无显著差异。